Protozoarios y helmintos de vida libre y parasitaria

Objetivos Adquirir la capacidad de identificar protozoarios presentes en diferentes muestras como el agua encharcada. Conocer algunos grupos e protozoarios y helmintos a partir de las observaciones realizadas con el microscopio. Identificar los diferentes protozoarios y helmintos que pueden parasitar al humano y a los que se pueden encontrar en vida libre.

Protozoarios Los protozoarios incluyen a todos los organismos unicelulares. El tamao de los protozoarios varia, generalmente las formas parasitarias son pequeas. Los protozoarios estn constituidos principalmente por protoplasma y un ncleo, aunque ocasionalmente presentan dos o ms. En los protozoos se distingue una forma activa que se conoce en la mayora de ellos con el nombre de forma vegetativa o trofozoito. En muchos casos, el trofozoito tiene la capacidad de transformarse en una forma de resistencia, conocida como quiste. El componente fundamental del cuerpo del protozoo es el protoplasma, el cual est diferenciado en ncleo y citoplasma. a) Ncleo: los ncleos de los protozoos tienen formas, tamaos y estructuras variadas. La mayora de los protozoos contienen un solo ncleo, pero hay muchos que tienen dos o ms ncleos. El ncleo aparece como una vescula constituida por una membrana perfectamente definida que envuelve el nucleoplasma en el que se encuentran el o los nucleolos (=cariosomas, =endosomas) y la cromatina nuclear. Estructuralmente, los ncleos pueden clasificarse en dos tipos principales: vesicular (en el que casi siempre se pueden observar uno o varios cariosomas que destacan sobre el resto del material cromatnico) y compacto (en el que el material cromtico aparece de un tamao uniforme, llenando casi todo el ncleo, por lo que ste toma un aspecto denso y compacto). b) Citoplasma: La parte extra nuclear del cuerpo del protozoo es el citoplasma. Est compuesto de un sistema coloidal que a menudo est formado por una parte perifrica, densa, denominada ectoplasma, y otra parte medular fluida llamada endoplasma. En el citoplasma se encuentran distintos orgnulos como mitocondrias, aparato de Golgi, vacuolas (pulstiles o digestivas), retculo endoplasmtico, etc. que participan en las distintas funciones inherentes a la vida del protozoo. La superficie del cuerpo est cubierta por una membrana cuya estructura se corresponde, en principio, con la membrana unidad de cualquier clula. Este sera el caso de la plasma-membrana o plasmalema de muchos protozoos (amebas y algunos flagelados). En otros protozoos, como en los ciliados, la membrana limitante del cuerpo presenta una estructura mas complicada y recibe el nombre de pelcula. La alimentacin se realiza mediante diferentes mecanismos. El mas simple se denomina osmotrofia y consiste en la incorporacin de sustancias orgnicas disueltas en el medio donde viven, a travs de su membrana. Otro procedimiento es la fagocitosis, que consiste en la incorporacin de partculas slidas de tamao considerable. Por ltimo, algunos protozoos se alimentan por pinocitosis, que es un proceso similar a la fagocitosis, del que se diferencia porque el tamao de las partculas ingeridas en este caso es mucho menor. La respiracin en algunos protozoos es aerobia y en otros anaerobia. En la primera toman el oxgeno de su medio ambiente y expulsan el dixido de carbono a travs de la membrana celular. En la segunda necesitan metabolizar ciertas sustancias de las cuales obtienen el oxgeno. Los protozoos presentan diversos mecanismos de locomocin, que se tienen en cuenta como uno de los caracteres para su clasificacin. As, muchos se mueven gracias a que poseen rganos locomotores permanentes: cilios o flagelos. En otros el movimiento se produce como consecuencia de la formacin de pseudpodos, que son proyecciones citoplasmticas temporales y retrctiles que, fijndose al sustrato, ejercen traccin sobre el resto del cuerpo del protozoo. Por ltimo, hay bastantes protozoos que carecen de rganos especficos de locomocin en casi todas las etapas de su ciclo biolgico. Los protozoos se multiplican por reproduccin asexual (binaria o mltiple) y solo algunos tienen reproduccin sexual. El enquistamiento en los protozoos Los ciclos biolgicos de los protozoos son ms o menos complejos dependiendo de las especies o grupos que se consideren. Entre los protozoos parsitos, cuando abandonan el hospedador en el que se encuentran para pasar a colonizar otro, es frecuente que adopten una forma de resistencia llamada quiste, a fin de superar las condiciones adversas del medio externo. Estos quistes estn formados por una masa citoplasmtica en la que se observan un nmero de ncleos igual o superior al que tena el trofozoito del que derivan. Todo ello est rodeado por una cubierta resistente llamada pared qustica que lo protege de los agentes externos, lo que permite que estos quistes acten como medios de transmisin del parsito de un hospedador a otro. Para algunas especies estos quistes sirven adems como reorganizadores de la divisin nuclear e incluso en otras actan como fijadores al hospedador.Sarcomastigophora Seudpodos. Todos excepto Dientamoeba fragilis, poseen fase de trofozoito y quiste.Entamoeba histolytica

1 Trofozoto redondeado en una muestra de heces

2 quiste maduro no teido preservado en formol3 trofozoto con tincin tricrmicaEntamoeba coli

Mastigophora Flagelos Hemoflagelados Intestinales Atriales (boca, uretra, vagina)

4 trofozoto y un quiste ms pequeo adyacenteGiardia lamblia

5 trofozoto

Trichomonas vaginalis

6 trofozotos teidos con GiemsaCiliophora Cilios Macroncleo MicroncleoBalantidium coli

7 trofozoto

8 QuisteParamecium spProtozoos ciliados con forma ovalada, poseen citostoma, una especie de invaginacin que le sirve para capturar el alimento Se alimenta de bacterias, algas y levadurasSu hbitat se encuentra en estanques de agua dulce, arroyos, ros, lagos y embalsesSe reproducen asexualmente por fisin binaria o mitosis, y (sexualmente) por conjugacin.

Apicomplexa Inmviles. Parsitos intracelulares obligados. Esporozoos Coccidios Toxoplasma gondii

Helmintos

9 HuevoFaciola hepatica

CestodosTaenia solium

10 Scolex

Taenia saginata

11 Scolex

Nematelmintos

12 Huevo13 AdultoAscaris lumbricoides

14 Huevo con larva (infectante)

15 AdultoEnterobius vermicularis

16 HuevoTrichiris tichiria

17 Hembra y macho adultos

Amibas de vida libre que ocasionan patologa en el ser humanoSe les denomina de vida libre ya que no dependen de un solo hbitat para poder vivir, y tambin se les conoce como amibas anfizoicas . Ampliamente distribuidas en la naturaleza (agua, tierra, vegetacin) Presentan movilidad por medio de pseudpodos Se alimentan por fagocitosis Se reproducen por fisin binaria Se les considera patgenos humanos, ya que son causantes de enfermedad a nivel de SNC Presentan formas de trofozoto y quiste.

18 QuisteBalamuthia sp

19 Trofozoito

Son organismos oportunistas, afectan pulmn y SNC, produce GAE: Encefalitis amebiana granulo matosa, infecciones nasofarngeas y cutneas.

Acanthamoeba sp

Encefalitis y queratitis amebiana, se asocia tambin a enfermedades cutneas y sinusitis, los Individuos inmunodeprimidos, incluyendo los pacientes de SIDA, son particularmente susceptibles a infecciones con Acanthamoeba.Hartmannella sp

Naegleria sp

Anlisis de resultadosEn la muestra de agua de charco no se observo ningn protozoario, por lo cual se recurri aun revisin bibliogrfica para conocer los posible protozoos presentes en dicho medio, de los cuales con mayor frecuencia se puede observar a el Parameicum sp, adems de la mayora de los protozoarios antes mencionados que se pueden transmitir y vivir en vida libre en el agua contaminada.ConclusionesUno de los protozoarios mas comunes en el agua estancada como se observo (investigo) es el Paracemium, tambin es probable encontrar otro tipo de protozoarios de inters medico en el agua estancada, lo que nos demuestra que la higiene es algo mas importante y que es necesario conocer las formas de contagio.

Transmisores, vectores y ectoparsitos Objetivos Adquirir la capacidad para identificar parsitos as como las diversas formas en las que se presentan. Conocer algunos mecanismos de transmisin y propagacin de un parsito. Conocer los ciclos biolgicos de algunos parsitos.La parasitologa es una rama de la biologa que estudia el fenmeno del parasitismo. Estudia a los organismos vivos parsitos y la relacin de ellos con sus hospedadores y el medio ambiente. Convencionalmente, se ocupa slo de los parsitos eucariotas como son los protozoos, helmintos (trematodos, cestodos, nematodos) y artrpodos; el resto de los organismos parsitos (virus, procariotas y hongos). Tambin estudia las parasitosis o enfermedades causadas en el hombre, animales y plantas por los organismos parsitos. Para un estudio ms especfico, la parasitologa se divide en tres ramas: Parasitologa mdica o clnica: Estudia los parsitos del ser humano. Zooparasitologa: Estudia los parsitos de los animales. Fitoparasitologa: Estudia los parsitos de las plantas. Todo organismo vivo depende del ambiente en el cual vive, obteniendo de ste sus nutrientes,que en unos casos son inorgnicos (fotoauttrofos), en otros orgnicos (hetertrofos). La dependencia a un ambiente especfico determina la asociacin entre organismos vivos, supliendose as las necesidades metablicas, de una forma unilateral o bilateral. Las asociaciones entre organismos vivos se han divididos en varios tipos. La simbiosis ha pasado, de un tipo de asociacin biolgica a ser considerada como el trmino que abarca todas las asociaciones biolgicas. Tipos de simbiosis El comensalismo es una forma de interaccin biolgica en la que uno de los intervinientes obtiene un beneficio, mientras que el otro no se ve ni perjudicado ni beneficiado. El parasitismo es un tipo de simbiosis y tiene una estrecha relacin en la cual uno de los participantes, (el parsito) depende del otro (el hospedero u hospedador) y obtiene algn beneficio; lo cual no necesariamente implica dao para el hospedero. El mutualismo es una interaccin biolgica, entre individuos de diferentes especies, en donde ambos se benefician y mejoran su aptitud biolgica. El mutualismo se diferencia de otras interacciones en las que una especie se beneficia a costas de otra. Un parsito es todo ser viviente, animal o vegetal, unicelular o pluricelular, que debe sacar necesariamente su alimentacin de la sustancia de otro organismo vivo (llamado husped) Depredador muy especializado cuya accin expoliadora no causa la muerte inmediata de la especie de que toma el alimento, pero puede causrsela a largo plazo. Si acta en el exterior del patrn, se lo denomina ectoparsito; si lo hace en el interior, se le llama endoparsito.

Anlisis de resultadosEn las muestras biolgicas no se observo ningn protozoario, por lo cual se recurri aun revisin bibliogrfica para conocer los posibles parsitos que afecten a la mosca y a la cucaracha encontrando lo siguiente:En cucaracha:

20 Cryptosporidium sp21 Habronema muscae22 Toxoplasma gondii23 Giardia lamblia

24 Huevos de Taenia sp

En cucaracha:

Conclusin:A pesar no lograr observar nada, con una la revisin bibliografa se observaron muchos parsitos que pueden transmitir estos artrpodos, una cuestin importante es que no solo los transmiten en su intestino o saliva, en la superficie de su cuerpo pueden llevar huevos o quistes de parsitos, los cueles contaminan alimentos y superficies cuando estos artrpodos se colocan sobre estos, por lo cual es importante tener buenos hbitos de higiene en los alimentos.

Tcnica de colecta y tincin de parsitos

Objetivo Aprender a colectar material parasitario de animales de experimentacin y domsticos. Conocer y utilizar las diferentes tcnicas de tincin, utilizadas en parasitologa.

Tincin de WrightLa tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el laboratorio de hematologa este tipo de tincin, ya que puede obtenerse una cantidad abundante de informacin a partir del examen de un frotis de sangre perifrica bien teido. Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina B. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky y da una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras qumicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los ncleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijanel azul B, colorante bsico La eosina Y, colorante cido, se fija a los agrupamientos bsicos de las molculas de hemoglobina y a las protenas bsicas. La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares determina su avidez por los componentes del colorante policromtico de Wright; es as como los cidos nucleicos se tien con azul B que es el bsico y la hemoglobina con la eosina Y que es cida. Otras estructuras se tien por una combinacin de ambos y se denominan neutrfilas. Observaciones Una tincin satisfactoria debe dar los siguientes resultados: Glbulos Rojos: rojo amarillento. Neutrfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma rosa plido y grnulos lila. Eosinfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma azul plido y grnulos rojo brillante. Basfilos: cromatina prpura oscuro, grnulos azul oscuro. Linfocitos: cromatina prpura oscuro, citoplasma azul cielo. Monocitos: cromatina prpura medio, citoplasma azul grisceo y grnulos lila Plaquetas: centrmero violeta o prpura, hialmero azul claro. Causas de error en la tincin del frotis sanguneo. Una extensin excesivamente azul (basfila). Extensin gruesa. Lavado insuficiente. Tiempo tincin excesivamente prolongado. Empleo de colorante excesivamente alcalino Una coloracin excesivamente rosada (acidfila). Extensin delgada. Exceso de buffer. Empleo de colorante excesivamente cido.

Tincin de giemsaSe emplea en Hematologa para observar los elementos sanguneos normales y en Microbiologa para identificar parsitos (protozoarios de la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos (Chlamydia). Observacin: el citoplasma en color azul claro. Los eritrocitos en color gris claro. Se basa en la distinta afinidad que demuestran las clulas y sus componentes a los distintos colorantes incluidos en el colorante de Giemsa. Resultados errneos: se deben principalmente a errores durante el extendido sanguneo o durante la aplicacin del fijador. Resultaos e interpretacin: Los eritrocitos se tien de rosa Las plaquetas de violeta Los ncleos de los leucocitos de violeta El citoplasma de los leucocitos es rosa. La tincin de Giemsa al igual que la tincin de Wright sirven para la identificacin de parsitos tales como el Paludismo en los cuales es conveniente un tiempo de 30 minutos hasta una hora para Giemsa y de tres a cinco minutos para Wright aunque se podran obtener mejores resultados si se le deja a ste ultimo hasta por 15 minutos. El mtodo de Wright brinda buenos resultados y requiere de muy poco tiempo, pero se obtiene detalles ms precisos con la tincin de Giemsa. El mtodo de Wright solo se puede aplicar a frotis delgados mientras que en Giemsa se pueden usar frotis delgados y frotis de gota gruesa omitiendo el paso de fijacin con alcohol metlico. Anlisis de resultadosEn esta prctica no se observaron ectoparsitos en el sapo usado, en otro se encontr una garrapata y estos son de importancia medica ya que son importantes transmisores de enfermedades.Despus de sacrificar al sapo se tomaron muestras de sangre para su posterior uso en gota gruesa y frotis. Durante la observacin de sus rganos de observaron en pulmones microfilarias, se busco parsitos en otros rganos pero no se observaron en ningn lado. Se conservaron las microfilarias en AFA.ConclusionesCon base en la prctica se colecto parsitos de animales, se aprendi la forma correcta de realizar preparaciones de los parsitos colectados y su conservacin en AFA.Ademas de observar parastios en los pulmones. No observando ningn otro parasito.