pengaruh pemberian kalsium karbonat pada...

SKRIPSI

PENGARUH PEMBERIAN KALSIUM KARBONAT

PADA GAMBARAN HISTOPATOLOGI GINJAL

TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)

ARIZA VERONICA MUFIDAH SURABAYA – JAWA TIMUR

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SURABAYA 2006

ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga

Skripsi Pengaruh Pemberian Kalsium Karbonat Pada ... Ariza Veronica Mufidah

“PENGARUH PEMBERIAN KALSIUM KARBONAT PADA GAMBARAN

HISTOPATOLOGIS GINJAL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)”

Seminar diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan

pada Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya

Oleh :

ARIZA VERONICA MUFIDAH Nim : 060233095

Menyetujui,

Komisi pembimbing

Julien Soepraptini.,SU. Drh. Soetji Prawesthirini., SU. Drh.Pembimbing I Pembimbing II



Setelah mempelajari dan menguji dengan sungguh-sungguh, kami berpendapat bahwa

tulisan ini baik ruang lingkup maupun kualitasnya dapat diajukan sebagai skripsi untuk

memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN HEWAN.

Menyetujui,

Panitia Penguji,

Dr. E. Bimo. A. H. P., M.Kes., drh.

Ketua

Roesno Darsono, drh. Kuncoro Puguh, S., M.Kes., drh

Sekretaris Anggota

Julien Soepraptini, SU., drh Soetji Prawesthirini, SU., drh.

Anggota Anggota

Surabaya, 3 Maret 2006.

Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Airlangga

Dekan,

Prof. Dr. Ismudiono, M.S., Drh.

NIP. 130 687 297




HISTOPATOLOGIS GINJAL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)”

ARIZA VERONICA MUFIDAH

ABSTRAK

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh dari pemberian kalsium karbonat dengan dosis tertentu pada gambaran histopatologi ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) dan juga untuk mengetahui pada dosis berapakah ginjal mulai terjadi perubahan.

Penelitian ini menggunakan 25 ekor tikus betina (Rattus norvegicus) umur kurang lebih tiga bulan dengan berat rata-rata 150 gram yang dibagi secara acak menjadi lima kelompok perlakuan (P0, P1, P2, P3, dan P4) dengan lima ulangan. Perlakuan kontrol (P0) diberi perlakuan kalsium karbonat (CaCO 3 ) sebanyak 0 mg/ekor/hari, kelompok P1 diberi perlakuan kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 100 mg/ekor/hari, kelompok P2 diberi perlakuan kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 200 mg/ekor/hari, kelompok P3 diberi perlakuan kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 400 mg/ekor/hari, pada P4 diberi perlakuan kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 600 mg/ekor/hari yang masing-masing perlakuan dilarutkan dengan aquades sebanyak 3 ml. Pemberian kalsium karbonat (CaCO 3 ) dilakukan peroral dengan menggunakan sonde yang dilakukan pada hari ke-15. Setelah perlakuan selama 8 minggu, hewan coba dieutanasia menggunakan dietil eter kemudian dilakukan pembedahan untuk mengambil organ ginjal guna dibuat preparat histopatologi dengan pewarnaan Heamatoxylin Eosin, kemudian diperiksa dibawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 100x dan 400x kemudian dilakukan penilaian (skor).

3

3

3

3

Hasil pemeriksaan preparat histopatologi ginjal dianalisis dengan Uji Kruskal – Wallis yang dilanjutkan dengan Uji Pasangan Berganda (Uji Z) 5%. Hasil uji statistik yang dilakukan menunjukan bahwa terdapat perbedaan yang nyata (p<0,05) terhadap perubahan gambaran histopatologi ginjal tikus putih. Kesimpulan yang didapat bahwa pada pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 100 mg, 200 mg, 400 mg, dan 600 mg dapat terlihat adanya perubahan pada gambaran histopatologi ginjal pada tikus putih. Perubahan yang terjadi pada P0, P1, P2, P3 dan P3 antara lain mengalami hemorragi, degenerasi tubuler, nekrosis tubuler dan glomerulonefritis. Kerusakan paling berat terlihat pada gambaran histopatologi ginjal tikus putih betina berupa hemorragi, degenerasi tubuler, nekrosis tubuler dan glomerulonefritis dengan pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis 600 mg/ekor/hari.

3

3



UCAPAN TERIMA KASIH

Syukur Alhamdulillah semoga selalu terpanjatkan ke hadirat Allah SWT, sehingga atas

berkat rahmat dan hidayah-NYA penulis dapat menyelesaikan makalah skripsi dengan judul :


HISTOPATOLOGI GINJAL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)”.

Dalam kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada :

1. Bapak Prof. Dr. Ismudiono, MS., Drh. selaku Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Airlanggga.

2. Ibu Julien Soepraptini., SU. Drh. selaku Dosen Pembimbing I, yang dengan sabar

membimbing dan mengkoreksi penulisan makalah.

3. Ibu Soetji Prawesthirini, SU., Drh. selaku Dosen Pembimbing II sekaligus Dosen

Pembimbing Penelitian, yang telah dengan sabar membimbing, memberi dorongan moril.

4. Para Bapak Dosen Penguji : Dr. E. Bimo A.H.P., M.Kes., drh. Roesno Darsono, drh.

Kuncoro Puguh, S., M.Kes., drh., yang telah membantu kesempurnaan makalah skripsi

ini

5. Para staf Kandang Unit Hewan Coba

6. Para Staf Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner

7. Para staf Laboratorium Patologi

8. Ayahanda dan Umik atas segala dukungan, dorongan moral maupun material dan doa

restu yang telah diberikan pada penulis.

9. Arliza, Arizky, Mbak Ani dan Azzam yang selalu memberi semangat baik moril maupun

spiritual pada penulis sampai terselesaikannya penulisan makalah.

10. Mas M. Putro U dan Tante Titis., yang selalu memberi perhatian, semangat, bantuan baik

moril maupun spiritual pada penulis dari awal penelitian sampai terselesaikannya

penulisan makalah.



11. Temanku penelitian Yossy S, terimakasih atas bantuannya hingga selesai penelitian.

12. Y. Susilo atas bantuannya mulai dari penelitian sampai mencari bahan untuk penulisan

skripsi

13. Sahabat-sahabatku dan orang-orang yang kusayangi, Mbak Dini, Lidya, Mbak Phin,

Meta, dan Tri Dian, terima kasih atas segala bantuan dan dukungannya, serta teman-

teman angkatan ’01 yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu.

14. Seluruh pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu-persatu, yang telah membantu

terlaksananya penelitian ini.

Penuls berharap semoga Allah SWT, memberikan balasan atas segala bantuan yang telah

diberikan kepada penulis. Demi kesempurnaan makalah seminar ini, penulis mengharapkan

kritik dan saran dari semua pihak. Semoga tulisan ini dapat bermanfaat bagi penulis, juga bagi

semua yang membacanya.

Surabaya, Maret 2006

Penulis



DAFTAR ISI

Halaman

ABSTRAK…………………..........……...………………………………………

UCAPAN TERIMA KASIH..................................................................................

DAFTAR ISI……………………………..........………………………………....

DAFTAR TABEL..................................................................................................

DAFTAR GAMBAR.............................................................................................

DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................

BAB I. PENDAHULUAN……...…………………………………..........………

1.1 Latar Belakang……………………………………………….............

1.2 Perumusan Masalah..…………………………………………............

1.3 Landasan Teori……………………………………………….............

1.4 Tujuan Penelitian…............…………………………………..............

1.5 Manfaat Penelitian……………………………………………............

1.6 Hipotesis Penelitian…………………………………………..............

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA...........................................................................

2.1 Kalsium..………..…............................................................................

2.1.1 Sumber,Fungsi dan Penggunaan Kalsium................................

2.1.2 Absorbsi, Metabolisme dan Ekskresi........................................

2.2 Tinjauan Tentang Ginjal.......................................................................

2.2.1 Anatomi Fisiologi Ginjal..........................................................

2.2.2 Fungsi Ginjal.............................................................................

BAB III. MATERI DAN METODE......................................................................

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian..............................................................

3.2 Materi Penelitian..................................................................................

3.2.1 Hewan Percobaan......................................................................

iii

iv

vi

viii

ix

x

1

1

4

4

6

6

6

7

7

7

8

11

11

13

15

15

15

15



3.2.2 Bahan-bahan Penelitian.............................................................

3.2.3 Alat-alat Penelitian....................................................................

3.3 Metode Penelitian.................................................................................

3.3.1 Persiapan Hewan Coba……………………………….............

3.3.2 Penentuan Dosis………………………...........……………….

3.3.3 Perlakuan………………………………………...........………

3.3.4 Pembuatan Preparat Histopatologi……………………............

3.3.5. Variabel Penelitian……………………………………...........

3.3.6 Pemeriksaan Preparat Histopatologi........................................

3.4 Rancangan Percobaan dan Analisis Data............................................

BAB IV. HASIL PENELITIAN..........................……....…..............…….................

BAB V. PEMBAHASAN....................................................................................

BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................

6.1 Kesimpulan...........................................................................................

6.2 Saran.....................................................................................................

RINGKASAN........................................................................................................

DAFTAR PUSTAKA............................................................................................

LAMPIRAN...........................................................................................................

15

16

16

16

16

16

17

18

18

19

21

25

31

31

31

32

35

39



DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

3.1. Peubah dan Skor Perubahan Gambaran Histopatologi Ginjal tikus Putih

(Rattus norvegicus)............................................................................................

4.1. Nilai rank dan Skor Perubahan Gambaran Histopatologi Ginjal Tikus

Putih...................................................................................................................

1. Data, Jumlah dan Rata-rata Skor Histopatologi Ginjal Tikus Putih (Rattus

norvegicus) Pada Perubahan Hemorragi………………………………............


norvegicus) Pada Perubahan Degenerasi Tubuler…………………………......


norvegicus) Pada Perubahan Nekrosis………………...…................................


norvegicus) Pada Perubahan Glomerulonefritis.………………….........…......

5. Beda Rata-rata Perlakuan Pada Perubahan hemorragi untuk Uji Z…………...

6. Beda Rata-rata Perlakuan Pada Perubahan Degenerasi Tubuler untuk

Uji Z…………………………………………………………………….....…..

7. Beda Rata-rata Perlakuan Pada Perubahan Nekrosis untuk Uji Z……….........

8. Beda Rata-rata Perlakuan Pada Perubahan Glomerulonefritis untuk

Uji Z..…………………………………………………………………..…...…

19

23

46

47

48

49

51

53

55

57



DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

3.1. Gambar Bagan Alir Penelitian…..………………………………………

4.1. Grafik Rata-rata Perubahan Histopatologi Ginjal Tikus Putih

(Rattus norvegicus)…………………………………………………...…

)(_

R

5.1. Gambar hemorragi di sekitar Tubulus Pewarnaan yang digunakan HE

dengan pembesaran 400x…………………………………...…………...

5.2. Tubulus mengalami degenerasi, selain itu terdapat perdarahan

(perbesaran 400x). Pewarnaan yang digunakan HE……………………

5.3. Pada ujung panah warna biru terlihat tubulus yang mengalami nekrosis

(perbesaran 400x) dengan pewarnaan HE……………….........................

5.4. Glomerulonefritis (perbesaran 400x). Pewarnaan HE……….…………

1. Proses Pengambilan Organ…………………………………………...…...

2. Peralatan Bedah……………………………………………………………

3. Timbangan dan Mikroskop……………………………………………….

4. Kandang Tikus Percobaan……………………………………………...…

5. Kalsium Karbonat………………………………………………...……….

6. Komposisi Pakan………………………………………………………….

20

24

26

28

29

30

63

63

63

64

64

65



DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Pembuatan Preparat Histopatologi……………………………………..

2. Pewarnaan Preparat Histopatologi Ginjal Tikus Putih Betina................

3. Konversi Penghitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan dan

Manusia………………………………………………………………

4. Volume Maksimum Larutan Obat yang dapat diberikan Pada Berbagai

Hewan…………………………………………………………………

5. Data, Jumlah dan Rata-rata Skor Histopatologi Ginjal Tikus Putih

(Rattus norvegicus)……………………………………………………

6. Analisa Dats Uji Kruskal Wallis dan Uji Z untuk Perubahan

Hemorragi………………………………………………………………

7. Analisa Data Uji Kruskal Wallis dan Uji Z untuk Perubahan

Degenerasi ……….…………………………………………………….


Nekrosis……………………………………………………………….


Glomerulonefritis……………………………………………………....

10. Gambar Histopatologi Ginjal Tikus Putih (Rattus norvegicus) dengan

perbesaran 400x Pada Perlakuan P0 Tanpa Pemberian Kalsium

39

42

44

45

46

50

52

54

56



Karbonat…………………..………...…………………………………


perbesaran 400x Pada Perlakuan P1 dengan Pemberian Kalsium

Karbonat Dosis 100 mg………………………………………………...



Karbonat Dosis 200 mg ………………………………………………..







15. Foto Penelitian………………………………………………………….

58

59

60

61

62

63



BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Gangguan tulang sering terjadi baik pada manusia maupun hewan.

Gangguan tersebut biasanya berkaitan dengan status mineral kalsium (Ca) dan

fosfor (P) di dalam tubuh. Ketidakseimbangan mineral di dalam tubuh antara lain

dapat mengakibatkan demineralisasi tulang (osteomalasia) atau pengeroposan

tulang (osteoporosis) (Darmawan, 1988 dikutip oleh Suyatmi, 2005).

Osteoporosis menunjukkan kadar mineral dan kepadatan tulang menurun,

tanpa atau dengan diikuti oleh bahan organik tulang (kolagen, osteoblast,

osteoklast dan tenunan pengikat). Kondisi tersebut menggambarkan penurunan

hydroxylapatit [3Ca3(PO4)2Ca(OH)2] tulang dan defisiensi kalsium pada tulang.

Penyebab utama defisiensi kalsium dan demineralisasi tulang sudah diketahui

yaitu tidak tersedianya vitamin D dan kalsium yang dapat digunakan dari

makanan (Linder, 1992). Menurut Macon et al (1992), bahwasanya pemberian

(CaCO ) dapat meningkatkan kadar kalsium dalam darah. 3

Kalsium dibutuhkan bagi segala umur, mulai dari bayi sampai usia tua

dengan jumlah kebutuhan kalsium yang berbeda-beda (Agus, 1999). Kalsium

sangat banyak dibutuhkan selama pertumbuhan bayi dan anak-anak, sekalipun

demikian kebutuhan kalsium tidak menurun bersama umur (Linder, 1992).

Kalsium akan bekerja lebih efektif setelah kulit terkena paparan sinar

matahari. Paparan sinar matahari merangsang terbentuknya vitamin D, yang

1



fungsinya sebagai pemicu kalsium untuk masuk dalam aliran darah dan tulang.

Gaya hidup dan kesalahan dalam memilih makanan dengan gizi yang tidak

seimbang terutama defisiensi vitamin D yang dapat menyebabkan terhambatnya

penyerapan kalsium dalam tubuh (Agus, 1999). Fungsi kalsium sudah diketahui

banyak orang yaitu mencegah kerapuhan tulang, hal ini dapat ditunjang melalui

konsumsi kalsium bersamaan dengan konsumsi vitamin D (Mutschler, 1991).

Vitamin D tidak banyak terdapat dalam makanan, maka bisa ditambahkan

dari air susu (Linder, 1992). Sumber vitamin D yaitu minyak hati ikan dan

jaringan lemak hewan, kuning telur, susu. Fungsi vitamin D yaitu membantu

absorbsi ion kalsium di usus dan juga meningkatkan reabsorbsi ion kalsium dalam

ginjal (Mutschler, 1991).

Pengaruh pengaktifan vitamin D apabila kalsium cukup tersedia dalam

lumen usus adalah untuk meningkatkan jumlah kalsium dalam tubuh yang

sebagian untuk memperbaiki kalsium yang telah diambil dari tulang sebagai

upaya mempertahankan konsentrasi kalsium dalam darah, bila kalsium tidak

cukup atau tidak ada, maka kalsium darah dipertahankan dengan mengambil

kalsium dari tulang, jika keadaan ini terus berlanjut maka bisa menyebabkan

terjadinya osteoporosis, walaupun Ca dan P cukup dalam pakan tetapi vitamin D

kurang, maka kalsium tidak dapat diserap dengan jumlah yang cukup (Linder,

1992).

Fenomena yang berkembang dewasa ini banyak wanita menopouse yang

menderita osteoporosis, sehingga untuk pencegahannya dianjurkan

mengkonsumsi susu atau produk susu kalsium tinggi. Demikian pula pemilik

2



hewan kesayangan juga memberikan kalsium pada hewan-hewan peliharaannya

dalam usaha mereka untuk mencegah terjadinya kerapuhan tulang (Isbagio, 1995

dikutip oleh Indra, 2005).

Kalsium diperlukan setiap hari, jika kebutuhan kalsium tersebut tidak

terpenuhi maka darah akan mengambil kalsium tersebut dari tulang dan gigi, juga

dapat mempengaruhi fungsi gerak tubuh diantaranya terjadi kram kaki, sakit

kepala, sulit tidur dan keadaan paling parah yaitu terjadi pengeroposan tulang

(osteoporosis) (Prawira, 2000).

Kebutuhan kalsium tidak cukup hanya mengandalkan makanan sehari-

hari, oleh sebab itu dapat diberikan susu sebagai salah satu sumber kalsium

terbaik, apabila tidak suka atau alergi dengan susu, maka alternatif lain adalah

mengkonsumsi produk-produk yang diperkaya kalsium seperti sereal dan

suplemen kalsium. Banyak suplemen kalsium dan susu kalsium tentu perlu

disikapi dengan bijaksana, karena kelebihan asupan kalsium dalam jumlah

tertentu dapat menimbulkan batu ginjal bagi mereka yang beresiko terkena batu

ginjal (Agus, 1999). Menurut Ganong (1983), ginjal merupakan organ utama

yang berfungsi mengeluarkan produk sisa metabolisme yang terlarut dalam air

dan semua substansi yang diserap dari saluran pencernaan yang tidak dapat

dimetabolisme dan tidak dibutuhkan oleh tubuh.

Pemberian suplemen kalsium sangat diperlukan, jika dari makanan sehari-

hari asupan kalsium kurang (Lutwalk et al., 1971). Pemberian suplemen kalsium

tinggi tidak diperlukan dengan syarat kadar kalsium dalam pakan normal sesuai

dengan kebutuhan kalsium per harinya, hal ini disebabkan karena penyerapan

3



kalsium dalam usus terbatas (Linder, 1992). Batas maksimal volume larutan obat

yang dapat diberikan pada tikus sebanyak lima ml secara peroral (Pujianto,1997

dikutip oleh Veronica, 2003). Pemberian kalsium karbonat kepada tikus

percobaan merupakan jenis kalsium yang sering digunakan karena selain mudah

didapat, harganya juga murah, dan lebih ekonomis (Monroe, 1994)

1.2. Perumusan Masalah.

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan diatas maka dapat

dirumuskan permasalahan sebagai berikut : apakah pemberian kalsium karbonat

(CaCO ) dengan dosis tertentu dapat menimbulkan kelainan pada ginjal tikus

(Rattus norvegicus), pada gambaran histopatologisnya.

3

1.3. Landasan Teori.

Kalsium merupakan makromineral, karena kalsium merupakan salah satu

mineral yang dibutuhkan tubuh dalam jumlah yang relatif banyak dan terdapat

melimpah didalam makanan (Linder, 1992). Metabolisme suplemen kalsium

dalam tubuh dipengaruhi oleh berbagai faktor antara lain jumlah suplemen

kalsium yang dikonsumsi, rasio kalsium fosfor yang dikonsumsi, vitamin D, serta

kemampuan saluran cerna untuk menyerap kalsium yang terdapat dalam makanan.

Salah satu faktor yang dapat meningkatkan penyerapan kalsium adalah

vitamin D, melalui bentuk aktif vitamin D yakni 1,25-dihidroksikolekalsiferol

akan meningkatkan resorbsi kalsium dalam tulang maupun dalam tubulus ginjal

(Sumarni, 2003). Faktor tambahan yang berhubungan dengan kehilangan mineral

4



tulang adalah rasio kalsium terhadap fospor dalam makanan hendaknya berkisar

2 : 1 dengan demikian dapat menyebabkan absorbsi kalsium maksimal dan

kehilangan minimal mineral tulang (David, 1987). Makin tinggi kalsium yang

dikonsumsi terbukti dapat meningkatkan kristalisasi garam-garam kalsium.

Kalsium hanya dapat diabsorpsi bila terdapat dalam bentuk larut air dan bukan

dalam unsur makanan (Murray, 1999). Konsentrasi kalsium dalam darah sedikit,

maka mengakibatkan reabsorbsi tubulus sangat tinggi, sehingga hampir tidak ada

kalsium yang dikeluarkan dalam urin, sebaliknya bila konsentrasi kalsium dalam

darah bertambah sedikit saja di atas normal, maka ekskresi kalsium akan

meningkat dalam urin (Guyton, 1995).

Menurut Linder (1992), kalsium yang tidak diserap oleh tubuh sebagian

besar di ekskresikan lewat feses dan urin. Organ ekskresi terpenting adalah

ginjal. Kecepatan dan besarnya ekskresi melalui ginjal dipengaruhi oleh filtrasi

glomerulus, reabsorbsi tubulus dan sekresi tubulus (Mutschler, 1991).

Mekanisme utama untuk pengaturan jangka panjang dari konsentrasi ion

kalsium adalah rendahnya kadar kalsium dalam cairan ekstraseluler akan

meningkatkan sekresi hormon paratiroid dan hormon ini akan menyebabkan

peningkatan absorbsi kalsium dalam saluran cerna (Guyton, 1995).

Menurut Agus (1999), ada tiga jenis garam kalsium, yaitu kalsium

karbonat (CaCO ), sitrat, dan fosfat. Kalsium karbonat (CaCO ) merupakan jenis

garam kalsium yang paling banyak didapat dalam saluran cerna. Konsumsi

suplemen kalsium ssebaiknya mulai dari dosis rendah lalu perlahan-lahan

3 3

5



ditingkatkan sampai dosis yang dianjurkan, jika kelebihan bisa membentuk batu

ginjal bagi orang yang beresiko batu ginjal.

1.4. Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini yaitu : untuk mengetahui pengaruh dari

pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis tertentu pada ginjal. 3

1.5. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat melengkapi informasi tentang efek dari

kalsium karbonat (CaCO ) dan dapat mengetahui dosis kalsium yang lebih baik

untuk digunakan.

3

1.6. Hipotesis Penelitian

Berdasarkan landasan teori yang ada, maka hipotesis penelitian ini adalah

pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dalam dapat menyebabkan kerusakan ginjal

pada tikus putih betina(Rattus norvegicus).

3

6



BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Kalsium

2.1.1. Sumber, Fungsi dan Penggunaan Kalsium.

Kalsium bisa diperoleh dari sayuran hijau (misalnya bayam), buah-buahan,

brokoli, serta tempe, tahu, juga ikan-ikanan. Kandungan kalsium dalam bahan

makanan kacang-kacangan dan ikan cukup besar, selain itu sumber kalsium yang

didapat dari makanan adalah susu, keju dan hasil olahannya (Agus, 1999 ;

Sumarni, 2003).

Konsumsi kalsium bisa didapat dari makanan atau suplemen dalam bentuk

tablet. Suplemen kalsium dalam pakan biasanya disediakan dalam bentuk

kalsium karbonat dan sumber yang paling populer adalah batu kapur atau kulit

tiram. Kapur tanah, kulit hewan laut lain dan kulit telur unggas juga dapat

digunakan (Davies, 1982). Kalsium karbonat (CaCO 3 ) cukup baik diabsorbsi bila

lambung terisi makanan, sebaliknya kalsium sitrat dapat diabsorbsi dengan baik

pada kondisi puasa atau lambung dalam keadaan kosong (Nicar et al., 1985).

Kalsium adalah kation utama yang terdapat dalam tubuh manusia dan

hewan. Elemen ini adalah nomor lima terbanyak dalam tubuh manusia dan

hewan. Kandungan kalsium sekitar 99% berada pada tulang dalam bentuk

hydroxylapatit [3Ca3(PO4)2Ca(OH)2] (Linder, 1992). Kalsium termasuk

golongan makromineral, keberadaannya sangat penting didalam tubuh, peranan

dari kalsium yaitu untuk pertumbuhan tulang dan gigi (Prawira, 2000).

7



Kalsium bukan hanya berperan sebagai komponen dasar jaringan tulang

dengan membentuk kesatuan struktural yang penting dalam membantu

meningkatkan ukuran tubuh selama masa pertumbuhan, tetapi juga berperan

penting dalam berbagai proses fisiologis dan biokimia. Fungsi ion kalsium yang

lain adalah mempengaruhi proses pembekuan darah, mempengaruhi kepekaan

neuromuskuler, transmisi impuls syaraf, memelihara fungsi membran sel, serta

mengaktifkan reaksi enzimatis dan sekresi hormon (Lewis et al., 1990 ; Sumarni,

2003).

Di Indonesia, biasanya pada anjing, kuda, kambing terjadi kekurangan

jumlah kalsium dalam pakannya yang mengakibatkan kebutuhan kalsium setiap

hari tidak tercukupi sehingga dapat menimbulkan gangguan pada hewan itu

(Ressang, 1984), tetapi bila jumlah kalsium dalam pakan berlebihan akan dapat

mengakibatkan gangguan berupa penurunan fungsi tiroid (Lewis et al., 1990).

2.1.2. Absorbsi, Metabolisme dan Ekskresi.

Banyaknya kalsium dalam tubuh ditentukan oleh kombinasi faktor nutrisi

dan hormonal, dengan interaksi yang terjadi dapat menentukan jumlah kalsium

yang diserap, kapasitas intestin untuk menyerap dan jumlah kalsium yang hilang

dalam urin, kelenjar keringat dan feses (Linder, 1992). Efisiensi penyerapan

kalsium didalam usus juga tergantung pada banyaknya paparan sinar matahari,

asupan vitamin D, umur, jenis kelamin, dan sumber makanan serta kandungan

total kalsium dalam makanan (Sumarni, 2003).

8



Faktor-faktor yang dapat meningkatkan penyerapan kalsium antara lain

adanya asam amino tertentu seperti lisin dan arginin, vitamin D, laktosa, sitrat,

glukosa, serta sukrosa. Pada umumnya makanan yang dikonsumsi cenderung

akan meningkatkan penyerapan kalsium dengan meningkatkan sekresi asam

lambung. Mekanisme utama untuk pengaturan jangka panjang dari konsentrasi

ion kalsium adalah rendahnya kadar kalsium dalam cairan ekstraseluler akan

menimbulkan sekresi hormon paratiroid dan hormon ini akan menyebabkan

meningkatnya absorbsi kalsium dari saluran cerna (Guyton, 1995).

Penyerapan kalsium oleh usus halus sangat terbatas kurang lebih

30 – 80% dari yang dikonsumsi dan pada umumnya disesuaikan dengan

kebutuhan tubuh. Kalsium di ekskresikan dari tubuh melalui beragam jalur,

antara lain melalui feses, urin, plasenta selama kehamilan untuk membantu

pertumbuhan fetus, air susu dan kulit (Djojosoebagio, 1990). Penyerapan kalsium

terjadi terutama di usus halus bagian proximal dan menurun pada bagian usus

yang lebih distal (Lewis et al., 1990).

Hanya 30% - 50% kalsium dalam makanan yang dapat diserap, jauh lebih

banyak pada anak sedang tumbuh (minum air susu). Jumlah kalsium yang di

ekskresi dalam urin merupakan refleksi dari sejumlah kalsium yang diserap dalam

pakan. Kalsium yang keluar dan yang masuk melalui pencernaan diperkirakan

sama dan hanya sedikit yang dapat diserap kembali (Linder, 1992). Absorbsi

kalsium juga dipengaruhi oleh umur, kemampuan absorbsi kalsium lebih tinggi

pada masa pertumbuhan dan menurun pada proses menua (Almatsier, 2001).

9



Kalsium memegang peranan kunci didalam berbagai macam proses

biologi seperti kontraksi otot, koagulasi darah, aktivitas enzim, eksitabilitas

syaraf, pembebasan hormon, permeabilitas membran, dan sebagai unsur esensial

struktur tulang rangka (Smith et al., 1983).

Sistem homeostasis dikendalikan langsung oleh hormon paratiroid (PTH),

kalsitriol (1,25-DHCC) dan kalsitonin (CT) (Smith et al., 1983). Hormon

paratiroid diekskresikan oleh kelenjar paratiroid apabila kadar kalsium rendah.

Dalam rangka mengembalikan kadar kalsium darah ke batas normal, hormon

paratiroid bekerja secara langsung pada tulang dan ginjal serta bekerja tidak

langsung pada usus (Banks,1980). Jumlah kalsium yang diekskresikan tergantung

pada konsentrasi ion kalsium dalam plasma. Ekskresi kalsium lewat feses

maupun urin menurun apabila terjadi hipokalsemia (Smith et al., 1983). Beberapa

persen kalsium yang ada di dalam filtrat glomerulus direabsorbsi kembali dalam

tubulus proksimalis dan tangkai asendens dari lengkung Henle, selanjutnya di

dalam tubulus distalis dan duktus kolektivus terjadi reabsorbsi selanjutnya dari

kalsium yang tersisa secara selektif, tergantung dari konsentrasi kalsium dalam

darah, apabila konsentrasinya rendah, maka reabsorbsinya sangat tinggi sehingga

hampir tidak ada kalsium yang dikeluarkan dalam urin, sebaliknya bila

konsentrasi kalsium bertambah sedikit saja di atas normal, maka ekskresi kalsium

lebih besar (Guyton, 1995)

10



2.2. Tinjauan Tentang Ginjal

2.2.1. Anatomi Fisiologi Ginjal.

Ginjal adalah organ ekskresi dalam vertebrata yang berbentuk mirip

kacang. Sebagai bagian dari sistim urin, ginjal berfungsi menyaring kotoran

(terutama urea) dari darah dan membuangnya bersama dengan air dalam bentuk

urin. Pada umumnya ginjal merupakan organ yang berpasangan, terletak dibagian

belakang peritonium di sebelah kanan dan kiri kolumna vertebralis, bertempat

pada sisi tengah atau sisi cekung dari ginjal, terdapat suatu hillus yang dilalui oleh

arteri dan vena ginjal (Ganong, 1983). Ginjal terdiri dari dua komponen antara

lain: bagian korteks ginjal dan medula ginjal.

Lapisan kortek terluar terlihat terang dan mengandung granula halus,

lapisan medula disebelah dalam berwarna lebih gelap dan mempunyai garis-garis

halus memanjang. (Mutschler, 1991). Unit satuan ginjal ialah tubulus uriniferus,

yang terdiri atas dua bagian yaitu nefron dan duktus kolektivus. Nefron berfungsi

sebagai penghasil urin, sedangkan duktus kolektivus sebagai saluran yang

membawa urin ke pelvis ginjal (Lesson et al, 1993). Unit fungsional dasar dari

ginjal adalah nefron. Pada kedua ginjal mengadung kira-kira 2.400.000 nefron,

dan setiap nefron dapat membentuk urin sendiri. Nefron pada dasarnya terdiri

dari : sebuah glomerulus sebagai tempat filtrasi dan sebuah tubulus yang panjang,

dimana cairan hasil filtrasi tersebut diubah menjadi urin dalam perjalanannya

menuju renis (Guyton, 1995).

Pembentukan urin dimulai dalam glomerulus, dimana terjadi filtrasi

sekitar 800 liter plasma setiap harinya yang menghasilkan 180 liter filtrat, yang

11



sebagian besar direabsorbsi dalam tubulus. Setiap glomerulus terdiri dari

anyaman kapiler yang komplek yang menonjol di dalam ruang Bowman

(Underwood, 1999). Glomerulus adalah sebuah jaringan yang mengandung

sampai lebih dari 50 cabang-cabang paraler kapiler, dilapisi sel-sel epithelial dan

dibungkus dalam kapsula Bowman (Guyton, 1995). Lapisan dalam kapsul

Bowman menutupi kapiler glomerulus sedangkan lapisan luar membatasi rongga

kapsul dan terus manuju ke tubulus proksimal. Tubulus terdiri dari bagian-bagian

berikut : tubulus proksimal, ansa henle, tubulus distal, tubulus kolektivus

(Mutschler, 1991).

Masing-masing ginjal mendapat cabang langsung aorta abdominal (arteri

renal) dan pada umumnya darah melalui glomerulus sebelum melalui bagian

ginjal lainnya (Lesson et al, 1993). Tekanan darah di dalam glomerolus

menyebabkan cairan difiltrasikan kedalam kapsula Bowman dan kemudian cairan

mengalir ke dalam tubulus proximal yang terletak dalam korteks ginjal bersama-

sama dengan glomerulus, dari tubulus proximal cairan masuk ke dalam ansa

henle, setiap ansa dibagi menjadi cabang desendens dan cabang asendens, sesudah

melewati ansa henle cairan akan memasuki tubulus distal dan dari beberapa

tubulus bersatu membentuk tubulus kolektivus, setelah dari tubulus kolektivus

cairan akan menuju duktus kolektivus. Duktus kolektivus yang terbesar akan

mengosongkan isinya kedalam pelvis renalis melalui ujung dari papila renalis ini

adalah proyeksi seperti konus dari medula yang menonjol kedalam kaliks renalis,

ketika filtrat glomurulus mengalir melalui tubulus-tubulus, lebih dari 99% air dan

12



berbagai zat yang terlarut didalamnya secara normal diresorbsi kedalam sistem

pembuluh darah (Guyton, 1995).

2.2.2. Fungsi Ginjal

Fungsi dasar dari nefron adalah untuk membersihkan atau menjernihkan

plasma dari substansi yang tidak diinginkan oleh tubuh, sewaktu darah mengalir

melalui ginjal, terutama hasil akhir metabolisme, seperti urea, kreatinin, dan asam

urat, sebagai tambahan ada beberapa substansi yang lain seperti ion natrium, ion

kalium, ion klorida dan ion hidrogen cenderung untuk berakumulasi kedalam

badan dalam jumlah yang berlebihan, ini juga merupakan fungsi nefron untuk

membersihkan plasma dari kelebihan tersebut (Guyton, 1995).

Pada umumnya fungsi ginjal adalah untuk mempertahankan keseimbangan

susunan darah yaitu dengan : mengeluarkan bahan sisa, mengeluarkan garam-

garam anorganik yang kebanyakan berasal dari makanan, mengeluarkan bahan-

bahan asing yang terlarut dalam darah, mengatur keseimbangan air dan elektrolit.

Ginjal dapat melakukan fungsi diatas karena fungsi saring glomerulus dan karena

adanya reabsorbsi dari tubulus dan karena fungsi sekretorik sel-sel tubulus

(Leeson et al., 1989 ; Ressang, 1984).

Ginjal juga memproduksi beberapa hormon antara lain : Prostaglandin,

yang mempengaruhi pengaturan garam dan air serta mempengaruhi tekanan

vaskuler. Eritropoietin, yang merangsang produksi sel darah merah.

1,25-dihidroksikolekalsiferol, yang memperkuat absorpsi kalsium dari usus dan

reabsorpsi fosfat oleh tubulus renalis. Renin, yang bekerja pada jalur angiotensin

13



untuk meningkatkan tekanan vaskuler dan produksi aldosteron (Underwood,

1999).

Adanya kerusakan ginjal, menyebabkan ginjal tidak dapat

mengekskresikan hasil metabolisme yang tidak berguna bagi tubuh terutama urea

dan kreatinin. Urea dan kreatinin merupakan hasil metabolisme protein yang

pembuangannya diatur oleh ginjal yaitu melalui filtrasi glomerulus. Adanya

kerusakan pada sel glomerulus menyebabkan laju filtrasi glomerulus menurun

sehingga urea dan kreatinin akan menumpuk di dalam darah (Bremmer dan

Hosteter, 1982).

14



BAB III

MATERI DAN METODE

3.1. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di kandang unit hewan coba Kampus C Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Airlangga dan dilanjutkan dengan pembuatan dan

pemeriksaan preparat hispatologis ginjal tikus putih betina (Rattus norvegicus) di

Laboratorium Patologi Fakultas Kedokteran Hewan Unair. Waktu penelitian pada

tanggal 3 Oktober 2005 sampai dengan 27 November 2005.

3.2. Materi Penelitian

3.2.1. Hewan Percobaan

Pada penelitian ini hewan coba yang digunakan adalah tikus putih betina

(Rattus norvegicus) umur tiga bulan dengan berat rata-rata 150 gram.

3.2.2. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan untuk penelitian ini adalah : kalsium karbonat

(CaCO ), aquadest, dietil ether, formalin 10%, alkohol 70%, 80%, 90%, 96%,

alkohol absolute I, II, III dan xylol I, II, Parafin I dan II, Canada Balsam, pakan

tikus bentuk pellet dan air PDAM.

3

15



3.2.3. Alat-alat Penelitian

Kandang tikus berupa kotak plastik serta tutup kandang tikus yang terbuat

dari anyaman kawat, botol tempat minum tikus, timbangan, sonde, peralatan

bedah, mikroskop, obyek glass, hot plate, mikrotom, oven, cetakan blok dan alat

clearing.

3.3. Metode Penelitian

3.3.1. Persiapan Hewan Percobaan

Hewan coba yang digunakan untuk penelitian ini sejumlah 25 ekor tikus

betina (Rattus norvegicus) dibagi menjadi lima kelompok perlakuan (P0, P1, P2,

P3 dan P4) masing-masing menggunakan lima ulangan

3.3.2. Penetuan Dosis

Dosis kalsium karbonat (CaCO ) yang diberikan pada lima kelompok

perlakuan P0 sebanyak 0mg/ekor/hari, P1 sebanyak 100mg/ekor/hari, P2

sebanyak 200mg/ekor/hari, P3 sebanyak 400mg/ekor/hari, P4 sebanyak

600mg/ekor/hari yang masing-masing dilarutkan dalam 3 ml aquadest.

3

3.3.3. Perlakuan

Pada hari pertama sampai hari ke tujuh hewan coba tersebut diadaptasikan

dengan diberikan pakan standart, kemudian pada hari ke delapan hewan coba

tersebut dilakukan pengacakan pada masing-masing perlakuan (P0, P1, P2, P3 dan

16



P4) terdiri atas lima ekor tikus betina sebagai ulangan. Pada hari kelima belas

mulai diberikan kalsium karbonat (CaCO ). 3

Perlakuan pada hewan coba meliputi :

• P 0 : Kalsium karbonat 0 mg/ekor/hari




• P4 : Kalsium karbonat 600 mg/ekor/hari

Pemberian suplemen kalsium diberikan secara per oral menggunakan sonde pada

pagi hari selama enam minggu. Selama masa perlakuan hewan coba diberi pakan

dan air minum secara ad libitum.

3.3.4. Pembuatan Preparat Histopatologis

Setelah delapan minggu, seluruh hewan coba dieuthanasia dengan

menggunakan dietil eter dan dilakukan pembedahan untuk diambil ginjalnya.

Ginjal yang telah diambil dimasukkan ke dalam pot plastik yang berisi formalin

10%, kemudian dilakukan pembuatan preparat histopatologis untuk pemeriksaan

secara mikroskopis. Pembuatan preparat histopatologis dilakukan di Laboratorium

Patologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

17



3.3.5. Variabel Penelitian

Dalam penelitian ini variabel yang diamati meliputi : variabel bebas yaitu

pemberian kalsium karbonat (CaCO 3 ); variabel kendali yaitu tikus putih, umur,

pakan dan kandang dengan kondisi yang sama; dan variabel tergantung adalah

gambaran histopatologis ginjal.

3.3.6. Pemeriksaan Preparat Histopatologis

Pengamatan secara mikroskopis terhadap preparat histopatologis ginjal

tikus betina menggunakan mikroskop dengan pembesaran 100x dan dilanjutkan

dengan pembesaran 400x. Pengamatan dilakukan pada masing-masing lapangan

pandang mulai dari sudut kiri, kanan, bagian atas, bawah serta bagian tengah dari

preparat histopatologi, tingkat perubahan yang terjadi pada masing-masing

lapangan pandang diberikan nilai (skor) untuk satu sampel ginjal (Azmijah, 1996).

Menurut Solez (1996), derajat kerusakan ginjal terbagi menjadi beberapa

tingkatan, yaitu :

18



Tabel 3.1. Peubah dan skor perubahan gambaran histopatologi ginjal

Keparahan Skor Perubahan

Tidak terjadi perubahan 0

Perdarahan Ringan (terjadi kerusakan < 25%) Sedang (terjadi kerusakan antara 25 – 50%) Berat ( terjadi kerusakan > 50%)

1 2 3

Degenerasi tubuler Ringan (terjadi kerusakan < 25%) Sedang (terjadi kerusakan antara 25 – 50%) Berat ( terjadi kerusakan > 50%)

1 2 3

Nekrosis Ringan (terjadi kerusakan < 25%) Sedang (terjadi kerusakan antara 25 – 50%) Berat ( terjadi kerusakan > 50%)

1 2 3

Glomerulonefritis Ringan (terjadi kerusakan < 25%) Sedang (terjadi kerusakan antara 25 – 50%) Berat ( terjadi kerusakan > 50%)

1 2 3

Keterangan : Perdarahan : pecahnya arteri atau vena yang disebabkan oleh jejas. Degenerasi tubuler : kelainan patologi yang menyebabkan perubahan pada sitoplasma, baik struktur, ukuran, kepekatan. Degenerasi ditandai adanya akumulasi dari produk - produk metabolisme sel seperti, air, lemak, protein dan glikogen. Glomerulonefritis : keradangan pada ginjal yang dimulai dari glomerulusnya, kapiler-kapiler maupun membran basalis dari kapsula Bowman. Glomerulusnefritis ditandai dengan adanya perlekatan kapsula Bowman. Nekrose : kematian sel yang patologis dari jaringan tubuh yang masih hidup. Nekrose ditandai dengan adanya perubahan pada inti yang bervariasi mulai dari piknotis, karioreksis, dan kariolisis. 3.4. Rancangan Percobaan dan Analisis Data

Rancangan percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah

Rancangan Acak Lengkap (RAL), lima perlakuan dan lima ulangan. Analisis data

menggunakan Uji Kruskal Wallis, apabila ada perbedaan yang nyata (p<0,05),

dilanjutkan dengan Uji Pasangan Berganda (Uji Z) (Daniel, 1999).

19



20

25 ekor tikus putih betina umur 3 bulan

5 ekor P1

5 ekor P3

5 ekor P2

Adaptasi selama 1 minggu dengan pakan standar dan pemberian minum ad-libitum

P1 100 mg

P3 400 mg

P2 200 mg

Perlakuan selama 6 minggu

Pada hari ke 15 mulai diberikan Kalsium Karbonat

5 ekor P4

P4 600 mg

5 ekor P0

P0 0 mg

pada umur 8 hari dilakukan pengacakan pada masing-masing perlakuan

Pengamatan kerusakan ginjal tikus tikus

Pembuatan preparat histopatologi ginjal tikus

putih

Gambar 3.1. Bagan Alir Penelitian



BAB IV

HASIL PENELITIAN

Hasil pemeriksaan mikroskopis dengan pembesaran 100x dan 400x

didapatkan adanya perubahan gambaran histopatologi ginjal yaitu hemorragi,

degenerasi tubuler, glomerulonefritis dan nekrosis

Pada kelompok perlakuan kontrol (P0) yang diberikan aquades secara

peroral sebanyak 3 ml, terlihat adanya hemorragi sedikit lebih banyak jika

dibandingkan dengan perlakuan P1 (100 mg/ekor/hari) tetapi masih termasuk

tingkatan ringan, selain itu terlihat adanya sedikit degenerasi, glomerulonefritis

dengan tingkatan kerusakan yang sama. Hewan coba pada perlakuan ini

dikondisikan sebagai pembanding sekaligus kontrol, karena pada P0 hanya diberi

pakan tanpa diberikan tambahan kalsium karbonat (CaCO ). Tujuannya untuk

mengetahui ada tidaknya perubahan pada gambaran histopatologi ginjal tikus jika

tidak diberikan tambahan kalsium karbonat (CaCO ) (lihat lampiran 10).

3

3

Pada kelompok perlakuan P1 yang diberikan kalsium karbonat (CaCO )

dengan dosis 100 mg/ekor/hari yang dilarutkan dengan aquades sebanyak 3 ml,

perlakuan diberikan selama enam minggu, hasil yang didapat dari pemeriksaan

preparat histopatologi ginjal terlihat adanya hemorragi, degenerasi tubuler,

nekrosis dan glomerulonefritis dengan derajat kerusakan ringan (lihat lampiran

11).

3

21




dengan dosis 200 mg/ekor/hari yang dilarutkan dengan aquades sebanyak 3 ml,


preparat histopatologi ginjal terlihat adanya perubahan ringan pada hemorragi,

nekrosis dan glomerulonefritis, sedangkan pada degenerasi tubuler tingkatan

sedang (lihat lampiran 12).

3


dengan dosis 400 mg/ekor/hari dilarutkan dengan aquades sebanyak 3 ml,


preparat histopatologi ginjal terlihat ada perubahan yang cukup berat pada

degenerasi tubuler sedangkan hemorragi, nekrosis dan glomerulonefritis

tingkatannya sedang (lihat lampiran 13).

3


dengan dosis 600 mg/ekor/hari dilarutkan dengan aquades sebanyak 3 ml,


preparat histopatologi ginjal terlihat ada perubahan yang sangat berat pada

hemorragi, degenerasi tubuler, nekrosis dan glomerulonefritis (lihat lampiran 14).

3

22



Tabel 4.1. Nilai rank dan skor perubahan gambaran histopatologi ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) akibat pengaruh pemberian kalsium karbonat (CaCO ). 3

Tingkat kerusakan Perlakuan

Hemorragi Degenerasi tubuler Nekrosis glomerulonefritis

P0 5,6c 3,1d 3,3d 2,8d

P1 5,4c 9,5c 9,4c 10c

P2 15,2b 11,4c 11,5c 12,2c

P3 15,8b 19,1b 17,8b 16,8b

P4 23a 21,9a 23a 23a

Keterangan : superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan adanya perbedaan yang nyata antara perlakuan (p<0,05). Hasil analisis statistik dengan menggunakan Uji Kruskal Wallis pada

perubahan berupa hemorragi menunjukkan bahwa perlakuan P4 mempunyai nilai

tertinggi dan berbeda nyata dengan perlakuan yang lain, pada perlakuan P3 tidak

berbeda nyata dengan P2, sedang P2 berbeda nyata dengan P1 dan P0, tetapi P1

tidak berbeda nyata dengan P0. Pada perubahan degenerasi, nekrosis dan

glomerulonefritis masing-masing menunjukkan bahwa perlakuan P4 dan P3

berbeda nyata dengan perlakuan yang lain, sedang pada P2 tidak berbeda nyata

dengan P1, tetapi P1 berbeda nyata dengan P0. Pada Uji Kruskal Wallis

menunjukkan adanya beda nyata antar perlakuan, selanjutnya dilakukan Uji

Pasangan Berganda (Uji Z), didapatkan hasil bahwa perbedaan dosis pemberian

kalsium karbonat (CaCO ) secara peroral menyebabkan kerusakan gambaran

preparat histopatologi ginjal dengan skor tertinggi diperoleh perlakuan P4

3

23



(dosis 600 mg/ekor/hari) yang diikuti perlakuan P3, P2 dan P1 yang berbeda nyata

(p<0,05) dengan perlakuan kontrol.

0

5

10

15

20

25

hemorragi

degenerasi tubuler

nekrosis

glomerulonefritis

P0P1P2P3P4

Gambar 4.1. Grafik rata-rata rank perubahan histopatologi ginjal tikus _

)(Rputih (Rattus norvegicus).

24



BAB V

PEMBAHASAN

Perubahan Pada Ginjal

Terbukti setelah dilakukan analisis statistik dengan menggunakan Uji

Kruskal – Wallis, kemudian dilanjutkan dengan uji pasangan berganda (Uji Z)

dengan taraf nyata signifikansi 0,05, menunjukkan hasil pengamatan secara

mikroskopis melalui lima lapangan pandang yang berbeda pada tiap preparat

histopatologi ginjal tikus putih menunjukkan adanya perbedaan gambaran

histopatologi antara perlakuan kontrol (P0) dengan kelompok perlakuan (P1, P2,

P3 dan P4) berupa hemorragi, degenerasi tubuler, nekrosis dan glomerulonefritis.

Sel normal adalah sel yang tidak pernah berhenti berdenyut, secara tetap

mengubah struktur dan fungsinya untuk memberi reaksi terhadap tekanan yang

selalu berubah, bila tekanan terlalu berat dan terus berlanjut maka akan terjadi

jejas atau bahkan kematian sel. Beberapa keadaan reaksi sel terhadap tekanan

yang timbul yaitu, sel melakukan penyesuaian diri, terjadi jejas yang dapat pulih

kembali (reversibel), dan terjadi kematian sel. Bahan kimia dan obat-obatan

merupakan penyebab penting dari adaptasi, jejas dan kematian sel. Setiap agen

kimia dan obat dapat dilibatkan, meskipun bahan tersebut tidak berbahaya seperti

halnya kalsium karbonat, yang biasa digunakan sebagai bahan pembuatan

suplemen kalsium, tetapi bila konsentrasinya dapat merusak lingkungan sel

(toksik) maka bisa berakibat jejas dan kematian sel (Robbins dan Kumar, 1995)a.

25



Hemorragi pada jaringan ginjal akibat pemberian kalsium karbonat

(CaCO ) sudah mulai tampak pada perlakuan P1 dengan dosis pemberian 100 mg

dengan derajat kerusakan ringan dan derajat kerusakan berat terlihat pada

perlakuan P4 yang diberi kalsium karbonat (CaCO 3 ) dengan dosis 600 mg (seperti

terlihat pada gambar perdarahan 5.1), hemorragi juga terjadi pada perlakuan P0,

dikarenakan pada P0 tidak diberikan tambahan kalsium karbonat (CaCO ), dengan

rendahnya asupan kalsium dalam pakan dapat menyebabkan peningkatan

penyerapan kalsium di usus, selain itu tubuh berpeluang menyerap kembali

kalsium dari ginjal sehingga kadar kalsium dalam darah kembali normal

(Hadat, 2005). Hemorragi terjadi akibat masuknya zat-zat toksik dan sisa

metabolisme dalam jumlah besar ke dalam jaringan ginjal, sehingga terjadi

dilatasi arteriol lokal untuk vasokontriksi singkat. Katup prakapiler membuka,

mengakibatkan aliran darah dalam kapiler meningkat, juga dibukanya anyaman

kapiler, akibatnya anyaman venular pasca kapiler melebar dan diisi darah yang

mengalir deras, dengan demikian vaskulator pada lokasi jejas melebar, berisi

darah dan akhirnya pembuluh darah pecah (Robbins dan Kumar, 1995)

3

3

a.

Gambar 5.1. Gambar hemorragi di sekitar tubulus. Pewarnaan yang

digunakan HE dengan pembesaran 400x.

26



Degenerasi tubuler tampak pada gambaran histopatologi ginjal tikus putih

yang diberi perlakuan kalsium karbonat dengan dosis 100 mg/ekor/hari dengan

derajat kerusakan ringan (gambar 5.2). Degenerasi timbul oleh karena adanya

akumulasi dari bahan toksik dan zat metabolit lain. Zat metabolit dan bahan toksik

dapat menyebabkan gangguan pada organela mitokondria yang menghasilkan

energi (Rippey, 1993). Apapun yang mengganggu metabolisme energi dalam sel

atau sedikit saja melukai membran sel, dapat membuat sel tidak mampu

memompa ion natrium yang cukup, biasanya dalam rangka untuk menjaga

kestabilan lingkungan internal maka sel harus mengeluarkan energi metabolik

untuk memompa ion natrium keluar dari sel, sebagai akibat yang ditimbulkan dari

kenaikan konsentrasi natrium didalam sel adalah masuknya air ke dalam sel dan

menyebabkan perubahan morfologis yang disebut pembengkakan sel, untuk

perubahan ini disebut juga pembengkakan yang keruh, secara mikroskopis

sitoplasmanya bergranula, secara mikroskopis perubahan pembengkakan sel

hanya menyebabkan sedikit perbesaran sel dan sedikit perubahan susunan, jika

bahaya pembengkakan sel dapat dihilangkan maka sel-sel biasanya mulai

mengeluarkan natrium bersama-sama dengan air dan volumenya kembali menjadi

normal, karena bentuk perubahan ini bersifat reversibel. Perubahan ganguan ini

hanya merupakan gangguan ringan dari keadaan normal (Gerald, 1994).

27



Gambar 5.2. Tubulus mengalami degenerasi, selain itu terdapat perdarahan

(perbesaran 400x). Pewarnaan yang digunakan HE.

Nekrosis terjadi pada perlakuan (P1) dengan derajat kerusakan ringan dan

derajat kerusakan mulai tampak sedang pada perlakuan (P3) (gambar 5.3). Jika

pengaruh berbahaya pada sebuah sel cukup hebat atau berlangsung lama, maka sel

akan mencapai titik dimana sel tidak lagi dapat mengkompensasi dan tidak dapat

melangsungkan metabolisme. Proses ini menjadi ireversibel dan sel sebetulnya

mati. Perubahan-perubahan lisis yang terjadi pada jaringan nekrotik dapat

melibatkan sitoplasma sel, namun intilah yang paling jelas menunjukkan

perubahan-perubahan kematian sel. Biasanya inti sel yang mati itu menyusut,

batasnya tidak teratur dan berwarna gelap, proses ini disebut piknosis, dan intinya

disebut piknotik. Kemungkinan lainnya yang terjadi inti dapat hancur dan

meninggalkan pecahan-pecahan zat kromatin yang tersebar didalam sel, proses ini

disebut karioreksis. Akhirnya pada beberapa keadaan inti sel yang mati

kehilangan kemampuan untuk diwarnai dan menghilang, proses ini disebut

kariolisis. Daerah yang mengalami nekrosis biasanya menimbulkan respon

peradangan pada bagian jaringan yang bersebelahan. Sebagai akibat dari respon

28



peradangan ini, maka jaringan yang mati akhirnya dihancurkan dan dihilangkan.

Keadaan ini akan membuka jalan bagi proses perbaikan yang mengganti daerah

nekrotikdengan se-sel regenerasi yang sama dengan yang hilang. Kerusakan khas

terletak pada sel tubulus proksimal, sedangkan pada tubulus distal jarang

ditemukan (Gerald, 1994).

Gambar 5.3. Pada ujung panah warna biru terlihat tubulus yang mengalami

nekrosis (perbesaran 400x) dengan pewarnaan HE.

Pada penelitian ini terjadi glomerulonefritis akut, yang ditandai adanya

peradangan didalam glomerulus (gambar 5.4). Pada P1 dengan dosis 100 dapat

dilihat perubahan gambaran histopatologi ginjal dengan derajat kerusakan ringan.

Glomerulonefritis diakibatkan baik oleh reaksi antibodi terhadap antigen

glomerulus, terhadap komplek imun dalam sirkulasi yang kemudian dideposit

dalam glomerulus, ataupun terhadap antibodi yang bereaksi terhadap antigen

asing yang telah tertanam pada membran basalis. Jalur akhir yang umum dari

cedera glomerulus ialah pengaktifan komplemen yang menghasilkan berbagai

tingkat kerusakan sel dan penarikan sel radang (Underwood, 1999). Reaksi

radang ini dapat merusak dinding kapiler, sehingga memungkinkan untuk

29



pelepasan sel darah merah ke dalam urin dan menimbulkan kelainan

hemodinamika yang menjurus ke pengurangan laju filtrasi glomerulus (Robbins

dan Kumar, 1995)b. Reaksi keradangan ini menyebabkan glomerulus secara total

digantikan jaringan fibrosa dan fungsi nefron akan menurun atau hilang sama

sekali. Sedikit nefron yang masih berfungsi akan menjadi beban dari tubulus

ginjal terhadap zat-zat yang sedikit diabsorpsi dan dikompensasi dengan

peningkatan daya reabsorpsi oleh masing-masing tubulus ginjal sebanyak 50%.

Oleh karena sedikitnya larutan yang diabsorpsi, maka larutan yang lain berubah

menjadi diuretik osmotik dan menyebabkan peningkatan aliran cairan tubulus,

sehingga volume urin meningkat (Guyton, 1995).

Gambar 5.4. Glomerulonefritis (perbesaran 400x). Pewarnaan HE.

30



BAB VI

KESIMPULAN DAN SARAN

6.1. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian pengaruh pemberian kalsium karbonat

(CaCO ) pada gambaran histopatologi ginjal tikus putih betina (Rattus

norvegicus), dapat disimpulkan bahwa : pemberian kalsium dengan dosis

100 mg, 200 mg, 400 mg, 600 mg, dapat menimbulkan perubahan pada

gambaran histopatologi ginjal tikus putih berupa : hemorragi, degenerasi

tubuler, nekrosis dan glomerulonefritis, pada pemberian kalsium karbonat

(CaCO ) dengan dosis 600 mg/ekor/hari terlihat perubahan yang hebat

pada gambaran histopatologi ginjal tikus putih betina berupa : hemorragi,

degenerasi tubuler, nekrosis dan glomerulonefritis.

3

3

6.2. Saran

Berdasarkan hasil penelitian, dapat diajukan saran bahwasanya

tidak dianjurkan untuk pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis

600 mg/ekor/hari pada tikus putih betina (Rattus norvegicus). Penggunaan

suplemen kalsium hendaknya disesuaikan dengan dosis dan aturan pakai

sehingga sesuai dengan efek terapi yang maksimal.

3

31



R I N G K A S A N

ARIZA VERONICA MUFIDAH. Pengaruh Pemberian Kalsium

Karbonat Pada Gambaran Histopatologi Ginjal Tikus Putih (Rattus Norvegicus),

dibawah bimbingan Ibu Julien Supraptini., SU., Drh. selaku dosen

pembimbing I dan Ibu Soetji Prawesthirini., SU., Drh. selaku dosen

pembimbing II.

Asupan kalsium tidak cukup atau bahkan tidak ada dalam pakan, maka

kalsium darah dipertahankan dengan mengambil kalsium dari tulang, jika keadaan

ini terus berlanjut maka bisa menyebabkan terjadinya osteoporosis. Kebutuhan

kalsium tidak cukup hanya mengandalkan makanan sehari-hari, oleh sebab itu

dapat diberikan susu sebagai salah satu sumber kalsium terbaik, apabila tidak

suka atau alergi dengan susu, maka alternatif lain adalah mengkonsumsi produk-

produk yang diperkaya kalsium seperti sereal dan suplemen kalsium. Banyak

suplemen kalsium dan susu kalsium tentu perlu disikapi dengan bijaksana, karena

kelebihan asupan kalsium dalam jumlah tertentu dapat menimbulkan batu ginjal

bagi mereka yang beresiko terkena batu ginjal.

Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh dari

pemberian kalsium karbonat (CaCO ) dengan dosis tertentu pada ginjal.

Penelitian ini menggunakan 25 ekor tikus putih betina (Rattus norvegicus) sebagai

hewan percobaan dengan umur kurang lebih tiga bulan dengan berat rata-rata

150g. Hewan percobaan tersebut dibagi secara acak menjadi lima kelompok

3

32



perlakuan, yaitu perlakuan P0 (kontrol), P1 (diberi kalsium karbonat (CaCO )

dengan dosis 100 mg/ekor/hari), P2 (diberi kalsium karbonat (CaCO ) dengan

dosis 200 mg/ekor/hari), P3 (diberi kalsium karbonat (CaCO 3 ) dengan dosis 400

mg/ekor/hari) dan P4 (diberi kalsium karbonat (CaCO 3 ) dengan dosis 600

mg/ekor/hari), setiap kelompok mendapat lima ulangan, setelah enam minggu

pemberian perlakuan kalsium karbonat (CaCO ) dilakukan pembedahan untuk

mengambil organ ginjal guna dilakukan pembuatan preparat histopatologi, dan

dilakukan pewarnaan dengan menggunakan Hematoxilyn Eosin (HE).

Pemeriksaan preparat histopatologi menggunakan mikroskop dengan perbesaran

100x dan 400x dan dilakukan penilaian. Data yang diperoleh berdasarkan derajat

kerusakan diolah dengan penilaian peringkat (rank) kemudian dianalisis

menggunakan Uji Kruskal – Wallis dan dilanjutkan dengan Uji Perbandingan

Berganda (Uji Z) dengan taraf nyata 0,05.

3

3

3

Hasil penelitian pada tiap perlakuan menunjukkan adanya kelainan pada

gambaran histopatologi ginjal tikus putih yang telah diberi kalsium karbonat

(CaCO ), berupa hemorragi, degenerasi tubuler, nekrosis dan glomerulonefritis.

Kerusakan gambaran histopatologi ginjal terlihat berat pada P4 dengan pemberian

kalsium karbonat (CaCO 3 )dengan dosis 600 mg/ekor/hari. Berdasarkan penelitian

ini dapat dinyatakan bahwa pada pemberian kalsium karbonat (CaCO 3 ) dengan

dosis 600 mg/ekor/hari tidak dianjurkan pada tikus tikus betina (Rattus

norvegicus). Pemberian kalsium karbonat (CaCO ) sebagai suplemen harus

3

3

33



digunakan sesuai dengan aturan dan dosis yang dianjurkan, sehingga dapat

didapatkan efek terapi ysng maksimal dengan kerugian yang seminimal mungkin.

34



D A F T A R P U S T A K A

Agus S. 1999. Penuhi Kalsium dari Berbagai Sumber. www.indomedia.com/intisari

Almatsier, S. 2001. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.

Azmijah, A., Arimbi, dan T. Widiyatno. 1996. Pengamatan Histopatologi Hati dan Ginjal Tikus Putih Akibat Pemberian Air Sumur Pada Daerah Pemukiman di Sekitar Pabrik Baja. Lembaga penelitian. Universitas Airlangga.

Banks, W.J. 1980. modern Nutrisi in Health Disease, Goodhart, R.S., and M.E. Shils (ed). Lea and Fabiger, Philadelphia.

Bremmer, D. M. and T. H. Hosteter. 1982. Principles of Internal medicine. Edition 9th. Penerbit buku Kedokteran EGC. Jakata. Halaman 6-9.

Daniel. W. W. 1999. Statistika Non Parametrik Terapan. Terjemahan : Alex Tri Kantjono W. PT. Gramedia. Jakarta.

Darmawan, J. 1988. Pengaruh Pemberian Rebon Terhadap Tulang Femur dan Kelenjar Paratiroid Tikus Sprague dawley Betina Penderita Osteoporosis Umum. Medika , Jurnal Kedokteran dan Farmasi. No 6. thn 14. Jakarta. Halaman 528-535

David, W. Martin, Jr., MD. 1987. Biokimia / David, W. Martin, Jr. Alih bahasa, Iyan Darmawan. ED. 20. Jakarta ECG. Halaman 721-723.

Davies, H.L. 1982. Nutritional and Growth manual. Published by the Australian University International Development Program.

Djojosoebagio, S. 1990. fisiologi Kelenjar Endokrin. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi. Pusat antar Universitas. Ilmu Hayati IPB.

35



http://www.indomedia.com/intisari

Ganong. 1983. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Alih bahasa : Petrus Andrianto. Editor : Jonatan Oswari. Hak Cipta Terjemahan Indonesia Penerbit Buku Kedokteran EGC. Halaman 365 – 377.

Gerald, D. Abrams., Prince Sylvia Andedrson. 1994. Patofisiologi ; Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Alih bahasa : Peter Anugrah. Editor : Caroline Wijaya. Jakarta EGC. Halaman 22-35

Guyton. 1995. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 7 Bagian III. Penerbit Buku kedokteran EGC Jakarta. Halaman 288 – 308.

Hadat, H. M. 2005. Kalsium Tidak Hanya Buat Tulang http://www.kompas.com/kesehatan/news/0503/16/153255.htm

Indra Firmansyah. 2005. Gambaran Histopatologi Tulang Femur Tikus Putih Betina (Sprague dawley) Ovariohisterektomi Dengan Suplemen Kalsium Karbonat Dosis Tinggi. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

Isbagio, H. 1995. Pencegahan dan Pengelolaan Osteoporosis. Cermin Dunia Kedokteran.

Kusumawati, D. 1999. Bahan Ajar : Manajemen Hewan Coba. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Surabaya.

Lesson, C. R., Tomas, S. Lesson and A. A. Paparo. 1989. Buku Teks Histologi. Edisi V. Jakarta EGC. Halaman 427-453

Lesson, C. R., Tomas, S. Lesson and A. A. Paparo. 1993. Atlas Histologi Cetakan I. .Binarupa Aksara. Jakarta. Halaman 215-234

Lewis, L. D., Morris, M. L. Aand Hand, N. S. 1990. Small Animal Clinical Nutrition III. Mark Morris Associates. Topeka. Kansas.

Linder, M.C. 1992. Biokimia Nutrisi dan Metabolisme. Penerjemah : Aminudin Parrakasi., cetakan I, Jakarta. Penerbit UI (UI – Press). Halaman 194 – 196.

Lutwak et al. 1971. Dalam Nutrition Biochemistry and Metabolism with Clinical Aplication. Linder, M.C. Elsiver. New York.

36



http://www.kompas.com/kesehatan/news/0503/16/153255.htm

Macon, E.J., J.C. Oliver., Oettingger, C.W. 1992. The Effects Of Calcium Carbonate as The Sole PhosPhate Binder in Combination with Low Calcium Dialysate and Calcitriol Therapy in Chronic Hemodialysis Patients. Journal of The America Society of Nephrology, Vol 3

Mutschler, E. 1991. Dinamika Obat oleh Ernest Mutschler Edisi ke–5, diterjemahkan oleh Mathilda B. Widianto dan Anna Setiadi Ranti. Penerbit ITB. Halaman 597 – 599.

Monroe, W. E. 1994. Diseases of the Parathyroid Glands In Practical Small

Animal Internal Medicine. Saunders Company. Philadelpia. London. Toronto. Montreal. Sydney. Tokyo. Halaman 1071-1082.

Murray, R. K. Granner, D. K. Mayes, P. A. Rodwel, V. W. 1999. Biokimia Herper. Edisi 24. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Halaman 644-655.

Nicar, J. Michael and C. Y. Pak. 1985. Calcium Bioavilability From Calcium Carbonate and Calcium Citrate. J. Clin. Endocrinol. Meteb.

Prawira, R. 2000. Penuhi Kalsium dari Berbagai Sumber. http://www.mail-archive.com/[email protected]/msg18899.html.

Pudjianto, A. 1997. Uji Anti Kanker Ekstrak Etanol Daun Gynura Procumbens (lour) Merr pada Mencit yang diinduksi dengan Benzo (a) Pyrena. Skripsi, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

Ressang, A. A. 1984. Patologi Veteriner. Denpasar.

Rippey, J. J. 1993. General Pathologi. Witwatersrand University Press. Perth Western Australia. Halaman 89-92

Robbins, Stanley L. dan Kumar, Vinay. 1995a. Buku Ajar Patologi I (Basic Pathology Part I). Edisi 4. Editor : dr. Jonatan Oswari. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Halaman 1-89

Robbins, Stanley L. dan Kumar, Vinay. 1995b. Buku Ajar Patologi II (Basic Pathology Part II). Edisi 4. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Halaman 182-219

37



http://www.mail-archive.com/[email protected]/msg18899.html

Smith, E. L., R. L. Hill, I. R. Lehman, R. J. Lefkowitz, P. Handler, and A. White. 1983. principles of biochemistry : Mamalian Biochemistry. Ed. 7. MacGraw Hill Book Co. New York. Halaman 441-467.

Solez, K. 1996. International Standarditation of Criteria for The Histologic Diagnosis of Renal Allograft Rejection. Specimen Adequasy and Lesion Scoring. University of Pittsburgh.

www.yahoo.com/search/kidney_scoring

Sumarni, S. 2003. Gizi Mikro. Jilid II. Fakultas Kesehatan Masyarakat. Universitas Airlangga.

Suyatmi. 2005. Pengaruh Pemberian Kalsium Dosis Tinggi Terhadap Mineralisasi Tulang Tikus Putih (Rattus norvegicus) Ovariohisterektomi. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

Underwood, J. C. E. 1999. Patologi Umum dan Sistemik. Vol. 2/ Ed. 2. Jakarta EGC. Halaman 639-681

Veronica, S. D. 2003. Penyembuhan Radang Kulit Lokal Buatan dedngan Mengkudu (Morinda citrifolia, linn). Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

38



http://www.yahoo.com/search/kidney_scoring

Lampiran I. Pembuatan Preparat Histopatologis.

Pembuatan sediaan histopatologi ini dilakukan di laboratorium patologi FKH

Unair, dengan cara sebagai berikut :

a) Fiksasi dan Pencucian

b) Dehidrasi dan Cleaning

c) Infiltrasi

d) Pembuatan Balok Parafin

e) Pengirisan dengan Mikrotom

a. Fiksasi dan Pencucian

Bertujuan untuk :

menghentikan proses metabolisme jaringan

mematikan kuman

menjadikan jaringan lebih keras, sehingga lebih mudah untuk

dipotong

mencegah terjadinya degenerasi

Reagen : formalin 10%

Cara kerja :

Setelah diseksi, organ ginjal diambil dan dimasukkan dalam

formalin 10% sekurang-kurangnya selama 24 jam.

Organ ginjal dipotong dengan ketebalan 0,5 cm.

Kemudian dilakukan pencucian dengan air mengalir selama 30

menit.

39



b. Dehidrasi dan Clearing

Bertujuan untuk :

Menarik air dari jaringan

Membersihkan dan menjernihkan jaringan

Reagen : alkohol 70%, 80%, 90%, 96%, alcohol absolute I, II, III dan

xylol I, II

Cara kerja :

Organ yang telah dicuci dengan air demasukkan ke dalam reagen

dengan urutan alcohol 70%, 80%, 90%, 95%, alcohol absolute I

dan II masing-masing 30 menit.

c. Infiltrasi

Bertujuan

Menginfiltrasi jaringan dengan parafin. Parafin ini akan

menembus ruang sel dan dalam sel sehingga jaringan lebih

tahan terhadap pemotongan.

Reagen : Parafin I dan II

Cara kerja :

Jaringan dimasukkan dalam parafin I yang mencair, kemudian

dimasukkan kedalam oven selama 30 menit, lalu dimasukkan

kedalam parafin II dan dimasukkan ke dalam oven selama 30 menit

pada suhu 80oc

40



d. Pembuatan Balok Parafin

Bertujuan

Supaya jaringan mudah dipotong

Reagen : Parafin cair

Cara kerja:

Disediakan beberapa cetakan besi yang telah diolesi dengan

gliserin dengan tujuan untuk mencegah lekatnya parafin dengan

cetakan, kemudian organ ginjal yang telah dipotong tadi

dimasukkan dengan pinset kedalam cetakan dan ditunggu sampai

parafin membeku.

e. Pengirisan dengan Mikrotom

Bertujuan :

Untuk memotong jaringan setipis mungkin, agar mudah dilihat

di mikroskop.

Alat : Mikrotom

Cara kerja :

Pemotongan dilakukan secara random yaitu tiap 15 kali

pemotongan yang dilakukan seri, diambil satu dengan ketebalan

empat sampai tujuh mikron, kemudian dicelupkan air hangat

dengan suhu 20 derajat celcius sampai 30 derajat celcius, sampai

jaringan mengembang dengan baik, kemudian diletakkan pada

obyek glass yang sebelumnya telah diolesi dengan Egg Albumin

lalu dikeringan dengan hot plate.

41



Lampiran II. Pewarnaan Preparat Histopatologi Ginjal Tikus Putih Betina

Pembuatan sediaan histopatologi dilanjutkan dengan pewarnaan Hematoxylin

Eosin (HE)

a. Pewarnaan

Bertujuan :

Untuk memudahkan melihat perubahan pada jaringan, disini

digunakan pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) dengan

metodde Harris.

Cara kerja :

Jaringan yang telah dikeringkan dimasukkan kedalam xylol I

selama tiga menit

Masukkan kedalam xylol II selama satu menit

Masukkan berturut-turut alkohol absolut I, II, alkohol 96%, 90%,

80%, 70% dan air kran selama

Masukkan jaringan kedalam zat warna Harris selama lima menit

sampai sepuluh menit.

Masukkan kedalam air PDAM selama sepuluh menit.

Celupkan kedalam alkohol amoniak sebanyak enam kali

Masukkan kedalam air PDAM selama sepuluh menit.

Masukkan kedalam aquades selama lima menit.

Masukkan berturut-turut kedalam alkohol 70%, 80%, 90%, 96%,

alkohol absolut I dan II masing-masing selama dua menit.

42



Masukkan kedalam xylol I dan II masing-masing selama dua

menit.

Bersihkan dari sisa-sisa pewarnaan.

b. Mounting

Penutupan obyek glass dengan cover glass yang sebelumnya telah ditetesi

dengan Canada Balsam.

c. Pemeriksaan Mikroskopis

Pemeriksaan dilakukan dengan mikroskop dengan perbesaran 100x dan

400x.

43



Lampiran 3. Konversi Penghitungan Dosis Untuk Berbagai Jenis Hewan dan

Manusia.

Mencit

20 g Tikus 200 g

Marmot200 g

Kelinci1,5 kg

Kucing2 kg

Kera4 kg

Anjing 12 kg

Manusia70 kg

Mencit 20 g

1,0 7,0 2,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9

Tikus 200 g

0,14 1,0 1,74 3,9 4,2 9,2 17,8 56,0

Marmot 200 g

0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5

Kelinci 1,5 kg

0,04 0,25 0,44 1,0 1,08 2,4 4,5 14,2

Kucing 2 kg

0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0

Kera 4 kg

0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1

Anjing 12 kg

0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1

Manusia 70 kg

0,0026 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0

(Kusumawati, 1999)

44



Lampiran 4. Volume Maksimum larutan obat yang Dapat diberikan pada Berbagai Hewan

IV (ml) IM (ml) IP (ml) SC (ml) PO (ml)

Mencit 20-30 g

0,5 0,05 1,0 0,5-1,0 1,0

Tikus 100 g 1,0 0,1 2-5,0 2,5-5,0 5,0

Hamster 250 g

- 0,1 1-2,0 2,5 2,5

Marmut 250 g

- 0,25 2-5,0 5,0 10,0

Merpati 300g

2,0 0,50 2,0 2,0 10,0

Kelinci 2,5 g

5-10 0,5 10-20 5-10 20,0

Kucing 3 kg 5-10 1,0 10-20 5-10 50

Anjing 5 kg 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0

(Pudjianto, 1997 dikutip oleh Veronica, 2003)

45



Lampiran 5. Data, jumlah dan rata-rata skor histopatologis ginjal tikus putih.

Tabel 1. Data, jumlah dan rata-rata skor histopatologis ginjal tikus putih (Rattus

norvegicus) pada perubahan Hemorragi.

Perlakuan Ulangan LP 1 LP2 LP 3 LP 4 LP 5 Jumlah Rata-rata

P0 1

2

3

4

5

1

1

0

1

1

1

1

0

1

0

1

1

1

1

0

1

1

1

1

1

1

1

1

0

1

5

5

3

4

3

1

1

0,6

0,8

0,6

P1 1

2

3

4

5

1

0

1

1

1

0

0

2

0

1

1

1

1

1

1

0

1

1

1

1

1

1

1

1

0

3

3

6

4

4

0,6

0,6

1,2

0,8

0,8

P2 1

2

3

4

5

2

1

2

2

2

2

2

2

2

2

2

1

1

1

1

2

2

2

1

1

2

1

2

1

1

10

7

9

7

7

2

1,4

1,8

1,4

1,4

P3 1

2

3

4

5

1

1

2

2

1

1

2

2

2

2

2

1

1

2

2

2

2

2

1

1

2

1

2

1

2

8

7

9

8

8

1,6

1,4

1,8

1,6

1,6

P4 1

2

3

4

5

2

3

3

2

2

3

3

3

1

2

3

2

3

3

3

2

3

3

3

3

3

2

3

2

3

13

13

15

11

13

2,6

2,6

3

2,2

2,6

46




norvegicus) pada perubahan Degenerasi Tubuler.


P0 1

2

3

4

5

1

1

2

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

2

1

1

1

1

1

1

2

1

0

1

1

7

5

5

6

5

1,4

1

1

1,2

1

P1 1

2

3

4

5

2

2

2

2

1

2

2

2

2

2

2

1

2

2

2

2

1

2

1

2

2

1

2

1

1

10

7

10

8

8

2

1,4

2

1,6

1,6

P2 1

2

3

4

5

2

2

2

1

2

1

2

2

2

1

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

2

9

10

10

9

9

1,8

2

2

1,8

1,8

P3 1

2

3

4

5

3

3

2

2

3

2

3

2

3

3

3

2

3

2

3

3

3

3

2

2

2

3

3

3

2

13

14

13

12

13

2,6

2,8

2,6

2,4

2,6

P4 1

2

3

4

5

3

3

3

3

3

2

3

2

3

3

3

3

3

2

3

2

3

3

3

3

3

3

2

3

3

13

15

13

14

15

2,6

3

2,6

2,8

3

47




norvegicus) pada perubahan Nekrosis.


P0 1

2

3

4

5

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

1

1

1

0

0

1

1

1

1

1

0

0

0

1

1

2

2

2

0,2

0,2

0,4

0,4

0,4

P1 1

2

3

4

5

0

0

1

2

1

0

1

2

1

1

1

0

1

1

1

0

1

2

0

2

1

1

1

0

0

2

3

7

4

5

0,4

0,6

1,4

0,8

1

P2 1

2

3

4

5

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

2

0

1

1

1

2

1

1

1

1

0

1

5

5

6

6

4

1

1

1,2

1,2

0,8

P3 1

2

3

4

5

1

1

2

2

1

1

1

2

2

1

2

2

1

1

2

1

2

2

1

2

2

2

2

1

2

7

8

9

7

8

1,4

1,6

1,8

1,4

1,6

P4 1

2

3

4

5

2

3

3

2

1

3

2

3

2

3

3

3

3

2

3

2

2

3

3

3

2

3

2

3

1

12

13

14

12

11

2,4

2,6

2,8

2,4

2,2

48




norvegicus) pada perubahan Glomerulonefritis.


P0 1

2

3

4

5

1

1

0

1

1

1

1

0

1

0

1

1

1

1

0

1

1

1

1

1

1

1

1

0

1

3

3

1

2

3

0,6

0,6

0,2

0,4

0,6

P1 1

2

3

4

5

1

0

1

1

1

0

0

2

0

1

1

1

1

1

1

0

1

1

1

1

1

1

1

1

0

4

4

8

7

6

0,8

0,8

1,6

1,4

1,2

P2 1

2

3

4

5

2

1

2

2

2

2

2

2

2

2

2

1

1

1

1

2

2

2

1

1

2

1

2

1

1

7

7

6

7

8

1,4

1,4

1,2

1,4

1,6

P3 1

2

3

4

5

1

1

2

2

1

1

2

2

2

2

2

1

1

2

2

2

2

2

1

1

2

1

2

1

2

8

9

9

8

7

1,6

1,8

1,8

1,6

1,4

P4 1

2

3

4

5

2

3

3

2

2

3

3

3

1

2

3

2

3

3

3

2

3

3

3

3

3

2

3

2

3

13

12

15

11

12

2,6

2,4

3

2,2

2,4

49



Lampiran 6. Analisa data uji Kruskal-wallis dan Uji Z untuk perubahan Hemorragi

Ranks

5 5,605 5,405 15,205 15,805 23,00

25

haemoragi,0p1p2p3p4Total

perdarahanN Mean Rank

Test Statistics a,b

21,0634

,000

Chi-SquaredfAsymp. Sig.

perdarahan

Kruskal Wallis Testa.

Grouping Variable: haemoragib.

Untuk db 4, H tabel (0,05) = 9,49

H hitung > H tabel (0,05), maka terdapat perbedaan yang nyata diantara

perlakuan, jadi H0 ditolak.

Dilanjutkan dengan uji perbandingan berganda (Uji Z)

| Ri - Rj | > Z ( ) ) }({)( 16

1 32

−−−−

NNttNNK

Keterangan

Rj : Jumlah rank dari cuplikan (lajur) ke-j

K : Banyaknya perlakuan

N : Banyaknya sampel

t : Banyaknya angka kembar dalam satu nilai skor

50



Untuk tingkat kesalahan sebesarα = 0,05 dan k = 5, maka :

Z = ( )1−KKα = ( )155

05.0−

= 0.0025

Z tabel (0,05) 0,0025 = 0,4920

= 0.4920 ( ){ }( )12525.5

204125255−−−

= 2,28

Tabel 5. Beda rata-rata perlakuan pada perubahan hemorragi untuk uji Z beda Perlakuan R rank

R-P1 R-P0 R-P2 R-P3 Uji Z 0,05

P4 a 23 17,6* 17,4* 7,8* 7,2* P3 b 15,8 10,4* 10,2* 0,6 P2 b 15,2 9,8* 9,6* P0 c 5,6 0,2 P1 c 5,4 0

2,28

Menentukan notasi garis

P4 P3 P2 P0 P1

a b

c

51



Lampiran 7. Analisa data uji Kruskal-wallis dan Uji Z untuk perubahan degenerasi

Ranks

5 3.105 9.505 11.405 19.105 21.90

25

degenerasi tubulerP0P1P2P3P4Total

PerlakuanN Mean Rank

Test Statistics a,b

21.5084

.000


Perlakuan


Grouping Variable: degenerasi tubulerb.

Untuk db 4, H tabel (0,05) = 9,49

H hitung > H tabel (0,05), maka terdapat perbedaan nyata diantara perlakuan, jadi

H0 ditolak.

Dilanjutkan dengan uji perbandingan berganda (Uji Z)

| Ri - Rj | > Z ( ) ) }({)( 16

1 32

−−−−

NNttNNK

Keterangan :





52




Z = ( )1−KKα = ( )155

05.0−

= 0.0025

Z tabel (0,05) 0,0025 = 0,4920

0.4920 ( ){ }( )12525.5

252125255−−−

= 2,27

Tabel 6. Beda rata-rata perlakuan pada perubahan degenerasi tubuler untuk uji Z beda Perlakuan R rank


P4 a 21,9 18,8* 12,4* 10,5* 2,8* P3 b 19,1 16,0* 9,6* 7,7* P2 c 11,4 8,3* 1,9 P1 c 9,5 6,4* P0 d 3,1

2,27


P4 P3 P2 P1 P0

a

b

c

d

53



Lampiran 8. Analisa data uji Kruskal-wallis dan Uji Z untuk perubahan nekrosis

Ranks

5 3,305 9,405 11,505 17,805 23,00

25

nekrosisP0P1P2P3P4Total

nekrosisN Mean Rank

Test Statistics a,b

21,6384

,000


nekrosis


Grouping Variable: nekrosisb.

Untuk db 4, H tabel (0,05) = 9,49



Dilanjutkan dedngan uji perbandingan berganda (Uji Z)

| Ri - Rj | > Z ( ) ) }({)( 16

1 32

−−−−

NNttNNK

Keterangan :





54




Z = ( )1−KKα = ( )155

05.0−

= 0.0025

Z tabel (0,05) 0,0025 = 0,4920

0.4920 ( ){ }( )12525.5

138125255−−−

= 2,28

Tabel 7. Beda rata-rata perlakuan pada perubahan nekrosis untuk uji Z beda Perlakuan R rank


P4 a 23 19,7* 13,6* 11,5* 5,2* P3 b 17,8 14,5* 8,4* 6,3* P2 c 11,5 8,2* 2,1 P1 c 9,4 6,1* P0 d 3,3

2,28


P4 P3 P2 P1 P0

a

b

c

d

55



Lampiran 9. Analisa data uji Kruskal-wallis dan Uji Z untuk perubahan glomerulonefritis

Ranks

5 3,005 10,005 12,205 16,805 23,00

25

glomerulonefritisP0P1P2P3P4Total

glomerulonefritisN Mean Rank

Test Statistics a,b

20,9914

,000


glomerulonefritis


Grouping Variable: glomerulonefritisb.

Untuk db 4, H tabel (0,05) = 9,49



Dilanjutkan dedngan uji perbandingan berganda (Uji Z)

| Ri - Rj | > Z ( ) ) }({)( 16

1 32

−−−−

NNttNNK

Keterangan :





56




Z = ( )1−KKα = ( )155

05.0−

= 0.0025

Z tabel (0,05) 0,0025 = 0,4920

0.4920 ( ){ }( )12525.5

228125255−−−

= 2.27

Tabel 8. Beda rata-rata perlakuan pada perubahan glomerulonefritis untuk uji Z beda Perlakuan R rank


P4 a 23 20,2* 13* 10,8* 6,2* P3 b 16,8 14,0* 6,8* 4,6* P2 c 12,2 9,4* 2,2 P1 c 10 7,8* P0 d 2,8

2,27


P4 P3 P2 P1 P0

a b

c

d

57



Lampiran 10. Gambar histopatologik ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) dengan pembesaran 400x pada perlakuan P0 tanpa pemberian kalsium karbonat

a b

c d Keterangan gambar: (a) gambaran kelainan histopatologik berupa Hemorragi, (b) degenerasi tubuler, (c) nekrosis tubuler, (d) glomerulonefritis

58



Lampiran 11. Gambar histopatologik ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) dengan pembesaran 400x pada perlakuan P1 dengan pemberian kalsium karbonat dosis 100 mg

a b d

a

C

d Keterangan gambar: (a) gambaran kelainan histopatologik berupa hemorragi, (b) degenerasi tubuler, (c) nekrosis tubuler, (d) glomerulonefritis

59



Lampiran 12. Gambar histopatologik ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) dengan pembesaran 400x pada perlakuan P2 dengan pemberian kalsium karbonat dosis 200 mg

d

d

a

60

b

c

d c a

Keterangan gambar: (a) gambaran kelainan histopatologik berupa hemorragi, (b) degenerasi tubuler, (c) nekrosis tubuler, (d) glomerulonefritis



Lampiran 13. Gambar histopatologik ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) pada perlakuan P3 dengan pemberian kalsium karbonat dosis 400 mg

d a

c

b

Perbesaran 400x

a

Perbesaran 100x Keterangan gambar: (a) gambaran kelainan histopatologik berupa hemorragi, (b) degenerasi tubuler, (c) nekrosis tubuler, (d) glomerulonefritis

61



Lampiran 14.. Gambar histopatologik ginjal tikus putih (Rattus norvegicus) dengan pembesaran 400x pada perlakuan P4 dengan pemberian kalsium karbonat dosis 600 mg.

c

d

a

b d

Keterangan gambar: (a) gambaran kelainan histopatologik berupa hemorragi, (b) degenerasi tubuler, (c) nekrosis tubuler, (d) glomerulonefritis

62



Lampiran 16. Foto Penelitian

Gambar 1. Proses Pengembilan Organ.

Gambar 2. Peralatan bedah. Gambar 3. Timbangan dan Mikroskop

63



Gambar 4. Kandang Tikus Percobaan.

Gambar 5. Kalsium Karbonat.

64



Gambar 6. Komposisi Pakan

65



pengaruh pemberian kalsium karbonat pada...

Documents