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Instrumentación BásicaFacultad de Bioanálisis

PRACTICA No. 1"MICROSCOPIA: DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO"

FUNDAMENTO. El microscopio es el instrumento común de aumento del laboratorio clínico. Se usa en

gran parte con fines cualitativos, para la identificación morfológica de células, microorganismos y tejidos, y para la localización de reacciones químicas ó inmunológicas.

Los microscopios son ubicuos en los laboratorios de patología, citología, genética, microbiología, hematología y análisis de orina, pero se encuentran mucho menos en laboratorios de química, donde casi todos los procedimientos realizados son de carácter cuantitativo.

A pesar del papel central que desempeña el microscopio en el laboratorio clínico, el personal no suele estar formalmente capacitado en su uso y mantenimiento. Aunque el microscopio óptico moderno es un costoso instrumento de presición, a menudo se le subutiliza y maltrata pues se le usa sin el cuidado ni los conocimientos necesarios. En esta práctica, se pretende que el alumno conozca la utilidad, funciones, partes, mecanismos del funcionamiento del microscopio, en especial, del microscopio de campo claro, el más utilizado en el trabajo del laboratorio.

GENERALIDADES.1. INTRODUCCION: Utilidad del microscopio, diferencias entre microscopio simple y

compuesto.2. HISTORIA.3. PARTES DEL MICROSCOPIO :

a) Sistema Opticob) Sistema de Iluminaciónc) Sistema mecánico

MATERIAL. Microscopios compuestos de diferentes marcas.

TECNICA. Examinar los diferentes modelos de microscopios. Describir por sistemas las partes que integran el instrumento e indicar sus funciones. Anotar las observaciones de las partes del microsopio:

Sistema Parte Descripción Función


Optico

Iluminación

Mecánico

OBSERVACIONES. Realiza algún comentario respecto a tus impresiones de la práctica.

CUESTIONARIO.l. De qué es producto la ampliación total de un microscopio?2. Mediante qué fórmula podemos determinar el poder de resolución?3. Con qué fin se utiliza el aceite de inmersión?4. Qué significan los números que aparecen escritos en los objetivos?5. Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?

PRACTICA No. 2MICROSCOPIA: USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO


OBJETIVO. Reforzar el conocimiento del manejo correcto y cuidados que requiere el uso del microscopio de campo luminoso.

FUNDAMENTO. La verdadera utilidad de la miscrocopía se fundamenta en la formación de una imágen magnificada con la menor cantidad posible de defectos ópticos, y el logro del contraste basado en la absorción diferencial de la luz entre la muestra estudiada y su medio. El reforzamiento de las técnicas de manejo y cuidados del microscopio son necesarios para poder obtener el máximo provecho de esta herramienta tan importante en muchas áreas del trabajo de un laboratorio de análisis clínicos.

MATERIAL.

METODOS. I.CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.l. Transportar el microscopio en forma vertical, tomándolo del brazo con una mano y de la base con la otra.2. Colocar con cuidado el microscopio en la mesa. Es conveniente asegurarse de que no existan vibraciones ó aparatos que las provoquen ( vortex, agitadores, etc. ) en la mesa donde será colocado.3. No deberá fumarse al pie del microscopio pues las lentes pueden cubrirse con una capa de material no combustible mezclado con residuos de carbón lo que produce un campo borroso.4. No deben usarse cantidades exageradas de aceite de inmersión, pues si no se llegara a eliminar al terminar el trabajo, puede irse acumulando en las lentes, lo que dará problemas al microscopista.5. Limpiar el soporte mecánico del microscopio con una tela que no deje pelusa, ó bien un trapo húmedo. Los objetivos secos pueden limpiarse con agua destilada; los objetivos de inmersión y el condensador, de preferencia con xilol aunque con medida.6. El microscopista que use anteojos, deberá quitárselos para mirar al microscopio pues podrían rayarse los oculares e inutilizarse.7. El microscopio debe limpiarse dos veces por semana, aceitarse una vez al mes y hacerle servicio profesional por lo menos una vez al año.

II. MANEJO DEL MICROSCOPIO.l. Iluminación del campo visual.

* Conectar y prender la lámpara.* Acercar el objetivo a la preparación.* Subir el condensador hasta el tope.* Abrir ó cerrar el diafragma del condensador aproximadamente a la mitad,

hasta tener un campo adecuadamente iluminado y con el mayor contraste posible. Recuerde que los campos excesivamente iluminados disminuyen el contraste de las estructuras del objeto que se observa y que los campos poco iluminados no permiten distinguir los colores.

2. Colocar la preparación en la platina y seleccionar con el revólver el objetivo de menor aumento. ( 10 X ).3. Enfoque de la preparación.

* Enfocar la preparación con el objetivo seco débil ( 10 X ), subiendo la platina hasta el tope, y si no lo hay, acercar la platina lo más que se pueda a la lente objetiva, mirando por los lados del microscopio.

* Mirando por los oculares , bajar la platina con el tornillo macrométrico hasta que empiecen a distinguirse los detalles de la preparación.

* Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico.* Sin mover los tornillos, cambiar al objetivo seco fuerte ( 40 X ) y mover el

tornillo micrométrico hasta enfocar de nuevo.


* Dejar caer una pequeña gota ( 15 mm de diámetro ) de aceite de inmersión sobre la preparación, y con cuidado, cambiar al objetivo de inmersión e intentar enfocar la preparación con el tornillo micrométrico. Cuando se está enfocando una preparación que se pretende observar con el objetivo de inmersión, debe evitarse mover el tornillo macrométrico. Es importante tener cuidado al estar buscando el enfoque correcto, ya que a veces por descuido, se presiona demasiado el portaobjetos con el objetivo hasta que éste se rompe.

Al terminar de hacer las observaciones, limpiar el microscopio como se indicó anteriormente y entregarlo:

Con la lámpara apagada, el cable enrollado y sujeto con una liga.Con la platina hasta el tope inferior.Con el revólver colocado en el objetivo de menor aumento ó donde no lo tiene.

III. El alumno deberá realizar el siguiente ejercicio con el fin de afianzar el manejo del microscopio así como la comprensión de su funcionamiento. Recorta un trozo de papel del tamaño de un portaobjetos, y dibuja en el centro de una de las dos caras, una flecha lo más pequeña posible y en posición vertical.

1. Coloca el objetivo de menor aumento, e ilumina correctamente.2. Sitúa la tira del papel de forma que la flecha quede en el centro del campo de

observación y en posición vertical. 3. Ahora, utilizando el tornillo macrométrico, acerca al máximo el objetivo a la tira de

papel4. Mirando por el ocular gira lentamente el tornillo de enfoque en sentido contrario,

alejando ahora el objetivo de la preparación hasta conseguir que la muestra esté enfocada. Cuando creas que la ves correctamente, sigue alejando un poco más, y si ves peor, retrocede al mejor enfoque. Termina de enfocar perfectamente utilizando el tornillo micrométrico.

5. Una vez enfocada la flecha, mueve la tira de papel hacia arriba ( sin dejar de mirar por el ocular ).Responde:

* Hacia dónde se desplaza la flecha ? R=* Mueve la tira de papel hacia la derecha y responde, hacia dónde se desplaza la

flecha? R=* Cómo se ven las imágenes en el microscopio? R=

1. Responde, para cada diferente objetivo, qué posibilidad de aumento tiene tu microscopio? R=

IV. Realizar el siguiente ejercicio con el fin de practicar el manejo del microscopio, así como también el uso de las distintas graduaciones de luz.Anota las observaciones de cada una de las siguientes muestras y responde:cómo concluyes que tuviste que graduar la luz para cada caso?

Enfocar muestra de sedimento urinario ( 10 X y 40 X )R =

objetivoocular


Enfocar muestra de un coproparasitoscópico. ( 10 X y 40 X )R=

Enfocar un frotis sanguíneo. ( 10 X, 40 X y 100 X )R=

V.Ejercicio para determinar exactamente la posición de cualquier punto de la preparación. Los microscopios utilizados en medidas de presición tienen platinas dotadas de dos movimientos perpendiculares entre sí. La lectura de los nonius de estos tornillos permite medir longitudes en las dos dimensiones, y determinar así la ubicación de cualquier punto en la preparación.

Lo anterior es una representación de una escala provista de carro móvil graduado.P= escala principal. S= escala secundaria. En la figura se puede apreciar que el “ 0 “ de la escala está situado entre 12 y 13 mm de la escala “ p “. Para realizar la lectura, hay que buscar un valor en el que “ s “ y “ p “ estén totalmente alineados; este valor lo encontramos en la división 20 de la escala “ p “ que está alineado con la división 8 de la escala “ s “ equivalente a 0.8 mm. Por lo tanto, la lectura será: - escala principal 12 mm - escala secundaria 0.8 mm es decir, 12.8 mm

PRACTICA No. 3MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO

INTRODUCCION.El efecto producido por la técnica del campo oscuro consiste en un fondo negro sobre

el cual se ven los objetos intensamente iluminados. Esto se logra al equipar el microscopio con un condensador especial que provoca que los rayos de luz que alcanzan al objeto sean tan oblicuos con relación al eje óptico, que no lleguen a pasar directamente por el objetivo. Este efecto se logra gracias al diseño de dicho condensador, el cual es capaz de formar un cono de luz hueco ó carente de luz en la parte central, debido a que la lente del


condensador está oscurecida en el centro, y deja pasar solamente un anillo luminoso exterior, con el cual se forma este cono de luz hueco.

El cono de luz hueco se invierte al atravesar la preparación, de la misma manera que en el microscopio de campo claro, pero como está oscurecido en la parte central, el anillo luminoso rodea al objetivo y la luz no logra penetrar, de manera que el campo visual no se encuentra iluminado, excepto cuando alguna estructura del especimen en la preparación logra desviar la luz por refracción y entonces sí logra entrar por el objetivo.Existen dos tipos de condensadores para lograr este cono de luz que son el cardioide y el paraboloide.

La microscopía de Campo Oscuro es de un valor especial en el examen de microorganismos sin teñir suspendidos en líquido ( Preparaciones Húmedas y Gota Pendiente )

MATERIALMicroscopio de campo OscuroLaminillas con muestra húmeda ó en gota pendiente.

TECNICA.

l. Colocar la fuente luminosa al microscopio y centrarla ( la lámpara se centra con el objetivo seco débil y con el condensador de campo claro.

2. Una vez centrada la luz, colocar el condensador de campo oscuro3. Colocar el porta-objetos con muestra en la platina.4. Enfocar la muestra siguiendo los mismos pasos que en la técnica

para enfoque con el microscopio de campo claro. CAMPO DESCRIPCIÓN

INICIAL

FINAL

DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO .

SISTEMAPARTE DESCRIPCIÓN FUNCION


MECÁNICO

ÓPTICO

ILUMINACIÓN

DESCRIPCIÓN DE LOS CAMPOS OBSERVADOS EN EL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.

ACTIVIDADES.

Realizar esquemas del condensador especial para campo oscuro desde un plano frontal y desde un plano lateral.

Realizar esquema de la plaquita que contiene los diafragmas anulares de campo oscuro para el condensador y que reemplaza al condensador de campo oscuro.

Observar la muestra con el microscopio de campo oscuro aplicando la técnica que se indicó anteriormente

Realizar observaciones del campo al inicio de la observación y del campo al final de la misma, con la muestra observada en campo oscuro.

¿Cómo tienes que ajustar la luz con el diafragma del condensador para observar mejor con el microscopio de campo oscuro?

C

PRACTICA No. 4MICROSCOPÍA DE CONTRASTE DE FASES


INTRODUCCION.El microscopio de Contraste de Fases es de un valor incalculable para el estudio de

células vivas, en el examen de preparaciones húmedas y de gota pendiente.Con iluminación normal, resulta muy difícil el estudio de preparaciones de densidad

homogénea y transparentes como bacterias y células cuya capacidad de absorción de la luz es tan pequeña que la imagen no presenta diferencias de luminosidad entre sus elementos. Al ser absorbidos los rayos de luz por las diferentes estructuras, las ondas luminosas que atraviesan la células se retrasan y desvían. Las ondas retardadas están en una fase distinta que las de los restantes rayos luminosos, pero estas diferencias no son suficientemente grandes como para poderse apreciar con el microscopio óptico ordinario.El microscopio de Contraste de Fases amplifica estas diferencias en la fase y las convierte en diferencias en la intensidad de la luz, aumentando así el contraste entre las células y su medio exterior.

De esta manera, pone de manifiesto diferencias en las células y en sus estructuras no discernibles por otros medios ópticos, transformándolas en cambios de intensidad luminosa ( diferentes grados de brillo ó de oscuridad

GENERALIDADES.Principales características del microscopio de contraste de fases.Principio del funcionamiento del microscopio de Contraste de Fases . MATERIAL.Microscopio de Contraste de Fases.Material Biológico.

TECNICA.1. Colocar la lámpara al microscopio y centrarla.2. Ajustar el diafragma de fase del condensador, colocando la ranura anular de 10

X y la lente objetiva de 10X. 3. Quitar el ocular de la izquierda y sustituírlo por el telescopio de centrado. Hacer el

centrado con los anillos de fase. ( negro del objetivo, blanco del condensador.) girando el ocular de fase.

4. Retirar el telescopio de centrado y colocar nuevamente el ocular.Observar la preparación.

SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCIÓN


OCULAR DE FASE

OBJETIVODe

FASE

ANILLO CIRCULAR

ZONA COMPLEMENTARIA

O

P

T

I

C

O


SISTEMA PARTE DESCRIPCIÓN FUNCIÓN

CONDENSADOR

LENTES

RANURA ANULAR

LÁMPARA

BRAZO, BASE TORNILLO MACRO Y MICROMÉTRICO,

CARRO, REVÓLVER,ETC.

Ejercicios:

Realizar las observaciones que complementan los cuadros anteriores.

I L

U

M

I

N

A

C

I Ó

N

M E

C Á

N I

CO

O


Realizar las descripciones del campo en los siguientes pasos:

Con el ocular normal:

Con el ocular de fase ó telescopio antes de centrar los anillos:

Con los anillos centrados:

Al colocar de nuevo el ocular

normal:Imagen en campo claro:

Imagen con contraste de fases:

Realizar esquemas de dichas observaciones.

Realizar esquema del condensador de fases ajustable con los diafragmas para los diferentes aumentos.

PRACTICA No. 5MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA


Es un Microscopio que se utiliza para observar muestras teñidas con colorantes especiales llamados fluorocromos, los cuales se caracterizan porque cuando son iluminados con luz de longitud de onda corta (invisibles al ojo humano), dan origen a longitud de onda larga (visibles al ojo humano). Estos materiales se denominan fluorescentes y el fenómeno, fluorescencia. Este principio ha sido incorporado a técnicas que permiten identificar específicamente a objetos por observación microscópica directa. . .

MATERIAL:

Microscopio de fluorescenciaPreparaciones teñidas con fluorocromos

MÉTODOS: Observar cada una de las partes del microscopio y analizar sus funciones.Realizar un dibujo de dichas observaciones y llenar la tabla con la información que se pide en ella.

TECNICA PARA LA OBSERVACIÓN CON EL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA.l.Colocar el tablero de defensa de la luz.2.Poner el condensador en posici6n DF3.Introducir el filtro excitador (Presione el anillo de la derecha) 4.Checar que el obturador este hacia afuera5.Prender la lámpara de ha1ógeno

6.Bajar la platina para colocar la muestra7.Subir la platina hasta el tope8.Bajar la platina lentamente hasta encontrar la imágen del objeto 9.En caso de que la imágen sea demasiado brillante, regular el brillo con la ayuda de los

filtros ND10.Si por algún motivo no esta revisando la preparación introduzca el obturador para evitar

pérdida de fluorescencia de la muestra.

DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCION


MECANICO

Práctica No. 6Balanzas Granatarias.

OPTICO

ILUMINACION


Las balanzas granatarias son instrumentos que sirven para pesar. Se caracterizan por no tener una sensibilidad muy grande, pero sin embargo son muy aceptables cuando la muestra que se va a pesar no va a ser utilizada para análisis que requieran una gran presición

Material.Balanza grantaria Balanza de Tres Vigas ó de platillo únicoVidrio de relojEspátula

Métodos: A ) Descripción de la Balanza.l. Describir las partes que la integran.2. Anotar sus funciones3. Realizar un esquema señalando cada una de sus partes.

PARTE DESCRIPCIÓN FUNCIÓN

BASE

PUNTO DE APOYO

FIEL

BRAZOS DE ESCALAS( BRAZOS

PUENTE)

PESAS


TORNILLO DE CALIBRADO

PLATILLO

B) 1. Determinar el peso de cualquier objeto realizando la pesada como se indica en la técnica.

2. Pesar en un vidrio de reloj tarado previamente, 0.68 g de cloruro de sodio 1800 mg de azúcar

Técnica del Manejo de la Balanza:

l. Nivelar la balanza usando los tornillos niveladores. La balanza estará nivelada cuando coincida la aguja ó fiel con el centro de la escala ó cuando coincida la línea de la escala móvil con la línea de la escala fija.

2. Colocar en el centro del platillo el objeto que se va a pesar.3. Agregar pesas hasta que la balanza quede nuevamente nivelada.4. Anotar el peso del objeto el cual se obtiene sumando las pesas empleadas.5. No colocar sobre los platillos objetos ó sustancias que los deteriore. Para esto se emplearán recipientes adecuados, por ejemplo, vidrios de reloj, pesafiltros, cápsulas de porcelana, crisoles, papel,etc.6. En caso de usar recipientes, pesar primero éste, luego agregar la sustancia y pesar nuevamente.El peso de la sustancia se obtiene por la diferencia de los dos pesos.7. En el caso de necesitar pesar una cantidad específica, se suma el peso del recipiente a la cantidad que necesitamos, y se colocan las pesas con el peso equivalente a dicha suma. La balanza de momento quedará en desequilibrio. Habrá que ir agregando al recipiente, poco a poco, la cantidad que queremos pesar, hasta que la aguja ó fiel marque nuevamente el cero ó indique que la balanza ya está equilibrada, momento en el que la pesada se da por terminada.

Resultados.

Observaciones

Responde:l. Clasificar a las balanzas según su construcción2. Indicar su sensibilidad


3. Cómo se realiza la pesada por sustitución.4. Cómo se realiza la pesada por transposición5. En qué casos se realizan las pesadas por sustitución y por transposición?

PRACTICA No. 7BALANZA ANALÍTICA

La balanza analítica eléctrica es una balanza mecánica, aunque tiene una luz eléctrica para iluminar la escala de lecturas. La lectura se realiza retirando pesas incorporadas, en cantidad equivalente al peso del cuerpo por pesar. El astil se vuelve a una una posición cercana a la original y la desviación residual se lee en una escala iluminada.


Actualmente entre las balanzas analíticas se encuentran las conocidas como balanzas electrónicas, que se caracterizan porque no tienen pesas incorporadas.

En ella se utiliza una acción electromagnética para volver a la cruz a su posición original. La corriente eléctrica necesaria para generar dicha acción es proporcional a la masa del objeto que se pesa.

MATERIAL. Balanza analíticaEspátulaVidrio de relojMaterial a pesar

TÉCNICA:A) DESCRIPCIÓN DE LA BALANZA1. Describir las partes tanto internas como externas que integran el instrumento e

indicar sus funciones .2. Anotar observaciones .

I. PARTES INTERNAS DE LA BALANZA.

PARTE DESCRIPCIÓN FUNCIÓNASTIL, BRAZO O SOPORTE.


ESTRIBO. PRISMA.( Cuchilla pequeña

CUCHILLA PRINCIPAL.

PESAS.

AMORTIGUADOR NEUMÁTICO.

II.PARTES EXTERNAS DE LA BALANZA.



PLATILLO.

FRENO DEL PLATILLO Ó DISPOSITIVO DE PARADA.

TORNILLOS NIVELADORES Ó DE REGULACIÓN DE HORIZONTALIDAD.

NIVEL DE BURBUJA.

BOTÓN DE CONTROL DE PESAS

TORNILLO DE CALIBRACIÓN Ó DE REGULACIÓN DEL CERO.

ESCALA LUMINOSA U ÓPTICA. ( PLACA GRADUADA )


PALANCA DE PESAS Y PLATILLO.

B. MANEJO DE LA BALANZA.

l. Al efectuar las pesadas, observar que el nivel de burbuja de la balanza se encuentre centrado. En caso de no estarlo, mover los tornillos niveladores ó de regulación de horizontalidad.

2. Disparar la balanza con la palanca de pesas y platillo en pesada final. Ver que las escalas que aparecen en la pantalla luminosa marquen cero. De ser así, proceder a pesar. Si no está nivelada, mover el botón de regulación del cero ó de calibración. El ajuste del cero debe hacerse siempre que sea necesario.

3. Apagar la balanza y colocar el objeto a pesar. Al efectuar la pesada, primero marcar el peso aproximado del mismo con el botón de control de pesas, luego proceder a mover la palanca de pesas y platillos en posición de pesada inicial ó prepesada. Ver si la escala luminosa aparece. Si es así, apagar y volver a accionar la palanca pero ahora en posición de pesada final. Si la escala no aparece, quitar ó poner pesas ( con el control de pesas ) checando cada cambio con la palanca en posición de prepesada ó pesada inicial, y por último en pesada final.

4. Ajustar en pesada final con el tornillo de calibración.

5. Apagar la balanza y retirar el objeto pesado y colocar las pesas en su posición original.

Observaciones: No debe dispararse la balanza en pesada final si antes no se conoce el peso aproximado del objeto ó sustancia a pesar.No se añadirán ó quitarán pesas ú objetos mientras la balanza se encuentre disparada.

OBSERVACIONES.

RESULTADOS DE LECTURA:

ESQUEMA DE PARTES INTERNAS DE LA BALANZA.

ESQUEMADE PARTES EXTERNAS DE LA BALANZA.


PRACTICA No.8CENTRÍFUGAS:

Las centrífugas son instrumentos que sirven para separar los componentes de mezclas heterogéneas. Al usarlas se debe tomar en cuenta algunas precauciones para evitar deterioros del aparato y las muestras, ó accidentes personales. Con el propósito de un rendimiento máximo del equipo, es necesario familiarizarse con sus partes y con el uso adecuado.Principalmente se debe observar que exista un balance de carga el cual se efectúa en base al balance estático y al balance dinámico.

Para obtener un buen balance dinámico es necesario que las cargas opuestas sean iguales en masa y tengan el mismo centro de gravedad. Se puede variar el centro de gravedad usando volúmenes iguales de líquido que tengan gravedades específicas


diferentes. Los tubos de centrífuga deben ser idénticos. No debe usarse nunca un tubo de cuatro pulgadas con uno de seis pulgadas en el lado opuesto.

Para obtener un buen balance estático, los envases metálicos donde se colocan los tubos se deben balancear antes de colocarse en la centrífuga. En caso de que no tengan el mismo peso, se debe agregar agua al envase hasta igualarlos.

MATERIAL.

Centrífugas de varios modelosTubos de ensaye de 13 X 100Balanza de tres vigas.

MÉTODOS.

I. Describir las partes de la centrífuga, y relacionarlas con sus funciones.


MOTOR

EJE CENTRAL


CABEZAL

ANILLOS

CAMISAS Ó CONTENEDORES

TACÓMETRO

BOTÓN DE ENCENDIDO

FRENO

CUBIERTA EXTERNA

II.Efectuar el Balance estático de acuerdo con el siguiente procedimiento:

1. Revisar que los tubos metálicos se encuentren limpios y en buenas condiciones.

2. Pesar los tubos y ordenarlos ( pares de tubos con el mismo peso )3. Colocar los tubos pesados en el anillo del cabezal . (Deben quedar pesos

iguales en posiciones opuestas )


OBSERVACIONES DEL BALANCE ESTÁTICO: DESCRIPCIÓN

CARACTERÍSTICAS DE LOS TUBOS METÁLICOS

PESO DE LOS TUBOS

CHEQUEO DEL BALANCE

RESULTADO

II. Efectuar el balance dinámico:

1.Seleccione los tubos de vidrio que va a utilizar en la centrífuga, procurando que éstos reúnan los requisitos necesarios, como son:

a) Tubos de igual longitudb) Igual espesor de vidrioc) No deben estar rayados ni estrellados

2. Una vez seleccionados los tubos se les coloca la muestra que se va a centrifugar, lenándolos como máximo hasta 1 cm antes del borde. 3. Preparar un tubo de contrapeso para la muestra


4. Colocar los tubos en la centrífuga en posiciones opuestas. 5. Poner en marcha la centrífuga lentamente y con regularidad. Si en la centrífuga existe equilibrio, no habrá vibraciones. 6. Si hay equilibrio, apagar lentamente y con regularidad la centrífuga. 7. Si no hay equilibtrio, checar nuevamente los pasos anteriores.

OBSERVACIONES DE BALANCE DINÁMICO:DESCRIPCIÓN

CARACTERÍSTICAS DE LOS TUBOS DE VIDRIO

LLENADO DE LOS TUBOS

RESULTADO

Observaciones.

PRACTICA No. 9INFLUENCIA DE LA FUERZA CENTRIFUGA SOBRE LA VELOCIDAD DE

SEDIMENTACION

La Sedimentación es un proceso mediante el cual las partículas tienden a irse al fondo de un recipiente, acelerándose este proceso al aplicar la fuerza centrífuga dependiendo de la velocidad de sedimentación, de la fuerza centrífuga aplicada y del tiempo de centrifugación.

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensayo de 13 x 100 Solución de Albúmina de huevo Pipetas graduadas Acido Nítrico Centrífuga


ReglaCronómetro Aplicador de madera

TECNICA:

1. Pipetear 6 ml. de la solución de albúmina de huevo en un tubo de ensayo de 13 X 100, agregar 1 ml. de ácido nítrico y mezclar (con un aplicador).

2. Centrifugar a 500 r.p.m. durante 2 min.3. Sacar el tubo con cuidado de la centrífuga y medir el paquete formado por la

sedimentación de albúmina, anotar la lectura.4. Mezclar con el aplicador la solución hasta la completa disolución y repetir la

centrifugación durante 2 min. Pero a 1000, 1500, 2000, 2500 r.p.m. anotando las respectivas lecturas.

5. Graficar los resultados en papel milimétrico colocando en el eje de las abcisas la velocidad de centrifugación y en el eje de las ordenadas las lecturas en mm. de albúmina sedimentada.

6. Preparar otro tubo con albúmina y ácido nítrico y mezclar.7. Centrifugar a 500 r.p.m. durante 1 min.8. Sacar el tubo de la centrífuga y medir el paquete formado por el sedimento.9. Mezclar y repetir la centrifugación a 500 r.p.m. pero durante 2,3,4,5 min.10.Graficar las lecturas en papel milimétrico colocando en el eje de las ordenadas las

lecturas en mm. de albúmina sedimentada y en el eje de las abcisas el tiempo de centrifugación.

FUERZA CENTRIFUGA VARIABLE- TIEMPO CONSTANTE. (2 min.)

R.P.M. PAQUETE MEDIDO (mm.) OBSERVACIONES

500

1,000

1,500

2,000


2,500

FUERZA CENTRIFUGA CONSTANTE (500 r.p.m.) - TIEMPO VARIABLE

TIEMPO PAQUETE MEDIDO (DUD.) OBSERVACIONES

1

2

3

4

5

CONCLUSION:

Instrumentación Básica Facultad de Bioanálisis

PRACTICA No. 10DESCRIPCION Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO

El espectrofotómetro es un instrumento que se utiliza principalmente para medir la luz que transmite una solución en una celda. La luz trasmitida, se convierte mediante cálculos matemáticos en unidades de absorbancia y que sirve para determinar la concentración de substancias absorbentes de luz presentes en la celda. Posee componentes básicos que es necesario conocer para la mejor comprensión de su funcionamiento.

MATERIALEspectrofotómetro

TECNICA:A).-DESCRIPCION DEL ESPECTROFOTOMETRO

1.-Describir las partes que integran el instrumento e indicar sus funciones.2.-Anotar sus observaciones en el cuadro que a continuación se da:

PARTE DESCRIPCION FUNCIONInterruptor de

Corriente

Selector deLongitud de

ondaBotón grueso

Botón fino

Botón deRegión es-

pectral

Botón de ceromecánico

Portaceldas

Celdas

Instrumentación Básica Facultad de BioanálisisSeñal de Lectura

Escala

Ongitud de Onda

MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETROl.-Prender el instrumento y dejarlo calentar2.-Seleccionar la longitud de onda3. - Calibrar a cero mecánico (Colocar el portaceldas invertido de tal forma que tape el haz

de luz y fijarse que la señal luminosa coincida con el cero de la izquierda de la escala, en caso de no coincidir mover el botón de cero hasta que quede calibrado, si es necesario puede moverse la escala).

4.-Calibrar a cero de absorbancia, 1OO% de transmitancia (En una celdilla colocar agua destilada o blanco de reactivo, introducirla al portaceldas, tapar y ver que la señal coincida con el cero de la derecha,.si no está calibrado mover el botón grueso cuando la distancia sea grande y el fino cuando la señal este muy cercano al cero).

5.-Una vez calibrado el instrumento colocar la muestra problema en una celdilla y hacer la lectura en la escala seleccionada.

Nota: Las celdillas no se deben tocar por la parte inferior, para evitar que la grasa de las manos altere la lectura.

Colocar las celdillas en el portaceldas siempre en la misma posición (marca al frente) de esta forma la luz siempre pasará por el mismo lugar.

Cada vez que se efectúe una lectura deberá de calibrar el aparato con el blanco de agua o de reactivo.

Una vez leídas sus muestras, colocar la señal de lectura en el cero de izquierda y apagar el instrumento

OBSERVACIONES:

ESQUEMA:

CONCLUSIONES:

Práctica No. 11REALIZACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN

La curva de calibración es aquella en la que se establece una relación entre absorbancia ó %

Instrumentación Básica Facultad de Bioanálisisde transmitancia con las concentraciones, y su empleo es necesario en los trabajos cuantitativos en los que hay que calcular la concentración del absorbente. Se prepara graficando las absorbancias en el eje Y, contra las concentraciones conocidas de las diluciones del std. en el eje X. Para calcular la concentración del problema se interpola su absorbancia en el eje Y, y se ve la concentración correspondiente en el eje de las X.

MATERIAL REACTIVOS:Tubos de ensaye 15 X 10 Estándar de Hemoglobina Pipetas graduadas Reactivo de CianometaEspectrofotómetro TÉCNICA1.- Prepare varias diluciones del estándar de Hemoglobina colocando una serie de la siguiente manera.

Tubo No. Estándar Cianometa Concentracióngr/100 ml

1 6 nada 20.0082 4.5 1.5 15.0063 3 3 10.0044 1.5 4.5 5.0025 nada 6 blanco

2.- Mezclar y leer en absorbancia a 540 nm contra blanco de agua. 3.- Graficar en papel milimétrico colocando en el eje de las abcisas la concentración en mg/100 ml.y en las ordenadas las absorbancias. .4.- Leer la misma serie en % de transmitancia y graficar las lecturas en papel milimétrico colocando en el eje de las abcisas la concentración (g/100 ml) y en el eje de las ordenadas el % de transmitancia.

LECTURA

OBSERVACIONES DE LA SERIE DE TUBOS

Tubo No. DESCRIPCION12345

CALCULOS:CONCLUSION:

Practica No.12ESPECTRO DE ABSORCION DE DOS COLORANTES

Tubo No. ABSORBANCIA % TRANSMITANCIA12345

Instrumentación Básica Facultad de BioanálisisUn espectro de absorción consiste en una gráfica de absorbancia contra longitud de onda. Los compuestos coloreados presentan espectro de absorción característicos que pueden ser detectados mediante un espectrofotómetro al leer la muestra de 400 nm a 700 nm y graficar las lecturas. La utilidad de obtener el espectro de absorción es determinar la longitud de onda de máxima absorbancia, a su vez es importante porque esa es la longitud de onda de trabajo para construir la curva de calibración o para leer problemas.

MATERIAL REACTIVOSTubos de ensaye 15 x 150 Sol de azul de bromofenolPipetas graduadas (10 mg/lt). Espectrofotómetro Sol.de naranja de metilo

(10mg/lt)TECNICA:1. Prepare una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla;

TUBO No. NARANJA DE AZUL DE BROMOFENOL

METILO (ml) (ml)

1 10 -----

2 ---- 10

3 5 5

2. Medir la absorbancia del tubo 1 desde 400 a 700 nm, de 5 en 5 nm, ajustándo acero 100 % T con un blanco de agua antes de cada medición.

3. Trazar la curva de absorción graficando en papel milimétrico, colocando en el eje de las ordenadas la absorbancia y en el eje de las abcisas la longitud de onda, (debe decir absorbancia en la ordenada y longitud de onda y sus unidades en las abcisas, además debe de llevar la leyenda de Espectro de absorción para dos colorantes localizar el punto de máxima absorción de la sustancia y marcarlo en la gráfica).

4. Repetir lo anterior para el tubo 2 y 3.

OBSERVACIONES DE LAS CURVAS TRAZADAS POR LOS COLORANTES.

TUBO No.1

DESCRIPCION DE LA CURVA


2

3

** ANEXAR GRAFICAS

CONCLUSION:

LECTURAS:

LONG. de onda TUBO Nº1 TUBO Nº2 TUBO Nº3

400405410415420425430435440445450455460465470475480485490495500505510515520525530535540545550555560565570575


580585590595600605610615620625630635640645650655660665670675680685690695700

PRACTICA No. 13REFRACTÓMETRO

El refractómetro es un instrumento con el cual se puede medir el índice de refracción de las sustancias, algunos modelos en base a este principio se le han calibrado escalas que nos permiten realizar otro tipo de lecturas.

MATERIAL._

Tubos de ensaye 13 X 100


Pipetas Pasteur.

Refractómetro.

TECNICA._

A) DESCRIPCIÓN DEL REFRACTOMETRO

1.-Describir las partes y funciones de las partes del refractómetro.

2.-Anotar sus observaciones en la tabla correspondiente.

PARTE DESCRIPCION FUNCION

Prisma

Tapa

Ocular

Tornillo de Calibración

Tubo delRefractómetro

B) MANEJO DEL REFRACTÓMETRO.

1. Limpiar la superficie de la tapa y el prisma, con un trapo

húmedo y déjese secar.

2. Colocar la tapa.

3. Aplicar un poco de la muestra en la orilla superior de la _

tapa, en tal forma que fluya sobre la superficie por capilaridad.

4. 0rientar el refractómetro hacia una fuente de luz.

5. Realizar la lectura de la muestra a través del ocular.


OBSERVACIONES

ESQUEMAS

CURVA DE CALIBRACION DEL AZUL DE BROMOFENOLPráctica No. 14

La curva de calibración es aquella en la que se establece una relación entre absorbancia ó % de transmitancia con las concentraciones, y su empleo es necesario en los trabajos cuantitativos en los que hay que calcular la concentración del absorbente. Se prepara graficando las absorbancias en el eje Y, contra las concentraciones conocidas de las diluciones del std. en el eje X. Para calcular la concentración del problema se interpola su absorbancia en el eje Y, y se ve la concentración correspondiente en el eje de las X.

MATERIAL REACTIVOSTubos de ensaye 15 X 10 Sol. Azul de Pipetas graduadas bromofenol( 10 mg Espectrofotómetro /lt ) Agua destilada

Instrumentación Básica Facultad de Bioanálisis Técnica1.- Prepare varias diluciones de la solución de azul de bromofeno colocando una serie de la siguiente manera.

Tubo No. Azul debromofenol

Agua destiladaml

Concentracióngr/100 ml

1 2 82 4 63 6 44 8 25 10 0

2.- Mezclar y leer en absorbancia a 590 nm contra blanco de agua. 3.- Graficar en papel milimétrico colocando en el eje de las abcisas la concentración en mg/100 ml.y en las ordenadas las absorbancias. .4.- Leer la misma serie en % de transmitancia y graficar las lecturas en papel milimétrico colocando en el eje de las abcisas la concentración (mg/10mml) y en el eje de las ordenadas el % de transmitancia.

LECTURA

OBSERVACIONES DE LA SERIE DE TUBOS

Tubo No. DESCRIPCION12345

CALCULOS:

Tubo No. ABSORBANCIA % TRANSMITANCIA12345


CONCLUSION

Instrumentación Básica Facultad de BioanálisisCAMPOS OBSERVADOS POR EL OCULAR DEL REFRACTOMETRO

SIN MUESTRA CON MUESTRA ( Suero )

SIN MUESTRA CON MUESTRA (Orina )

CONCLUSION:


PRACTICA No. 15 MEDIDOR DE pH

El medidor de pH es un instrumento que emplea un sistema de electrodos de fabricación comercial, uno de referencia, (calomel) y otro de vidrio, que se sumergen en la solución cuyo pH se quiere medir, generándose una diferencia de potencial la que se relaciona con el pH.

MATERIAL:Medidor de pHVasos de precipitados

REACTIVOS:Solución buffer pH 7 Soluciones de diferentes pH

TECNICA:A).-DESCRIPCION DEL MEDIDOR DE pH 1.Describir las partes y funciones del medidor de pH 2.Anotar sus observaciones en la tabla correspondiente:

PARTE DESCRIPCION FUNCION

Electrodoindicador

Electrodode referencia

Soporte

Medidor

Escala

Swith de funciones

Control deCalibración

Control detemperatura

Indicador de Lectura


B).-MANEJO DEL MEDIDOR DE pHl.Fijar el Switch de funciones en posición pH2.Sumergir el electrodo dentro de la solución buffer de 73.Ajustar el control de calibración, hasta que la aguja le lectura marque 74.Sacar los electrodos de la solución y enjuagarlos con agua destilada 5.Sumergirlos en una segunda solución y ajustar el control de temperatura6.Sacar los electrodos, enjuagar y hacer la medición de las muestras.

OBSERVACIONES:

ESQUEMA:

MEDIDOR DE pH

LECTURAS:


CONCLUSION:

INSTRUMENTACION BASICAFACULTAD DE BIOANALISIS

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