PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS

MÁRCIA SILVARÉKA MAULIDE CANE

28 NOVIEMBRE 2011

INGREDIENTES BIOACTIVOS

Cálculo de los volúmenesCi = 1 g/L = 1000 mg/L

Vf = 100 µL¿V1, V2, V3, V4,V5? Ci . Vi = Cf . Vf

↔ Vi = Cf . Vf / Ci

Solución Cf (mg/L) Vi (µL) Vagua destilada añadida (µL)

1 0 0100

2 100 1090

3 200 2080

4 400 4060

5 600 6040

EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ

Preparación de la curva patrón

Cálculo de la recta patrón

Determinación de polifenoles en la muestra

PRÁCTICA 1. EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ

Cálculo de la recta patrón

Solución Concentración (mg/L) Absorbancia (A)

1 0 0

2 100 0,294

3 200 1,099

4 400 1,125

5 600 1,379

f(x) = 2.82 xR² = 0.999886839425144

Concentración (g/L)

Abs

orba

ncia

(A)

Por este motivo se empleó otra curva de calibrado más robusta y fiable, donde eliminamos estos dos puntos. La ecuación de la recta obtenida por la pareja fue y = 2,82x.

EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ

La ecuación de la recta obtenida inicialmente no era fiable, porque la R es inferior a 0,9 y por que los valores de absorbancia de los patrones 200 y 400 son muy parecidos.

A partir de la ecuación de la recta obtenida y las absorbancias de cada fracción, se calcularon la masa de compuestos fenólicos (por 1 g de extracto) y el porcentaje de los mismos. Ecuación de la recta: y = 2,82x y –absorbancias

x -concentraciones las soluciones.

Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té

Fracción Peso secoextracto (mg) Cextracto (mg/mL)

1- extracto inicial 2,2 2,2

2 0,5 0,5

3 1,1 1,1

4 0,4 0,4

Cálculo de las concentraciones

Peso secoextracto (mg) = meppendorf+extracto - mappendorf

Vfraccións = 1,0 mLCextracto (mg/mL) = Peso secoextracto /

Vfracción

Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té

Csoluciones (g/L) = Abs / 2,82mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = Csoluciones (g/L) (1L / Cextracto (g/L))

% mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = (mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g)) 100 en el extracto inicial% mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g) = [(mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g)) / mextracto inicial (g)] 100 en los

fracciones 2, 3 y 4

Fracción Abs. (A) Csoluciones (g/L) Cextracto (g/L)mcomp. fenólicos (g) /

mextracto (g)

% mcomp. fenólicos

(g) / mextracto (g)

1- extracto

inicial1,110 0,394 2,2 0,177 17,7 %

2 0,002 7,09 10-4 0,5 1,42 10-3 0,1 %

3 0,774 0,264 1,1 0,240 24,9 %

4 0,418 0,148 0,4 0,370 37%

Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té

Fracción

% mcomp. fenólicos

(g) / mextracto

(g)

1- extracto

inicial17,7 %

2 0,1 %

3 24,9 %

4 37%

Discusión de los resultados Fracción extraída con metanol presentaba un mayor

contenido en compuestos fenólicos (37%) frente a las fracciones extraídas con agua ( 0,1%) y con acetato de etilo (24,9%).

Agua es el disolvente menos eficaz para hacer la extracción: los compuestos fenólicos presentan polaridades altas.

En una infusión de té se pierde parte de los compuestos fenólicos del mismo (el té contiene un 30% /g de peso seco; mientras que la infusión preparada en esta práctica contenía sólo el 17 % de estos compuestos).

Extracción y purificación de los compuestos fenólicos presentes en las hojas de té empleando disolventes orgánicos permite obtener una mayor cantidad de estos compuestos bioactivos (37% y 24,9% ).

Extracción con éter de petróleo

Determinación de carotenoides por cromatografia en capa fina (TLC)

PRÁCTICA 2. EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

Desarrollo de la cromatografía en capa fina (TLC)

EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

La clorofila a sale más alta que la clorofila b. Los carotenoides en función de la concentración pueden presentar un color: naranja-rojo (mayor concentración) amarillo (menor concentración)

Extracto de Tomate liofilizado

EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

El beta-caroteno fue el que más migró hacia arriba (fue con el frente); presentaba un color naranja con bordes amarillos (porque hay menos intensidad), (Rf ≈ 0,99).

El licopeno también migró hacia arriba y se encuentra más cerca del beta-caroteno; La luteína tiene una polaridad más alta, migra menos hacia arriba (Rf ≈ 0,97).

Discusión de los resultados

EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

Extracto de pimentón – el princiipal componente es la capsantina (color rojo).

Se pudieron distinguir distintas bandas:

Las de más arriba pueden corresponder a una molécula de capsantina unida a dos ácidos grasos.

Las demás bandas corresponden a otros esteres de la capsantina u otros carotenoides.

Discusión de los resultados

EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

Extracto de espinaca: es una fuente importante de luteína.

En la placa 1, se observa que la espinaca tiene una mezcla de las clorofilas a y b; las bandas de color gris que aparecen pueden deberse a que la clorofila haya perdido el magnesio en su estructura, convirtiéndose en feofitina.

Extracto de zanahoria - bandas de beta-caroteno, igual que en el tomate, pero puede que la zanahoria tenga una mezcla de isómeros.

Beta-caroteno ha migrado con el frente hacia más arriba; Alfa y el gamma-caroteno también eluirian con el frente. La zanahoria también contiene luteína.

PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS

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INGREDIENTES BIOACTIVOS

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