UNIVERSIDAD AUTONOMA DE GUERREROUnidad académica de ciencias químico-biológicas

MicrobiologíaPractica No. 12 Aislamiento e identificación de bacterias de interés medico

Practica No. 12 Aislamiento e identificación de bacterias de interés médico

OBJETIVO Aislamiento e identificación de algunas bacterias de interés médico, utilizando algunas

técnicas para su aislamiento.

RESULTADOSo PRIMERA PARTE: SIEMBRA Y OBSERVACION AL MICROSCOPIO Tinción de Gram

Cepa 7: Bacilos Gram Negativo

Siembra en estría cruzada sobre los medios de cultivo: Agar EMB Agar Mc Conkey Agar Salmonella – Shigella Agar Sangre Agar Sulfito de Bismuto Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Agar Verde Brillante

Siembra del microorganismo en placa agar Incubación a 37°C 24hrs.

o SEGUNDA PARTE: OBSERVACION DE LA MORFOLOGIA COLONIAL Y SIEMBRA DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

Morfología colonial “Cepa 7”

Agar EMB [Medio de cultivo diferencial para el aislamiento de bacilos entéricos Gram negativos]

Agar Mc Conkey (sin crecimiento)[Medio de cultivo diferencial para el aislamiento de microorganismos Gram negativos]

Agar Salmonella – Shigella (Sembrado por mi)[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella]

Agar Sangre

[Medio de cultivo de enriquecimiento]

Agar XLD Agar Sulfito de Bismuto

[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de [Medio selectivo para Salmonella]enteropatógenos, especialmente Salmonella y Shigella]

Agar Verde Brillante[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella]

Microorganismo Cepa 7

Medio de Cultivo Agar EMBAgar Mc Conkey

Agar SS Agar SB

Siembra 12/06/2012Lectura 13/06/2012Tamaño (mm) 1 mm

sin

crec

imie

nto

1.5 mm 1 mmForma Puntiforme Circular PuntiformeElevación Convexa plana ConvexaMargen o Borde Entero Entero EnteroColor Gris Transparentes NegroSuperficie Lisa Lisa LisaAspecto Húmedo Húmedo HúmedoLuz reflejada Mate Brillante MateLuz transmitida Opaca Traslúcida OpacaConsistencia Suave-viscosa Membranosa Suave-viscosa

Pruebas bioquímicas

Prueba de citocromo oxidasa: Negativo Prueba de la catalasa: Positivo(Realizada por mí)

Inoculación de pruebas bioquímicas por:

~Picadura (asa recta) -Agar Motilidad Indol Ornitina (MIO)

~Picadura y estría simple (asa recta) -Agar Hierro de Kligler (KIA) -Agar Hierro Lisina (LIA)

~Estría simple (asa bacteriológica o aguja de inoculación) -Agar Citrato de Simmons -Agar para prueba de Fenilalanina

~Mezcla en caldo (asa bacteriológica) Caldo Malonato Caldo Urea Caldo rojo de metilo (RM) Caldo de Voges Proskauer (PV) Caldo base rojo de fenol + sacarosa con

campana de Durham Caldo base rojo de fenol + glucosa con

campana de Durham Caldo base rojo de fenol + maltosa con

campana de Durham Caldo base rojo de fenol + lactosa con

campana de Durham

o TERCERA PARTE: LECTURA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS

-Agar Hierro de Kligler (KIA) -Agar Hierro Lisina (LIA) -Agar Citrato de Simmons

-Agar para prueba de Fenilalanina -Caldo Urea -Caldo rojo de metilo (RM)

-Caldo de Voges Proskauer -Agar Motilidad Indol Ornitina -Caldo Malonato

Maltosa

Caldo base rojo de fenol + Glucosa Lactosa Sacarosa

Cepa 7Prueba Resultado Medio de cultivo

Crecimiento Positivo

Agar KliglerCambio de color K/AProducción H2S PositivoProducción de gas NegativoDescarboxilacion de Lisina k/k

LIAProducción de H2S NegativoCitrato Negativo Citrato de SimmonsFenilalanina Negativo Agar de fenilalaninaUreasa Negativo Caldo ureaRojo de metilo Positivo Caldo rojo de metiloVoges Proskauer Negativo Caldo VPMovilidad Positivo

Agar MIODescarboxilacion de ornitina NegativoIndol Negativo

Fermentación de sacarosa NegativoCaldo base rojo de fenol + sacarosa

con campana de Durham

Fermentación de lactosa NegativoCaldo base rojo de fenol + lactosa con

campana de Durham

Fermentación de maltosa PositivoCaldo base rojo de fenol + maltosa

con campana de Durham

Fermentación de galactosa Positivo con producción de gasCaldo base rojo de fenol + galactosa

con campana de DurhamOxidasa Negativo Prueba de citocromo oxidasacatalasa Positivo Prueba de catalasa

DISCUSION

La finalidad de esta práctica es la identificación de una bacteria; por lo cual a cada equipo se le proporciono un tubo con cultivo en caldo que contenía la bacteria a identificar por dicho equipo, en nuestro caso, al equipo 2 le asignaron la cepa 7. Comenzamos por realizar dos frotis, que posteriormente teñimos con la técnica de Gram; al observar las preparaciones al microscopio se observaron bacilos Gram negativo; posteriormente se realizó la siembra del microorganismo en distintos medios de cultivo, que se incubaron a 37°C durante 24 horas. Pasado el tiempo de incubación se realiza la lectura de la morfología colonial; cabe desatacar que la bacteria de la cepa 7 creció en todos los medios proporcionados, exceptuando Agar Mc Conkey, En agar SS crecieron planas y transparentes, mientras que en Agar SB eran convexas y negras. Por los resultados de la tinción de Gram y las características morfológicas se trata de una enterobacteria, más específicamente se pudiera pensar en Salmonella o Shigella por su crecimiento en Agar SS; sin embargo las características morfológicas coloniales obtenidas en Agar SB nos indica que lo más probable es que se trate de Salmonella. Para asegurarse de que bacteria se trata realizamos las pruebas bioquímicas correspondientes y los resultados se compararon con tablas preestablecidas de libros para identificar con el menor margen de error la bacteria que se desea; según la tabla que consulte (y que agrego como anexo) 18 de los 20 resultados que obtuve son idénticos, 1 se obvia y otro no se menciona en la literatura consultada, por lo cual podemos decir que 19 de los 20 resultados son idénticos y por lo tanto la bacteria en cuestión es Salmonella typhi.

CONCLUSIONMediante la realización de esta práctica se aprendieron los procedimientos necesarios para el aislamiento e identificación de bacterias de interés médico, puesto que a partir de un cultivo en caldo, del cual se desconocía el microorganismo que contenía, se realizaron técnicas de tinción y cultivo para conocer su morfología microscopia y aislar la bacteria para su posterior resiembra en pruebas bioquímicas que según las reacciones obtenidas nos indicarían de que bacteria se trata.En el caso particular de nuestro equipo “2” en la asignada Cepa 7, después de realizar las técnicas y pruebas correspondientes, determinamos que la bacteria contenida en esta cepa es Salmonella tiphy; ya que los resultados obtenidos y la literatura consultada coincidieron en que la bacteria es Bacilo Gram-Negativo, tanto Agar SS y Agar SB son medios especiales para el aislamiento de salmonella y la morfología colonial de esta tiene como característica ser planas y traslucidas en Agar SS y de color negras en Agar SB. La presencia de Salmonella se confirmó con las pruebas bioquímicas ya que 19 de los 20 resultados obtenidos fueron los esperados para dicha bacteria.

ANEXO