i

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK

TERPURIFIKASI DARI Andrographis paniculata (Burm.

f.) Nees TERHADAP JUMLAH SEL BUSA DAN

PERUBAHAN KADAR MALONDIALDEHID (MDA)

PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR

YANG DIBERI DIET ATEROGENIK

Skripsi

NI PUTU ADITYA KUSUMA DEWI

1108505057

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2016

ii

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa karena

atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan Skripsi yang berjudul

“Pengaruh Pemberian Ekstrak Terpurifikasi dari Andrographis paniculata

(Burm. f.) Nees Terhadap Jumlah Sel Busa dan Perubahan Kadar

Malondialdehid (MDA) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar yang Diberi

Diet Aterogenik” tepat waktu dan diajukan sebagai syarat untuk memperoleh

gelar sarjana farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam.

Penyusunan Skripsi ini tidak terlepas dari bimbingan, saran dan dukungan

dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati pada

kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada semua pihak

yang telah memberikan bantuan baik secara langsung maupun tidak langsung,

yaitu kepada:

1. Ida Sang Hyang Widhi Wasa yang selalu memberikan kesehatan, petunjuk

dan Berkat-Nya kepada penulis mulai awal hingga akhir sehingga Skripsi ini

selesai dengan baik dan tepat waktu.

2. Ni Kadek Warditiani, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I

dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan,

dorongan, saran dan segala bantuan kepada penulis selama penyusunan

Skripsi ini.

3. Luh Putu Febryana Larasanty, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen

pembimbing II yang telah meluangkan waktunya untuk mengarahkan,

iv

membimbing, memberikan perhatian, serta dorongan semangat dalam

penyusunan Skripsi ini.

4. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si, selaku Dekan Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

5. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan

Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas

Udayana.

6. Seluruh dosen dan staf pegawai Jurusan Farmasi FMIPA Universitas

Udayana, terutama laboran yaitu kak Anggi, mbok Dwi dan kak Pasek yang

telah memberikan bantuan dan bimbingan kepada penulis selama penyusunan

Skripsi ini.

7. Keluarga dan terlebih kedua orang tua tercinta, I Wayan Darma dan Ni

Nyoman Ratini yang tak hentinya mendoakan, memberi semangat dan

menjadi sebuah motivasi buat penulis sehingga Skripsi ini selesai tepat

waktu. Juga untuk adik tercinta, Kadek Bayu Darma Kusuma serta teman

terdekat Adi Kusuma yang senantiasa mendoakan, membimbing, dan selalu

memberi semangat dalam penulisan Skripsi ini.

8. Sahabat satu tim penelitian penulis, Nyoman Ayu Putri Paramita Sari, Anak

Agung Istri Sinta Indrani dan Ida Ayu Putu Suara Swasti yang selalu

menemani penulis dalam penelitian dan penyusunan Proposal sampai Skripsi

serta selalu memberi doa, semangat, saran, kritik dan bantuan sehingga dapat

selesai tepat waktu.

v

9. Sahabat seperjuangan dan menjadi keluarga penulis “Dulpari”, Komang Ayu

Paramita Widhiastuti, Cheristien Pinangkaan, Milawati. Teman-teman

seperjuangan praktikum di Farmasi, I Gusti Ayu Agung Ratih Cardiani Putri,

Dewa Ayu Made Intan Pertama Sari Arsana, Sayu Mentari Dewi, Putu Andre

Angga Agastya yang selalu memberi semangat, doa dan senasib

sepenanggungan bersama sejak awal menginjakan kaki di Jurusan Farmasi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

10. Sahabat terkasih Komang Ayu Herdiani Sattvika, Ida Ayu Nyoman Ratih

Pradnyani, Ni Made Dewi Purnama Sari, Indah Migel, Tri Ambarsari yang

telah memberikan semangat dan dorongan kepada penulis dalam

menyelesaikan Skripsi ini.

11. Seluruh Mahasiswa/i Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana,

khususnya Angkatan 2011 “Lumiere Onze Vaquelin” yang telah berjuang

bersama sejak awal yang telah membantu dan memberikan semangat dalam

penyusunan Tugas Akhir I ini.

12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan Skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga Skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

membutuhkan.

Jimbaran, Januari 2016

Penulis

vi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................... vi

DAFTAR TABEL ............................................................................................ viii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix

DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. x

DAFTAR ISTILAH ......................................................................................... xi

BAB I PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1. Latar Belakang .............................................................................. 1

1.2. Rumusan Masalah ......................................................................... 4

1.3. Tujuan Penelitian........................................................................... 4

1.4. Manfaat Penelitian......................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5

2.1. Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees) 5

2.1.1. Klasifikasi Tanaman .............................................................. 5

2.1.2. Morfologi Tanaman ............................................................... 6

2.1.3. Kandungan Kimia Andrographis paniculata ........................ 7

2.2. Andrografolid ................................................................................ 8

2.3. Ekstrak Terpurifikasi ..................................................................... 9

2.4. Aterosklerosis ................................................................................ 10

2.4.1. Morfologi Aterosklerosis ....................................................... 10

2.4.2.Proses Terjadinya Aterosklerosis ........................................... 12

2.5. Malondialdehid (MDA)................................................................. 15

2.6. Obat Aterosklerosis ....................................................................... 16

2.7. Metode Induksi Aterosklerosis pada Hewan Uji........................... 17

BAB III METODE ........................................................................................... 18

3.1. Rancangan Penelitian .................................................................... 18

vii

3.2. Tempat dan Waktu Penelitian ....................................................... 18

3.3. Objek Penelitian ............................................................................ 19

3.4. Bahan Penelitian ............................................................................ 20

3.5. Alat Penelitian ............................................................................... 20

3.6. Prosedur Penelitian ........................................................................ 21

3.6.1. Determinasi Tanaman ............................................................ 21

3.6.2. Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi .......................................... 21

3.6.3. Uji Fitokimia Ekstrak Terpurifikasi Sambiloto ..................... 21

3.6.4. Pengukuran Kadar Air Ekstrak Terpurifikasi Sambiloto ...... 23

3.6.5. Pengukuran Kadar Androgafolid pada Ekstrak Terpurifikasi 24

3.6.6. Pembuatan Diet Tinggi Lemak dan Kolesterol ..................... 24

3.6.7. Induksi dan Perlakuan Hewan Coba ...................................... 25

3.6.8. Uji Histopatologi ................................................................... 26

3.6.9. Pengukuran Malondialdehid (MDA) ..................................... 26

3.7. Analisis Data ................................................................................. 27

3.8. Skema Rancangan Penelitian ........................................................ 28

3.9. Skema Kerja Uji Aktivitas Antiaterosklerosis ................................. 29

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 30

4.1. Determinasi Tanaman ................................................................... 30

4.2. Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi .................................................. 30

4.3. Uji Fitokimia Ekstrak Terpurifikasi Sambiloto ............................. 31

4.4. Penetapan Kadar Air Ekstrak Terpurifikasi Sambiloto ................. 33

4.5. Pengukuran Kadar Androgafolid pada Ekstrak Terpurifikasi ....... 34

4.6. Metode Induksi Aterosklerosis pada Tikus Putih (Rattus

norvegicus, L.) Jantan Galur Wistar.............................................. 36

4.7. Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Terpurifikasi Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees dalam Penurunan Jumlah Sel Busa ... 39

4.8. Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Terpurifikasi Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees dalam Perubahan Kadar

Malondialdehid (MDA)................................................................. 45

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 50

viii

5.1. Kesimpulan.................................................................................... 50

5.2. Saran .............................................................................................. 51

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 52

LAMPIRAN ..................................................................................................... 57

ix

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Terpurifikasi Andrographis paniculata

(Burm. f.) Nees ................................................................................ 32

Tabel 4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Terpurifikasi Andrographis pani-

culata (Burm. f.) Nees ..................................................................... 33

Tabel 4.3. Hasil Pengamatan KLT-Spektrofotodensitometri Standar Andro-

grafolid dan Sampel Ekstrak Terpurifikasi Andrographis pani-

culata (Burm. f.) Nees ....................................................................... 35

x

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1. Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees 6

Gambar 2.2. Struktur Kimia Andrografolid .................................................... 8

Gambar 2.3. Proses Terjadinya Aterosklerosis ................................................ 13

Gambar 2.4. Sel Busa Aorta Abdominalis Tikus Wistar ................................. 14

Gambar 3.1. Skema Rancangan Penelitian ...................................................... 28

Gambar 3.2. Skema Kerja Uji Aktivitas Antiaterosklerosis ............................ 29

Gambar 4.1. Kurva Kalibrasi Larutan Standar Andrografolid ........................ 36

Gambar 4.2. Gambaran Histopatologi Aorta Masing-masing Kelompok ....... 40

Gambar 4.3. Rata-rata Perbedaan Jumlah Sel Busa Tiap Kelompok Perlakuan 41

Gambar 4.4. Rata-rata Perbedaan Kadar MDA Sebelum dan Setelah Perlakuan 46

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman Andrographis paniculata (Burm. f.)

Nees ............................................................................................ 58

Lampiran 2. Hasil Uji Ethical Clearance ........................................................ 59

Lampiran 3. Gambar dan Perhitungan Ekstrak Terpurifikasi Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees ......................................................... 60

Lampiran 4. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Terpurifikasi Andrographis paniculata

(Burm. f.) Nees ........................................................................... 61

Lampiran 5. Perhitungan Penetapan Kadar Andrografolid dalam Ekstrak

Terpurifikasi Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees ............ 62

Lampiran 6. Perhitungan Dosis Ekstrak Terpurifikasi Andrographis paniculata

(Burm. f.) Nees yang Diberikan .................................................. 66

Lampiran 7. Perhitungan dan Pembuatan Larutan Uji .................................... 68

Lampiran 8. Hasil Pengamatan Histopatologi ................................................. 70

Lampiran 9. Hasil Analisis Data Untuk Pengujian Jumlah Sel Busa .............. 71

Lampiran 10. Gambaran Histopatologi Jumlah Sel Busa Hewan Uji .............. 74

Lampiran 11. Hasil Analisis Data Untuk Pengujian Kadar MDA ................... 79

xii

DAFTAR SINGKATAN

ANOVA : Analysis of Variance

BB : Berat Badan

BR-1 : Broiler 1 (pakan ayam broiler)

CMC-Na : Carboxy Methyl Cellulose Natrium

HDL : High Density Lipoprotein

HMG-KoA : 3-Hidroksi-3-Metil Glutaril Koenzim A

iNOS : inducible nitric oxide synthase

IU : International Unit, yaitu satuan khusus untuk vitamin

LDL : Low Density Lipoprotein

MDA : Malondialdehid

NF-kB : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B

cells

p.o : Per oral, yaitu diberikan secara oral

UV : Ultra Violet

WHO : World Health Organization

xiii

DAFTAR ISTILAH

Ad libitum : Diberikan tanpa ada yang menghalangi (sesukanya)

Arteri coroner : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke jantung

Arteri serebral : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke otak

Buffer formalin 10% : Berfungsi sebagai pengawet sehingga terhindar dari

pencemaran oleh enzim-enzim dan bakteri untuk

melindungi struktur fisik sel (mengandung larutan

formaldehyde 40%, aquadest, sodium dihidrogen fosfat

monohidrat, disodium hidrogen fosfat anhidrat)

Diet Aterogenik : Makanan yang menginduksi aterosklerosis berupa lemak

babi : kuning telur bebek : pakan standar (15:5:80) setiap

hari serta kalsium 1% dan Vitamin D3 20000 IU seminggu

sekali

Ekstrak terpurifikasi : Ekstrak yang sudah mengalami proses purifikasi untuk

menghilangkan komponen yang dianggap sebagai

pengganggu seperti lemak, klorofil dan lain-lain sehingga

didapatkan komponen bahan alam yang lebih murni dan

bebas dari komponen kimia lain yang tidak dibutuhkan

Fibrofatty plagues : Lesi berwarna putih-kuning dengan dasar yang terletak

pada tunika intima dan menonjol ke dalam lumen

pembuluh darah

xiv

Fibrosis : Fibrosis adalah pembentukan struktur seperti skar yang

halus yang menyebabkan jaringan mengeras dan

mengurangi aliran cairan melalui jaringan-jaringan

Fibrous plaque : Penebalan lapisan lemak terutama kolesterol

HDL : Lipoprotein yang mengandung kolesterol sekitar 20-30%

In vitro : Percobaan dalam biakan dengan medium buatan, tidak

dalam sel atau jaringan hidup

In vivo : Eksperimen di dalam tubuh organisme

Larutan bouin’s : Untuk fiksasi yang berfungsi mempertahankan bentuk

jaringan sedemikian rupa sehingga perubahan bentuk atau

struktur sel jaringan yang terjadi hanya sekecil mungkin

dan membuat jaringan mudah diwarnai

LDL : Lipoprotein yang mengandung kolesterol paling banyak

yaitu 60-70% dan 10% trigliserida

MDA : Metabolit hasil peroksidasi lipid oleh radikal bebas

Proliferasi : Pertumbuhan pesat menghasilkan jaringan baru

Sel busa : Bentukan makrofag berisi LDL yang teroksidasi

Selectin : Protein pro inflamasi yang menyebabkan melekatkan

leukosit pada endotel

Stroke : Penyakit yang terjadi akibat penyumbatan pada pembuluh

darah otak atau pecahnya pembuluh darah di otak

Ulserasi : Plak lemak yang mengandung kapur

xv

ABSTRAK

Ekstrak terpurifikasi Andrographis paniculata (Burm.f) Nees telah terbukti

memiliki efek terhadap penyakit dislipidemia, jumlah sel busa dan kadar MDA

merupakan salah satu parameter yang digunakan untuk menilai perkembangan

penyakit tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak

terpurifikasi dari Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees yang mengandung

andrografolid terhadap jumlah sel busa dan perubahan kadar malondialdehid

(MDA) tikus putih jantan galur wistar yang telah diberi diet aterogenik.

Penelitian ini meliputi beberapa tahapan yaitu: pembuatan ekstrak

terpurifikasi dengan metode maserasi, uji fitokimia, uji kadar air, penetapan kadar

andrografolid, induksi diet aterogenik pada hewan uji serta pengujian ekstrak

terpurifikasi terhadap jumlah sel busa pada irisan preparat aorta jantung dan

perubahan absorbansi yang menggambarkan kadar MDA pada serum tikus.

Pengujian dilakukan dengan membagi tikus menjadi 5 kelompok perlakuan:

kontrol normal, kontrol negatif (CMC Na 0,1%), kontrol positif (atorvastatin 7,2

mg/kg BB), perlakuan I (ekstrak terpurifikasi 12,2 mg/kg BB) dan perlakuan II

(ekstrak terpurifikasi 36,5 mg/kg BB). Pemberian ekstrak terpurifikasi dosis 12,2

mg/kg BB dan 36,5 mg/kg BB diberikan selama 30 hari.

Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh ekstrak terpurifikasi dengan 2 kadar

andrografolid yang berbeda yaitu 41,143% b/b dan 66,510% b/b. Ekstrak

terpurifikasi dosis 12,2 mg/kg BB dan 36,5 mg/kg BB secara signifikan (p<0,05)

dapat menurunkan pembentukan sel busa serta memberikan perubahan pada

gambaran kadar MDA sebelum diberikan andrografolid dan setelah diberikan

ekstrak terpurifikasi dari Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees.

Kata kunci : Ekstrak terpurifikasi Andrographis paniculata (Burm.f) Nees, sel

busa, Malondialdehid (MDA)

xvi

ABSTRACT

The purified extracts of Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees shown to

have an effect dyslipidemia disease, number of foam cells and MDA is one of

parameters used to assess the progression of the disease. The aim of this study

performed to find out the influence of purified extracts of Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees containing andrografolid against number of foam cell

and changes in levels of malondialdehide (MDA) on male white rats wistar strain

which has been given an atherogenic diet.

This research includes several steps: preparation of purified extract with

maceration, phytochemicals tests, water content test, measurement of

andrographolide concentration, atherogenic diet induction on experimental rats

and administration purified extracts of foam cells in aorta and absorbantion

changed that describe of MDA levels in rat serum. This study is carried out by

divided rats into five groups: normal control, negative control (CMC Na 0.1%),

positive control (atorvastatin 7.2 mg/kg), treatment I (extract terpurifikasi 12.2

mg/kg) and treatment II (extract terpurifikasi 36.5 mg/kg). Administration of

purified extracts using two doses 12.2 mg/kg BW and 36.5 mg/kg BW was

administered 30 days.

Based on the research, results of andrographolide two different concentrations

is 41,143% w/w and 66,510% w/w in purified extracts. Administration of 12.2

mg/kg BW and 36.5 mg/kg BW of purified extracts that significantly decreasing

the foam cells formed (p<0,05) and give a changing in describing MDA levels

before treatment and after treatment by purified extracts of Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees

Keywords : Purified extracts of Andrographis paniculata, foam cell,

Malondialdehide (MDA)