operon lac

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OPERON LAC. OPERON LAC. “Operón”: Es una unidad de trasncripción: genes estructurales regulados por un promotor y un operador . - PowerPoint PPT Presentation

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  • OPERON LAC

  • OPERON LAC

    Opern: Es una unidad de trasncripcin: genes estructurales regulados por un promotor y un operador .

    Ejemplo: Los genes involucrados en el uso de la Lactosa como fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que participan en la misma va metablica.

  • OPERON LAC

  • COMPOSICIN.a) Genes estructurales (en tndem).gen lac Z codifica para la expresin de la -galactosidasa

    el gen lac Y que codifica para la permeasa del galactsido.el gen lac A, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactsido.Se transcriben desde un promotor comn en un mRNA policistrnico, el cual es traducido para dar lugar a las tres enzimas.

  • COMPOSICINb) PromotorSitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripcin.

  • COMPOSICIN.c) OperadorPor lo general se localiza adyacente o traslapado con el promotor , sirve como el sitio de unin de una protena, conocida como represor (ejemplo de protena reguladora de genes).La protena reguladora de genes (represor) reconoce una secuencia especifica dentro del DNA y se une a esta con alta afinidad.

  • COMPOSICINd) Gen Regulador.La expresin de los genes estructurales tambin esta controlada por un gen regulador especfico. El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que estn siendo regulados. El gen regulador codifica para una protena especfica, un producto denominado REPRESOR.

  • En este tipo de operador inducible como lac, la protena represora slo puede unirse al DNA en ausencia de lactosa, que funciona como un INDUCTOR.

  • CONTROL POSITIVO POR cAMP.

    La concentracin de cAMP en las clulas se relaciona con la presencia de glucosa en el medio; a mayor concentracin de glucosa, menor concentracin de cAMP.

    El cAMP acta en las clulas procariotas al unirse a una protena, en este caso la protena receptora de cAMP (CAP). Aunque CAP es incapaz de unirse al DNA, el complejo cAMP-CAP reconoce y se une a un sitio especifico de la regin de control de LAC, aumentando la afinidad de la regin promotora por la RNA polimerasa, lo que estimula la transcripcin del Opern.

    La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripcin del Opern, aun cuando la lactosa esta presente y el represor es inactivo.

  • -Galactosidasa Lac ZRepresor transcripcional del opern Lac, Lac ILactosa permeasa Lac YActivador transcripcional del opern Mph9 . Galactosidasa -O-Acetiltransferasa Lac A

  • E. coli en medio mnimo AGlu 2%BLac 2 %CGlu + Lac2 %DGlu 2 %EGlu + Lac2 % tiempo + Lac 2 % 15 min 7.5 min Medio mnimo

  • Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sndnt

    Resuspender bacterias en 250 L de amortiguador Z

    Aadir 25 L de CHCl3 + 12.5 L SDS 0.1 %

    Aadir 50 L de ONPG, Incubar 2 min. TA

    Aadir 125 L Na2CO3 1 M

    Observar color