pacifigorgianes and tamariscene as constituents of frullania tamarisci and valeriana officinalis

7
Paci®gorgianes and tamariscene as constituents of Frullania tamarisci and Valeriana ocinalis Claudia Paul a , Wilfried A. KoÈnig a, *, Hermann Muhle b a Institut fu Èr Organische Chemie, Universita Èt Hamburg, Martin-Luther-King-Platz 6, D-20146 Hamburg, Germany b Abteilung Spezielle Botanik, Universita Èt Ulm, D-89091 Ulm, Germany Received 13 November 2000; received in revised form 2 January 2001 Abstract The sesquiterpenoid constituents of the essential oils from the liverworts Frullania tamarisci, Frullania fragilifolia and of the angiosperm Valeriana ocinalis were investigated. Tamariscene, a compound with a new sesquiterpene skeleton, valerena-4,7(11)- diene and ®ve new paci®gorgiadienes, namely paci®gorgia-1,10-diene, paci®gorgia-1(6),10-diene, paci®gorgia-1(9),10-diene, paci®- gorgia-2,10-diene, and paci®gorgia-2(10),11-diene were isolated and identi®ed. Structure elucidation was carried out by NMR spectroscopy and chemical correlations to establish absolute con®gurations. Compounds present in both the essential oils of the Frullania species and Valeriana ocinalis were enantiomeric to each other. A plausible biogenetic relationship between the paci®- gorgiane, valerenane and tamariscane skeletons is postulated. Paci®gorgia-6,11-diene, not yet detected in nature, was generated by dehydration and rearrangement of natural ()-tamariscol. # 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Frullania tamarisci; F. fragilifolia; Valeriana ocinalis; Hepaticae; Essential oil; Structure elucidation; Paci®gorgiane; Tamariscane; Valerenane; Sesquiterpene 1. Introduction The leafy liverworts Frullania tamarisci and F. fragilifo- lia (Tayl.) of the order Jungermanniales and the medicinal plant Valeriana ocinalis L. were investigated and showed a striking chemical relationship concerning their volatile constituents. Essential oil samples were obtained by hydrodistillation and analysed by gas chromatography± mass spectrometry (GC±MS). Individual components, including a number of new sesquiterpene hydrocarbons, were isolated by liquid chromatography and preparative GC and investigated by NMR ( 1 H, 13 C, 1 1 H±COSY, HMQC, HMBC, NOESY). The absolute con®guration of the new compounds was derived by dehydration of the related natural alcohols, polarimetric measurements, total hydrogenation and enantioselective gas chromato- graphy using cyclodextrin as stationary phases. 2. Results and discussion The following sesquiterpenoids in the order of their elu- tion from a capillary column with polydimethylsiloxane were identi®ed as constituents of the essential oil of F. fra- gilifolia:()-tamariscene (1), a-copaene, ()-paci®gorgia- 1(9),10-diene (2), b-elemene, ()-paci®gorgia-1,10-diene (3), ()-paci®gorgia-1(6),10-diene (4), ()-paci®gorgia- 2,10-diene (5), 11-bourbonene (Warmers et al., 1998), (+)-paci®gorgia-2(10),11-diene (6), selina-5,11-diene, a- humulene, g-muurolene, bicyclogermacrene and (+)- germacrene A. In the essential oil of F. tamarisci in addition to 1±4 and 6 the following sesquiterpenoids were identi®ed: a- copaene, ()-b-elemene, 11-bourbonene, g-gurjunene, selina-4,11-diene, eremophilene, (+)-germacrene A, b- 0031-9422/01/$ - see front matter # 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S0031-9422(01)00018-8 Phytochemistry 57 (2001) 307±313 www.elsevier.com/locate/phytochem * Corresponding author Tel.: +49-40-42838-2824; fax: +49-40- 42838-2893. E-mail address: [email protected] (W.A. KoÈ nig).

Upload: claudia-paul

Post on 02-Jul-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

������������ �� ������� �� ��� � � � ����������� ������� �� ��� ����� ��������

������� ���� �� ������� �� ��� �� ���� ���� ���� �

�������� ���� �������� �� � � ���� ������ ������� ����������� ������� ���! "� #�$%&'" ������� ( ���)�*�� ����� +, !� �� -�����.� ���� ������ ��� #�/0%0& ��� ( ���)

����� ! "����� #$$$% ����� � ����� ���� # &����' #$$

��������

(� ��)�� �*��� ��� � � � �� � �� ��� ���� ���� � ����+�� � ��������� �������� ��������� ������������ �� �� ������*�� ��� ����� �������� +� ��� ��� �� (�������� � ���*��� +� � � + ��)�� �* �,� �� �����-.�/0 1-

�� �� �� + *�������������� ���' *����������- � $-��� *����������- 021� $-��� *����������- 031� $-��� *����-������-#� $-��� �� *����������-#0 $1� -�� +� ����� � �� �� ���� 4 ��� �� ������ �� +�� ������ �� �' "���*� �����*' �� ������� ������ ��� � � ������ ������ ������� ���� ���*���� *�� � �� � � �� ��� ���� �� ���������� , �� �� ��� ����� �������� +� � ������ � ��� � ��� � *������� ���� �� ��� �����* � + � *����-

������� ����� �� �������� �,� �� �� *�� ��� �� �����������-2� -��� � ' � � � � � ��� +�� ��� � �'��'��� �� �� ������� �� � ���� 0�1- ���������� � #$$ 5����� 4��� 6 �� ��� ���� � ������

� )1��23 ��������� �������% �4 ������������% ��� ����� ��������% �*� ���% 5�� ��� ���% 4 ��� �� ������ ��% �����������% (��������%

7����% 4�)�� �*

� ���� ������

(� ���' ����+�� � ��������� ������� �� �4 ������������� 0(�'��1 �� � ���� &��������� �� � �������*�� ��� ����� �������� 6� +� ��� ��� � �� ���+�� � ��,�� ������� ��� �����* ������ ��� ���� ����� � � �� 5�� ��� ��� ���*�� +� �� ��� �'�'������ ���� �� �� ���'�� �' ��� ������ ����*�'8���� �*� ��� �' 09�8�41� :�������� ���*� ��������� � ���� �� + ��)�� �* �'����������+� ����� � �' ��)��� ������ ����*�' �� *�*��� ��9� �� ��� ��� � �' "�� 0 �� !�� �8 �8�;4<���=�� ��>�� ";54<1� (� ������ ������� ���� � + ���*���� +�� ����� �' ��'��� �� �� � ��� � � ���� ��������� *������ ��� ������ �� � �� �'����� �� �� � ����� �� ��� ������ �-���*�' ���� �'����? �� �� � � ����' *�����

� ������� �� ���������

(� �����+�� ��)�� �*���� � � ���� �� ��� ��- �� ���� � ��*�����' ����� +� � *��'��� �'�����?�+� �� ��� �� ��� � � � �� � �� ��� ��� �� �4 �������������@ 0�1- ������� 0�1� �-��*�� 0�1-*����������- 031� $-�� 0�1� �-��� 0�1-*����������- � $-��0�1� 0�1-*����������- 021� $-�� 0�1� 0�1-*����������-#� $-�� 0�1� -������ 0������ ���� 33A1�0B1-*����������-#0 $1� -�� 0�1� ����-C� -��� �-������ �-������� ���'��������� �� 0B1-������ ��

: � �� ��� ��� �� �4 ������� � ���� �� � ����� � � �����+�� ��)�� �*���� +� �� ���@ �-��*�� 0�1-�-��� -������� �-���D������-.� -��� ���*���� 0B1-������ �� �-

$$! -3.##E$ EF - � ��� �� � � #$$ 5����� 4��� 6 �� ��� ���� � ������

�: : @ 4$$! -3.##0$ 1$$$ A-A

��' ������ �' C/ 0#$$ 1 !$/8! !

+++����������E���� E*�' ����

� �����*���� �� ��� (��@ B.3-.$-.#A!A-#A#.% ��?@ B.3-.$-

.#A!A-#A3!�

5���� �22� 3 +,���G�������-��������� 0���� ��� ��1�

��HH�� 0�1- ��������� 0�1 0�����' ���� 3A.% (��� ���� 33 1� ��������� ����������� ���� �� (-�������: � �� ��� ��� �� ��� ����� �������� 07���-

�����1 � �����+�� ��)�� �*���� +� �� ���@0BE�1-�-��� 0B1-�� �-'���� �-��*�� 0B1-���-��� 0B1-�� �-���'�*�'��� �-��� 0�1-�����-.�/0 1-�� 0�1� ������������� #- ,�-����-�-���'�*�'��� ������ I� ���'�����������-����� 0�1-*����������� 0��1 0>�� ���� 3A21� ��-���� >� �*� ������ ������� �� ������������ ,�+ ���*���� +� �� ��� �' ���� �*�-

��� �' � ��D�� �� +� � ��� ��� ������ ����*���� �� ����� �' ���*����� +� � � �*� ��� ������'� ������� ��� �� ���� ?*��� �� ���� ���0&����� �� ��� ��� 33A1� ��� ���*� � �� ���)�� �*���� *�� � � �� ��� ���� +� � � �4������������ +� � J ��� �� � ��� ���*���� � � �� � �� ��� ���� � +� � C2J � �4 �������� �� �-�-� +� � J � �4 ��������� ��� � �� ���*� ����� � + ��� ���� � �� !J �� ��� ��-� � � � �� � �� ��� ����(� + ��)�� �* �'�������� ������� 0�1

+�� � ��D�� ��� � � �� �4 ������������4 (� �����*� ��� ?���� � � �������� �� ����� � 6! #$. ��� �� �� ���*��� �� �� � C�#.� (� *�� � "���*� ��� ���+� � *��� �� +� ����� � ��� � �'�����*� 0�K �$ � �$!1 �� � � �'� ���� +� � ���+��� ���� 0�K �/.1 ����� �� �� � � �'�����* �� � ���� � � ����� ���� � ?��'����� �'� ����* ��� � *�� �� � +� ���� � � �K.�/ �� .�A3� �� � !� "�� ����� ��' ���+��� ���� � )�� ���' ����� 0�K ..�221 �� �'� ����* ��� � � ���� � � ��� ����� �� �?��'���� � �'� ����*� (���� � ���*��*'�������* �� � ������� �� ����� � ��� � ��� �� ��� � *�� ��� � � � ���'���� +� � � ����� ���� : � !� "�� �� *�����' ����� � ��� 0�K 3� 2�# �#3� #.�!/1� �� ������' ������ 0�K#3�$.� !$�!#�!$�. � !C�C!� $3�C$1� �� � ���' 0�K#A�3!� !$�$2� !!�CC�..�2.� C$� 31 �� +� )�� ���' ������ 0�K!.� C� ..�221 �� ����� : �� ����,��� �� � +� *�� ���**���� � �K$�C. 0�-.�1 �� $�/# 0�-C�1� ��*� ���'����� � � �'� ����*� 0�-.@ �K#3�$.% �-C@�K!$�!#1 �� ����� ���� � �- !�-�;4< �*� ����(� ��� ��� ' �� � ��L� ����*� +�� � ������� ������ �8 �8�;4< �� ��>� ?*��� �@ (�� �'� ����* �- C 0�K �$! % 3� 21 ���*�� � �*�� � �� � ��� �*� � �K �..8 �CC 0�-/� �-3�1 � � �;4< �*� ��� �� � � ��� �*� � �K � !8 �#2 0�-2E�-A�1 � � ��>� �*� ���� ��� � �-C����*�� � � ��� �*� � �K �228 �/2 0�-C�E�-A�1� �!!8 �. 0�-.�1 �� � !8 �#2 0�-2E�-A�1� +���� ���-�� � �� � � �'� ����*� �� ���� � � + � � ���' ������ �-! 0�K#A�3!1 �� �-2 0�KC$� 31� �� �� �'� ����* �- . 0�K �$ % # �#31 ?�������' ���*�� � � � �� *�� � �-!� ��� ��� �� �� � �������

����� (� ����� ����� +� � � � ���� �� � *�� � � �K$�3C �� ������ � � � �� *�� � �- $ ����� � ������ 0�K!!�CC1 ���*�� � � ����� �� ����� � � �K �$/ 0�-#1� �� +�� �� � � ������ � �K �/28 �A2 0�-!1� �/. 0�- !1 �� �..8 �CC 0�-/E�-3�1 �� � � ������ �K �CA8 �22 0�-3�1 � � ��>�� : � �8 �8�;4< �*� ��� ��' ���*���� ���� �- $ � � ������� �K.�/ 0�- #�1 �� � �- ! �� ������� (� )��- ���' ����� �- 0�K!.� C1 ���*�� � �- $� �-2E�-A�� �-/E�-3�� �-3�� �- #� 0�K.�/ 1 � � ��>�?*��� � �� *�� � �-3� ���+� ����� *�,� +� � �-/E�-3� �� �-2E�-A� �� � � �� *�� � �� ���� �'� ����* �-3� 0���� � � � ��� �*� +� � �-/1 ���*�� +� � �-C�E�-A�� �-3� �� �-2E�-A� �� �'� ����*� �-A��� �� �-3��� ��� � ��D�� ��� �-/ ���*�� � ��' � �- C� �� ,�+ ���� � �8 �8�;4< �*� ���� �� ���� � �-2E�-A�� �-/E�-3�� �-C�� �-3� �� �-C�E�-A�� � ��>� �*� ���*���� �� ��� ������ ��� � ���'���MC�!�$�$ �!N������,���(� ��� �� ������� �� +�� ����� ���� � ";5

?*��� @ �- $ ���+� � ������ �� +� � �-.�? ���-2 �� +�� �� +� � � � �'� ����* �- !� ��� ��-2 � ��� � ��� � +� � � �'� ����* �- C� �-.�?���� � ";5 ����� ����� �� � *��?��� ' �� � �'�- ����* �- .� O��� ���� � ��-������� �� ��� ������� � � � �� 7�-��� � �� �� � ���*��*'�������* �� � ��������(� ���� �*� ��� �� *����������- 021� $-�� 0�1

���+� � �������� �� ����� � 6! #$.� O��� ��� ��� �� ���*��� �� �� � C�#. �� ������ : � �-"�� �*� ��� ���� � �'� ����*� �� � � � ��(+� �� � � �'� ����*� �*�� � �' ���� � � �K �2C �� �/ 0�- #� �- !1 �� � ���� � � )��- ���' ����� ����� �� � � �� +� 0�- . �� �- C1 ?���� ����� ������ � � ���*�� �� ����0�K$�A!� $�3C1 �� �� ��� ���� � � ���' ��������� � !� "�� �*� ��� ���+� ���� ��+��� ���� ������� +� ����� ���� ��� � *�� � ��� ���'�������*���� O��� *�����' ����� � ��� 0�K A� C� A�!C� 3�CC� #2�$.1� ���� ������' ������ 0�K#!�C2�#/�C � ! �//� !!�$#1� ���� � ���' 0�K!#�3#� !3�A2�. �/.� #.�.$1 �� �� )�� ���' ������ 0�K ! �C$� !/�#!� !/�/ 1 �� ���� � � !� "��� �� �� ���+��� ���� � � �'� ����*� 0�- # �� �- !1 ���+����� *�,� � � �8 �8�;4< �*� ��� +� � ������ *�� � �- $ � �K.�AA� � ����� '� ����* ����� � �- $ ���*�� � �-# 0�K#�A#1 +���� � �����*�� � �-!E�-C� 0�K �/!8 �A/1� � *�� � ? � � � �'� ����* �- .� +���� �� ����� � ������ ������ *�, � � �8 �8�;4< �*� ���� (� � �-'� ����*� �-. 0�K �!28 �C#% #/�C 1 �� �-C 0C�@ � �������� � � ��� �*� �K �/!8 �A/% C�@ � ���� �*� �K �3!8#� $% #!�C21 ��� �����+ � �� ���� ����� �-. ���*�� � �-!E�C� 0�K �/!8 �A/1�� �-C�E�-A�E�-3� 0�K �3!-#� $1� O�� ������ �

!$A �4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&<

���*��� � + � *�� � �-/ 0�K#�./8#�C/1 � �� �'� ����* �- C 0�K$�3C1 �� � � � �'�����* �-A��� �� ����� � �' ����� *�,� +� � � ���- �*� � �� �-A� 0�K �#!8 �! 1 �� �-C�E�-A�E�-3�0�K �3!8#� $1� (� � �'� ����* �-A��� � �����*�� � � ��� �*� � � �K �3!8#� $ 0�-C�� �-A���-3�1 �� #� 28#�#C 0�-3�1� ��� � �������� � ��-�� ��� �*��� � �' � ����� ��� ���� � ��?-����� ���� O��� � ��>� � ����� ���� �� �-2 0�K !/�/1 �� ���� � �-/ 0�K. �/.1 �� �-C0�K#!�C21 ����� � ���+� � ���*��� � �- C� �-A��� �-.��� �� +�� �� � � ��� �*� �-C�E�-A�E�-3��: � ��?-����� ��� � ��� ��� ' �� � ������� ������ � ���*���� �� �-# 0�K!3�A21 � �- .� �- #��- ! �� �-.��� � � ��� �� �� �-. 0�K#/�C 1 ��- .� �-!E�-C� � � � �� ���� ����� �- 0�K !/�#!1 ���� ��' *��� ���*���� � �-A� �� � � ��� �*� �-C�E�-A�E�-3�� �� � �� �� � �*���������� �,� � �� ��� +� � � ����� ����� 021 �� $ *��� ��� (� ������ ";5 ���+� ����

������ �� � + �- $ �� �- .� �� � +� � �-!�+���� �� ��' *������ +� � ����� *�� � �- $ �� ��� �+���� � ��� �� � ����� '� ����* �� �� � � � �'� ����* �- .� �� ��'��� �� �� � ����-��� 0�1-*����������� 0��1 +� � ,�+ ������ ����-��� �� 0��� �� 3A!1 '���� � �� ���� ���*��� �� � *����� ��? ��� � +�� ��� �� ��� ���-� � � � �� � ��-��� � ���(� ��� ���)�� +� �**��� � �� ��' �

� ��� ��� �� � *������������� �� �� �� � �� �������� *����� *����������-2� -�� 0�1� (��� � �� � #-�������� "�� ?*��� � ��� �� ��� � �� ��� � (���� 8!�(� ������ ������� �� �� 0B1- ������� 0�1 +��

� ������� ������ � ��'��� �� ��� �� �� 0�1-*���-�������� 0��1� +���� +�� ����� � ���� � �� ��� ��� ���4 ��������4 �� ����� �� � � O��� � *� � �� 0B1-� ��0B1-� +� �� ��� � ��� @ $ �� ��� (� ��� *����� �� ��� �� � ��� @ �� ��� +� ����� � � ������-� ��� �� 0O��� � *� � �1 �� 0B1- ������� �'� ���� �� � ���*� �� ��� ���*��� � ���������� � A� � ��� # ��'�� (� �� � ' �� � *����� � +��*���� �' � ����� �� 9� �� �' 9�8�4�: �� ����,��� �� � � ��'��� �� ��� �� 0O���

� *� � �1 � �� ����� ��� +���� +���� ��� � 0B1-���� � ����� � ����� � ��D��� �� �����-� � � � �� ������ � �����'�������' ���������� 0�1- ��������� 0�1 �� ����� � � ��'��� ��+� � *������ ��� �� �� 0O��� #1 � ����� ����� �� ����� � 0�1-*����������- � $-�� 0�1 ��0�1-*����������-#� $-�� 0�1 �� ��� �,�� *�������*����� �� � ��'��� �� *����� � 0�1-� �� 0�1-� �� � ����� ����� � �� � �� ���*���� �'� ����� �� 9� �� � � ������ ������� ���(� � ��� �� �� 0�1-�����-.0/1� -�� 0�1 +��

� ������� �' "�� ��� ��� �� 0(��� .1� (� ���- �� ������� �� +�� ������ ���� � ���� � �� ";5?*��� �� � ������ ������� �� �� ������ � �

(���

"�� ���*��� ������ ��� �� *����������- 031 $-�� 0�1

��� � �8 �8�;4<-���*���� ";54<-���*����

�-# �- $ �-!� �- #� �- .

�-! �-.���� �- . �-#

�-.��� �-!� �-C�� �-C� �- .� �-C�� �-C�� �-2� �- $

�-C� �-.���� �-C�� �-2 �-.���� �-C�� �-2

�-C� �-.���� �-C� �-.���� �-C�

�-2 �-C� �-.���� �-C�� �- $� �- C

�-/E�-A� �-A�� �- C 8

�-A� �-/E�-A�� �-3 �-3

�-3 �-A� �-A�� �- #

�- $ �-#� �- #� �- ! �-.���� �-2� � !� �- .

�- # �- $ �-#� �-3

�- ! �- $ �- $

�- . �-! �-#� �-.���� �- $

�- C �-/E�-A� �-2

(��� #

"�� ���*��� ������ ��� �� *����������-#� $0 1-�� 0�1

��� � �8 �8�;4<-���*���� ";54<-���*����

�- E�-!E�-C�E�-A� �-C�E�-3�� �-2� �-A�� �-3� �-2� �-/� �- #�� �- C

�-.��� �- E�-!E�-C�E�-A�� �-C�E�-3� �-C�E�-3�

�-C�E�-3� �-.��� �- E�-!E�-C�E�-A�� �-.���� �-2

�-2 �- E�-!E�-C�E�-A� �- E�-!E�-C�E�-A�� �-C�E�-3�� �-/

�-/ �- C �- E�-!E�-C�E�-A�� �-2

�-A� �- E�-!E�-C�E�-A� �- C

�-3� �- E�-!E�-C�E�-A� �- #�

�- $ �- #�� �- #�� �- ! �- !� �- .

�- #� �- $� �- ! �- E�-!E�-C�E�-A�� �-3�

�- #� �- $� �- ! �- !

�- ! �- $� �- #�� �- #� �- $� �- #�

�- . �- E�-!E�-C�E�-A�� �-A� �- $

�- C �-/ �- E�-!E�-C�E�-A�� �-A�

�4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&< !$3

�� ���� � ,�+ �?'�� � ��� � � � �� �4 ���������� +� � � ��� �,� �� (� ��� �**��� � ��+�� � ��� �� ������� �� +�� � ������� ������";5 ?*��� �� �� �'����� �� ��� ��� ������ ���� � ������ ������� �� �' ���*�����+� � � �� *����������� �� � ���� �� ��������O�� � ������� *����� 0B1-*����������-2� $-

�� 0�1 �� �� ��� ���� 0�1- ��������� 0�1� ��' ���� �� ������� �� �� � ������ 0";51 �� ������� � � � �-/ �� ����� � �� � �� � ,�+ �� � � �� +� ������ � �� � �-# �� �-! �� �L� ��' � ������� ��� ���

(��� !

"�� ���*��� ������ ��� �� *����������-2� $-�� 0�1

��� � �8 �8�;4<-���*���� ";54<-���*����

�- E�-A��� �-#� �-!E�-3�� �-3�� �- !E�- C �- $� �- !E�- C

�-# �- E�-A���� �-!E�-3�� �- $ �-.�� �- .

�-!E�-3� �- E�-A���� �-#� �-.�� �-.�E�-C�� �-3�� �- . �-.�E�-C�� �- $

�-.� �-!E�-3�� �-.�E�-C�� �-C� �-#� �-C�� �- .

�-.�E�-C� �-.�� �-C� �-!E�-3�� �-C�� �- !E�- C� �- .

�-C� �-.�� �-.�E�-C� �-.�� �-.�E�-C�� �- !E�- C

�-3� �- E�-A���� �-!E�-3� �- #� �- !E�- C

�- $ �-#� �- #� �- !E�- C �- E�-A���� �-!E�-3�� �- .

�- # �- $� �- !E�- C �-3�

�- !E�- C �- E�-A���� �- # �- E�-A���� �-.�E�-C�� �-C�� �-3�

�- . �-!E�-3� �-#� �-.�� �-.�E�-C�� �- $

O��� � ������ �� ��� ��� � + ������� 0�1 �� *����������� 0��1� ������� ���� ���@ 0�1 ����!� A��� # ��'� ��'��� ��

���� ���@ 0�1 *'����� 4;��#� $��� ! ���

O��� #� ������ �� ��� �� � + ��������� 0�1 �� � *����-

��������� 0�1 �� 0�1� I�'��� ��� �� ���� ���@ 0�1 *'�����

4;��#� $��� ! ��

(��� .

"�� ���*��� ������ ��� �� �����-.�/0 1-�� 0�1

��� � �8 �8�;4<-���*���� ";54<-���*����

�- 8 �-/� �- $

�-# �-#�E�-3�� �-!��� �- $� �- .

�-#�E�-3� �-#�� �-!�� �-A�E�-3�� �-A� �-/� �-A�E�-3�� �- .

�-!��� �-#�� �-#�E�-3�� �- C �- $� �- .� �- C

�-2 �-/� �-A� �-A�E�-3�� �-A�� �- C

�-/ �-2� �- #� �- ! �- � �-#�E�-3�� �-A�E�-3�� �- !

�-A�E�-3� �-#�E�-3�� �-A� �-#�E�-3�� �-2� �-/� �- $� �- .

�-A� �-#�E�-3�� �-2� �-A�E�-3� �-2

�- $ �- . �- � �-#�� �-!���� �-A�E�-3�

�- # �-/ 8

�- ! �-/ �-/

�- . �- $ �-#�� �-#�E�-3�� �-!���� �-A�E�-3�

�- C �-!��� �-!���� �-2

! $ �4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&<

(� ��-������� �� ������ �� *����������� ���� ����� �������� �� � *��� �� ������� �� � � �����* ��� �� ��������� ��' � � �����*������� ��� �� � ������ �� *������������ (����� ����� �����' �� �����H� � O��� !�

� ������ �����

<4&4 ( � ��� 7, �� ���� ,��� 2��

(�@ ;��� ������� . # ����� ����� �� ��� +� � #C � ���� ������ ��*������� +� � *��'����?���4��-C �� *��'����?� ��4��- 3 0�����*��,1% �����5��� O��� ���* # C$� . 2$ ��� ������ ����*�� +� � #C� ���� ������ ��*������� +� � �* �,��0#�2-��-�-� �'�-!-�-* '�1-�-�'����? �� �� �* �,��02-�-� ��-�� '���-� �'����'�-#�!-��-�-� �'�1-�-�'����? �� � ;7 /$ 0C$J� +E+1� �*�� �D� ��% �*�� �� �� �**��?� @!$%O:I% ������ ��� $�C ��� �#% �D� �� �� � � �� �-*�� ��� +� #$$ �� #C$��� ��*� ���'� ��*��� ��

9� 0���� �� ��� ��� 33.1@ ������ 7���� .$$ ��#A$$ �� ��� �� )��**� +� � � � ����� � � �����0 �AC ��.�! ��1 +� � $J *��'��� �'�����?� 45-!$ � ���������� �-��% �� 4����� �� 0������1����� 0 �3C ��C�! ��1 +� � �* �,��02-�-� ��-�� '�-��� �'����'�-#�!-��-�-� �'�1-�-�'����? �� ��������� *��'����?� 45-C# 0 @ � +E+1 � ���������� �-��% O:I% ����� �� ������ ��� � � P�+ �� �� #.$ ��E��% �D� �� �� � � �� �*�� ��� +� #$$ ��#C$��� ��*� ���'� 9�8�4 ������ � 05:� /$ 71+� ������ �� +� � � �+� ���,��� �� CA3$ ��������� ����*� ���*�� � � 79 ���' ���� /$-#C$4 �����*� ��� �� :� ����� �*�� ��@ #$$��� "��-�*� �����*'@ "�� ������ � +� ������ �� +� �� >��,� �� .$$ �� � >��,� �� C$$ �� ��� ���� (�4 �� � ��� � ������ ������� �'@ �����-� � +� ������ �� +� � � *������ � !. 0��,�5���1 � CA3 � � #$��� I� � ��' ����� ���� � ������� � ���*���� ��' � �� �� �* ���� �� � �� ����� � ����� ����������� I�'��� �� �� � +�� �������� �' ���� �� �� ���'�������� � � ���� �� �� �

O��� !� ������� ���� �� ��� �����* � + �������� *����������� �� �������

�4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&< !

������� � *'���� � $��� �� � ! � �� � ����� +� � +������ �� � +��,�* +�� *������ +� � �)� "���;!

���� �� �� �?� ? ��� ��� O�� � ��'��� �� �� �� � ��� �� +�� )���� �� � ! ����'����� �� +�� ?�� � �' ������� �'���� ���

������ � ���*� �������� � �?� �� ���� �� ��*��������E�������� ��� �� �� ���� ���� � ����� �� � ��� �� ��? �� ��� ����� *��� �� �'���� *��-��� ��� !$ ���������� ��� �� �� 0B1-� +�� *������ �

���������� ��� � *���� �� # ��'� � A���

<4$4 ���� �� ���� ��2 ����� ���

��������� ������������ 0(�'��1 +�� ����� � � � ���-�� ��������� 04� ���� ������ �� 9���'1 � "���-�� 33/ � AC$ � �� � ��������� ������� +�� ����� � ��� ��� 07������� Q4�1 � ��' 33/ �� � 6�,-���� 4+�� � 4* ��� 33C� (� �� ��� ���� �� �����+�� � +� �� ��� �' �'������ ���� �� 0# �1 ���)���� ������ � �� � ���� �� �� ����+�� ����� ��� �� �� �-�?� �� ����� �� ���� � (� ��� ����� ����� �������� 05���*�� ����� >�������� �� ���@3/ 2C � .�$A�3/1 +�� �� ��� ���� ���� ����� 9������������ 9���'�

<4<4 �������� �� ���� ������� �� �� ����� ���

(� ����� �� +�� ������ �� ���� ����� ������ �-���*�' 0������ �� 2$ 0���,1� �� @ �-* �� �#$��1�� *�*��� �� 9��

<4'4 >����� � :�;

0�1- 0 ?�#+�!?�.+�/?�A+1 -.�A-��� �'�-#-0 � -� �'�- �'�1- ���'���MC�!�$�$ �!N���� ��������� ���% �:��4��C@ !CC% �� �� �* ���� �� � �� 0�H1@ �� �� ���� ���� ����� � ���� ��������� ������������ �� �4�������% *��� �� ��� � ���� ����� � ���� ��� �������������% � "�� 0.$$� ��H� �2I21@ � $�C. 0 �� ��-.�1� $�/# 0 ��� �-C�1� $�3C 0 �� 2� �- $� @K2� �H1� �$ 0!�� 2� ��!-!� @K2�2�H1� �$! 0!�� 2� ��!-/� @K2�2�H1� �$/ 0 �� 22� �-#� @KC�2% C�2 �H1� � !8 �#2 0#�� ��-2� �-A�1� �!!8 �. 0 �� � �-.�1� �..8 �CC 0#�� ��-/� �-3�1� �CA8 �22 0 �� � �-3�1� �228 �/2 0#�� ��-C�� �-A�1� �/. 0!�� � ��!- 1� �/28 �A2 0 �� � �-!1� .�/ 0 �� � �- #�1� .�A3 0 �� � �- #�1% !� "��0 $$�2 ��H� �2I21@ �K 3� 2 0A� �- C1� # �#3 0A� �- .1�#.�!/ 0A� �- !1� #A�3! 02� �-!1� #3�$. 0�� �-.1� !$�$2 02��-#1� !$�!# 0�� �-C1� !$�. 0�� �-31� !!�CC 02� �- $1� !.� C0� �- 1� !C�C! 0�� �-A1� ..�2. 02� �-/1� C$� 3 02� �-21� $3�C$ 0�� �- #1� ..�22 0� �- 1% �4 05:� /$ 71� 6!0��� � �1@ #$. M�NB0#21� 2# 0#!1� 2 0# 1� ./ 0.A1� !!0!$1� 3 0#.1� $3 0#C1� $A 0.$1� $/ 0!A1� $C 0CC1� 3C0!$1� 3. 0!21� 3! 0AC1� 3 0CC1� A 0.$1� /3 0C!1� // 0!C1� 2/0!21� CC0C21� C! 0!#1� .! 0 21� .# 0##1� . 0 $$1� !3 0C$1�

<484 ���B�������&:0;�&%�2� � :�;

0�1-0 +�.?�C+�/�?1-#�.�C�2�/�/�-�?��'���- �C-���- �'�-.-0#-� �'�- -*��*'�1- �-��� ��������� ���%�:��4��C@ !A.% �� �� �* ���� �� � �� 0����������1@*��� �� ��� � ���� ����� � ���� �4 ��������% ��- �� ��� � ���� *�� � �4 �������% � "��0.$$� ��H� �I��!1@ � $�A$ 0!�� 2� ��!-!� @K2�2 �H1� �$/ 0!�� 2� ��!-/� @K2�2 �H1� $�3#- �$. 0 �� � �-C�1� �! 8 �.$ 0#�� � �-.���1� �CC8 �2 0 �� � �-!1� �2. 0!�� � ���� ��!- 1� �/ 0!�� � �� ��!- 1� �/.8 �3! 0#�� � �-/� �-A�1� �3C8#�$! 0 �� � �-C�1�#�$C8#� C 0 �� � �-21� #�!3-#�.A 0 �� � �-A�1� !�#.0 �� 22� �-#� @K.�2% $�# �H1� C� A 0 �� � �-31� C� 30 �� 2� �- $� @K �/ �H1% !� "�� 0 $$�2 ��H��I��!1@ � A�$/ 0A� �- !1� 3�!C 0A� �- .1� #$�#. 0A� �- C1� #2�! 0A� �- #1� #3�CC 0�� �-.1� !.�2. 0�� �-C1� !/�#C02� �-!1� .$�$C 0�� �-A1� .$�.. 02� �-/1� .#�C/ 02� �-#1�.3�#/ 02� �-21� A�3 02� �-31� ##�$3 02� �- $1� !$�//� !!�C$ 0�� � � �- � �- 1% �4 05:� /$ 71� 6! 0���� �1@ #$. M�NB0C!1� ./ 0C.1� $/ 0. 1� $C 0CA1� 3! 0C21�3 0C.1� CC 0C$1� . 0 $$1� !3 0.C1�

<4"4 ���B�������&�&%�2� � :�;

0�1-0 +�C+�/�?1-#�!�C�2�/�/�-�?��'���- �C-��� �'�-.-0#-� �'�- -*��*'�1- �-��� ��������� ���% �:��4��C@ .$$% �� �� �* ���� �� � �� 0����������1@ �� ����� � ���� ����� � ���� �4 �������% � "��0.$$� ��H� �I��!1@ � $�3!-$�33 0 �� 1� $�A3 0!�� 2�@K/� �H1� �$ 0!�� 2� @K2� �H1� �$A8 �!! 0.�� 1� �CC 0!�� 1� �/. 0!�� 1� �2!- �A# 0#�� 1� �AA-#�$#0#�� 1� #�$C8#� C 0#�� 1� C�.2 0 �� 1% �4 05:� /$71� 6! 0��� � �1@ #$. M�NB0C#1� A3 0##1� 2# 02!1� 2 0 21� ./ 0 $$1� 3 0!#1� $C 0/#1� 3 0!.1� /3 0 21� //0 31� CC 0 A1� . 0!#1� !3 0 C1�

<494 ���B�������&:";�&%�2� � :�;

0�1-0 +�.?�C+-#�!�.�C�2�/1-�?��'���- �C-��� �'�-.-0#-� �'�- -*��*'�1- �-��� ��������� ���% �:��4��C@ . .% �� �� �* ���� �� � �� 0����������1@ *��� �� ���� ���� ����� � ���� �4 ��������% �� �� ���� ���� *�� � �4 �������% � "�� 0.$$� ��H� �I��!1@ � $�A! 0!�� 2� ��!-!% @K/� �H1� $�3C0!�� 2� ��!-/% @K2�2 �H1� �#!8 �! 0 �� � �-A�1� �!28 �C# 0#�� � �-.���1� �2C 0!�� � �� ��!- 1� �/ 0!�� � ���� ��!- 1� �/!8 �A/ 0#�� � �-!� �-C�1� �3!-#� $ 0!�� � �-C�� �-A�� �-3�1� #� 28#�#C 0 �� ��-3�1� #�./8#�C/ 0 �� � �-/1� #�A# 0 �� �� � �-#1� .�AA0 �� 2� �- $� @K $�# �H1% !� "�� 0 #C�A ��H��I��!1@ � A� C 0A� �- !1� A�!C 0A� �- .1� 3�CC 0A� �- C1� #!�C2 0�� �-C1� #2�$. 0A� �- #1� #/�C 0�� �-.1� ! �//0�� �-A1� !#�3# 02� �-!1� !!�$# 0�� �-31� !3�A2 02� �-#1�. �/. 02� �-/1� #.�.$ 02� �- $1� ! �C$ 0� �- 1� !/�#!0� �- 1� !/�/ 0� �-21% �4 05:� /$ 71� 6! 0��� � �1@

! # �4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&<

#$. M�NB0.A1� A3 0 31� 2# 02 1� 2 0 /1� ./ 0 $$1� 3 0!$1� $C 0/$1� 3 0#A1� // 0 /1� CC 0 /1� . 0!#1�

<4/4 ���B�������$�&%�2� � :�;

0�1-0 +�!�?�/�?1-#�!�!��2�/�/�-�?��'���- �C-���- �'�-.-0#-� �'�- -*��*'�1- �-��� ��������� ���%�:��4��C@ .##% �� �� �* ���� �� � �� 0����������1@�� �� ��� � ���� ����� � ���� �4 �������% �"�� 0.$$� ��H� �I��!1@ � $�3/ 0!�� 2� @K2�2 �H1�$�AA8 �$# 0 �� 1� �$38 �#3 0.�� 1� �.3 0!�� 1� �C 0!�� 1� �/. 0!�� 1� �2.8 �/3 0 �� 1� �AC- �3/ 0!���1� #� -#� A 0#�� 1� C�CC 0 �� 1% �4 05:� /$ 71� 6!0��� � �1@ #$. M�NB0C21� A3 0#C1� 2# 02#1� 2 0 21� ./0 $$1� !! 0 21� #$ 0 /1� 3 0!!1� $/ 0 /1� $C 0/.1� 3!0 C1� 3 0!C1� /3 0 21� CC 0 31� . 0!21� !3 0 21�

<404 ���B�������$:&%;�&&�2� � :�;

0B1-0 +�!�?�C+�/�+1 -#�!�!��C�2�/�/�-�� ��'���- �C-��� �'�-.-0#-� �'�-#-*��*'�1- �-��� ������������% �:��4��C@ .!C% �� �� �* ���� �� � �� 0�H1@*��� �� ��� � ���� ����� � ���� �4 �������% �"�� 0.$$� ��H� �2I21@ � $�A 8$�3# 0 �� � �-21�$�3C 0!�� 2� ��!-/� @K2�2 �H1� $�3/- � C 0#�� � �-C���-3�1� �$C 0!�� 2� ��!-!� @K2�2 �H1� � C8 �#/ 0 ��� �-A�1� �!C8 �.C 0 �� � �-/1� �238 �/A 0#�� � �-.���1� �A 0!�� � ��!- 1� �A#- �3# 0.�� � �- � �-!��-C�� �-A�1� �328#�$2 0 �� � �-3�1� .�A. 0 �� � �- #� ��1� .�3# 0 �� � �- #� ����1� C�2A 0 �� � �- $1% !� "�� 0 $$�2 ��H� �2I21@ � 3�!A 0A� �- .1� 3�/20A� �- C1� #.�33 0A� �- !1� #3�A! 0�� �-31� ! �## 0�� �-C1�!#�C/ 0�� �-A1� !/�A. 0�� �-.1� !3�.! 02� �-/1� !3�C/ 02� �-!1� C#�2# 02� �- 1� C2�CC 02� �-21� !�/ 0�� �- #1� # �2#02� �- $1� ..�!/ 0� �- 1� .C�22 0� �-#1% �4 05:� /$71� 6! 0��� : �1@ #$. M�NB0! 1� 2# 0!C1� ./ 02#1� !!0!#1� 3 0!#1� $3 0! 1� $A 0..1� $/ 0.C1� $C 02/1� 3C0!21� 3. 0!/1� 3! 0 $$1� 3 02#1� A 0.#1� /3 0C$1� // 0.$1�2/ 0. 1� CC 0.31� . 0A!1� !3 0.$1�

<4&%4 ��� � ���'�9:&&;�2� � :�;

!�!��.�C�2�/-�?��'���- �.-��� �'�-/-0#-� �'�- -*��*'�1-#�-��� ��������� ���% �:��4��C .C2% ���� �* ���� �� � �� 0����������1@ �� ��% � "��0.$$� ��H� �I��!1@ � $�/C 0!�� 2� ��!- $� @K/� �H1� �#/8 �!A 0#�� � �-A�� �-3�1� �.A8 �C/ 0 �� � �-#�1� �2 8 �2! 0 �� � �-A�1� �2! 0!�� � ��!-.1� �220!�� � �� ��!- 1� �23 0!�� � ���� ��!- 1� �/28 �A3 0#�� � �-#�� �-3�1� �3$8#�$$ 0 �� � �- $1�#� 8#�#C 0#�� � �-!���1� #�3! 0 �� �� � �- 1� !�!28!�.# 0 �� � �-21� C�.2 0 �� 2� �-/� @K3�. �H1% !�"�� 0 #C�A ��H� �I��!1@ � #�$/ 0A� �- .1� !�!3 0A��- C1� /�/A 0A� �- #1� #.�2$ 0�� �-#1� #2� 0A� �- !1�#2�C2 0�� �-A1� #A�23 0�� �-31� !!�C/ 02� �- $1� !!�2C 02� �-21� !/�CC 0�� �-!1� ./�.$ 02� �- 1� #2�# 02� �-/1� #A�!A

0� �-.1� #3�// 0� �- 1� !2�$. 0� �-C1% �4 05:� /$71� 6! 0��� : �1@ #$. M�NB0//1� A3 0C21� 2 0C$1� ./02#1� !! 0C 1� 3 0C!1� $3 0C/1� $/ 0CA1� $C 0/.1� 3!0/$1� 3 0/.1� CC 0C 1� . 0 $$1�

<4&&4 ���B�������"�&%�2� � :�;

��� �����@ 0!�+��.?��C+�1-!�!��.�C�2�/-�?��'���- �C-��� �'�-.-0#-� �'�- -*��*'�1-#�-��� ���-������ ���% �:��4��C@ .#/% �� �� �* ���� �� � ��0����������1@ *��� �� ��� � ���� ����� � ����������� �� 0�1- ��������� 0�1% � "�� 0C$$� ��H� �I��!1@ � $�/3 0!�� 2� ��!-!� @K2�2 �H1� $�AA-$�3A 0 �� � �-.�1� � 38 �!$ 0#�� � �-!� �-3�1� �.38 �C2 0 �� � �-#1� �2$ 0!�� 2� ��!- � @K �! �H1� �2 0!�� � ��!-/1� �/# 0!�� 2� ��!- � @K$�3 �H1� �/.8 �A$ 0#�� � �-.�� �-C�1� �AC- �3# 0 �� � �-3�1�#� /8#�# 0!�� � �- � �-A���1� #�..8#�.A 0 �� � �-C�1� .�A 0 �� �� 2� �- $� @K $� �H1% !� "�� 0 #C�A��H� �I��!1@ � !�C! 0A� �- C1� A�/2 0A� �- #E !�#$�$ 0A� �- .1� #C�CA 0�� �-C1� #C�3! 0A� �- !E #1� #/�320�� �-31� !C�$2 0�� �-.1� !2�32 0�� �-A1� !/� $ 02� �-!1�C#�C. 02� �-#1� C#�/ 02� �- 1� #A�#$ 0� �-2E/1� #3� 302� �- $1� !$�AA 0� �- 1� !2�!C 0� �-/E21% �4 05:� /$71� 6! 0��� : �1@ #$. M�NB 0 C1� .A 031� ./ 0A1� $30 $$ 1� 3C 0 .1� 3! 0 A1� 3 0A1� /3 0 !1� 2/ 0##1� CC 0 $ 1�. 0 !1� !3 0.1�

��!��"�� #� ����

���*��� � +�� ����� � �' ��������� � �� (�� 5� 0Q����� ' �� �������1� (� ������ ��*-*�� �� � O��� �� ������� :��� �� �� ��� ����'��,�+�����

��$�������

>��� ��� ����,�� ��� ����� ���� &�� 4�*��� 9�� 3A2� :���� �� �� �

��)�� �* ������� 0�1-*����������� ���� ��� ����� ���������

��' ������ �' #C� #!.8 #!C�

�����'� &�I�� �������� 6�&�� �'���� � I�4�� 3A.� (� � ��� �� ��

���������� � + *���������� ��)�� �*��� ������� ���� �

����+�� ��������� �������� ( ������ 6 � #C� .$ 8 .$#�

����� :�� ��� ��� ����� 33.� ��*��� �� � ���� �*��� �� +� �

������ �'����? ��� �� ������ � � ����' *����� &����� ��

������ ����*�' � 222� 2 82 C�

&������ I�� ��� ��� ����� 33A� (� � ��� �� 4*� ��� I� � �� 4�-

)�� �* �'���������� 5�>�-7����� ��������

��� �� �� 9�� 3A!� (� �� 4' ���� �� ������������� ��I �����

����� Q����� '�

(���� ��� 4��� ��� "������,�� <�� "�,������� ��� ���,�+�� <��

33 � 4 ���� � � ����+�� ������� ���������� 4' ���� ��

������ ������� ��� &����� �� ������� 4��� ' ��,� (��� �

.!C8 ..C�

������� Q�� ���� � H� ��� >�� ��+� "�� O���,� ��� ��� ��� ����� 33A�

4�)�� �* ��� � � � �� � ����+�� ���),�� �� � �� ������

��' ������ �' .3� /#!8 /! �

�4 ��� � ��4 6 �)���� ���) 89 :$%%&; <%9=<&< ! !