1

LAPORAN PENELITIAN

PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN SIRSAK

(ANNONA MURICATA) DALAM MENGHAMBAT

PERTUMBUHAN BAKTERI SALMONELLA TYPHI

SECARA IN VITRO

Oleh :

PUTU NANDA PRAMADYA P.

MADE AGUS HENDRAYANA

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

UNIVERSITAS UDAYANA FAKULTAS KEDOKTERAN

DENPASAR

2016

2

PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN SIRSAK (ANNONA

MURICATA) DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI

SALMONELLA TYPHI SECARA IN VITRO

Putu Nanda Pramadya P, Made Agus Hendrayana

Fakultas Kedokteran Universitas Udayana

ABSTRAK

Salmonella typhi merupakan penyebab utama penyakit demam typhoid.

Masalah yang kini dihadapi dari berbagai penyakit infeksi adalah resistensi

bakteri terhadap antibiotik. Pengembangan suatu alternatif pengobatan yang tidak

menyebabkan efek samping perlu dilakukan. Salah satu tanaman yang telah lama

dimanfaatkan sebagai obat tradisional diantaranya adalah daun sirsak. Kandungan

flavonoid, steroid, alkaloid, saponin, dan tanninyang dilaporkan pada daun

tanaman sirsak (Annona muricata) berkontribusi sebagai antibakteri. Penelitian ini

bertujuan untuk mengetahui efek antibakteri dengan mengukur zona hambat yang

diinduksi oleh ekstrak metanol daun sirsak pada bakteri Salmonella typhi secara in

vitro. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium dengan

rancangan penelitian posttest only control design dengan metode difusi agar

(Kirby-Bauer). Studi ini menggunakan daun sirsak yang diekstraksi dengan

metode maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol daun

sirsak dengan konsentrasi larutan 50mg/mL, 100mg/mL, 200mg/mL dan

400mg/mL yang diuji pada bakteri Salmonella typhi secara in vitro. Uji ekstrak

secara in vitro pada bakteri Salmonella typhi melaporkan hasil bahwa ekstrak

metanol daun sirsak (Annona muricata) tidak dapat menghambat pertumbuhan

bakteri Salmonella typhisecara in vitro. Terdapat beberapa faktor yang tidak dapat

dikontrol yang mempengaruhi hasil dari penelitian ini seperti jenis bakteri,

lingkungan tempat tanaman berasal, dan efektifitas ekstrak. Diperlukan penelitian

lebih lanjut untuk uji antibakteri ekstrak metanol daun sirsak dengan konsentrasi

larutan yang berbeda, untuk mengetahui konsentrasi yang dapat memberikan efek

secara in vitro pada bakteri Salmonella typhi.

Kata Kunci: Salmonella typhi, ekstrak daun sirsak, antibakteri

3

DAFTAR ISI

SAMPUL..................................................................................................... 1

ABSTRAK .................................................................................................. 2

DAFTAR ISI ............................................................................................... 3

DAFTAR TABEL ....................................................................................... 6

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. 7

BAB I. PENDAHULUAN

1.1 ..................................................................................................... Latar

Belakang ............................................................................................... 8

1.2 ..................................................................................................... Rumus

anMasalah .......................................................................................... 10

1.3 ..................................................................................................... Tujua

n .......................................................................................................... 11

1.4 ..................................................................................................... Luara

n yang Diharapkan ............................................................................ 11

1.5 ..................................................................................................... Manfa

at ......................................................................................................... 11

BAB II Landasan Teori

2.1 KarakteristikBakteriSalmonella typhi ............................................. 13

2.1.1 Salmonella ........................................................................................ 13

2.1.2 Salmonella typhi ............................................................................... 14

2.1.3 Morfologi ......................................................................................... 14

2.1.4 Patogenesis ....................................................................................... 15

2.1.5GejalaKlinis Demam Tifoid .............................................................. 17

4

2.2 Potensi Daun Sirsak (Annona muricata) ......................................... 19

2.2.1 Tanaman Annona muricata .............................................................. 19

2.2.2 Manfaat Annona muricata ............................................................... 20

2.2.3 Aktifitas Antibakteri Daun Annona muricata .................................. 21

BAB III KERANGKA BERPIKIR DAN KONSEP PENELITIAN

3.1Kerangka Berpikir ............................................................................. 23

3.2Konsep Penelitian ............................................................................... 24

3.3Hipotesis Penelitian ............................................................................ 24

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian ....................................................................... 25

4.2 Ruang Lingkup Penelitian ................................................................ 27

4.2.1 Lokasi Penelitian .............................................................................. 27

4.2.2 Waktu Penelitian .............................................................................. 27

4.2.3 Disiplin Ilmu Terkait ........................................................................ 27

4.3 Rancangan Penelitian ....................................................................... 27

4.4 Sampel Penelitian .............................................................................. 28

4.5 Pengulangan Sampel ........................................................................ 28

4.6 Kriteria Sampel ................................................................................ 28

4.6.1 Kriteria Inklusi ................................................................................ 28

4.6.2 Kriteria Ekslusi ................................................................................ 28

4.7 Identifikasi Variabel ......................................................................... 29

4.8 Definisi Operasional Variabel .......................................................... 29

4.9 Alat dan Bahan ................................................................................. 31

5

4.10 Protokol Penelitian .......................................................................... 31

4.10.1 Pembuatan Simplisia Daun Annona Muricata ............................... 31

4.10.2 Pembuatan Ekstrak ......................................................................... 32

4.10.3 Pembuatan Media ........................................................................... 33

4.10.4 Pembuatan Larutan Mc. Farland .................................................. 33

4.10.5 Pembuatan Suspensi Bakteri ......................................................... 33

4.10.6 Inokulasi Bakteri pada Media Agar ............................................... 34

4.10.7 Pembuatan larutan Kontrol Negatif dan Positif ............................. 34

4.10.8 Penyiapan Larutan Uji ................................................................... 34

4.10.9 Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Agar ....... 34

4.7.10 Pengamatan Data Pengukuran ....................................................... 35

4.11 Analisi Data .................................................................................... 35

4.12 Jadwal Penelitian ........................................................................... 35

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Hasil Ekstraksi Daun Sirsak ........................................................... 36

5.2 Hasil Uji Fitokimia ........................................................................... 36

5.3 Hasil Uji Antibakteri ........................................................................ 43

5.4 Pembahasan ...................................................................................... 45

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN

6.1 Simpulan ........................................................................................... 49

6.2 Saran ................................................................................................. 50

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

6

DAFTAR TABEL

Tabel 5.1 Hasil Uji Fitokimia Alkaloid ........................................................ 39

Tabel 5.2 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Sirsak ...................... 42

Tabel 5.3 Data Hasil Pengukuran ................................................................ 45

7

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1Salmonella typhi pada pengecatan Gram stain .......................... 15

Gambar 2.2 Struktur Bakteri Salmonella typhi ............................................ 15

Gambar 2.3 Skema PatogenesisSalmonella typhi ......................................... 18

Gambar 2.4 Tanaman Annona muricata ....................................................... 20

Gambar 3.1 Skema Konsep Penelitian ......................................................... 24

Gambar 4.1 Skema Rancangan Penelitian ................................................... 25

Gambar 5.1 Larutan Uji ............................................................................... 37

Gambar 5.2 Hasil Uji Flavonoid .................................................................. 37

Gambar 5.3 Hasil Uji Saponin ..................................................................... 38

Gambar 5.4 Hasil Uji Fenol ......................................................................... 39

Gambar 5.5 Hasil Uji Bouchardat ................................................................ 40

Gambar 5.6 Hasil Uji Wagner ...................................................................... 40

Gambar 5.7 Hasil Uji Mayer ........................................................................ 40

Gambar 5.8 Larutan Blanko ......................................................................... 40

Gambar 5.9 Hasil Uji Steroid ....................................................................... 41

Gambar 5.10 Hasil Uji Triterpenoid ............................................................ 41

Gambar 5.11 Hasil Uji Tannin ..................................................................... 41

Gambar 5.12 Hasil Uji Glikosida ................................................................. 42

Gambar 5.13 Hasil Uji Ekstrak Metanol Daun Sirsak ................................. 44

8

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Demam typhoid merupakan salah satu penyakit infeksi pada saluran

pencernaan yang menjadi sorotan seluruh masyarakat dunia. Demam

typhoidsendiri diakibatkan oleh bakteri Salmonella khususnya serotipe Salmonella

typhi atau Salmonella paratyphi. Seperti penyakit menular lainnya, demam

typhoid banyak ditemukan di negara berkembang, dimana kebersihan pribadi dan

sanitasi lingkungannya masih tergolong kurang baik. Menurut catatan CDC,

estimasi demam typhoiddi Amerika serikat adalah 5.700 kasus tiap tahunnya,

dimana lebih banyak ditemukan pada wisatawan. Selain itu, estimasi sekitar 21

juta orang di seluruh dunia terinfeksi demam typhoid dan 200.000 dari yang

terinfeksi meninggal akibat infeksi ini(CDC,2014). Prevalensi untuk negara-

negara kawasan ASIA diketahui sekitar 900/10.000 penduduk per tahun.

Indonesia diketahui sebagai negara endemik demam typhoid. Diperkirakan sekitar

800/100.000 penduduk menderita demam typhoidsetiap tahunnya

(Widoyono,2011).

Permasalahan dalam penanggulangan penyakit infeksi bakteri seperti

demam typhoid yang terjadi hampir diseluruh belahan dunia saat ini adalah

resistensi atau ketidakpekaan bakteri terhadap antibiotik lapis pertama (first-line

9

drug) yang digunakan sebagai terapi.Penggunaan antibiotik yang tidak rasional di

kalangan masyarakat semakin menambah kasus resistensi antibiotik pada bakteri-

bakteri enterik salah satunya pada bakteri Salmonella typhi(Kavita N, 2010).

Tingginya angka morbiditas dan mortalitas karena demam

typhoidterutama pada negara berkembang, menggerakkan berbagai pihak

berupaya untuk menyelesaikan masalah ini. Berkembangnya paradigma dalam

bidang kesehatan, untuk menggunakan ramuan alami dan obat-obat tradisional

sebagai terapi penyakit, sangat membuka peluang untuk meneliti dan

mengembangkan tanaman obat sebagai cadangan antibiotik di masa depan. Salah

satu tanaman yang sering digunakan untuk obat tradisional adalah sirsak (Annona

muricata L). Bagian tanaman sirsak yang dilaporkan mengandung efek antibakteri

adalah bagian daunnya (Widoyono,2011)(Kavita N, 2010).

Penelitian terdahulu telah melakukan uji daya hambat ekstrak metanol

daun sirsak pada berbagai jenis bakteri gram negatif dan gram positif.Hasil

penelitian dari Ginda Haro, et al, menyatakan bahwa ekstrak metanol dari daun

sirsak pada konsentrasi 150 mg/ml dapat menghambat pertumbuhan dari

Staphylococcus aureus dengan diameter zona inhibisi sebesar 14.1 mm dan pada

konsentrasi 250 mg/ml mampu menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia

coli dengan zona inhibisi sebesar 14.5 mm. Minimum Inhibition Concentration

(MIC) dari ekstrak metanol daun sirsak yakni 5 mg/ml dapat menghambat

pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan zona inhibisi sebesar 8.6 mm

dan 8.0 mm pada bakteri Escherichia coli. Pada penelitian ini juga memperoleh

hasil bahwa ekstrak metanol memiliki kekuatan inhibisi lebih kuat apabila

dibandingkan dengan ekstrak kloroform (Ginda Haro et al, 2011)

10

Escherichia coli mempunyai beberapa kesamaan karakteristik dengan

Salmonella typhi. Beberapa kesamaan karakteristik dari kedua bakteri ini

diantaranya adalah berasal dari golongan yang sama yakni gram negatif,

sama-sama berbentuk batang, tidak berspora, dinding sel berupa

peptidoglikan dengan komponen membran luar bakteri yang tersusun atas

lipopolisakarida, serta merupakan jenis bakteri enterikyang menginfeksi

usus manusia.

Melihat adanya kesamaan karakteristik antara bakteri Escherichia

coli dengan Salmonella typhi,tidak tersedianya data ilmiah terkait penelitian

ekstrak daun sirsak pada bakteri gram negatif Salmonella typhiserta adanya

paradigma masyarakat yang mengembangkan sumber alam sebagai terapi

cadangan di masa depan, membuat peneliti tertarik untuk melakukan

penelitian pendahuluanuji daya hambat ekstrak daun sirsak (Annona muricata)

dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro.

Diharapkan nantinya hasil penelitian pendahuluan yang dilakukan dapat

menjadi dasar teori dari penelitian selanjutnya mengenai potensi antibakteri

untuk terapi pada infeksi bakteri Salmonella typhi.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas, maka dapat dirumuskan masalah yaitu :

1. Apakah ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) dapat menghambat

aktivitas dari bakteri Salmonella typhi secara in vitro ?

11

2. Berapakah diameter zona hambat yang dihasilkan dari ekstrak metanol daun

sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella typhisecara in

vitro?

3. Berapakah konsentrasi optimal yang menunjukkan aktivitas antibakteri ekstrak

metanol daun sirsak (Annona muricata) terhadap bakteri Salmonella typhi secara

in vitro?

1.3 Tujuan

1.3.1 Tujuan umum

Untuk mengetahui efek antibakteri ekstrak metanol daun sirsak (Annona

muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro.

1.3.2 Tujuan khusus

1. Untuk mengetahui diameter zona hambat yang dihasilkan dari ekstrak metanol

daun sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella

typhisecara in vitro.

2.Untuk mengetahui konsentrasi optimal yang menunjukkan aktivitas antibakteri

ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata)terhadap bakteri Salmonella

typhisecara in vitro.

1.4 Luaran yang Diharapkan

Luaran yang diharapkan adalah terkumpulnya data ilmiah aktivitas antibakteri

ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) terhadap pertumbuhan bakteri

Salmonella typhisecara in vitro.

1.5 Manfaat

12

1.5.1 Manfaat bagi penulis

Menambah wawasan penulis tentang efek aktivitas antibakteri ekstrak

metanoldaun sirsak (Annona muricata) terhadap bakteri Salmonella typhi.

1.5.2 Manfaat bagi dunia pendidikan

Hasil penelitian dapat menambah ilmu pengetahuan khususnya dalam bidang

mikrobiologi alternatif dan dapat dijadikan acuan dalam penelitian selanjutnya.

1.5.3 Manfaat bagi masyarakat

Hasil penelitian diharapkan dapat digunakan sebagai alternatif alami antibakteri

Salmonella typhi.

13

BAB II

LANDASAN TEORI

2.1 Karakteristik Bakteri Salmonella typhi

2.1.1 Salmonella

Salmonella merupakan bakteri batang gram-negatif, tidak mempunyai

kapsul, berflagela dan tidak membentuk spora. Karena habitat aslinya yang berada

di dalam usus manusia maupun binatang, bakteri ini dikelompokkan ke dalam

enterobacteriaceae. Walaupun begitu banyak serotip dari Salmonella, namun telah

disepakati bahwa hanya terdapat dua spesies, yakni S. bongori dan S. enterica

dengan enam subspesies. Klasifikasi Salmonella terbentuk berdasarkan dasar

epidemiologi, jenis inang, reaksi biokimia, dan struktur antigen O, H, V ataupun

K. Antigen yang paling umum digunakan untuk Salmonella adalah antigen O dan

H(Widoyono,2011).

Antigen O, berasal dari bahasa Jerman (Ohne), merupakan susunan

senyawa lipopolisakarida (LPS). LPS mempunyai tiga region. Region I

merupakan antigen O-spesifik atau antigen dinding sel. Region II merupakan

bagian yang melekat pada antigen O, merupakan core polysaccharide yang

konstan pada genus tertentu. Region III adalah lipid A yang melekat pada region

II dengan ikatan dari 2-keto-3-deoksioktonat (KDO). Antigen H merupakan

antigen yang terdapat pada flagela dari bakteri ini, yang disebut juga flagelin.

Antigen H adalah protein yang dapat dihilangkan dengan pemanasan atau dengan

menggunakan alkohol. Antigen K berasal dari bahasa Jerman, kapsel. Antigen K

merupakan antigen kapsul polisakarida dari bakteri enteric (Widoyono,2011)

(Mandal, B.K et al, 2008).

14

2.1.2 Salmonella typhi

Penamaan yang umum digunakan, seperti Salmonella typhi sebenarnya

tidak benar. Taksonomi S. typhi adalah sebagai berikut.

Phylum : Eubacteria

Class : Prateobacteria

Ordo : Eubacteriales

Family : Enterobacteriaceae

Genus : Salmonella

Species : Salmonella enterica

Subspesies :enteric (I)

Serotipe : typhi

Karena itu, penamaan yang benar adalah S. enterica subgrup enteric serotip typhi,

ataupun sering dipersingkat dengan S. enteric I ser. typhi. Namun penamaan

Salmonella typhi telah umum digunakan karena lebih sederhana (Microbes.edu,

2014).

2.1.3 Morfologi

Salmonella typhi merupakan bakteri batang, gram negatif yang tidak

membentuk spora. Bakteri ini juga bersifat fakultatif, dan sering disebut sebagai

facultative intra-cellular parasites karena mampu hidup baik di dalam maupun

diluar sel inangnya. Dinding selnya terdiri atas murein, lipoprotein, fosfolipid,

protein, dan lipopolisakarida (LPS) dan tersusun sebagai lapisan-lapisan. Ukuran

panjangnya bervariasi, dan sebagian besar memiliki peritrichous flagella sehingga

bersifat motil (bisa bergerak)(Widoyono,2011)(Mandal, B.K et al, 2008).

15

2.1.4 Patogenesis

Bakteri Salmonella typhi masuk ke system pencernaan manusia melalui

makanan atau minuman yang sudah tercemar. Salmonella typhi masuk melewati

Gambar 2.1: Salmonella typhi pada pewarnaan

Gram Stain. Memiliki bentuk menyerupai

batang, memiliki peritrichous flagella sehingga

bersifat motil.

Gambar 2.2Struktur bakteri Salmonella typhi yang merupakan kelompok bakteri gram

negatif berflagel.

16

mucosa usus halus dan usus besar, kemudian menetap pada bagian intraseluler

tempat mereka berproliferasi (memperbanyak diri). Setelah melewati epitel,

bakteri akan memasuki lamina propria. Bakteri dapat juga melakukan penetrasi

melalui intercellular junction. Serta menyebabkan munculnya

ulserasi(pembengkakan) pada folikel limfoid. Pada awalnya S. typhi berproliferasi

di Payer’s patch dari usus halus, kemudian sel mengalami destruksi sehingga

bakteri akan dapat menyebar ke hati, limpa, dan system retikuloendotelial. Dalam

satu sampai tiga minggu bakteri akan menyebar ke organ tersebut. Bakteri ini

akan menginfeksi empedu, kemudian jaringan limfoid dari usus halus,

terutamanya ileum. Invasi bakteri ke mukosa akan memicu sel epitel untuk

menghasilkan berbagai sitokin proinflamasi seperti IL-1, IL-6, IL-8, TNF-β, INF,

GM-CSF.

Infeksi dari Salmonella typhi baik pada saluran cerna maupun organ lain,

akan menyebabkan reaksi inflamasi. Reaksi inflamasi ini akan menghasilkan

pirogen endogen sehingga set point tubuh (suhu tubuh) meningkat, dan suhu

tubuh pun meningkat. Rasa tidak nyaman pada bagian perut juga merupakan hasil

reaksi inflamasi pada saluran cerna yang menghasilkan bradikinin. Adanya

bradikinin akan menimbulkan sensasi nyeri. Sedangkan endotoksin yang

dihasilkan S. typhi dapat menyebabkan gangguan kardiovaskular, gangguan

neuropsikiatrik, dan gangguan pernafasan (Sarman,2001)(WHO,2003).

17

2.1.5 Gejala klinis demam typhoid

Gejala klinis demam typhoid bervariasi dari asimtomatik, ringan, berat,

bahkan sampai menyebabkan kematian. Gejala klinis demam typhoid yang

simptomatik biasanya ditandai dengan demam, nyeri abdomen, mual, muntah,

malaise, dan diare yang muncul akibat infeksi bakteri S.typhi. Hal yang

membedakan demam typhoid dengan diagnosis penyakit lainnya adalah pola

demam yang bersifat stepwise atau anak tangga. Demam diawali dengan suhu

yang lebih rendah, kemudian meningkat dihari berikutnya. Pola demam yang

sedemikian rupa inilah yang dapat menyebabkan hilangnya kesadaran pada

penderita. Masa inkubasi S. typhi berkisar 3-21 hari dimana durasinya sesuai

dengan virulensi, serta status imunitas dari penderita. Gejala klinis yang umum

adalah demam yang panjang (38,8˚C-40,5˚C). Demam ini dapat berkelanjutan

selama empat minggu jika tidak segera ditangani. Keluhan nyeri abdomen hanya

berkisar 30-40% dari penderita yang menderita demam typhoid. Jika dilakukan

pemeriksaan fisik, hanya dapat ditemukan suhu tubuh yang meningkat

(Widoyono,2011)(Mandal,B.K et al,2008)(WHO,2003).

18

Gambar 2.3 : Skema patogenesis untuk Salmonella typhi.

Setelah bakteri menginfeksi tubuh manusia, S.typhiakan menghasilkan

endotoksin yang dapat mengganggu system kardiovaskuler, neuropsikiatrik dan

pernafasan. Selain itu S.typhi akan menimbulkan reaksi inflamasi terutama pada

saluran pencernaan, hepar dan limpa. S.typhi juga akan menghasilkan pirogen

endogen, sehingga menimbulkan peningkatan suhu tubuh sebagai manifestasi

klinisnya.

Gangguan

kardiovaskuler,

neuropsikiatrik,

pernafasan

Demam

Hepatomegali

Spleenomegali

Perasaan

tidak enak

diperut

Pirogen

endogen

Hepar dan limpa Saluran cerna

Endoktoksin Reaksi inflamasi

Infeksi S.typhi

19

2.2 Potensi Daun Sirsak (Annona Muricata L)

2.2.1 Tanaman Annona muricata

Annona muricata atau di Indonesia yang lebih dikenal dengan buah sirsak

merupakan tanaman dataran rendah tropis yang berasal dari keluarga Annonaceae.

Nama lain dari buah ini adalah graviola and guanábana. Buah sirsak berasal dari

Amerika Tengah dan Amerika Selatan, serta kepulauan Caribia. Kini buah sirsak

tersebar di daerah-daerah tropis di seluruh dunia termasuk Florida Selatan dan

ASIA Tenggara pada daratan 1150 meter dari permukaan laut. Berikut adalah

taksonomi dari tanaman sirsak.

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Bangsa : Ranunculales

Suku : Annonaceae

Marga : Annona

Jenis : Annona muricata (Sri Sugati, 1991)

Tanaman Annona muricata rata-rata tumbuh sampai mencapai tinggi 8

meter. Daunnya licin, berbentuk oval. Bunga dan buahnya cenderung berbentuk

bulat dan biasanya muncul ada musim-musim tertentu saja. Buahnya berbentuk

oval ireguler, berukuran 15-30 cm. Daging buah berwarna putih, berserabut dan

berisi biji berwarna hitam. Jus sirsak diketahui mengandung 19-23% gula dan

20

1.10-1.71% protein total. (Onyechi,2012) Varietas pada Annona muricata sendiri

terdiri dari banyak jenis.

2.2.2 Manfaat Annona muricata

Sejak jaman dahulu, tanaman Annona muricata digunakan dalam

kehidupan sehari-hari. Biasanya Annona muricata digunakan sebagai bahan untuk

dikonsumsi, baik secara langsung, ataupun diolah terlebih dahulu. Buah, biji,

daun, kulit dan akar digunakan sebagai terapi untuk parasit pada sistem

pencernaan, batuk (termasuk asma dan bronkitis), penyakit pada hati, inflamasi,

diabetes dan hipertensi. Biji Annona muricata digunakan sebagai insektisida,

sedangkan daunnya biasa digunakan untuk membasmi kutu rambut dan kutubusuk

(bedbugs) (Susi et al, 2014).

Buah sirsak dalam pengobatan alami digunakan untuk mengobati penyakit

atritis, neuralgia, diare, disentri, demam, malaria, penyakit akibat parasite,

rematik, kemerahan pada kulit dan dikonsumsi juga pada ibu menyusui untuk

meningkatkan produksi ASI. Daunnya digunakan untuk terapi pada kista,

Gambar2.4 :TanamanAnnona muricata tumbuh sampai mencapai tinggi 8 meter.

Daunnya licin, berbentuk oval. Bunga dan buahnya cenderung berbentuk bulat dan

biasanya muncul ada musim-musim tertentu saja.

21

diabetes, sakit kepala dan insomnia. Biji sirsak yang dihancurkan dipercaya

memiliki efek antihelmintik yang dapat melawan cacing eksternal dan internal

manusia, serta parasite lainnya. Di negara-negara tropis Afrika, tanaman sirsak

digunakan sebagai astringent (untuk menghentikan perdarahan), insektisida dan

agen piscicide, serta untuk mengatasi batuk, nyeri, penyakit kulit. Di India, buah

dan bunga digunakan untuk mengatasi radang selaput lender hidung (catarrh),

sedangkan akar batang dan daunnya dipercaya memiliki aktifitas anti radang dan

antilemitik. Di Amerika Selatan dan Negara tropis Afrika, termasuk Nigeria, A.

muricata digunakan sebagai echtomedicine untuk melawan tumor dan kanker.

Selain digunakan sebagai anti inflamasi, hipoglikemi agen, sedative, relaksasi otot

polos, efek hipotensif dan antipasmodik (Soheil,2015).

2.2.3 Aktifitas antibakteri daun Annona muricata

Analisis fitokimia mengungkapkan adanya metabolit skunder seperti

tannin, steroid, cardiac glycoside; alkaloid, saponin dan flavonoidyang membuat

ekstrak daun sirsak memiliki aktivitas antibakteri. Komparasi aktivitas antibakteri

antara ekstrak metanol daun sirsak dengan antibiotik standar yakni streptomicyn,

memperlihatkan hasil bahwa ekstrak metanol memiliki signifikansi (P<0.05)

efikasi sebagai anti bakteri dan dapat disandingkan dengan antibiotik standar

seperti streptomicyn(Solomon et al,2014)

Hasil penelitian yang dilakukan Ginda Haro dkk, di Medan Sumatera

Utara juga menyatakan bahwa ekstrak metanoldaun A.muricata memiliki efek

antibakteri yang cukup baik pada percobaan yang menggunakan bakteri

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli apabila dibandingkan dengan

22

penggunaan ekstrak dengan chloroform. Hasil dari uji aktivitas anti bakteri yang

dilakukan oleh Ginda Haro dkk, memperlihatkan konsentrasi 150 mg/ml ekstrak

metanol daun sirsak mampu menginhibisi pertumbuhan dari Staphylococcus

aureus dengan diameter zona inhibisi 14.1 mm dan pada konsentrasi 250 mg/ml

mampu menginhibisi pertumbuhan Escherichia coli dengan diameter zona inhibisi

14.5 mm. Pada konsentrasi minimum inhibisi, ekstrak metanol 5mg/ml mampu

menginhibisi pertumbuhan dari Staphylococcus aureus dengan diameter zona

inhibisi 8.6 mm dan 8.0 mm untuk E.coli.

Diameter zona inhibisi pada ekstrak metanol terbukti jauh lebih besar

karena kemampuan metanol yang lebih mudah melarutkan bahan bioaktif yang

ada pada daun. Senyawa dengan diameter zona inhibisi 14 sampai dengan 16 mm

dinyatakan sebagai hasil yang memuaskan.

Diameter zona inhibisi ekstrak metanol daun sirsak sangat dianjurkan,

mengingat ekstrak metanol daun sirsak mengandung tannin dan flavonoids.

Mekanisme tannin pada aktifitas anti bakteri pada konsentrasi rendah dapat

merusak membran sitoplasma dan menyebabkan pecahnya sel, Pada konsentrasi

yang tinggi tannin akan berkoagulasi dengan protein seluler. Sedangkan flavanoid

dapat merusak permeabilitas dari dinding sel antibakteri(Ginda Haro et al, 2011).

23

BAB III

KERANGKA BERPIKIR, KONSEP PENELITIAN DAN

HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Berpikir

Demam Typhoid merupakan salah satu penyakit infeksi endemik yang

berada di negara-negara berkembang sepeti Indonesia. Demam Typhoid

disebabkan oleh bakteri Salmonella Typhi yang menular secara fecal-oral akibat

tingkat kebersihan dan sanitasi yang buruk. Berkembangnya paradigma dalam

bidang kesehatan terkait dengan terapi pengobatan, yaitu penggunaan ramuan

alami dan obat-obat tradisional, sangat membuka peluang untuk meneliti dan

mengembangkan tanaman obat untuk terapi komplementer.Salah satu tanaman

yang sering digunakan untuk obat tradisional adalah sirsak (Annona muricata L).

Bagian tanaman sirsak yang dilaporkan mengandung efek anti bakteri adalah

bagian daunnya. Penelitian ini berfokus pada penggunaan ekstrak metanol

daunAnnona Muricatadengan berbagai konsentrasiuntuk melihat efektifitasnya

terhadap pertumbuhan koloni bakteriSalmonella typhi. Annona Muricata dipilih

karena beberapa studi sebelumnya menyebutkan terdapat efek antibakteri pada

tumbuhan tersebut. Penelitian ini menggunakan uji cakram difusi (diffusion disc

method) dengan mengukur rerata diameter zona hambat yang dihasilkan pada

berbagai konsentrasi ekstrak serta membandingkannya untuk menilai efek optimal

terkait perananannya sebagai antibakteri.

24

3.2 Konsep Penelitian

Gambar 3.1 Skema Konsep Penelitian

3.3 Hipotesis Penelitian

Berdasarkan landasan teori yang ada dan sehubungan dengan

permasalahan, maka dapat dirumuskan hipotesis sebagai berikut:

a) Ho= Ekstrak metanol Annona Muricatatidak dapat menghambat

pertumbuhan bakteri Salmonella typhi secara in vitro (P > 0,01)

b) Ha = Ekstrak metanol Annona Muricatadapat menghambat pertumbuhan

bakteri Salmonella typhi secara in vitro (P < 0,01)

25

BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode True Experimental Post Test Only

Group Design untuk mengetahui pengaruh ekstrak metanol daun Annona muricata

dalam menghambat pertumbuhan Salmonella typhi secara in vitro. Sampel dibagi

dalam 2 kelompok yakni kelompok kontrol (K) dan kelompok perlakuan (P).

Kelompok kontrol merupakan kontrol negatif dengan (K1) dan kontrol positif

dengan (K2) sedangkan kelompok perlakuan dibagi atas 4 kelompok berdasarkan

dosis penggunaan ekstrak metanol daun Annona muricata pada masing-masing

isolat pada biakan Salmonella typhi dengan konsentrasi 50 mg/mL(P1), 100

mg/mL (P2), 200 mg/mL (P3), dan 400mg/mL(P4).

26

Gambar 4.1 Skema Rancangan Penelitian

Keterangan :

K1 = Kelompok kontrol Salmonella typhi negatif (metanol)

K2 = Kelompok kontrol Salmonella typhipositif (ciprofloxacin)

P1 = Kelompok intervensi 1 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona

muricata 50 mg/mL

P2 = Kelompok intervensi 2 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona

muricata 100 mg/mL

P3 = Kelompok intervensi 3 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona

muricata 200 mg/mL

P4 = Kelompok intervensi 4 Salmonella typhi, ekstrak metanol daun Annona

muricata 400 mg/mL

Q1 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok kontrol negatif setelah

perlakuan

Q2 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompokP1 setelah perlakuan

Q3 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P2 setelah perlakuan

Q4 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P3 setelah perlakuan

Q5 = Jumlah koloni Salmonella typhi pada kelompok P4 setelah perlakuan

Populasi = Isolat bakteri Salmonella typhi

Sampel = Isolat bakteri Salmonella typhi yang berasal dari Instalasi

Laboratorium Mikrobiologi Rumah Sakit Umum Pusat Sanglah

27

4.2 Ruang Lingkup Penelitian

4.2.1 Lokasi penelitian

a) Pengeringan dan pembuatan ekstrak metanol daun Annona muricata dilakukan

di Lab. Pasca Sarjana Universitas Udayana.

b) Pengambilansampel isolat bakteri Salmonella typhi dilakukan di Instalasi

Laboratorium Mikrobiologi Rumah Sakit Umum Pusat Sanglah.

c) Persiapan, perlakuan, dan uji zona hambat pada sampel di Laboratorium

Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Udayana, Jalan PB. Sudirman,

Denpasar.

4.2.2 Waktu penelitian

Penelitian ini dimulai dari perancangan tema, penyusunan kerangka,

pengumpulan, pengolahan dan analisis data, pelaksanaan eksperimen, serta

pembuatan laporan hasil penelitian. Penelitian ditargetkan dilaksanakan pada

Maret 2016 – Januari 2017.

4.2.3 Disiplin ilmu terkait

Penelitian ini merupakan penelitian multidisiplin yang menggabungkan

aspek farmakologi dan mikrobiologi.

4.3 Rancangan Penelitian

Jenis penelitian ini adalah penelitian True Experimental Posttest only

Control Group, sehingga dapat mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak

metanol daun Annona muricata dalam menghambat pertumbuhan Salmonella

typhi yang dinilai berdasarkan parameter diameter zona hambat.

28

4.4 Sampel Penelitian

1. Sampel bakteri yang digunakan dalam penelitian adalah isolat bakteri

Salmonella typhi yang diperoleh dari Instalasi Laboratorium Mikrobiologi Rumah

Sakit Umum Pusat Sanglah.

2. Sampel ekstrak daun Annona muricata yang digunakan, diperoleh dari tanaman

Annona muricatayang banyak terdapat di Kabupaten Klungkung, provinsi Bali.

4.5 Pengulangan Sampel

Sesuai dengan rancangan penelitian, maka sampel dialokasikan ke dalam 4

kelompok perlakuan (P1, P2, P3, P4), dan 2 kelompok kontrol (K1, K2). Untuk

mengetahui jumlah ulangan (replikasi) pada tiap kelompok, dipergunakan rumus

Federer: . Karena jumlah perlakuan (p) adalah 6, maka

jumlah pengulangan minimal yang dilakukan pada masing-masing jenis perlakuan

dan kontrol adalah sebanyak 4 kali yang kemudian akan dirata-ratakan.

4.6Kriteria Sampel

4.6.1 Kriteria inklusi

Koloni bakteri yang digunakan tumbuh secara merata pada lempeng agar.

4.6.2 Kriteria eksklusi

Koloni bakteri tidak tumbuh merata atau terkontaminasi pada lempeng agar.

29

4.7 Identifikasi Variabel

Adapun variabel yang akan dianalisis pada penelitian ini adalah:

a. Variabel Bebas : - Ekstrak daun sirsak (Annona muricata)

b. Variabel Tergantung : - Diameter zona hambat

c. Variabel Kendali : - Waktu inkubasi

- Suhu inkubasi

- Media kultur bakteri

- Konsentrasi ekstrak

4.8 Definisi Operasional Variabel

No Variabel Definisi Skala

1 Ekstrak daun

Annona

muricata

Ekstrak daun Annona muricata adalah

ekstrak zat aktif yang diperoleh dengan

melakukan ekstraksi dari daun tanaman

Annona muricata dengan menggunakan

pelarut metanol. Konsentrasi ekstrak

yang digunakan pada penelitian ini

adalah 50mg/mL, 100mg/mL,

200mg/mL, dan 400mg/mL.

Numerik

2 Diameter zona

hambat

Diameter zona hambat adalah diameter

area bening pada kultur bakteri yang

tidak menunjukkan adanya aktivitas

pertumbuhan bakteri akibat dari

pemberian zat antibakteri.

Pengukuranakandilakukandengan

Numerik

30

menggunakan jangka sorong dengan

satuan milimeter.

3 Waktu

inkubasi

Waktu yang digunakan dalam

menumbuhkan kultur bakteri dan

menguji aktivitas zat antibakteri yang

diberikan pada kultur bakteri Salmonella

typhi dalam inkubator. Waktu inkubasi

yang digunakan adalah 18-24 jam.

Numerik

4 Suhu inkubasi Suhu yang digunakan dan diatur pada

inkubator dalam menumbuhkan dan

menguji aktivitas zat antibakteri yang

diberikan pada kultur bakteri Salmonella

typhi. Suhu inkubasi yang digunakan

adalah 37o C.

Numerik

5

Media Kultur

Bakteri

Media kultur bakteri yang digunakan

dalam penelitian ini adalah media agar

Mueller-Hinton. AgarMueller-Hinton

(MH)ditimbang seberat 3,4 gram,

kemudian dilarutkan dengan 100 ml

akuades serta dimasukkan kedalam

autoclave dengan suhu 1210 C selama

15 menit. Selanjutnya, MH tersebut

ditaruh di water bath hingga suhu turun

menjadi ± 500 C. MH dituangkan

31

kedalam cawan petri serta diinkubasi

dengan suhu 370

C selama 24 jam untuk

mengetahui sterilitas media. Bila media

tampak jernih (steril)/ tidak ada koloni

bakteri maka media bisa digunakan

sebagai penanaman bakteri Salmonella

typhi.

4.9 Alat dan Bahan Penelitian

a. Alat-alat yang dibutuhkan: 1) Tabung reaksi dan rak;2) Ose; 3) Lampu

spiritus; 4) Inkubator; 5) Kapas lidi steril; 6) Pinset/penjepit; 6)Jangka

sorong; 7) Cawan petri; 8) Erlemeyer; 9) Kaca preparat; 10) Pipet; 11)

Autoclave ;12) Disk kosong

b. Bahan-bahan yang dibutuhkan: 1) Agar Mueller Hinton (MH); 2) Ekstrak

metanol daun sirsak 3) Larutan NaCl (0,9%); 4) Larutan 0,5 Mc Farland;

5) Linezolid 30g; 6)Bakteri Salmonella typhi 7) Metanol 8) Akuades 9)

Ciprofloxacin

4.10 Protokol Penelitian

4.10.1 Pembuatan simplisia daun Annona muricata

Buat bubuk sampel dengan cara: (1) Cuci bersih daun Annona muricata

yang berusia matang (tidak muda, tidak tua) (2) Potong kecil-kecil, (3) Keringkan

potongan daun dengan diangin-anginkan dalam ruangan (tidak terpapar sinar

32

matahari, (4) Hancurkan menggunakan blender hingga menjadi bubuk, lalu ayak,

(5) Simpan serbuk dalam toples yang tertutup rapat dan kering.

4.10.2 Pembuatan ekstrak

1. Daun sirsak yang sudah dibersihkan dengan air kemudian dipotong-

potong kecil menggunakan pisau, kemudian dikering-anginkan tanpa

sinar matahari atau dengan menggunakan oven dengan suhu 400C.

Setelah kering, daun sirsak dihaluskan dengan blender dan diayak

untuk memisahkan bagian yang masih kasar dengan yang sudah

halus.

2. Setelah itu, 500 gram serbuk simplisia daun sirsak direndam dengan

larutan metanol sebanyak 2 liter di dalam sebuah toples kaca, lalu

ditutup.Biarkan selama 2 hari sambil sesekali diaduk.

3. Setelah 2 hari, sampel yang direndam tersebut disaring dengan kertas

saring sehingga menghasilkan filtrat 1 dan ampas 1. Setelah itu filtrat

(lapisan atas yang berupa campuran metanol dengan zat aktif)

diambil dan residu dimaserasi kembali selama semalam. Selanjutnya

filtrat diambil lagi dan residu dimaserasi kembali sampai empat kali

pengulangan.

4. Setelah semua filtrat ekstrak daun sirsak diperoleh, lalu difiltrasi

menggunakan kertas Whatmann 0,1 dan evaporasi menggunakan

rotary evaporator pada suhu 400 C sehinga diperoleh ekstrak kental.

5. Ekstrak ditimbang dan disimpan dalam wadah gelas atau botol yang

tertutup sebelum digunakan untuk pengujian dengan berat 0.05 gr,

33

0.1 gr, 0.2 gr, dan 0.4 gr. Tidak lupa untuk memberikan label pada

botol.

6.Lalu bila akan digunakan, ekstrak metanol daun sirsak yang sudah

ditimbang diencerkan dengan menambahkan larutan metanol lalu

aduk hingga ekstrak larut dalam botol.

4.10.3 Pembuatan media Mueller-Hinton

Persiapan diawali dengan menimbang Mueller-Hinton(MH) seberat 3,4

gram yang kemudian dilarutkan dengan 100 ml akuades serta dimasukkan

kedalam autoclave dengan suhu 1210 C selama 15 menit. Selanjutnya, Mueller-

Hinton tersebut ditaruh di water bath hingga suhu turun menjadi ± 500 C.

Mueller-Hinton dituangkan kedalam cawan petri serta diinkubasi dengan suhu

370C selama 24 jam untuk mengetahui sterilitas media. Bila media tampak jernih

(steril) atau tidak ada koloni bakteri maka media bisa digunakan sebagai

penanaman bakteri Salmonella typhi.

4.10.4 Pembuatan standar kekeruhan larutan (Larutan Mc. Farland)

Larutan H2SO4 0,36 N sebanyak 99,5 ml dicampurkan dengan larutan

BaCl2.2H2O 1,175% sebanyak 0,5 ml dalam Erlenmeyer, lalu dikocok sampai

terbentuk larutan yang keruh.

4.10.5 Pembuatan suspensi bakteri

Kekeruhan yang setara dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland

dapat diperoleh dengan mengambil bakteri uji yang telah diinokulasi

menggunakan kawat ose steril lalu disuspensikan kedalam tabung berisi 2 ml

larutan NaCl 0,9%.

34

4.10.6 Inokulasi bakteri pada media agar

Bakteri uji diambil dengan lidi kapas steril, lalu ditanamkan pada media

agar miring dengan digores. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 370C selama 24

jam.

4.10.7 Pembuatan larutan kontrol negative dan kontrol positif

Kontrol negatif yang digunakan dalam pengujian adalah larutan metanol.

Kontrol positif yang digunakan dalam pengujian adalah ciprofloxacin.

4.10.8 Penyiapan larutan uji

Ekstrak yang telah ditimbang dan disimpan dalam wadah gelas atau botol

yang tertutup dengan berat 0.05 gr, 0.1 gr, 0.2 gr, dan 0.4 gr dan sudah diberi label

pada botol, diencerkan atau dilarutkan dengan menambahkan larutan metanol

1000 cc pada masing-masing botol, kemudian aduk hingga ekstrak larut dalam

botol.

4.10.9 Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar

Pengujian dilakukan dengan metode difusi agar (Kirby-Bauer). Celupkan

swab kapas yang telah steril ke dalam suspensi bakteri, peras swab kapas dengan

memberikan menekan ke dinding tabung suspensi bakteri untuk menghindari

cairan yang banyak berpindah ke lempeng uji agar Mueller-Hinton (MH).

Selanjutnya usapkan swab kapas ke lempeng agar MH secara merata ke seluruh

permukaan agar dan biarkan biakan agar mengering selama 3-5 menit pada suhu

ruangan (25oC). Selanjutnya cakram diletakkan di atas media agar dengan

menggunakan pinset. Setiap piringan yang berukuran diameter 10 cm diletakkan 6

35

cakram yang masing-masing mengandung: 1) metanol; 2) ciprofloxacin; 3)

ekstrak daun sirsak konsentrasi50 mg/mL(P1) ; 4) ekstrak daun sirsak konsentrasi

100 mg/mL ; 5) ekstrak daun sirsak konsentrasi 200 mg/mL ; 6) ekstrak daun

sirsak konsentrasi 400mg/mL.

4.10.10 Pengamatan data pengukuran

Pengamatan dilaksanakan setelah 1 x 24 jam masa inkubasi. Setelah

inkubasi, diamati aktivitas antibakteri dengan melihat zona bening di sekitar paper

disc yang kemudian diukur dengan menggunakan jangka sorong.

4.11 Analisis Data

Data pada penelitian ini akan dianalisis dan disajikan dalam bentuk tabel

dan narasi.

4.12 Jadwal Penelitian

No Jenis Kegiatan Bulan I Bulan II Bulan III Bulan IV

1 Persiapan peralatan

2 Persiapan daun Annona

muricata

3 Persiapan specimen Salmonella

typhi

4 Pembuatan ekstrak daun

Annona muricata

5 Pengujian dan pengukuran hasil

eksperimen

6 Analisis hasil eksperimen

36

7 Penyusunan draft dan

penyelesaianlaporan

37

BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1Hasil Ekstraksi Daun Sirsak

Daun sirsak dari tanaman spesies Annona muricata yang digunakan pada

penelitian didapatkan dari Desa Takmung, Kecamatan Banjarangkan, Kabupaten

Klungkung, Bali. Daun sirsak yang digunakan adalah daun sirsak dewasa dan

tidak terserang hama. Daun yang sudah dicuci bersih kemudian dipotong menjadi

bagian yang lebih kecil kemudian dikeringkan tanpa menggunakan sinar matahari

pada suhu kamar. Daun sirsak yang sudah kering kemudian dihaluskan dengan

menggunakan blender serta diayak dengan menggunakan saringan sehingga

diperoleh serbuk daun sirsak dengan berat 330 gram. Serbuk daun dimaserasi

dengan metanol dan filtrat hasil maserasi kemudian dievaporasi sehingga

diperoleh ekstrak kental yang berwarna hijau kehitaman.

5.2 Hasil Uji Fitokimia

Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui jenis senyawa metabolit

sekunder yang terdapat didalam ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata).

Penulis melakukan uji terhadap beberapa senyawa metabolit sekunder dasar

seperti alkaloid, saponin, flavonoid, tannin, steroid, triterpenoid, fenol, dan

glikosida di Laboratorium Fitokimia Farmasi FK UNUD.

Prosedur dan hasil pengujian adalah sebagai berikut :

a. Penyiapan Larutan Uji

Sebanyak 20 mg ekstrak daun sirsak dilarutkan kedalam 20 metanol 96%.

38

b. Uji untuk flavonoid

Sebanyak 1 ml larutan uji diuapkan, dibasahkan sisanyadengan aseton ,

ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat dan serbuk halus asam oksalat ,

dipanaskan hati–hati di atas penangas air dan dihindari pemanasan yang

berlebihan. Kemudian dicampur sisa yang diperoleh dengan 10 mleter dan

diamati dengan sinar ultraviolet 366 nm. Larutan berflurorensensi

kuningmenunjukkan adanya flavonoid.

Gambar 5.1 Larutan uji yang dibuat dari

20 mg ekstrak metanol daun sirsak kental

Gambar 5.2Hasil uji fitokimia positif flavonoid

karena berfluroresensi kuning dibagian pinggir.

39

c. Uji untuk saponin

Sebanyak 2 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10

mlaquadest dan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuk buih

yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm, dan

pada penambahan 1 tetes asam klorida 2N, buih tidak hilang menyatakan bahwa

ekstrak mengandung saponin.

Gambar 5.3 Hasil uji fitokimia positif saponin, terlihat buih pada permukaan

larutan yang ditunjukan oleh anak panah

d. Uji untuk fenol

Sebanyak 2 ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan

larutan FeCl3 2%. Terbentuk warna hitam pekat atau biru keunguan menandakan

adanya senyawa fenol.

40

Gambar 5.4 Hasil uji fitokimia fenol dinyatakan positif karena terbentuk

warna kehitaman setelah diberi larutan FeCl3 2%

e. Uji untuk alkaloid

Sebanyak 2 ml larutan ekstrak uji diuapkan di atas cawan porselin hingga didapat

residu. Residu kemudian dilarutkan dengan 5 ml HCl 2N. Larutan yang didapat

kemudian dibagi kedalam 4 tabung reaksi.

Tabel 5.1 Hasil Uji Fitokimia Alkaloid

Tabung 1 Blanko ( asam encer) Larutan pembanding

Tabung 2 Pereaksi Mayer Terbentuk endapan putih

Tabung 3 Pereaksi Bouchardat Terbentuk endapan hitam

Tabung 4 Pereaksi Wagner Terbentuk endapan coklat

41

f. Uji untuk steroid dan triterpenoid (Reaksi Liebermann-Burchard)

Sebanyak 2 mL larutan uji diuapkan dalam cawan penguap. Residu dilarutkan

dengan 0,5 ml kloroform, kemudian ditambahkan 0,5 ml asam asetat anhidrat.

Gambar 5.8 Larutan Blanko Gambar 5.7 Hasil uji mayernegatif,

tidak tampak endapan putih pada

larutan

Gambar 5.5 Hasil uji

bouchardatpositif, karena terbentuk

endapan hitam

Gambar 5.6 Hasil uji wagner positif,

karena terbentuk endapan cokelat

dipermukaan larutan

42

Selanjutnya ditambahkan dengan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung.

Terbentuk cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan larutan menunjukkan

adanya triterpenoid, sedangkan bila muncul cincin biru kehijauan menunjukkan

adanya steroid.

g. Uji untuk tannin

Sebanyak 2 ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan

larutan Pb asetat 10% Terbentuk endapan putih menandakan adanya senyawa

tanin.

Gambar 5.11Terdapat endapan putih dari hasil uji

fitokimia, yang berarti ekstrak positif mengandung

tannin

Gambar 5.9Hasil Uji Fitokimia

Steroidpositif, pada pengamatan terdapat

cincin biru kehijauan

Gambar 5.10Hasil uji fitokimia

triterpenoidmenunjukan negatif

43

h. Uji untuk glikosida

Sebanyak 2 ml larutan ditambahkan 5 ml asam asetat anhidrat P. Kemudian

diambahkan10 tetes asam sulfat P. Terjadi warna hijau kebiruan, menunjukkan

adanya glikosida.

Tabel 5.2 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Sirsak (Annona

muricata)

NO

IDENTIFIKASI

GOLONGAN

SENYAWA

METODE

PENGUJIAN PENGAMATAN* HASIL

1 Alkaloid

Meyer Tidak terbentuk

endapan putih

_

Bouchardat Terbentuk endapan

hitam

+

Wagner Terbentuk endapan

coklat

+

Gambar 5.12Terdapat perubahan warna hijau

kebiruan pada hasil uji fitokimia, yang berarti

ekstrak positif mengandung glikosida

44

2 Saponin Foam Terbentuk busa yang

stabil

+

3 Flavonoid Pew Terbentuk warna

kuning intensif

+

4 Steroid Lieberman-

Burchard

Terbentuk cincin

warna biru kehijauan

+

5 Triterpenoid Lieberman-

Burchard

Tidak Terbentuk

cincin kecoklatan _

6 Fenol FeCl310% Terbentuk warna biru

kehitaman

+

7 Glikosida Lieberman-

Burchard

Terbentuk warna

Hijau kebiruan

+

8 Tanin Pbasetat 10% Terbentuk endapan

putih

+

5.3 Hasil Uji Antibakteri

Pengukuran diameter zona hambat dilakukan setelah lempeng agar dengan

bakteri Salmonella typhi diinkubasi didalam inkubator selama 18-24 jam dengan

suhu 370C. Diameter zona hambat diukur menggunakan jangka sorong dengan

ketelitian 0,05 mm pada zona bening di sekitar cawan petri.

45

Gambar 5.13 Hasil Uji Ekstrak Metanol Daun Sirsak (Annona

muricata)terhadap Pertumbuhan Bakteri Salmonella typhi Secara In Vitro

Pada penelitian ini digunakan 4 buah cawan petri dengan inkubasi koloni

bakteri Salmonella typhi sesuai 108 CFU/ml dibuat kekeruhan yang setara dengan

0,5 MacFarland. Pada masing-masing cawan petri yang berisi bakteri Salmonella

typhi, diletakkan 6 buah disk yang terdiri dari1) metanol(K1); 2)

ciprofloxacin(K2); 3) ekstrak daun sirsak konsentrasi 50 mg/mL(P1) ; 4) ekstrak

daun sirsak konsentrasi 100 mg/mL(P2); 5) ekstrak daun sirsak konsentrasi 200

mg/mL(P3); 6) ekstrak daun sirsak konsentrasi 400mg/mL(P4).

Dari zona hambat yang ditunjukkan pada gambar di atas, pengukuran

dilakukan dari beberapa sisi lingkaran kemudian dirata-ratakan sehingga

46

didapatkan hasil rerata K1 = 0,00 mm, K2 = 32,25 P1 = 0,00 mm, P2 = 0,00 mm,

P3 = 0,00 mm, dan P4 = 0,00 mm. Hasil dapat dilihat pada tabel 5.3.

Tabel 5.3 Data Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak

MetanolDaun Sirsak (Annona muricata) terhadap Pertumbuhan Bakteri

Salmonella typhi Secara In Vitro

NO K1

(mm)

K2

(mm)

P1

(mm)

P2

(mm)

P3

(mm)

P4

(mm)

1 0,00 35,00 0,00 0,00 0,00 0,00

2 0,00 31,00 0,00 0,00 0,00 0,00

3 0,00 32,00 0,00 0,00 0,00 0,00

4 0,00 31,00 0,00 0,00 0,00 0,00

5.4 Pembahasan

Hasil pengukuran diameter zona hambat dengan metode disk diffusion

menunjukan bahwa ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) tidak

memberikan efek antibakteri pada bakteri gram negatif Salmonella typhi secara in

vitro. Berbeda dengan hasil yang telah diperoleh oleh penelitian terdahulu,

pengujian ekstrak metanol daun sirsak yang dilakukan pada kelompok bakteri

gram negatif menunjukan adanya aktifitas anti bakteri seperti yang dilakukan oleh

Ginda Haro, et al (2014), yang menguji pada bakteri Escherichia coli, dimana

pada konsentrasi minimalnya (5mg/mL) mampu menghambat pertumbuhan

bakteri dengan zona inhibisi 8.0 mm (Ginda Haro,2014). Dian Riani dkk(2016),

yang juga menguji ekstrak metanol daun sirsak pada bakteri gram

47

negatifEscherichia coli memperoleh hasil bahwa ekstrak yang digunakan mampu

menghambat pertumbuhan bakteri secara in vitro dengan diameter zona hambat

3.0 mm (Dian R, 2016).

Sebagian besar penelitian pendahuluan yang menguji aktivitas antibakteri

pada ekstrak daun sirsak, menggunakan bakteri gram negatif yang berasal dari

spesies Escherichia coli, maka dari itu dapat dipahami apabila hasil yang peneliti

dapatkan berbeda dengan apa yang didapat oleh penelitian sebelumnya. Perbedaan

ini dapat terjadi mengingat spesies bakteri yang digunakan berasal dari spesies

yang berbeda. Spesies bakteri yang berbeda akan menimbulkan mekanisme

pertahanan yang berbeda pula terhadap antibakteri, baik dari komponen dinding

sel bakteri maupun materi genetik yang dibawa.

Perbedaan hasil uji penelitian ini dapat pula terjadi karena adanya

kemungkinan resistensi bakteri yang digunakan sebagai sampel uji. Resistensi

bakteri secara genetik terhadap zat tertentu perlu diperhitungkan mengingat

sampel berasal dari isolat pasien Lab. Mikrobiologi RSUP Sanglah. Mekanisme

strain bakteri yang mengalami resistensi terhadap antibiotik bisa diakibatkan dari

pemakaian antibiotik dalam jangka waktu yang relatif lama dan terus-menerus,

yang memungkinkan bakteri membentuk mekanisme pertahanan diri.Selain itu,

faktor kepatuhan dari diri pasien, juga dapat memengaruhi terjadinya resistensi

antibiotik jika pasien tidak memiliki kepatuhan dalam mengkonsumsi antibiotik

dengan benar (Silvan J,2013).

Hasil uji fitokimia yang dilakukan di Lab Farmasi Universitas Udayana

menyatakanbahwa ekstrak metanol daun sirsak (Annona muricata) mengandung

metabolit sekunder yang bersifat anti bakteri seperti flavonoid, steroid, alkaloid,

48

saponin, dan tannin.Flavonoid dilaporkan memiliki mekanisme sebagai

antibakteri. Adapun mekanisme reaksi antibakteri yang ditimbulkan oleh

flavonoid seperti mampu menginhibisi sintesis asam nukleat bakteri, menginhibisi

fungsi dari membran sitoplasmik, serta mampu menginhibisi metabolisme energi

pada bakteri(Tim Cushnie, 2005). Steroid tersebar di alam sebagai fraksi lipid dari

tanaman maupun hewan. Steroid dibentuk oleh bahan alam yang disebut sterol.

Sterol merupakan senyawa yang terdapat pada lapisan malam (lilin) daun dan

buah yang berfungsi sebagai pelindung diri dari serangan serangga dan serangan

mikroba. Saponin berfungsi sebagai antibakteri dengan menyebabkan kebocoran

protein dan enzim dari dalam sel. Selain itu saponin dapat menjadi antibakteri

karena zat aktif permukaannya mirip detergen. Kemiripan sifat saponin dengan

detergenakanmenyebabkan penurunan tegangan permukaan dinding sel bakteri,

merusak permeabilitas membran dan akan sangat mengganggu kelangsungan

hidup bakteri. Alkaloid sebagai antibakteri bekerja dengan caramengganggu

komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel

tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel. Selain itu, komponen

alkaloid diketahui dapat berfungsi sebagai interkelator DNA dan menghambat

enzim topoisomerase sel bakteri. Taninsendiri merupakan senyawa yang bersifat

lipofilik, sehingga mudah terikat pada dinding sel dan mengakibatkan kerusakan

dinding selbakteri(Dian R, 2016).

Hasil uji fitokimia yang dilakukan peneliti dengan uji fitokimia pada

penelitian sebelumnya memang memiliki kesamaan, yang menyatakan bahwa

ekstrak metanol daun sirsak memiliki potensi sebagai antibakteri apabila dilihat

dari metabolit sekunder yang dikandungnya. Namun hasil uji in vitro yang peneliti

49

lakukan pada bakteri jenis gram negatif dalam hal ini adalah bakteri Salmonella

typhi memberikan hasil bahwa potensi antibiotik yang dimiliki ekstrak metanol

daun sirsak tidak memberikan efek antibiotik pada bakteri tersebut. Perbedaan

hasil uji ini akan sangat tergantung pula pada efektifitas ekstrak yang digunakan.

Efektifitas ekstrak yang digunakan pada masing-masing penelitian sangat

dipengaruhi olehadanya variasi biologis dari tanaman yang digunakan. Tempat

asal dari tanaman sirsak yang daunnya digunakan, diketahui dapat memengaruhi

jumlah kandungan bahan aktif yang ada. Faktor-faktor lingkungan seperti suhu

udara, kelembapan relatif, radiasi matahari, angin, suhu tanaman, jenis unsur hara,

ketersediaan air, ketercukupan cahaya dalam proses fotosintesis sangat

memengaruhi fungsi fisiologis, bentuk anatomis, dan siklus hidup tumbuhan.

Faktor lingkungan inilah yang mungkin memengaruhi kadar senyawa metabolit

sekunder yang dihasilkan oleh daun (Melisa R,2015).

Perbedaan hasil uji antibakteri antara peneliti satu dengan lainnya dapat

pula dipengaruhi oleh ekstrak bahan alam yang digunakan. Tidak adanya

standarisasi pembuatan ekstrak bahan alam antara laboratorium satu dengan yang

lain akan menimbulkan hasil yang berbeda pula. Selain prosedur standar

pembuatan ekstrak, faktor lain yang dapat memengaruhi mutu ekstrak yang

digunakan adalah faktor kimia seperti jenis dan jumlah senyawa kimia serta

metode ekstraksi dan pelarut yang digunakan (Melisa R,2015).

50

BAB VI

SIMPULAN DAN SARAN

6.1 Simpulan

Adapun simpulan berdasarkan hasil dan pembahasan yang telah

dipaparkan adalah ekstrak metanol daun sirsak(Annona muricata)tidakdapat

menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhisecara in vitro. Hal ini

disebabkan oleh perbedaan jenis bakteri gram negatif yang digunakan dengan

penelitian terdahulu, adanya mekanisme pertahanan bakteri Salmonella typhi

baik dari dinding dan materi genetik yang dibawa yang belum dapat

dihancurkan oleh kandungan metabolit sekunder dari ekstrak metanol daun

sirsak, adanya kemungkinan resistensi yang dimiliki oleh strain bakteri yang

digunakan, perbedaan kandungan metabolit skunder tanaman sirsak yang

digunakan yang sangat tergantung oleh faktor lingkungan tempat tumbuhan

berasal, serta perbedaan standarisasi laboratorium dalam proses pembuatan

ekstrak yang digunakan pada penelitian.

6.2 Saran

Adapun beberapa saran yang dapat diberikan melalui penelitian ini antara lain:

a. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk uji antibakteri ekstrak metanol

daun sirsak dengan konsentrasi larutan yang berbeda untuk mengetahui

konsentrasi yang dapat memberikan efek secara in vitro pada bakteri

Salmonella typhi.

51

b. Masih perlu dilakukan penelitian lanjutan menggunakan pelarut selain

metanol seperti etanol, n-heksana, etil asetat dan kloroform terhadap

bakteri Salmonella typhi dan bakteri gram negatif lainnya.

c. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk uji anti bakteri menggunakan

bagian lain dari tanaman sirsak seperti kulit buah, kulit batang, dan biji

sirsak untuk menemukan cadangan sumber anti bakteri di masa depan.

52

DAFTAR PUSTAKA

CDC. Diaksespada 15 Agustus 2014. Diunduh dari :

http://www.cdc.gov/nczved/divisions/dfbmd/diseases/typhoid_fever/technical.htm

l#incidence

DaunSirsak. Diunduh dari :

http://tehherbalbali.blogspot.co.id/2013/10/daun-sirsak.htmldiaksespada 1Februari

2016

Dian R, Kartika D, dkk. 2016.

IdentifikasiSenyawaMetabolitSekundersertaUjiAktivitasEkstrakDaunSirsaksebag

aiAntibakteri. Molekul. Vol 11 N0.1 ; 101-111

Endrini S, et al. 2014. Annonamuricata leaves have strongest cytotoxic activity

against breast cancer cells. UniversaMedicina. Univ Med;33:179-84

Haro G, et al. 2014. Study Of The Antibacterial Activities Of Soursop

(Annonamuricata L.) Leaves. International Journal of PharmTechResearch

CODEN(USA). Vol.6, No.2

Kavita N., ShivannarT.C., et al. Antimicrobial Susceptibility Of Salmonella Typhi

In India. Journal Infect DevCtries. 2010. 4(20): 070-073.

Mandal B.K., et al. 2008. PenyakitInfeksiEdisiKeenam. Erlangga. Hal: 144-145

Melisa R, dkk. 2015. UjiDayaHambatEkstrakDaunSirsak (Annonamuricata)

terhadapPertumbuhanStaphylococcus aureussecaraIn Vitro. Pharmacon

:JurnalIlmiahFarmasi. Vol 4 No 4

Onyechi, et al. 2012. Nutrient, Phytochemical Composition and Sensory

Evaluation OfSoursop (Annonamuricata) Pulp and Drink in South Eastern

53

Nigeria. International Journal of Basic & Applied Sciences IJBAS-IJENS

Vol:12 No:06

PanduanLengkapTeknikdan Cara BudidayaSirsakTanamanBerkhasiat. 2015

http://www.ruangtani.com/10-panduan-lengkap-teknik-dan-cara-budidaya-

sirsak-tanaman-berkhasiat/

Solomon-W et al. 2014. Phytochemical Screening and Antimicrobial activities of

Annonamuricata (L) leaf extract. American Journal of Biological,

Chemical and Pharmaceutical Sciences. Vol.2, No 1

Sarman Singh. 2001. Symposium: Typhoid FeverPathogenesis and Laboratory

Diagnosis. Journal Indian Academy of Clinical Medicine. Vol. 2, No. 1

and 2 http://medind.nic.in/jac/t01/i1/jact01i1p17.pdf

Soheil ZM, et al. 2015. Review Annonamuricata (Annonaceae): A Review of Its

Traditional Uses, Isolated Acetogenins and Biological Activities.

International Journal of Molecular Sciences ISSN 1422-0067

Silvan J. 2013. PolaSensitivitasIn VitroSalmonella

typhiterhadapAntibiotikKlorampenikol, AmoksisilindanKotrimoksazol di

BagianAnak RSUD Ulin Banjarmasin periode Mei-September 2012.

BerkalaKedokteran. Vol 9 No 1 : 25-34

SirsakdanManfaatnyaBagiKesehatan. 2013.

http://m.kompasiana.com/ellygun/sirsak-manfaatnya-bagi-

kesehatan_552854846ea834f7588b458bdiaksespadaSenin, 25 Januari

2016.

Syamsuhidayat SS, Hutapea JR. 1991. InventarisTanamanObat Indonesia.

DepartemenKesehatanRI :BadanPenelitiandanPengembanganKesehatan.

Hal.56

54

TaksonomiSalmonella typhi. Diaksespada 15 Agustus

2014.http://microbes.ucsc.edu/cgibin/hgGateway?hgsid=439197&clade=e

ukaryotaprotista&org=Salmonella+typhi+Ty2&db=0

Tim Cushnie. 2005. Review :Antimicrobial Activity of Flavonoids. International

Journal of Antimicrobial Agents 26. 343-356

WHO. Background Document:TheDiagnosis,Treatment And Prevention Of

Typhoid Fever. Communicable Disease Surveillance and

ResponseVaccines and Biologicals. 2003. Hal 1-48

diaksesmelaluihttp://whqlibdoc.who.int/hq/2003/WHO_V&B_03.07.pdf

Widoyono.2011. PenyakitTropisEdisiKedua. Erlangga. Hal:40-45