penuntun praktikum biokimia semester 2

PROGRAM STUDI KIMIAFAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS JAMBI2015

PENUNTUN

PRAKTIKUM

BIOKIMIA IIProtein

ATURAN UMUM LABORATORIUM BIOKIMIA

PROGRAM STUDI KIMIA FST-UNJA

Selama mengikuti Praktikum Biokimia II, peserta diwajibkan untuk :

1. Mempersiapkan diri, dengan :

a. Menggunakan jas lab dan sepatu tertutup selama praktikum

b. Menyiapkan jurnal/catatan praktikum dan laporan

c. Memahami Material Safety Data Sheet (MSDS) dari bahan-bahan kimia yang akan

digunakan pada percobaan sebelum memulai praktikum

d. Membawa kain lap, tissue gulung, sikat tabung, sabun cuci air dan korek api.

2. Bertanggung jawab terhadap peralatan yang digunakan:

a. Meminjam peralatan gelas yang selanjutnya disimpan di lemari praktikum

b. Mengecek ulang peralatan tambahan dan mengembalikan alat-alat yang dipinjam harian

setelah selesai melakukan praktikum. Apabila tidak mengembalikan alat pada saat itu,

maka alat tersebut dianggap hilang/pecah dan dimasukkan ke dalam daftar alat yang

harus diganti di akhir semester.

c. Mengganti peralatan yang hilang/pecah di akhir semester dengan menyertakan bon

pembelian.

3. Menjaga kebersihan ruang kerja dan lingkungan Laboratorium

a. Menjaga kebersihan alat dan meja kerja

b. Tidak membuang batu didih atau padatan ke dalam washbak

c. Membuang sampah pada tempat yang telah disediakan, terutama tissue yang digunakan

selama praktikum

d. Membuang limbah logam berat dan limbah pelarut organik pada tempat yang sudah

disediakan

e. Mematikan keran air dan api/gas setelah selesai digunakan

f. Menanyakan hal-hal mengenai keselamatan dan keamanan kerja di lab kepada ASISTEN,

PETUGAS LAB, atau PEMIMPIN PRAKTIKUM jika ada keraguan.

ATURAN KHUSUS PRAKTIKUM BIOKIMIA

Selama mengikuti praktikum Biokimia II, peserta diwajibkan untuk :

1. Datang tepat waktu

a. Setiap keterlambatan berakibat pengurangan nilai praktikum hingga tidak boleh

mengikuti praktikum

b. Tanpa jas lab dan jurnal yang telah ditulis, praktikan tidak dapat mengikuti

percobaan saat itu

c. Pengecualian dimungkinkan dengan izin pemimpin praktikum.

2. Mengerjakan seluruh modul percobaan dengan tertib

a. Jika percobaan memerlukan tahapan dan waktu yang panjang, masing-masing asisten

akan membagi praktikan ke dalam sub-sub kelompok

b. Masing-masing praktikan mencatat seluruh hasil percobaan di jurnalnya

c. Setiap praktikan wajib membuat laporan yang berisi pendahuluan, hasil dan

pembahasan dan dikumpulkan ke asisten pada hari yang sama

d. Penggunaan komputer/notebook hanya pada saat analisis hasil percobaan

3. Hak-hak praktikan

a. Setiap praktikan berhak mengerjakan setiap modul percobaan, tetapi jika peralatan

dan zat-zat kimia terbatas, modul percobaan dilaksanakan oleh beberapa orang

praktikan secara bersama-sama

b. Masing-masing praktikan berhak mendapatkan penjelasan mengenai percobaan yang

sedang dikerjakan dari asisten atau pemimpin praktikum

c. Hasil tes awal setiap percobaan akan dikembalikan ke praktikan setelah dikoreksi.

PERCOBAAN 1

PENGENALAN METODA ASEPTIK DAN TEKNIK DASAR MIKROBIOLOGI

PENDAHULUAN

Penelitian pada bidang biokimia, umumnya melibatkan berbagai pengerjaan yang berkaitan dengan mikroba, baik itu bakteri maupun fungi sehingga sangat diperlukan kemampuan dasar bekerja secara aseptic. Pada prinsipnya bekerja secara aseptik adalah bekerja dengan teknik steril. Jadi setiap langkah pekerjaan diusahakan tidak membawa mikroorganisme lain selain yang kita inginkan. Untuk mencapai tujuan ini, semua peralatan, bahan-bahan kimia (termasuk media pertumbuhan dan air), meja kerja dan tangan kita harus disterilkan terlebih dahulu. Sterilisasi dilakukan dengan beberapa metode diantaranya menggunakan autoclave dengan suhu 121 °C selama 15 menit,menggunakan sinar UV serta penggunaan alcohol 70% untuk tangan dan alat kerja lainnya.

Teknik dasar mikrobiologi yang harus diketahui adalah inokulasi mikroba. Inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Inokulasi dilakukan dalam kondisi aseptik, yakni kondisi dimana semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium dan pengerjaan, dijaga agar tetap steril. Hal ini untuk menghindari terjadinya kontaminasi. Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan. Beberapa teknik inokulasi yang biasa dilakukan diantaranya: metode gores; metode tebar; metode tuang; dan metode tusuk.

ALAT DAN BAHAN PERCOBAAN

1. Alat-alat:

2 buah cawan petri kosong steril

2 buah tabung reaksi yang berisi 8-10 mL medium pertumbuhan padat

3 buah awan petri yang berisi medium padat

2 buah tabung reaksi kosong steril

2 buah tabung reaksi berisi agar miring

Kapas bebas lemak dengan atau tanpa busa

Jarun ose

Batang L

Pipet ukut 1 mL

Rak tabung reaksi

Pipet mikro dan Tip

Gelas kimia 100 mL

Wadah tempat menyimpan alat “habis pakai” yang mengandung desinfektan

2. Bahan-bahan:

Medium pertumbuhan

Luria Bertani (LB) Padat : Yeast eksrak 0,5%, Tripton 1%, NaCl 1%, Bacto agar 2%

Kultur E. coli

Etanol 70%

PROSEDUR PERCOBAAN:

Pada percobaan ini akan dipelajari cara menyimpan medium padat dalam cawan petri, menggunakan jarum ose, dan batang L.

Siapkan meja dengan cara membasahi diikuti dengan pengusapan meja dengan etanol 70%. Nyalakan Bunsen dan atur api sehingga berwarna biru.

1. Menyiapkan media padat dalam cawan petriSiapkan cawan petri kosong steril dan tabung reaksi yang berisi 8-10 mL media padat steril. Atur agar api berada diantara cawan petri dan tabung yang berisi media. Buka cawan petri dari pembungkusnya (hati-hati) jangan sampai cawan petri bagian atas dan bagian bawah terbuka.Ambil 1 tabung reaksi berisi media padat (cek suhu), pegang tabung dengan tangan kanan, buka tutup tabung dengan kelingking dan jari manis tangan kiri. Segera panaskan mulut tabung di api, buka tutup cawan petri dengan ibu jari tangan kiri (tutup tabung tetap terjepit di jari kiri). Kemudian tuang isi tabung ke dalam cawan petri dan segera tutup kembali . Panaskan kembali mulut tabung sebelum ditutup. Ulang teknik ini untuk pasangan cawan petri kosong dan media padat dalam tabung yang lain. Untuk mengetahui keberhasilan teknik aseptic anda inkubasi cawan petri ini pada 37°C semalam, amati apakah ada perkembangan mikroorganisme.

2. Menggunakan jarum oseSiapkan agar miring, kultur murni, media padat dalam cawan petri dan jarum ose. Atur meja kerja supaya agar miring dan kultur berada di sebelah kiri api, sedangkan jarum ose dan media padat ( dalam cawan petri) ada di sebelah kanan api.

Ambil tabung yang berisi kultur murni dengan tangan kiri, buka tutup tabung dengan menjepitnya diantara kelingking dan jari manis tagan kanan, segera panaskan mulut tabung. Dengan jari telunjuk dan ibu jari tangan kanan, ambil jarum ose dan segera panaskan hingga membara, dinginkan sesaat pada media padat di dalam cawan petri, ambil kultur dengan jarum ose, segera panaskan mulut tabung dan segera tutup. Letakkan kembali tabung yang berisi kultur murni pada rak. Ambil tabung yang berisi agar miring, buka tutup tabung, panaskan mulutnya dan segera gesekkan ujung ose diatas agar dimulai dari arah bagian dasar tabung kearah mulut tabung. Segera panaskan mulut tabung dan tutup kembali. Panaskan jarum ose setelah dipakai hingga membara, tempatkan pada raknya. Ulangi percobaan ini untuk media agar miring lainnya. Inkubasi tabung yang berisi agar miring yang sudah diinokulasi pada 37 °C, amati keesokan harinya.

3. Menggunakan Batang LSiapkan media padat dalam cawan petri, pipet ukur, filler cuplikan air, 50 mL etanol 70% dan batang L atur agar media padat, pipet ukur dan cuplikan air berada di sebelah kiri api sedangkan filler, etanol dan batang L disebelah kanan api.Siapkan filler agar segera dapat digunakan. Buka pembungkus pipet ukur bagian pangkal, sambungkan degan filler. Pegang pipet berfiller dengan tangan. Ambil tabung berisi cuplikan air dengan tangan kiri, buka tutupnya ( dengan menjepitnya dengan kelingking dan jari manis tangan kanan), panaskan mulut tabung, pipet 0,1 mL air, panaskan mulut tabung, segera tutup. Letakkan pipet ke dalam wadah habis pakai yang megandung desinfektan. Ambil batang L, celupkan bagian pendeknya di dalam etanol, lewatkan pada api untuk menghilangkan alcohol tersebut, dinginkan sesaat di media agar, kemudian gesekkan batang L di atas cuplikan air ( dari tepi cawan ke arah tengah) sambil memutar petri searah jarum jam agar cuplikan merata di seluruh permukaan media. Inkubasi cawan petri ini pada suhu 37 C semalaman, amati adanya pertumbuhan mikroba.Jangan lupa memberi nama, tanggal percobaan, dan keterangan sampel lainnya sebelum menyimpan di dalam incubator.

Perhatian!!

Setelah selesai bekerja dengan mikroba, jangan lupa untuk mensterilkan kembali meja dan semua peralatan dan bahan “habis pakai” yang telah digunakan. Buang sampah di tempat khusus (yang mengandung desinfektan)

PERTANYAAN

Amati dan hitung jumlah koloni yang tumbuh pada masing-masing kultur.

TUGAS PENDAHULUAN

1. Sebukan dan jelaskan nutrisi yang harus ada pada media pertumbuhan mikroba!2. Jelaskan yang dimaksud dengan kultur murni dan kuktur campuran?

3. Sebutkan 3 macam medium pertumbuhan bakteri beserta fungsinya!

DAFTAR PUSTAKA

Crueger, Wulf, and A. Grueger, 1984, Biotechnology A Textbook of Industrial Microbiology, Science Tech., Inc., USA

PERCOBAAN 2

UJI KUALITATIF ZAT PEMANIS BUATAN

PENDAHULUAN

Pemanis buatan merupakan bahan tambahan pangan yang dapat memberikan rasa manis pada pangan, tetapi tidak memiliki nilai gizi. Bahan pemanis ini adalah hasil buatan manusia dan tidak diproduksi secara alamiah. Pemanis buatan yang telah dikenal dan banyak digunakan adalah sakarin dan siklamat. Pedagang kecil dan industry rumahan seringkali menggunakan pemanis buatan karena dapat menghemat biaya produksi.

Beberapa pemanis buatan yang dikenal dan banyak ditambahkan pada makanan dan minuman adalah natrium atau kalsium siklamat, serta natrium atau kalsium sakarim. Garam siklamat dan sakarin ini memiliki tingkat kemanisan 400 dan 30 kali lebih tinggi dibandingkan sukrosa, namun penggunaannya dilarang di beberapa Negara karena diduga bersifat karsinogenik.

ALAT DAN BAHAN PERCOBAAN:

1. Alat:

Corong kaca 1 buah

Gelas ukur 10 mL 1 buah


Kertas saring 4 lembar

Penangas air 1 buah

Batang pengaduk 1 buah

Neraca 1 buah

Gelas kimia 100 mL 4 buah

Lampu spiritus 1 buah

Pipet tetes 5 buah

2. Bahan:

Aquades

Larutan BaCl2 10% 100 mL

Asam sulfat pekat 10 mL

Larutan NaOH 1N 100 mL

Resorsinol 1 gram

Karbon aktif 100 gram

Larutan NaNO2 100 mL

Asam klorida pekat 10 mL

Bahan minuman ringan yang diduga mengandung sakarin dan siklamat (disediakan oleh praktikan) 3 macam

PROSEDUR

1. Identifikasi sakarin dalam sampela. Pipet masing-masing sampel 50 mL (3 sampel), masukkan ke dalam gelas piala 100

mL. tambahkan karbon aktif diamkan 30 menit lalu saring dengan kertas whatmanb. Tambahkan 50 mg resorsinol dan 5-10 tetes asam sulfat pekat, panaskan sekitar 3

menit dalam penangas air lalu dinginkanc. Tambahkan 10 mL NaOH 1Nd. Jika terbentuk warna hijau berarti sampel mengandung sakarin

2. Identifikasi siklamat dalam sampela. Pipet masing-masing sampel 50 mL (3 sampel) masukkan ke dalam gelas piala 100

mL. tambahkan karbon aktif diamkan 30 menit lalu saring dengan kertas whatmanb. Tambahkan 10 mL HCl pekat, kocok lalu tambahkan masing-masing 10 mL BaCl2

10% dan NaNO2 10%c. Panaskan diatas penangas air 10 menit lalu dinginkand. Jika terbentuk endapan putih berarti sampel mengandung siklamat

PERTANYAAN:

1. Jelaskan fungsi penambahan NaOH, HCl, resorsinol, BaCl2, dan NaNO2?2. Manakah dari sampel minuman ringan yang mengandung sakarin dan siklamat paling

tinggi?

TUGAS PENDAHULUAN

1. Sebutkan dan jelaskan metode lain dari penentuan kandungan sakarin dan siklamat selain metode yang digunakan pada percobaan ini!

2. Sarankan pemanis alternative yang memiliki tingkat kemanisan tinggi namun aman bagi kesehatan manusia

DAFTAR PUSTAKA

Sudarmadji, Selamet (1997), Prosedur analisa untuk Bahan Makanan dan Pertanian, Edisi keempat, Liberty: Yogyakarta

PERCOBAAN 3

ANALISA KUALITATIF KANDUNGAN URIN

PENDAHULUAN

Urin merupakan cairan sisa yang dieksresikan oleh ginjal yang kemudian akan dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinalisasi. Eksresi urin diperlukan untuk membuang molekul-molekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal dan untuk menjaga homeostasis cairan tubuh. Dalam mempertahankan homeostasis tubuh peranan urin sangat penting, karena sebagian pembuangan cairan oleh tubuh adalah melalui sekresi urin.

Komposisi zat-zat dalam urin bervariasi tergantung jenis makanan serta air yang diminumnya. Urin normal berwarna jernih transparan, sedangkan warna urin kuning muda berasal dari zat warna empedu (bilirubin dan biliverdin). Urin normal pada manusia terdiri dari air, urea, asam urat, amoniak, kreatinin, asam laktat, asam fosfat, asam sulfat, asam oksalat,asam amino, garam-garam dan zat-zat yang berlebihan di dalam darah misalnya vitamin C dan obat-obatan. Semua cairan dan materi pembentuk urin tersebut berasal dari darah atau cairan intertisial. Komposisi urin berubah sepanjang proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, seperti glukosa, diserap kembali ke dalam tubuh melalui molekul pembawa.


1. Alat

Tabung reaksi

Pipet volume

Penjepit kayu

Pipet tetes

Sendok plastic

Pengatur waktu

2. Bahan

Urin normal 24 jam dan urin patologis

Kristal ammonium sulfat

Larutan natrium nitroprusida 5%

Larutan ammonium hidroksida pekat

Asam nitrat pekat

Larutan Benedict

PROSEDUR

1. Uji glukosa dalam urin (uji Bennedict)a. Campurkan dalam tabung reaksi 2,5 mL larutan Bennedict dan 4 tetes urinb. Panaskan tabung reaksi tersebut selama 5 menit dalam penangas air mendidihc. Dinginkan perlahan-lahand. Perhatikan endapan atau warna yang terbentuk

Warna Penilaian KonsentrasiBiru/ hijau keruh - -Hijau/ hijau kekuningan +1 Kurang dari 0,5%Kuning kehijauan/kuning +2 0,5-1%Jingga +3 1,0-2,0%Merah +4 Lebih dari 2%

Hasil percobaan

Uji Benedict Warna Penilaian KonsentrasiUrin NormalUrin mengandung glukosa 0,3%Urin mengandung glukosa 1%Urin mengandung glukosa 5,0%

2. Uji protein dalam urin (Uji Heller)a. Ambil 3 mL urin normal atau urin patologis masukkan kedalam tabung reaksib. Dengan perlahan-lahan (dengan pipet tetes) masukkan 3 mL asam Nitrat pekat ke

dalam tabung diatas melalui dinding reaksi ( hati-hati)c. Perhatikan cincin putih yang terbentuk pada perbatasan

Catatan

Urea, asam urat dan garamnya dapat menghasilkan cincin putih, tetapi dapat dibedakan dengan memakai urin yang telah diencerkan 3-4 kali, sehingga pengaruh ini dapat dihilangkan.

Hasil percobaan

Sampel Pengamatan KesimpulanUrin normalUrin patologis

3. Uji senyawa keton dalam urin ( Uji Rother)a. Tambahkan kristal ammonium sulfat kedalam 5 mL urin normal atau urin patologis

hingga jenuhb. Tambahkan 2-3 tetes larutan natrium nitroprusida 5% (dalam keadaan segar) dan 1

mL ammonium hidroksida pekat. Aduk dan biarkan minimal 30 menit.c. Perhatikan perubahan warna yang terjadi

Hasil percobaan

Sampel Pengamatan Kesimpulan

PERTANYAAN

1. Apakah kadar glukosa, protein dan senyawa keton dalam sampel urin masih berada dalam batas normal?

2. Apa yang menyebabkan variasi kadar glukosa, protein dan terdapatnya senyawa keton dalam urin manusia?

TUGAS PENDAHULUAN

1. Tuliskan reaksi antara glukosa dengan reagen Benedict2. Jelaskan fungsi asam nitrat pada uji Heller,dan apakah uji Heller spesifik terhadap

protein?

PERCOBAAN 4

PENENTUAN KADAR VITAMIN C

PENDAHULUAN

Vitamin merupakan molekul polar yang larut dalam air, maupun molekul nonpolar yang larut dalam pelarut lemak. Kebanyakan vitamin yang larut dalam air bertindak sebagi batu bangunan oleh koenzim, contoh asam askorbat (vitamin C) sebagai gizi diperlukan bagi hewan menyusui tingkat tinggi dan normal.

Dalam larutan air, vitamin C mudah dioksidasi terutama bila dipanaskan,oksidasi di percepat apabila ada tembaga atau suasana alkalis. Kehilangan vitamin C sering terjadi dalam pengolahan, pengeringan dan cahaya. Vitamin C penting dalam pembuatan sel-sel intra seluler,kolagen. Vitamin ini tersebar keseluruh tubuh dalam jaringan ikat, rangka, matriks,dan lain sebagainya. Vitamin C berperan penting dalam hidroksilasi prolin dan lisin menjadi hidroksi prolin dan hidroksi lisin.Vitamin C berperan penting dalam menghambat reaksi-reaksi oksidasi dalam tubuh yang berlebihan dengan bertidak sebagai inkubator. Sehingga vitamin C merupakan vitamin vitamin yang esensial untuk memelihara fungsi normal semua unit sel termasuk struktur-struktur subsel seperti ribosom dan mitokondria


1. Alat:

Erlenmeyer 250 mL 6 buah


Labu ukur 250 mL 2 buah

Corong kaca 1 buah

Mikro buret 50 mL 1 set

Labu semprot 250 mL 1 buah

Timbangan analitik 1 set

2. Bahan:

Sampel (Buah Jeruk, Jambu Biji, dll)

Larutan kanji 1%

Larutan iodium 1.10 N

Aquades

Kertas saring secukupnya

Kapas secukupnya

PROSEDUR

1. Bahan ditimbang 200-300 gram, hancurkan dalam wadah blender sampai membentuk slury

2. Timbang 10-30 gram slury tambahkan aquades sebanyak 100 mL, masukkan ke dalam labu takar 250 mL, dan encerkan sampai tanda batas.

3. Saring dengan menggunakan kapas, filtrate yang diperoleh dimasukkan ke dalam Erlenmeyer sebanyak 25 mL

4. Tambahkan larutan kanji 1% titrasi dengan cepat dengan memakai larutan iodium 0.01 N sampai timbul perubahan warna.

5. Gunakan tablet vit C komersial sebagai pembanding

PERTANYAAN

1. Jelaskan fungsi penambahan larutan kanji dan larutan iodium pada percobaan ini2. Jelaskan metoda lain yang dapat digunakan untuk penentuan kadar vitamin C

TUGAS PENDAHULUAN

1. Gambarkan struktur serta reaksi oksidasi vitamin C2. Jelaskan prinsip titrasi iodimetri dalam kaitannya dengan praktikum ini

DAFTAR PUSTAKA

Less, R. (1975). Food Analysis : Analytical and Qualitative Control Methode for the Food Manufacture and Buyer. London : Leonard Hill Book

PERCOBAAN 5

PENGUJIAN SIFAT KIMIA LEMAK

PENDAHULUAN

Lemak dan minyak adalah suatu senyawa trigliserida yang merupakan hasil reaksi

esterifikasi antara 1 molekul gliserol dengan 3 molekul asam lemak. Lemak dan minyak

tergolong ke dalam senyawa lipid sederhana yang banyak terdapat di alam. Perbedaan antara

lemak dan minyak terletak pada susunan asam lemak penyusunnya, wujudnya pada suhu kamar

dan sumbernya. Mutu lemak dan minyak dapat ditentukan dari sifat fisik dan kimianya. Sifat

fisika lemak dan minyak antara lain adalah berat jenis, warna, kelarutan, bau dan rasa.

Sedangkan sifat kimianya meliputi bilangan asam, bilangan peroksida, bilangan iod, bilangan

penyabunan dan bilangan ester.


1. Alat

Tabung reaksi 6 buah

Pipet tetes 5 buah

Gelas kimia 250 mL 2 buah


Erlenmeyer 250 mL 4 buah

Corong kaca 2 buah

Buret 50 mL 2 buah

Neraca analisis 1 buah

2. Bahan

Asam asetat glasial 20 mL

Alkohol 96% 20 mL

Kloroform 55 mL

Natrium Tiosulfat 25 gr

Indikator amilum/pati 1 gr

KI 5 gr

Aquades

PROSEDUR PERCOBAAN

1. Penentuan bilangan peroksida

1.1 Pembuatan Pereaksi

- Campuran larutan asetat: alkohol dan kloroform (20:20:55). Campurkan 20 ml

asam asetat glasial + 20 ml alkohol 96% + 55 ml kloroform.

- Larutan KI jenuh: Masukkan serbuk KI (Kalium lodida) ke dalam 10 ml air

suling, lalu aduk. Tambahkan lagi KI sampai jenuh.

- Larutan tio sulfat 0.02 N yang distandarisasi dengan tepat. Larutan ini dibuat

dengan mengencerkan larutan tiosulfat 0. 1 N. Tio sulfat 0.1 N : Larutkan 24, 82

gram tio sulfat (Na2S203.5H20) dengan air suling (yang sudah dididihkan dan

didinginkan hingga suhu kamar) hingga volume 1000 mL. tambahkan 0.1 gram

Na2CO3. Larutan stok ini dibuat 1 minggu sebelum digunakan.

- Tio sulfat 0.02N : Pipet 200 mL larutan tio sulfat 0.1 N kemudian encerkan

dengan air suling sehingga volume 1000 mL dalam labu ukur.

- Larutan indikator kanji. Larutkan I gr kanji (yang larut dalam air) ke dalam labu

ukur 100 mL. Kocok rata dan tambahkan ± 90 ml air suling mendidih. Aduk rata

lalu dinginkan hingga suhu ruang. Indikator ini dibuat sebelum digunakan pada

hari yang sama/masih segar.

1.2 Metode precobaan

- Timbang secara tepat 5,0 gr minyak ke dalam erlermeyer 250 ml yang bertutup.

- Kemudian tambahkan 30 ml campuran larutan asetat-alkohol-kloroform

(20 :20 :55), kocok hingga larut.

- Tambahkan 1 mL KI jenuh . dibiarkan di tempat gelap selama 1/2 jam . sambil

sekali-kali larutan digoyang. dan tambahkan 50 ml air suling.

- Titrasi campuran tersebut dengan larutan tio sulfat 0,02N. Titrasi harus dilakukan

secara cepat sampai warna kuning hampir hilang (kuning muda).

- Tambahkan larutan indikator kanji sebanyak 0,5 mL dan titrasi diteruskan.

Erlermeyer digoyang secara cepat sampai mendekati titik akhir yaitu warna biru

gelap menghilang. Penentuan pada blanko juga dilakukan dan setiap penentuan

contoh dan blanko dilakukan secara duplo.

PERTANYAAN PENDAHULUAN

1. Jelaskan mengenai bilangan peroksida pada minyak atau lemak!

DAFTAR PUSTAKA

Firestone, D. 1984. Peroxide value in oil and Fat. J .A .O.A .C . 28 : 507. LIPI-PuslitbangKimia Terapan. Kursus Latihan Teknik Perawatan Peralatan Laboratorium. Bandung .

PERCOBAAN 6

GLIKOLISIS DALAM SEL RAGI

PENDAHULUAN

Glikolisis merupakan rangkaian reaksi yang mengkonversi glukosa menjadi piruvat. Pada

organisme aerob, glikolisis adalah pendahuluan daur asam sitrat dan rantai transport electron,

saat sebagian besar energi bebas glukosa dihasilkan. Sepuluh reaksi glikolisis terjadi didalam

sitosol.

Sepuluh reaksi glikolisis terjadi didalam sitosol. Pada tahap pertama, glukosa dikonversi

menjadi fruktosa 1,6-bifosfat melalui reaksi fosforilasi, isomerasi, dan fosforilasi kedua. Dua

molekul ATP dipakai per molekul glukosa pada reaksi-reaksi ini. Pada tahap kedua, fruktosa 1,6

difosfat dipecah oleh aldolase membentuk dihrosiaseton fosfat dan gliserildehida 3-fosfat, yang

dengan mudah mengalami interkonvensi. Gliseraldehida 3-fosfat kemudian mengalami oksidasi

dan fofforilasi membentuk 1-3-bisfosfogliserat, suatu asetil fosfat dengan potensi transfer

fosforil yang tinggi. 3-fosfogliserat kemudian terbentuk dan ATP dihasilkan. Pada tahap akhir

glikolisis, fosfoenolpiruvat, zat antara kedua dengan potensi transfer yang tinggi, dibentuk

melalui pergeseran fosforil dan dehidrasi. ATP lainnya dihasilkan sewaktu fosfoenolpiruvat

dikonnversi menjadi piruvat.

Dalam beberapa jasad renik seperti ragi, glukosa dioksidasi menghasilkan etanol dan

CO2 dalam proses yang disebut fermentasi alkohol. Jalur metabolisme proses ini sama dengan

glikolisis sampai dengan terbentuknya piruvat. Dua tahap reaksi enzim berikutnya adalah reaksi

perubahan asam piruvat menjadi asetaldehide, reaksi reduksi asetaldehide menjadi alkohol.

Dalam reaksi yang pertama piruvat didekarboksilasi diubah menjadi asetaldehide dan

CO2 oleh piruvat dekarboksilase, suatu enzim yang tidak terdapat dalam hewan.

Reaksi dekarboksilasi ini merupakan reaksi yang tidak reversible, membutuhkan ion

Mg2+ dan koenzim tiamin piropospat. Dalam reaksi terakhir, asetaldehide direduksi oleh NADH

dengan enzim alkohol dehidrogenase, menghasilkan etanol. Dengan demikian etanol dan CO2

merupakan hasil akhir fermentasi alkohol, dan jumLah energi yang dihasilkannya sama dengan

glikolisis anaerob, yaitu 2 ATP.


1. Alat


Pipet tetes 6 buah

Gelas kimia 2 buah



Balon tiup 4 buah

Penangas listrik 1 set

Stopwatch 1 buah

Tissue 1 gulung

2. Bahan

Larutan flourida

Larutan arsenat

Suspensi ragi

Larutan glukosa 2%

Aquades

PROSEDUR PERCOBAAN

a. Menyediakan 4 buah tabung reaksi yang bersih dan kering dimana pada tabung 1

digunakan sebagai kontrol positif, tabung 2 sebagai kontrol negatif, sedangkan pada

tabung 3 dan 4 digunakan untuk melihat pengaruh inhibitor.

b. Memipet ke dalam setiap tabung

BahanTabung

1 2 3 4

Suspensi ragi

(mL)14 0 14 14

Suspensi ragi

yang telah

didihkan (mL)

0 14 0 0

Larutan

Flourida (mL)0 0 0,5 0

Larutan arsenat

(mL)0 0 0 0,5

Larutan

glukosa (mL)2 2 2 2

c. Setelah mencampurkan dengan masing-masing larutan tersebut, menutup tabung reaksi

yang berisi suspensi ragi menggunakan balon tiup yang diikat dengan karet, kemudian

membiarkan 15 menit dalam suhu kamar.

d. Amati dan catat perubahan yang terjadi pada balon dan perubahan cairan dalam tabung.

TUGAS PENDAHULUAN

1. Jelaskan bagaimana proses glikolisis yang terjadi dalam sel ragi!2. Bagaimana peran larutan fluorida dan arsenat sebagai inhibitor dalam glikolisis ragi?

DAFTAR PUSTAKA

McGilvery, R.W. 1996. Biokimia Suatu Pendekatan Fungsional. Airlangga University Press, Surabaya.

Ralston, G.B. 2006. Schaum’s Easy Outlines Biokimia. Erlangga, Jakarta.

PERCOBAAN 7

REAKSI UJI PROTEIN

PENDAHULUAN

Protein berasal dari kata protos atau proteos berarti utama. Protein adalah komponen

utama pada sel baik pada sel tumbuhan, hewan, maupun manusia. Protein untuk tubuh

diperoleh dari makanan baik dari sumber hewani seperti telur, daging, dan susu atau dari nabati

seperti protein kedele. Protein dalam makanan yang masuk ke saluran pencernaan akan dicerna

oleh enzim-enzim pencerna protein. Pencernaan protein dimulai di lambung dan kemudian

dilanjutkan di usus halus. Di lambung protein dipecah oleh enzim pepsin dan di usus halus

protein dipecah oleh enzim pankreas. Pencernaan protein sangat di pengaruhi oleh suhu dan pH.


a. Alat

a.1. Pengendapan dengan alkohol


Pipet tetes 5 buah

Gelas Kimia 2 buah

Gelas Ukur 2 buah


a.2. Denaturasi Protein


Pipet tetes 5 buah

Gelas Kimia 2 buah

Gelas Ukur 2 buah

Batang Pengaduk 1 buah

Penangas air 1 set

a.3. Penentuan Kadar Casein

Gelas kimia 4 buah

Corong 1 buah

Kertas saring 1 buah

Buret 1 buah

Penangas air 1 set

Termometer 1 buah

b. Bahan

Protein (susu kental dan kuning telur)

HCl 0,1 M

NaOH 0,1 M

Buffer asesat 1M (pH 4,7)

Etanol 95%

Asam asetat 1 N dan 0,25 N

NaOH 0,1 N

Formaldehide 40%

Fenolftalein

Aquades

PROSEDUR PERCOBAAN

a. Pengendapan dengan alkohol

1. Sediakan 3 tabung reaksi dan isi masing-masing tabung reaksi dengan 5 mL larutan

protein.

2. Ke dalam tabung I : tambahkan 1 mL HCl 0,1 M dan 6 mL etanol 95%

II : 1 mL NaOH 0,1M dan 6 mL etanol 95%

III : 1 mL Buffer asetat dan 6 mL etanol 95%

Lihat tabung-tabung mana yang tidak larut.

b. Denaturasi protein

1. Sediakan tiga tabung reaksi masing-masing tabung diisi dengan 9 mL larutan protein.

2. Ke dalam tabung I : tambahkan 1 mL HCl 0,1M

II : 1 mL NaOH 0,1M

III : 1 mL Buffer asetat

3. Tempatkan ketiga tabung dalam air mendidih selama 15 menit dan dinginkan pada

temperatur kamar.

4. Lihat ke dalam tabung mana terjadi endapan.

5. Lanjutkan percobaan di atas terhadap tabung I dan II dengan menambahkan 10 mL

buffer asetat.

c. Penentuan kadar casein

1. 20 mL sampel masukkan dalam gelas kimia, panaskan dipenangas air pada suhu 40oC.

bila digunakan sampel susu kental diencerkan dengan aquades perbandingan 1:2 dan

susu bubuk ditambahkan aquades 1:9.

2. Tambahkan 1,5 mL asam asetat 1 N, aduk homogen dan diamkan selama 20 menit.

Tambah lagi 4,5 mL asam asetat 0,25 N (untuk mencapai pH isoelektrik dari casein)

aduk dan diamkan selama 1 jam.

3. Dekanter kedalam corong dengan kertas saring. Cuci endapan dengan aquades sampai

air cucian bersifat netral.

4. Kemudian kertas saring dan endapan masukkan kedalam beker semula dan tambahkan

aquades sampai dengan volume ± 20 mL.

5. Tambahkan 4 mL larutan NaOH 0,1 M, panaskan diatas penangas air sampai larut

seperti susu dan dinginkan sampai suhu 21-24oC, teteskan 3 tetes fenolftalein.

6. Tambahkan 4 mL formaldehide 40% (warna rose hilang), titrasi dengan NaOH 0,1 N

sampai terbentuk warna rose kembali.

- Kadar Casein = mL NaOH 0,1 N x 0,9 %

TUGAS PENDAHULUAN

1. Sebutkan uji kualitatif dan kuantitatif untuk protein! Jelaskan mekanisme kerja dari uji

tersebut!

DAFTAR PUSTAKA

Lehninger, A. 1988. Dasar-dasar Biokimia. Terjemahan Maggy Thenawidjaya. Erlangga,

Jakarta.

Wibowo, L. 2009. Deskripsi dan macam-macam tingkatan struktur protein. Bandung

PERCOBAAN 8

KINETIKA REAKSI ENZIMATIS

PENDAHULUAN

Enzim adalah protein yang mengakatalisis reaksi-reaksi biologi. Sebagai katalis, enzim

mempengaruhi laju pada saat kesetimbangan dicapai, tetapi tidak mempengaruhi kesetimbangan

total suatu reaksi. Enzim membantu terjadinya reaksi dengan menurunkan energi aktivasi

pembentukan keadaan transisi substrat menjadi produk dibandingkan proses yang tidak

dikatalisis.

Laju awal (V0) dari reaksi yang dikatalisis enzim menigkat dengan bertambahnya

konsentrasi substrat hingga dicapai keadaan dimana penambahan substrat tidak lagi

meningkatkan laju awal reaksi. Keadaan dimana laju awal maksimum (Vmax) dicapai pada

kondisi substrat jenuh, diilustrasikan dengan Gmbar 1. Pngamatan ini, seperti yang terjadi pada

reaksi enzimatis atau hidrolisis substrat tunggal, telah dijelaskan dengan porstulat reaksi berikut,

dimana E adalah enzim, S adalah substrat, dan P adalah produk:

E + S ES E + P

Jadi, reaksi berlangsung melalui pembentukan kompleks enzim-substrat (ES). Bila semua

enzim adalah dalam keadaan ES (sistem dijenuhkan oleh substrat), maka laju reaksi akan

mencapai nilai maksimal (Vmax).

k1

k2

k4

k3

Michaelis dan Menten, dan kemudian Briggs dan Haldane, menggunakan skema reaksi di

atas untuk menurunkan persamaan matematik yang menggambarkan hubungan antara laju awal

dan konsentrasi substrat. Persamaan Michaelis-Menten tersebut adalah

V0 = Vmax [S ]Km+[S]

Dalam persamaan ini, Vmax dan V0 adalah laju maksimum dan laju awal reaksi, [S] adalah

konsentrasi substrat, dan Km adalah konstanta Michaelis yang nilainya sama dengan (k2 + k3)/k1.


1. Alat

Stopwatch 1 buah


Pipet ukur 1 mL, 5 mL, 10 mL 1 buah

Pengaduk kecil 2 buah

Gelas Kimia 50 mL 2 buah

Pipet seukuran 1 mL 5 buah

Kertas saring 5 lembar

Inkubator air 50 0C 1 set

Sentrifugasi klinik 1 set

Tabung sentrifuga 1 buah

Spektrofotometer 1 set

Gambar 1. Hubungan konsentrasi substrat dan laju awal dalam reaksi enzimatis

Kuvet 1 buah

2. Bahan

Larutan TCA 20%

Larutan kasein 2% (b/v)

Buffer fosfat 0,1 M (pH 8,0)

Larutan tripsin

Larutan NaOH 0,5 M

Reagen Folin-Ciocalteu

Air es

PROSEDUR PERCOBAAN

No Tabung Kasein (mL)Buffer Fosfat

(mL)Tripsin (µL)

It = 0 0,1 2,9 250

t = 20 0,1 2,9 250

IIt = 0 0,2 2,8 250

t = 20 0,2 2,8 250

IIt = 0 0,5 2,5 250

t = 20 0,5 2,5 250

IVt = 0 1,0 2,0 250

t = 20 1,0 2,0 250

Vt = 0 2,0 1,0 250

t = 20 2,0 1,0 250

Waktu inkubasi t = 20 menit

► Inkubasi masing-masing tabung yang berisi kasein dan buffer fosfat beserta pengaduknya

selama 5 menit pada inkubator 35 0C. sambil diaduk perlahan-lahan (jangan sampai

berbusa), selanjutnya tambahkan larutan tripsin (sesuai dengan tabel diatas).

► Inkubasi tepat 20 menit dalam inkubator 35 0C dihitung mulai tripsin ditambahkan, reaksi

diberhentikan dengan penambahan 1,5 mL TCA 20% ke dalam masing-masinh tabung

Perhatian : Hati-hati bekerja dengan TCA karena bersifat korosif, hindari kontak langsung dengan kulit dan mata. Bila terjadi kontak dengan kulit atau mata, cuci sesegera mungkin dengan air yang banyak.

disertai pengadukan yang kuat. Diamkan selama 30 menit kemudian saring melalui kertas

saring

► Selanjutnya sentrifuga selama 10 menit kemudian saring melalui kertas saring

► Filtrat dikerjakan menurut cara ANSON (lihat di samping)

Waktu inkubasi t = 0 menit

► Dalam tabung reaksi yang berisi pengaduk, masukkan larutan buffer dan larutan tripsin,

tambahkan masing-masing 1,5 mL larutan TCA 20%, inkubasi 30 menit dalam penangas

35 0C. terakhir tambahkan larutan kasein (semua pengukuran sesuai tabel). Diamkan

selama 30 menit dalam air es, selanjutnya sentrifuga 10 menit, kemudian saring melalui

kertas saring. Filtrat dikerjakan melalui cara ANSON (lihat di bawah)

Metode ANSON

► Campurkan 1 mL TCA-filtrat (dari percobaan di atas) dengan 2 mL NaOH 0,5 M.

tambahkan 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteu, aduk. Diamkan 10 menit, kemudian tetapkan

serapannya pada 650 nm.

Pertanyaan:

1. Buat grafik yang menggambarkan hubungan antara 1/v terhadap 1/S.

2. Dari grafik tentukan nilai Vmax dan KM.

3. Apa yang harus diperbuat seandainya warna larutan yang hendak diukur dengan

spektrofotometer itu terlalu gelap?

TUGAS PENDAHULUAN

1. Faktor apa saja yang mempengaruhi laju reaksi enzim? Jelaskan!

2. Turunkan persamaan kinetika enzim Michaelis-Menten dengan pendekatan teori keadaan

tunak (steady state) yang dikemukakan oleh Briggs dan Haldane!

3. Buktikan bahwa nilai KM sama dengan konsentrasi substrat pada V0 = ½ Vmax

4. Apa pengertian istilah-istilah berikut :

a. Unit aktivitas

b. Aktivitas spesifik

c. Aktivitas total

DAFTAR PUSTAKA

Clark, J.M and Switzer, R.L. (1976). Experimental Biochemistry, 2nd Ed., W.H Freeman

and Company, San Fransisco, USA.

penuntun praktikum biokimia semester 2

Documents