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METODOLOGÍA DE ESTUDIO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
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Purificación de proteínas
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Cromatografía de exclusión molecular (Filtración en gel)
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Cálculo de PM
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-OCH2COO-
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HPLC, FPLC,AKTA
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Otra alternativa es la expresión en sistemas heterólogos
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Análisis de muestras: Electroforesis en gel
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SDS PolyAcrilamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)
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SDS PolyAcrilamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)
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Isoelectroenfoque
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Electroforésis en 2 dimensiones (geles 2D)
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Qué podrías decir acerca de estos 3 “spots”?
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Determinación estructura primaria: Composición en aminoácidos: Hidrólisis , derivatización, y HPLC Secuencia: Digestión con proteasas HPLC Espectro de masa Determinación estructura secundaria: Dicroismo circular Determinación estructura terciaria/cuaternaria: Cristalografia y difracción de rayos X o Resonancia Magnética Nuclear (RMN)
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Digestión con proteasas
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Espectrómetro de masa: ioniza ysepara los núcleos por relación masa/carga (m/z)
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Para identificar la muestra es necesario utilizar una base de datos
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Se puede secuenciar un péptido realizando una doble corrida
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ESTRUCTURA SECUNDARIA: Dicroismo circular
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Cristalografia y difracción de rayos X
Difracción de la rotación de la molécula Mapa densidad electrónica
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Ajuste por secuencia de aminoácidos Estructura final
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