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PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO

PNT:Rev: 0Fecha Emisión

2015/09/19

LCCM-FARMA MUNDIProtocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

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Elaborado: Técnico Analista Revisado: Jefe Área Fisicoquímica

Aprobado: Gerente de Control de Calidad

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PNT: Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

COPIA CONTROLADA [ ] Nº…………….

NO CONTROLADA [ ]

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INDICE

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I. Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina que contienen en su formulación; Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg.a. Fase Móvil:

En un Matraz Volumétrico de 1000 ml, agregar 690 ml de agua Grado HPLC, seguidamente adicionar Ácido acético glacial, una cantidad equivalente a 30 ml, obteniendo así una relación de 72 partes entre agua y Ácido acético glacial, posteriormente Agregar metanol Grado HPLC equivalente a 280 ml. Filtrar y desgasificar usando filtros de membranas de Nylon, Tamaño de poro 0.45 µm.

b. Mezcla de Disolventes: En un Balón de 1000 ml, agregar 950 ml de Metanol Grado HPLC. Posteriormente, añadir 50 mL de Ácido acético Glacial.

c. Preparación de Soluciones Estándar.

1. Solución Madre del Estándar:Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes.

2. Preparación Estándar:Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína.

d. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.



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e. Sistema Cromatográfico:

Columna Zorbax Eclipse C18 150 mm x 4.6 mm, 5 µm. Temperatura de la columna 45 ± 1ºC. Longitud de onda analítica 275nm Flujo 1.5 ml / min. Volumen de inyección 10 µl

Nota: Realizar 5 inyecciones sucesivas de 10 µl, de la preparación del estándar. Después de cada inyección dejar correr los cromatogramas hasta obtener los tiempos de retención. Verificar que la desviación estándar relativa (DER) de las áreas de inyección sucesivas no es mayor de 2.0%

II. Listado de los Reactivos Necesarios:Reactivo Pureza Marca Concentración

Agua grado HPLCMetanol grado HPLCAcido Acético Glacial

III. Estándares Utilizados.Nombre Pureza Lote Marca

ER AcetaminofénER Acido Acetil SalicílicoAcido Acético Glacial

IV. Lista de Equipos e Instrumentación Requerida.Nombre del Equipo Modelo Serie

Cromatógrafos líquido de alta resolución HPLC

VARIAN 920LC EL08053903

Columna PURSUIT XRSBalanza Analítica A&D Calibrada

ANDGH-120 13506973

Espátula ----------------- -----------------Bomba de Vacío 2021B-01REV 080800000035Campana de Extracción

----------------- -----------------

Aparato de Ultrasonido B3-R



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BARCSONICV. Lista de Equipos/Equipos de seguimiento y Medición Calificados.

Nombre del Equipo Modelo SerieCromatógrafos líquido de alta resolución HPLC

VARIAN 920LC EL08053903

VI. Verificación de Registros de Calibración, Calificación y/o mantenimiento de los Equipos/Equipos de Seguimiento y Medición.

Tabla de Verificación de Registros de Clasificación de Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar

Equipos

Clasificación

Periodicidad Fecha de Ultima Calificación

Conforme/No Conforme

Observaciones


Tabla de Verificación de Registros de Mantenimiento de los Equipos/Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar

Equipos

Clasificación



Observaciones


Tabla de Verificación de Registros de Calibración de Cristalería/Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar

Equipos/Cristalería

Clasificación



Observaciones

Balanza Analítica A&D Calibrada ANDGH-120Cristalería



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Volumétrica a Utilizar

VII. Parámetros de Validación del Método de Análisis Químico.1. Validación para el Método analítico de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg,

Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.Considerando el método a validar, se ensayaran los siguientes parámetros:

Especificidad. Estabilidad de la Muestra. Linealidad e Intervalo. Exactitud. Precisión.

1.1. Especificidad.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico,

procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.

b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar:Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes.

Preparación Estándar:Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína.

c. Preparación de la Muestra para Someter a Estrés: 1. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y

0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Acido Clorhídrico 0.1N, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml



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de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente.

2. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Hidróxido de Sodio 0.1N, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente.

3. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Peróxido de Hidrogeno 10 volúmenes, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente.

d. Preparación del Estándar para Someter a Estrés: 1. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del

Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Acido Clorhídrico 0.1N, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.

2. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Hidróxido de Sodio 0.1N, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.



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3. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Peróxido de Hidrogeno 10 Volúmenes, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.

1.2. Estabilidad de la Muestra.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico,

procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.



c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.



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d. Procedimiento: Desarrollar el Método de Determinación Cuantitativa del producto realizando 3 replicas de la muestra por cada determinación y determinar el porcentaje recuperado de la preparación de la muestra recién preparada (inicialmente), después de 24 horas y después de 72 horas de su preparación, utilizando por cada día de análisis una solución del estándar recientemente preparada.

1.3. Linealidad e Intervalo del Sistema.Realizar por triplicado el siguiente procedimiento para obtener 3 curvas de linealidad.

a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.



c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :

Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.1667 g de Aspirina, 0.1750 g de Acetaminofén y 0.0875 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.



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Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.4167 g de Aspirina, 0.2125 g de Acetaminofén y 0.1063 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 85 µg/ml de ER de Acetaminofén, 566.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 42.5 µg/ml de ER de Cafeína.

Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.




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Desarrollar el método de determinación cuantitativa en sentido creciente de concentración 70, 85, 100, 115 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo lecturas por triplicado de cada concentración.

Determinar para cada ensayo el porcentaje recuperado de cada determinación, la media, el coeficiente de variación, coeficiente de correlación, coeficiente de determinación, ecuación de regresión, representación grafica de la recta de regresión, significación estadística del intercepto y de la pendiente, homoscedasticidad, grafico de residuales (análisis de residuos), análisis de variancia.

1.4. Linealidad e Intervalo del Método.Realizar por triplicado el siguiente procedimiento para obtener 3 curvas de linealidad.

a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.


Preparación Estándar:



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Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína.

d. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :






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Desarrollar el método de determinación cuantitativa en sentido creciente de concentración 70, 85, 100, 115 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo lecturas por triplicado de cada concentración.

Determinar para cada ensayo el porcentaje recuperado de cada determinación, la media, el coeficiente de variación, coeficiente de correlación, coeficiente de determinación, ecuación de regresión, representación grafica de la recta de regresión, significación estadística del intercepto y de la pendiente, homoscedasticidad, grafico de residuales (análisis de residuos), análisis de variancia.

1.5. Exactitud del Sistema.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y

cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína



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30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.








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Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa del producto y realizar el análisis de las muestras en sentido creciente de concentración 70, 100 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo cinco lecturas de cada concentración.

Determinar el porcentaje recuperado, la media, coeficiente de variación, intervalo de confianza (95%) de la media, significación estadística de la media con respecto al valor verdadero (prueba t de Student) e igualdad de las variancias (prueba G de Cochran), grafico de cantidad adicionada versus cantidad recuperada, coeficiente de correlación y significación estadística del intercepto y de la pendiente.

1.6. Exactitud del Método.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y

cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina.


Preparación Estándar:



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Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína.


Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 1.1667 g de Aspirina ER, 0.1750 g de Acetaminofén ER y 0.0875 g de Cafeína ER. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.

Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 2.1667 g de Aspirina, 0.3250 g de Acetaminofén y 0.1625 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 130 µg/ml de ER de Acetaminofén, 866.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 65 µg/ml de ER de Cafeína.

Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa del producto y realizar el análisis de las muestras en sentido creciente de concentración (70, 100 y 130%), tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo cinco lecturas de cada concentración.



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Determinar el porcentaje recuperado, la media, coeficiente de variación, intervalo de confianza (95%) de la media, significación estadística de la media con respecto al valor verdadero (prueba t de Student) e igualdad de las variancias (prueba G de Cochran), grafico de cantidad adicionada versus cantidad recuperada, coeficiente de correlación y significación estadística del intercepto y de la pendiente.

1.7. Repetibilidad del Sistema.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y






Realizar 10 preparaciones de la muestra y realizar la Determinación Cuantitativa de cada una de ellas.



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Determinar el porcentaje recuperado, la media y el intervalo de confianza de la media al 95% y el coeficiente de variación de las respuestas obtenidas.

1.8. Repetibilidad del Método.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y






Realizar 10 preparaciones de la muestra y realizar la Determinación Cuantitativa de cada una de ellas.

Determinar el porcentaje recuperado, la media y el intervalo de confianza de la media al 95% y el coeficiente de variación de las respuestas obtenidas.



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1.9. Precisión Intermedia.a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y






Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa haciendo lecturas por triplicado de la muestra durante tres días. Los ensayos son realizados por 2 analistas en un equipo de seguimiento y medición automático (HPLC).



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Determinar el porcentaje recuperado total, la media, la desviación estándar, el coeficiente de variación y el intervalo de confianza para la media al 95%.

2. Especificaciones de los Parámetros de Validación del Método de Análisis Químico.2.1. Especificidad.

2.1.1. Método de Determinación Cuantitativa.La muestra y el Placebo no deben de presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se encuentra para el estándar.

2.2.Estabilidad de la Muestra.Factor (I): 98.0%-102.0%

2.3.Linealidad e Intervalo del Sistema y del Método.Parámetro Valor

Coeficiente de Variación ≤ Al 2.0% para determinación cuantitativa.Coeficiente de determinación ≥ de 0.98Coeficiente de Correlación ≥ 0.990Estadístico Durban-Watson Aproximadamente 2.0Intercepto de la Recta (a) Aproximadamente igual a 0.Pendiente de la Recta (b) Aproximadamente igual 1.0.Ecuación de la Recta Y=a+bxSignificación estadística de (a) texp<ttabla; el intervalo de confianza no debe incluir el cero. Significación estadística de (b) texp >ttabla; el intervalo de confianza debe incluir el cero.Homocesdasticidad Gexp<Gtabla; significa que las variancias son homogéneasAnálisis de residuales (grafico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio y no reflejar ninguna

tendenciaAnálisis de Variancia F1exp > F2exp, evidencia una pendiente distinta de cero

F1exp < F2exp, demuestra la linealidad de los resultados



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2.4.Exactitud del Sistema y del Método.Parámetro Valor

Coeficiente de Variación ≤ Al 2.0% Prueba t de Student para la media texp<ttabla; no hay diferencia significativa entre la media y el valor

considerado como verdadero (100%)Igualdad de las Variancias Gexp<Gtabla; significa que las variancias son homogéneasCoeficiente de Correlación ≥ a 0.990 Ecuación de la recta Y=a+bxIntercepto de la recta (a) Aproximadamente igual a 0.Pendiente de la recta (b) Aproximadamente igual 1.0.Significación estadística de (a) texp<ttabla; el intervalo de confianza no debe incluir el cero. Significación estadística de (b) texp >ttabla; el intervalo de confianza debe incluir el cero.

2.5. Precisión.2.5.1. Repetibilidad del Sistema y del Método.

Coeficiente de variación ≤ al 2.0% para Determinación Cuantitativa.

2.5.2. Precisión Intermedia.

Coeficiente de variación ≤ al 2.0% para Determinación Cuantitativa. F de Fisher: Si Fexp<Ftabla, no existe diferencia significativa entre la precisión obtenida

por los analistas. Prueba t de Student: Si texp<ttabla; no hay diferencia significativa entre las medias

obtenidas por los analistas.

_________________________________Final del Documento_________________________________

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