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Protein Engineering und ProteintechnologieE-Learning-Veranstaltung im Sommersemester 2010
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 1
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FPLC-Workstation I
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Quelle: GE
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Industrieanlage
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Quelle: GE
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Membranadsorber I
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Membranadsorber II
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Affinitätschromatographie
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Fusionsproteine
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Fusionspartner für Affinitätschromatographie
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Affinitätschromatographie
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http://courses.cm.utexas.edu/jrobertus/ch339k/overheads-1/ch5_affinity.jpg www.nonoil.com/bio/engineering/genetic-engineering.files/12-11.jpg
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Expressionsvektoren für Bla-Fusionen
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Expressionsvektoren für Bla-Fusionen
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Phenylboronatsepharose
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Reinigung von ββββ-Laktamasefusionsproteinen II
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Periplasmaextrakt
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Affinitätschromatographie an Phenylboronat-Sepharose
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Spaltung des Fusionsproteins mit IgA-Protease
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IgA-Proteasespaltung und Affinitätsreinigung
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Fusionsproteine mit GST
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Proteolytische Prozessierung von Fusionsproteinen
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Dingermann, Tab. 3-1-1
TEV Protease - Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln / Ser -
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Metallchelataffinitätschromatographie
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Metallchelataffinitätschromatographie
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Metallchelataffinitätschromatographie
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Metallchelataffinitätschromatographie
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IMAC-Reinigung eines Proteins
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Strepavidin Biotin Komplex
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StrepTag
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StrepTag
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StrepTag
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Single Chain Fv
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StrepTag Screen
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StrepTag Screen
SA AP
BCIP/NBT
Indigo/Formazan
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StrepTag
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Chemische Proteinkonjugation
SA AP
Amin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 33
Amin
Sulfhydryl
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Molekularbiologische Proteinkonjugation
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New England Biolabs
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Insulin
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Insulinfreisetzung
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 36
http://www.uni-bonn.de/www/PharmChemBendas/Vorlesung/bilder/Vorlesungen/Diabetes.pdf
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Physiologische Wirkung des Insulin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 37
http://www.uni-bonn.de/www/PharmChemBendas/Vorlesung/bilder/Vorlesungen/Diabetes.pdf
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Insulinbedarf
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 38
Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27
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Insulin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 39
Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27
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Aufbau von Insulin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 40
http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS2/course/section11/insulin.html
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Proinsulin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 41
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Konversion von Schweineinsulin zu Humaninsulin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 42
Dingermann Abb. 6-2-3
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Funktionsweise von Trypsin
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 43
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Katalytische Triade
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 44
Berg, Tymoczko, Stryer, Biochemistry, 5th ed.
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Katalytische Triade
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 45
Berg, Tymoczko, Stryer, Biochemistry, 5th ed.
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Katalytische Triade
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 46
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Katalytische Triade
Threonin
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X
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Proteinproduktion in E. coli
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Insulinproduktion in E. coli I
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Insulinproduktion in E. coli als Fusion
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Insulinproduktion in E. coli als Fusion
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Goedell et al. 1979
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Insulinproduktion in E. coli als Fusion
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 52
Goedell et al. 1979
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Vollsynthese des Gens für HGH
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Goedell et al. 1979b
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Vollsynthese des Gens für HGH
28. April 2010 | Fachbereich Chemie | Institut für Organische Chemie und Biochemie | Prof. Kolmar | Proteintechnologie SS 2010 | 54
Goedell et al. 1979b
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Alles nur geklaut
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Wie Betrug reicht macht: Der Fall Wie Betrug reicht macht: Der Fall SeeburgSeeburg
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Menschliches Wachstumshormon (HGH)
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KlonierungKlonierung des HGH Gensdes HGH Gens
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Insulinproduktion in E. coli I
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Insulinproduktion in E. coli I
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Protein-Einschlusskörper (Inclusion Bodies)
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Steinmann et al. (zur Veröffentlichung eingereicht)
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Mechanismus der Bromcyanspaltung
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http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1a/CNBr5.png
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Oxidative Sufitolyse
2RS--SR+2HSO3- < - - - >2RS--SO3- +2RSH
2RSH+oxidizing agent - - - >RS--SR+2H-oxidizing agent
RS--SR+2HSO3- +oxidizing agent - - - >2RS--SO3- +2H-oxidizing agent (total)
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Oxidative Sufitolyse
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Insulinproduktion in E. coli II
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Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27