oksİdatİf stres ve antİoksİdanlar
DESCRIPTION
OKSİDATİF STRES VE ANTİOKSİDANLAR. AMAÇ. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
1
OKSİDATİF STRES VE
ANTİOKSİDANLAR
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
2
AMAÇ
• Bu çalışmada amaç; kromatografik şartları optimize
ederek, hedeflenen bitki ekstraktlarındaki
bileşenlerin etkin bir şekilde ayırmak ve ayrılan her
bir bileşenin FRAP antioksidan kapasitesini eş
zamanlı olarak belirlemek için bir on-line HPLC-
FRAP sistemi geliştirmekti.
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
3
GENEL BİLGİLER (özet)• Serbest Radikaller
• Reaktif Oksijen Türleri (ROS)
• Antioksidanlar
• Oksidatif Stres
• Fenolik Maddeler– Flavonoidler
– Fenolik asitler
• Kromatografi (HPLC)
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
4
Serbest Radikaller
• Serbest radikaller, kimyasal olarak en dış yörüngesinde bir elektron kaybetmiştir.
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
5
• Serbest radikallerin yapısında, çoğunlukla oksijen yer almaktadır. (reaktif oksijen türleri=ROS)
• ROS oksijen içeren, küçük ve oldukça reaktif moleküllerdir.
• Serbest radikaller (ROS) kararsız bir yapıdadırlar ve kararlı hale gelmek için hücrelere saldırarak hasar oluştururlar.
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
6
Reaktif Oksijen Türleri (ROS)Ateroskleroz
Kalp ve beyin hastalıkları
Diyabet
Yaşlanma
Kanser
İnflamasyon
Artrit
Katarakt
Reaktif
Oksijen
TürleriRadyasyon
hasarı Parkinson
Sıtma, amfizem
Alzheimer
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
7
Antioksidanlar • Serbest radikal oluşumunun, temelinde
oksijen olduğu için, gerçekte bir oksidasyon (oksidan) faaliyettir.
• Vücudumuz, bu faaliyete karşı “antioksidan” larla cevap vermektedir.
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
8
Oksidatif Stres• Antioksidanların miktarı oluşan serbest
radikalleri dengeleyemez ve serbest radikal seviyesi, antioksidan seviyesine göre artar ise serbest radikaller hücrelerde oksidatif hasarlara yol açar ve bu duruma oksidatif stres denir.
Pro-oksidan
ve oksidan
Antioksidan
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
9
Fenolik Maddeler(En yaygın görülen antioksidanlar)
• Flavonoidler
• özellikle meyve ve sebzelerde bulunur.
• C6-C3-C6 yapısında
• Fenolik asitler• yaygın olarak bitki taç kısmında
bulunur.
1. Hidroksi benzoik asit türevleri
2. Hidroksi sinamik asit türevleri
6
,
C
B
A
2
3
45
7
2
8
65
4
3
,
,
,
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
10
Fenolik Asitler
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
11
Fenolik Bileşiklerin Biyoaktiviteleri
• antimutajen,
• antikarsinojen,
• antioksidan,• antiviral,
• antibakteriyel,
• antitrombotik,
• antialerjik.
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
12
Antioksidan Kapasite Belirleme Yöntemleri
1. Hidrojen Atomu Transfer (HAT) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler
(substratın hidrojen verebilme yeteneğini ölçer)
2. Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler
(substratın (antioksidan) indirgeyici yeteneğini ölçer)
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
13
Hidrojen Atomu Transfer (HAT)Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler
• Oksijen radikal absorbans kapasitesi (ORAC),
• Toplam radikal yakalama antioksidan parametresi (TRAP),
• Oksijen kullanım inhibisyonu (IOU),
• Linoleik asit oksidasyonu inhibisyonu,
• LDL oksidasyonu inhibisyonu
• Krosin beyazlatma
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
14
Tek Elektron Transfer (SET) Reaksiyonlarına Dayalı Yöntemler
• Folin-Ciocalteu ayıracı ile toplam fenolik madde miktarı (FCR/TPC),
• Troloks eşdeğeri antioksidan kapasite (TEAC/ABTS),
• Demir (III) iyonu indirgeyici antioksidan güç (FRAP),
• Bakır (II) iyonu indirgeyici antioksidan kapasite (CUPRAC),
• DPPH (2,2'difenil-1-pikrilhidrazil) radikali temizleme
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
15
KROMATOGRAFİ
• Hareketli fazın cinsine göre:- Sıvı kromatografisi - Gaz kromatografisi
• Kullanılan tekniklere göre:- Kağıt kromatografisi (PC)- İnce tabaka kromatografisi (TLC)- Kolon kromatografisi (CC)- Gaz kromatografisi (GC)
HPLC
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
16
Adsorpsiyon kromatografisi, polarlıkları farklı bileşenlerden
oluşan karışımların ayrılmasında iyi sonuç verir.
HPLC
KROMATOGRA
Fİ
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
17
Bitkisel poşet çaylarda klasik
spektrofotometrik FRAP analizi
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
18
Bitkisel çaylarda antioksidan aktiviteler
455
435
649
605
264 293
718
659
961
892
347
367
499 509
443 50
9
842
832
788 77
8
0
200
400
600
800
1000
1200
Tarçın
-kar
anfil
Kuşbu
rnu
Ihlam
urAda
çayı
Yeşilç
ayFor
mça
yıM
ate ça
yıEkin
ezya
Mes
ir ça
yıSiya
hçay
şekerli
şekersiz
1. Toplam fenolik Madde İçerikleri
GA
E v
eya
CA
E (
µg/
mL)
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
19
2. DPPH Radikali Temizleme Aktiviteleri
49
60
33
,1 32
,9
10
2,8
99
,1
51
,12
1,1
18
,7 19
,1
11
0,6
10
5,3
53
,1 56
,1
47
,3
48
29
,2
38
,4
26
,62
2
0
20
40
60
80
100
120 şekerlişekersiz
SC50
seyr
elm
e or
anı x
10-4
0
200
400
600
800
1000
1200
Tarçın
-kar
anfil
Kuşbu
rnu
Ihlam
urAda
çayı
Yeşilç
ayFor
mça
yıM
ate ça
yıEkin
ezya
Mes
ir ça
yıSiya
hçay
şekerli
şekersiz
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
20
3. Demir (III) İndirgeme/ Antioksidan Güç Aktiviteleri
(FRAP)
229
408
120
582
831
118 26
0
246
552
547
214 31
4
144
527
817
123 22
4
271
576
569
0
200
400
600
800
1000T
arçı
nKar
anfi
l
Kuş
burn
u
Ihla
mur
Ada
çayı
Yeş
ilçay
For
mça
yı
Mat
e ça
yı
Eki
nezy
a
Mes
ir ç
ayı
Siy
ah ç
ay
TE
AC
(µ
M )
Şekerli
Şekersiz
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
21
Yaylaçayı bitki ekstraktlarında klasik
spektrofotometrik FRAP analizi
ON-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASION-LİNE HPLC-FRAP ANTİOKSİDAN AKTİVİTE YÖNTEMİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE DOĞAL ÜRÜNLERE UYGULANMASI
22
Yaylaçayı Ekstraktlarının FRAP Aktiviteleri
590
351
130 11580 82
0
100
200
300
400
500
600
Sulu-YÇ Metanollü-YÇ Etanollü-YÇ İzopropanollü-YÇ
Bütanollü-YÇ Asetonitrilli-YÇ
TE
AC
( µ
M )
.
Çözücülerin literatürdeki bağıl polarite değerleri su, metanol, etanol, n-bütanol, izopropanol ve asetonitril için sırasıyla 1,000- 0,762 - 0,654 - 0,602 - 0,546 ve 0,460’tır.