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  • Conjugacin

    Dra Sobeida Snchez Nieto

    M. en C. Paulina Aguilera

  • Variacin gentica

  • Recombinacin Gentica

    La recombinacin se puede definir como cualquierproceso en que tenga lugar la formacin de unnuevo DNA a partir de molculas distintas, demanera que la informacin gentica procedente decada molcula de DNA original estar presente enlas nuevas.

    Ejemplos en que ocurre la recombinacin:

    Meiosis en clulas eucariticas.Infeccin de plsmidos o virus.Integracin de elementos extracromosomales

    dentro del genoma hospedero

  • Infeccin por virus

    Los fagos transfieren el DNA de la clulabacteriana donadora a la clula receptora, lacual puede incorporarlo a su cromosoma.

    Ciclo Ltico.

  • Integracin de elementos extracromosomalesdentro del genoma hospedero

    Transformacin

    Conjugacin

  • Transformacin

    Entrada de DNA libre (DNA DESNUDO) seincorpora a una clula y puede recombinarsecon el material gentico de la clula receptora

  • Conjugacin

    Mecanismo de transferencia de informacin gentica de una bacteria a otra (contacto directo), seguida de la recombinacin con el material gentico de la clula bacteriana receptora.

  • Conjugacin bacteriana

    Descubierta por Lederberg y Tatum (1946)

    Dos cepas auxtrofas (una para met bio y la otra thr leu thi)

    Se cultivaron juntas en medio completo

    Se subcultivaron en medio mnimo

    Se encontraron nuevas colonias en el medio mnimo.

  • EXPERIMENTO QUE DEMOSTR LA RECOMBINACIN

  • BERNARD DAVIS DEMOSTR QUE SE NECESITABA EL CONTACTO FSICO PARA LA

    RECOMBINACIN BACTERIANA

  • WILLIAN HAYES Y LA TRANSFERENCIA DEL FACTOR F (FERTILIDAD)

    1. El intercambio gentico ocurre en una sola direccin

    2. La transferencia gentica es mediada por el factor F.

    3. DNA plasmdico circular F (aprox 1/40 el tamao de un cromosoma), es autoreplicativo AUTNOMO.

    4. El plsmido F contiene una secuencia de origen en el que inicia la transferencia del DNA.

    5. Tambin contiene genes para producir una estructura tipo pelo el llamado pili sexual o F pili, el cul ayuda en el contacto entre clulas

  • No ocurre conjugacin entre clulas del mismo tipo sexual

    La conjugacin comienza cuando el plsmido F es cortado en el origen y una cadena sencilla es transferida usando un sistema especial en donde se involucra a una relaxasa.

    Cuando la transferencia se completa ambas clulas contienen DNA doble cadena y son F+

  • FACTOR F ( FERTILIDAD)

    traA codifica para el piliOtros genes tra estn involucrados en la adhesin y reconocimiento de la clula aceptora y la estabilizacin del pili entre ambas clulas para optimizar la transferencia del DNA

    http://picses.eu/image/5f8b821d/http://picses.eu/image/5f8b821d/

  • Pili

    cilindro hueco de aproximadamente 20 m de largo, 8 nm de dimetro externo y 2 nm de dimetro interno, que es lo suficientemente grande para el pasaje de una molcula de DNA simple cadena.

    formado por un nica subunidad proteica denominada pilina que se encuentra codificada por el gen traA.

  • Transferencia del factor F

  • PROPIEDADES DE PLSMIDOS

    TRANSFERENCIA DE PLSMIDOS: Algunos plsmidos se pueden transferir entre bacterias a travs de la conjugacin bacteriana. Estos plsmidos codifican para todas las protenas y funciones que se requieren para movilizar y transferir de una clula husped a una clula recipiente.

    Muchos plsmidos son incapaces de hacer esto.

  • F+ y F-: Ambas clulas se vuelven F+

    CONJUGACIN

  • F+ y F+: Se inhiben por contacto

    CONJUGACIN

  • Hfr (alta frecuencia de recombinacin): el plsmido se integra al cromosoma bacteriano. Sigue siendo donadora.

  • Hfr y F-: no se transfiere el cromosoma completo, la parte del plsmido F se escinde.

  • F: Se escinde el plsmido F y se lleva consigo una parte del cromosoma. plsmido F, donador.

  • F y F-: Se generan clulas diploides parciales , la receptora se llama merocigoto.

    CONJUGACIN

  • Similar a lo que ocurre con Gram -.

    Sistema Mpf, es ms simple.

    E. faecalis secretan pptidos parecidos a feromonasque estimulan la expresin de genes tra en lasbacterias vecinas.

  • Para qu?

    Resistencia: antibiticos, metales pesados

    Colicinas y Bacteriocinas: protenas con actividad antimicriobiana.

    Factores de virulencia: Toxinas.

    Actividades metablicas: Sntesis degradacin de compuestos carbonados

    Cmo seleccionamos?

    Genes marcadores, dentro del plsmido y permite seleccionar colonias conjugantes por fenotipos:auxotrofas, fuente de energa, resistencia/susceptibilidad a antibiticos

  • E. coli JM1452StrR

    Resistente a Estreptomicina. No codifica para el pili (genes tra), por lo tanto es...

    E. coli W3110/FKmTn3

    Resistente a la Kanamicina. Cepa F, por lo tanto es

    RECEPTORA

    DONADORA

  • 600 L

    120 L300 L

    Resistente a Estreptomicina

    Resistente a Kanamicina

  • #CT: Nmero de Colonias Transconjugantes#CP: Nmero de Colonias Parchadas

  • Calendario de actividades prctica conjugacin

    Actividad Fecha

    1. Protocolo experimental. Conjugacin.

    A) Realizar conjugacin (lleva mximo 1 h), aislar por estra tanto cepa receptora como la transconjugante y se deja incubando (24 h)

    Martes 30 Septiembre

    2. Actividad extra-clase. Sacar cajas de la incubadora y colocarla a 4C.

    Mircoles 1 Octubre

    3. Protocolo experimental. Conjugacin continuacin.

    B) Parchar 50 colonias de las cepas aisladas en el paso B e incubar 24 h.

    Jueves 2 Octubre

    4. Actividad extra-clase: Sacar cajas y Observar crecimiento y determinar el porcentaje de colonias transconjugantes

    Viernes 3 Octubre

    MARTES 7 OCTUBRE

    MIRCOLES 7 OCTUBRE

    JUEVES 8 OCTUBRE

    VIERNES 9 OCTUBRE