Progetto Amici di Duccio 2015: la terapia genica alla sconfitta

della leucemia

C.F. Magnani, S. Tettamanti, A. Biondi, E. BiagiCentro M.Tettamanti, Clinica Pediatrica Università Milano-Bicocca

Ospedale S. Gerardo, Monza, Italy

Milano, HangarBicocca22 Giugno, 2015

Le nostre armi di difesa

Perchè il sistema immunitario non reagisce e combatte contro la cellula leucemica?

Il sistema immunitario ha lo scopo di difenderci dagli attacchi esterni e dalle malattie

Linfocita T

La leucemia per crescere e manifestarsi attua dei meccanismi di evasione dal sistema immunitario:• si nasconde e non si fa riconoscere• scappa in luoghi non facilmente raggiungibili• inibisce il sistema immunitario stesso, con le sue armi

La leucemia sfugge alle nostre difese

I CAR sono molecole prodotte in laboratorio mediante le tecniche di ingegneria genetica che vengono “montate” sui linfociti e funzionano come un RADAR: sono in grado di riconoscere la cellula leucemica come un bersaglio e di uccidere il tumore.

Come rafforzare le nostre difese? I recettori chimerici artificiali (CAR)

CAR

modified from Kershaw M.H. (2005), Nature Reviews Immunology, 5, 928-940

Linfocita T

Super Linfocita T con il CAR

Grazie ai CAR i linfociti diventano Killers tumorali

Linfocita T CAR+ riconosce la cellula leucemica

Uccisione ed eliminazione della cellula leucemica

Linfocita T CAR+ Cellula leucemica

Flusso sanguigno

Il “Breakthrough” dell’anno 2013

I CAR di ultima generazione!

Le scelte da fare sono tante:Quale linfocita T usare?Come montare il bazooka?Scelta del bersaglio tumorale…

Il nostro contributo nel panorama internazionale!

Le cellule CIK, le nostre “super” cellule T, potenti ma sicure

Risultati pubblicati nel 2007 ne dimostrano la loro sicurezza: una “joint venture” con il gruppo di ematologia di Bergamo

modified from Koseki H. (2008), Riken Research, 3, 7

Il metodo non virale per montare il bazooka

I trasposoni, un metodo non virale per rendere la terapia genica più economica, semplice e applicabile, offrono una valida alternativa ai metodi che utilizzano i virus come vettori

Modificato da Hackett P.B. (2010), Molecular Therapy, 18, 674-683

TRANSPOSONIR/DR IR/DR

TRANSPOSASE

scFvCD123.28OX40Z

scFvCD123

scFvCD123

Il DNA contenente il CARIl DNA contenente l’enzima che taglia e incolla

CAR + CIK + metodo non virale

Cellule CIK potenti ma

sicure

Il metodo non virale

Meno complicato dei vettori virali

CARil bazooka rapido, potente e diretto contro il tumore

Le cellule del tumore sono state eliminate!

Cellule del tumore

Cellule del tumore Controllo CIK + CAR

Controllo CIK + CAR

LEU

CEM

IAM

IELO

IDE

LEU

CEM

IALI

NFO

IDE

CAR + CIK + metodo non virale: ottimi risultati!

Il cocktail strategico per curare anche in Italia i nostri piccoli pazienti

LLA

LMA

Nucleofezione

INFUSIONE

CELLULE DEL DONATORE

+

Giorno 0

Espansione verso CIK

Criopreservazione

Giorno 21

Transgene

CAR

TERAPIA GENICA

Il cocktail CAR + CIK + metodo non virale depositato come brevetto

Stiamo sviluppando il protocollo per la linfoblastica acuta tramite il CD19 CAR

Per la LLA, la strada è ben avviata!

Il protocollo per la linfoblastica acuta tramite il CD19 CAR sarà presto disponibile al nostro ospedale

Investitori e company hanno dimostrato grande interesse per la piattaforma CAR

Il nostro brevetto ha suscitato l’interesse di una company americana

L’arrivo sulla scena di Formula Pharmaceutical

Figura 1

FILTRO D

CLASSED FILTRO C

ARMADIO

Non classificato Classe D Classe C Classe B Classe A – cabina a flusso laminare

Laboratorio di Terapia Cellulare Stefano Verri

Interventi di modifica

strutturale

- Impianti di circolazione

aria

- modifica dei passa-

materiali

- acquisto di nuovi arredi e

apparecchiature

01/

09

/14

01/

10

/14

Verifiche

- Convalide ambientali

- convalide di processo

- collaudi impianti

- procedure

01/

11

/14

01/

12

/14

Ispezione AIFA (20-23/01)

- 3 ispettori/4 giorni

- ispezione impianti

- ispezione documenti (>150)

- risultato: 11 deviazioni non-

critiche

01/

01

/15

Follow-up dell’ispezione

- Primo invio di documenti: 22/02/15

- Secondo invio: 08/04/15

- Terzo invio: 27/04/15

- Approvazione: 18/06/15

L’adeguamento del laboratorio:breve cronistoria

Nuova stanza di manipolazione genica

Che cosa ci aspetta per il futuro…Non solo LLA ma anche LMA!

CD19 CAR per la linfoblastica acuta

CD123 CAR per la mieloide acuta

Sfida ancora aperta nella mieloide acuta su cui stiamo investendo molto dal 2010

Il CD123 CAR è selettivo per la cellula leucemica

Super CIK con il CD123 CAR

Super CIK con il CD123 CAR eliminano le cellule di LMA!

Grazie a tutti… INSIEME si vince!

Andrea BiondiEttore Biagi

Chiara F MagnaniSarah TettamantiSilvia Arcangeli

Nice Turazzi Maria Caterina Roti Roti

Claudia MezzanotteGreta Giordano

Virna Marin

Fondazione M.Tettamanti

LA CooperMontini Eugenio

Benedicenti FabrizioAndrea Calabria Erika Tenderini

Aiuti Alessandro

Comitato Maria Letizia Verga

Quelli che… con Luca

Luca Varani’s labBellinzona –Switzerland-

Dr. Dominique Bonnet London, UK)

Daniela BelottiBenedetta CabiatiStefania CesanaGiada MateraArianna IncontriPaolo PerseghinGiuseppe Gaipa