UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD CIENCIAS BASICAS DE LA EDUCACIÓN

PROGRAMA LICENCIATURA CIENCIAS NATURALES Y MEDIO AMBIENTE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA

PRACTICA 3

CORPUSCULO DE BARR 1. INTRODUCCION La inactivación del cromosoma X es un proceso biológico notable, y es así como en un estado temprano del desarrollo embrionario de las hembras mamíferos. Uno de los cromosomas X de cada célula es desactivado. El cromosoma X desactivado, está fuertemente condensado, haciéndose visible como un cuerpo que se tiñe intensamente y que es conocido como cuerpo de Barr. El estado inactivo es observable de manera consistente a lo largo de todas las divisiones mitóticas subsecuentes que generan el estado adulto del mamífero.

Los cuerpos de Barr son estructuras que son observables dentro de la célula, después de unos tratamientos para la coloración y observación directa que permite el análisis de cromosoma inactivo en la célula humana.

En la presente práctica, los estudiantes podrán observar uno de los tantos materiales que conforman la materia viva, que en Biología son transparentes, sin coloración y por ello es difícil percibir su estructura, tal como sucede con la cromatina. Para tal efecto, en esta experiencia seguiremos los diferentes pasos del frotis, la fijación y la coloración del tejido que permitirá la observación de la cromatina inactiva y entender su significado.

PREGUNTAS 1.1 Determine el número de cuerpos de Barr para los siguientes casos • 45, XO • 47, XXY • 48, XXXY • 49, XXXXY 1.2 Por que la célula utiliza el mecanismo de inactivación del cromosoma x?

1.3 Que presupone para la herencia la inactivación del cromosoma X?

1.4 Cuando sucede la inactivación temprana del cromosoma X?

1.5 Cuales son las regiones que escapan a la activación en el cromosoma X?

1.6 Cortamente defina que es un cuerpo de Barr?

1.7 Cuales son las principales características estructurales de los globulos blancos?

2 OBJETIVOS

1. Adiestrar al estudiante en la observación de la estructura de los cuerpos de Barr y la identificación de los cromosomas inactivo. 2. Entrenar al estudiante en la preparación de muestras de frotis bucal para la observación directa de las células desprendidas. 3. Enseñar al estudiante los mecanismos básicos de la cromatina y su función. 4. Enseñar al estudiante los mecanismos básicos que permiten que el material genético pueda ser coloreado. 3. MATERIALES

4. PROCEDIMIENTO

4.1 Recolección de las células epiteliales: Estas pueden obtenerse rascando el interior de la mejilla (frotis bucal) con un baja lenguas nuevo. Para esto, hay que aplicar muy poca presión ya que se desprenden muy fácilmente. Posteriormente se extienden las células sobre el porta-objeto en área de uno o dos centímetros cuadrados.

4.2 Fijación: Para lograrla, se debe sumergir el portaobjetos inmediatamente en un frasco coplín que contenga una mezcla a partes iguales de alcohol metílico absoluto y acido acético. La fijación de realiza por 20 minutos. Después, se saca el portaobjetos del fijador.

4.3 Secado: se seca soplando con una perilla.

4.4 Coloración: Posteriormente, se deposita sobre un soporte especial, compuesto de por dos varillas separadas cinco centímetros entre si, y colocado sobre un lavabo. Se vierte sobre el portaobjetos azul de metileno al 1% y se deja por 10 a 15 minutos. Luego se enjuaga el colorante y se aclara el portaobjetos en agua corriente para eliminar el exceso de colorante. Se apoya oblicuamente el portaobjetos sobre uno de sus extremos y se deja secar. Una vez seco está listo para el examen a 40X.

Par obtener mejores resultados, con un lente de mayor aumento, se debe usar un cubreobjetos. El montaje se cubre con entellan, evitando dejar burbujas de aire. Para esto se debe colocar una gota de entellan sobre el frotis y se baja lentamente el cubreobjetos. No debe hacerse presión sobre el cubreobjetos sino dejar que su propio peso extienda elentellan. Si el entellan se observa demasiado espeso, se debe hacer más fluido con la adición de un poco de Xylol.

Las formulas utilizadas para determinar el número de cuerpos de Barr se calcula así: (N - 1). Donde N es el número de cromosomas X. Ejemplo: 46, XY = N – 1= 1 – 1 = 0. Es decir, en un hombre de condición cromosómica sexual normal, no debe observarse ningún (es decir 0) cuerpos de Barr. De acuerdo a lo observado, grafique los cuerpos de Barr para otros análisis en los siguientes: 46, XY (N – 1= [0) 46, XX (N – 1 = 1) 47, XXX (N – 1 = 2) 48,XXXY (N – 1 = 2) 5. BIBLIOGRAFIA • Kutsche, R., Brown, CJ. Determination of X- chromosome inactivation status using X-

linked expressed polymorphisms identified by database searching. Genomics 65: 9 – 15, 2000.

• Carrel, L. Et al. A first – generation X – inactivation profile of the human X chromosome. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 14440 – 14444, 1999.

• Lyon, M.F. sex Chromatin and Gene Action in the Mammalian X- chromosome. A. J. Hum. Genet, 14: 135 – 145, 1962.

• Skuse, D.H. Et al., Evidence from Turner´s Syndrome of an imprinted X - linked locus affecting cognitive function. Nature 387: 705 – 708, 1997

• Healey, Peter. Microscopios y Vida microscópica. Editorial Bruguera, 1980. • Tonon, L. Et al., Unbalanced X – chromosome inactivation in hematopoietic cells from

normal women. British Journal Hematology 102:996 – 1003, 1998. • Griffiths, J.F.A An introduction to Genetics Analysis. Mc GRAW-Hill. 7a Edition, 1999. • Belmont, J.W. Genetic control of X inactivation and processes leading to X –

inactivation skewing. Am. J. Hum. Genet. 58: 1108, 1996. 6. AUTORES • Patricia Eugenia Vélez V. M.Sc. Genética Humana • Pedro A. Moreno T. Doctorante Biología Celular y Molecula