práctica nº 06

LABORATORIO DE ANALISIS CLINICO BIOCELLHEMATOLOGIA IICdigo:LAB-AC-BIOCELL-01

MANUAL Versin:01

SISTEMA DE GESTIN DE CALIDADPgina:1-11

HEMATOLOGA II: RECUENTO DE GLBULOS BLANCOS Y FORMULA LEUCOCITARIA.I. OBJETIVOS: Desarrollo de actividades de destreza del alumno, en el manejo de las tcnicas. Conocer el fundamento y las tcnicas de recuento de glbulos blancos. Conocer la tcnica de formula leucocitaria e interpretar los resultados.

II. INTRODUCCIN:El recuento del nmero de leucocitos o glbulos blancos se expresa por mm3 de sangre.La sangre se deposita en un lquido para diluir leucocitos, dejndolos intactos. En cambio los eritrocitos son destruidos por este lquido. Luego se cuentan los leucocitos en una cmara de recuento, por medio de microscopio, y se calcula el nmero que existe por mm3 de sangre. Es importante conocer el nmero de leucocitos, pues este se altera en casos de enfermedad infecciosas. Existen tcnicas automticas y hemacitomtricas para el recuento de estos y son similares al recuento de G.R.

Valores de referencia:Grupos de edadleucocitos/mm3Hombres y mujeres5000 10000Nios de 1 ao8000 15000Recin nacidos10000 12000Nios de 3 a 9 aos 4000 15000

III. MATERIALES: tcnica hemocitomtrica

Sangre capilar o venosa (con o sin anticoagulante) Solucin de Turk Pipeta de toma para G.B. Sorbete Papel higinico o algodn Cmara de neubauer Laminilla de neubauer Agitador mecnico Microscopio Cronometro

se prohbe su reproduccin total o parcial sin la autorizacin de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL. Se considera copia no controlada a toda copia impresa que no lleve el sello de COPIA CONTROLADA. Documento para uso exclusivo de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL


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IV. PROCEDIMIENTO:1. Preparacin para el recuento:a) Emplear sangre venosa con anticoagulante o sangre obtenida por puncin cutnea.

b) Utilizar la pipeta de Thoma, aspirara sangre hasta la marca 0.5Limpiar la sangre excedente del extremo de la pipeta, con papel filtro o gasa, (cantidad)

c) Completar hasta la marca 11, con solucin de Turk y mantener en posicin horizontal.Evitar la formacin de burbujas (volumen)



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d) Agitar la pipeta durante 03 minutos, utilizando un agitador mecnico o cubriendo los extremos con los dedos de la mano.Utilizar guantes por bioseguridad.

e) Eliminar la cuarta parte del contenido de la pipeta ( 3 5 gotas)Para permitir formar muestra del embolo de la pipeta.

f) Cargar inmediatamente un lado de la camera de neubauer, colocando para ello una gota entre la superficie de la cmara y el cubreobjetos. Se debe evitar la sobrecarga. Dejar en reposo durante 3 minutos. Para que sedimenten los G.R. en la base de la cmara.



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g) Colocar la cmara sobre la platina del microscopio y enfocar a menor aumento. (10X) localizado en el retculo de la cmara. Aplicar normas de manejo de microscopio

2. Recuento:a) Cuntese los leucocitos situados en los 4 cuadrados de los retculos externos de la cmara de Neubauer (cada cuadrado esta subdividido en 16 cuadraditos).

b) Multiplquese el total de G.R. contados por 50 con el objeto de obtener el nmero de eritrocitos por mm3 de sangre. Se incluye al recuento las clulas que toquen los lmites los lmites izquierdo y superior de los cuadrados, pero no aquellos que toquen los lmites derecho e inferior. Antese la cantidad hallada en cada uno de los cuadrados. Las diferencias entre las cifras mayor y menor no deber exceder de 10. El recuento deber ser efectuado a menor aumento con objetos de 10X.se prohbe su reproduccin total o parcial sin la autorizacin de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL. Se considera copia no controlada a toda copia impresa que no lleve el sello de COPIA CONTROLADA. Documento para uso exclusivo de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL


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Clculos:Los clculos realizados fueron:Miguel = 95 G.B. x 50 = 4750Karina = 109 G.B.x 50 = 54503. Preparacin del frotis por el mtodo de dos portaobjetos.Consiste en la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjetos (25x75), empleando el cambio biselado de otro portaobjetos de igual dimensin.Materiales: Lancetas descartables Alcohol 70 Algodn Portaobjetos limpios y desengrasados (25x75)PROCEDIMIENTO:a) Una vez extrada la sangre con cualquiera de las metodologas, se coloca una pequea gota de sangre (5ml) (aprox. 3 mm de dimetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.


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b) Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un ngulo de 45.

c) Deslizar suavemente a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjeto.


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d) El grosor del frotis sanguneo puede variar segn sea el ngulo que formen entre si ambos portaobjetos. As, si es superior a 45, la extensin obtenida ser gruesa y corta, si es inferior a 45 ser larga y fina. El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posicin horizontal.Zona excesivamente gruesa: se halla en la regin inmediata al punto de partida de la extensin (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos.Zona excesivamente fina: corresponde al final de la extensin y termina en un rea donde las clulas adoptan una posicin acartonada (barbas). En esta regin existe un exceso de granulocitos y monocitos.Zona ideal: corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de clulas.CabezaCuerpoCola

4. Tincin con colorante WRIGNTFundamento:El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las variaciones anormalidades de estructura, forma y tamao de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloracin. La informacin obtenida de un frotis de sangre perifrica depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloracin.Materiales: Colorante Wright Frasco gotero Solucin amortiguadora tamponada Agua tamponada



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PROCEDIMIENTO:a) Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejara secar entre 15 y 20 minutos.

b) Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre con el colorante de Wright, dejndolo por espacio de 5 minutos.

c) Posteriormente se aade solucin amortiguada tamponada en partes iguales hasta obtener un brillo metlico, dejando 6 minutas adicionales.



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d) Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.

e) Se coloca en el microscopio y, con menor aumento, se revisa la calidad de la coloracin, la cantidad aproximada de glbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersin y se enfoca a un aumento de 100X

BasfiloNeutrfiloMonocito LinfocitoEosinfilo

f) La forma de los glbulos rojos se examinara detenidamente observando adems del color (cantidad de hemoglobina), presencia de plaqueta, y su agrupacin y su distribucin.se prohbe su reproduccin total o parcial sin la autorizacin de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL. Se considera copia no controlada a toda copia impresa que no lleve el sello de COPIA CONTROLADA. Documento para uso exclusivo de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL


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V. RESULTADOS:Clculos:Los clculos realizados fueron:Miguel = 95 G.B. x 50 = 4750Karina = 109 G.B. x 50 = 5450Cantidad de glbulos blancos contados:Neutrfilo = 44Basfilo = 16Eosinofilo = 14Linfocito = 8Monocito = 18 = 100

VI. DISCUSIONES: El recuento de glbulos blancos se realiz tomando en cuenta dos muestras la de Karina y la de miguel: Luego de extraer la sangre de ambas personas y hacer los procedimientos debidos pasamos a colocar una gota de sangre en la cmara de Neubauer y contamos el nmero de clulas de cada individuo. Los resultados obtenidos fueron los siguientesMiguel = 95 G.B. x 50 = 4750Karina = 109 G.B. x 50 = 5450 Estos resultados nos indican que Karina si cuenta con los glbulos blancos que se encuentran dentro de los valores de referencia, en cambio miguel tiene menor cantidad de glbulos blancos no se encuentra dentro de los valores de referencia.



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VII. CUESTIONARIO:a) Mencione las variaciones en el recuento diferencial de leucocitos en relacin a los valores de referencia de los mismos.De acuerdo a los valores de referencia: El Neutrfilo tiene el porcentaje mayor a diferencia de los otros tipos de G.B. se contaron 44 = 45- 65 % El Basfilo tiene un valor de referencia de 0-1 % pero se contaron 16 clulas de este tipo El Eosinfilo tiene un valor de referencia de 1 4% pero se encontr casi la misma cantidad de clulas que la del basfilo. El Linfocito es el 2do en tener la mayor cantidad de clulas y por lo tanto el mayor valor de referencia 20 45 %, se encontraron 8 clulas lo cual no concuerda con el valor de referencia. El Monocito tiene un valor de referencia de 4 8% y se contaron 18 clulas de este tipo lo cual si concuerda con los datos anteriores.b) Mencione las funciones que cumplen los colorantes enunciados en la prctica.La tincin de Wright es un tipo de tincin usada en histologa para facilitar la diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre. Se usa principalmente para teir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio.La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky.Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina B. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y da color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y. Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras qumicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los ncleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante bsico. La tincin de Wright cuyo colorante est compuesto de azul de metileno (que tie de color azul las partes acidas de las clulas) y eosina (que tie las partes alcalinas) disueltos en metanol (que permite la fijacin de las clulas), adicionando a la preparacin buffer de fosfatos (que rehidrata a las clulas despus de la exposicin con metanol)se prohbe su reproduccin total o parcial sin la autorizacin de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL. Se considera copia no controlada a toda copia impresa que no lleve el sello de COPIA CONTROLADA. Documento para uso exclusivo de LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO- BIOCELL

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