pcr oder serologie? - ennetseeklinik.ch · ab wann ist serologie möglich? • der nachweis von...
TRANSCRIPT
![Page 1: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/1.jpg)
Labordiagnostik Update Leishmaniose
Dr. Daniel Schaarschmidt-Kiener
„Chamer Höck“
15. Oktober 2015
![Page 2: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/2.jpg)
Simpler Praxistest
KNOTT-Test
![Page 3: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/3.jpg)
KNOTT-Test
Mikrofilarien-Diagnostik
![Page 4: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/4.jpg)
Modifizierter KNOTT-Test
• 1ml EDTA-Blut
• 4ml 2% Formalin
• leicht mischten
• 5min inkubieren
• dann sanft abzentrifugieren
• Überstand abschütten
• mit Methylenbalu färben
Leishmaniosepatienten haben oft ein sehr
prominentes Präzipitat
Test sehr unspezifisch und nicht sehr sensitiv
![Page 5: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/5.jpg)
Wann Labordiagnostik?
• Klinischer Verdachtsfall
• Import- oder Reisehund
• Blutspender
![Page 6: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/6.jpg)
Labordiagnostik
• Parasitologie
Kultur, Zytologie
Histologie, Immunhisto
• Serologie
Schnelltest, IFAT, ELISA
• Molekulare Diagnostik
PCR
![Page 7: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/8.jpg)
Typische Laborbefunde
• Hyperproteinämie
überschießende Bildung von Immunglobulinen als
Folge einer B-Zell-Stimulation
• Hypalbuminämie
Proteinverlust infolge einer Niereninsuffizienz oder
die erniedrigte Lebersyntheseleistung
• erniedrigten Albumin/Globulin-Quotienten
![Page 9: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/9.jpg)
Elektrophorese
• deutliche polyklonale Hypergammaglobulinämie
![Page 10: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/10.jpg)
Typische Laborbefunde
• regenerative Anämie
• Thrombozytopenie
• Leukopenie
• Nieren- und Leberenzyme erhöht
• Proteinurie
![Page 11: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/11.jpg)
Kultur
![Page 12: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/12.jpg)
Kultur
• extrem aufwendig
• dauert lange
• wichtig für Sub-Typisierung
• Nur in wenigen Speziallabors möglich
![Page 13: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/13.jpg)
Zytologie
![Page 14: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/15.jpg)
Zytologie
• KM-Punktat
• LK-Punktat
• Hauläsionen: Abklatschpräparat
• Konjunktivalabstrich
• Eventuell Histologie mit Immunhistologie
Hier detektiert man jeweils die amastigoten Stadien
![Page 16: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/16.jpg)
Zytologie
• Vorteile
Direktnachweis
nicht invasiv
Ausschluss anderer DD
direkt in betroffenem Gewebe
• Nachteile
nicht sehr sensitiv
oft andere Methoden nötig
nur von Experten durchführbar
keine Info über Immunstatus des Patienten
![Page 17: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/17.jpg)
Serologie
![Page 18: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/18.jpg)
Praxisschnelltest
• Vorteile
schnell
in der Praxis
detektiert Tiere mit hohem Titer
• Nachteile
nicht sehr sensitiv
nur ja/nein Ergebnis
Gefahr von falsch negativen
Positive Tiere müssen bestätigt werden
![Page 19: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/19.jpg)
IFAT oder ELISA
![Page 20: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/20.jpg)
IFAT
Antikörpertiter
• Vorteile
sehr spezifisch
man sieht die Zellen
• Nachteile
Interpretation braucht Erfahrung/Fachpersonal
aufwendiger (Kosten und Zeit)
Handmethode
![Page 21: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/21.jpg)
ELISA
Zahlenwert (LM-Einheiten)
• Vorteile
günstig
automatisierbar
neutrale Bewertung
• Nachteile
anfällig für Kreuzreaktionen
![Page 22: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/22.jpg)
Ab wann ist Serologie möglich?
• Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt
oft erst Wochen bzw. Monate p.i.
• asymptomatisch infizierte Tiere haben häufig keine
spezifischen oder grenzwertige bis schwache
Antikörpertiter (zelluläre Immunität)
• Bei klinisch erkrankten Tieren sind in den meisten
Fällen Antikörper nachweisbar
![Page 23: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/23.jpg)
Impftiter
• Nach der Impfung mit CaniLeish® sind
vorübergehend AK nachweisbar, die bei einigen
Hunden auch über Monate anhalten können
• Impf- und Infektions-AK sind serologisch derzeit
nicht zu unterscheiden
![Page 24: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/24.jpg)
PCR
![Page 25: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/25.jpg)
Serologie und PCR im Vergleich
![Page 26: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/26.jpg)
Serologie
• indirekte Nachweismethode
• „Antikörpertiter“/ELISA-Wert : kein absoluter Wert
- Untersuchungsmethode
- Durchführung und interne Bewertung
→ Ergebnis und Interpretation Labor-abhängig
• Serokonversion oft erst sehr verzögert
• Kreuzreaktivität
• Impfung
![Page 27: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/27.jpg)
PCR
• direkte Nachweismethode: Erregergenomnachweis
• hohe Spezifität
• hohe Sensitivität
• unabhängig von der Immunantwort
• schnell
• geeignet als Therapiekontrolle
![Page 28: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/28.jpg)
PCR - Grenzen
• falsch positiv (Kontaminationsgefahr)
• falsch negativ (Hemmstoffe,DNA-Menge,Material)
• Speziallabors notwendig
• geeignetes Probenmaterial
• Nachweis von kleinsten Erregermengen bzw. auch
abgestorbene Erreger
• Preis
![Page 29: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/29.jpg)
Light Cycler System
![Page 30: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/30.jpg)
Geschlossenes System
![Page 31: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/31.jpg)
Auswertung - früher
Marker - +
DNA
Agarose-
Gelelektrophorese
![Page 32: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/32.jpg)
Real Time PCR
![Page 33: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/33.jpg)
Auswertung - heute
Schmelzkurven-
Analyse + DNA
- DNA
+ positiv
- negativ
![Page 34: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/34.jpg)
PCR - Grenzen
• falsch positiv (Kontaminationsgefahr)
• falsch negativ (Hemmstoffe, DNA-Menge)
• Speziallabors notwendig
• geeignetes Probenmaterial
• Nachweis von kleinsten Erregermengen bzw.
auch abgestorbene Erreger
• Preis
![Page 35: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/35.jpg)
Probenmaterial PCR
• KM-Punktat
• LK-Punktat
• Milz-Punktat
• Hauläsionen: Abklatschpräparat
• Konjunktivalabstrich
EDTA-Blut und Urin machen sehr wenig Sinn!
![Page 36: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/36.jpg)
• Jahr 2005 in Italien gegründete Vereinigung von
Experten
• Durch standardisierte Kriterien sollen den
praktizierenden Tierärzten die Diagnose und die
Behandlung nach neuesten wissenschaftlichen
Empfehlungen erleichtert werden
www.leishvet.info
![Page 37: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/37.jpg)
Wann sollte man therapieren?
![Page 38: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/38.jpg)
• 2006 gegründete Vereinigung europäischer
Veterinärparasitologen
• Ziel: fundierte Informationen zur Verfügung zu stellen,
um Hunde, Katzen und Menschen vor einem Befall
mit Parasiten und dessen Folgen zu schützen
www.esccap.de
![Page 39: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/39.jpg)
Therapiekontrolle
![Page 40: PCR oder Serologie? - ennetseeklinik.ch · Ab wann ist Serologie möglich? • Der Nachweis von Leishmanien-Antikörpern gelingt oft erst Wochen bzw. Monate p.i. • asymptomatisch](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022052408/5cc13ee188c993ed078bc8fe/html5/thumbnails/40.jpg)
Leishmaniose bei der Katze
• selten
• oft als Co-Infektion
• Häufig serologisch
positiv bei Katzen aus
Endemiegebieten