2013/7/17

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宿主依存性修飾

発育鶏卵

赤血球凝集反応(Hemagglutination: HA)

+        ‐

溶血反応(Hemolysis)

細胞融合現象(Cell fusion)

センダイウイルス感染マウス

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正常マウス肺

感染マウス肺コンソリデーション

組織培養事始め‐1957年

センダイウイルス感染L細胞 宿主依存性修飾

トリプシンによるセンダイウイルスの活性化

トリプシン処理感染L細胞は感染中心となる

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非活性型 L‐Sendaiをトリプシンで活性化させる

トリプシン処理 L‐Sendai

（感染性、溶血能、細胞融合能の同時回復）

感染性

溶血能

細胞融合能

トリプシン濃度

トリプシン処理 L‐Sendaiの細胞内侵入（Envelope Fusion）

清水洋子 撮影

トリプシンはL‐Sendai のenvelope 融合能を活性化する

トリプシン活性化および

エンベロープの状態から見た

センダイウイルスのモデル

・溶血能・融合能・感染性

・溶血能・融合能・感染性

蛋白分解酵素

F

F1F2 (トリプシンによる活性化の分子機構）

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トリプシン処理前

処理後

トリプシンによるF糖蛋白の開裂活性化

F糖蛋白の開裂活性化

F糖蛋白の開裂活性化

（浅野モデル）

トリプシン処理後に出現するF1のN末端の疎水性アミノ酸配列

センダイウイルスのモデル

本間・戸澤・清水

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卵の中でのセンダイウイルスの活性化

卵漿尿液中にはトリプシン様活性化物質がある

様

溶血能

感染性

卵漿尿液中にはトリプシン様活性化物質

卵漿尿液中の活性化物質の

性状

トリプシン存在下でのプラーク

（肺病原性の機構）

Egg‐Sendai 感染マウス

（肺捻発音, 立毛, 体重減少）

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接種後の日数

Egg‐Sendai感染マウス（体重減少, 死）

体重

Egg‐Sendai感染マウスの肺組織像 （HE染色)

ウイルスは気管支上皮細胞で増える（PAP染色)

時間経過に伴う感染拡大

感染量少ない感染量多い

肺内での多段増殖

L‐Sendai接種マウス

（感染の兆候なし）

L‐Sendai感染マウス

接種後の日数

体重

（体重減少なし）

2013/7/17

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L‐Sendai感染マウス肺組織像（HE染色)

増殖の所見なし（PAP染色)

トリプシン処理L‐Sendai

肺感染性の発現

（プロテアーゼ変異株による肺病原性の解析）

トリプシン抵抗性

変異ウイルスTRの作出

TRのトリプシン抵抗性

キモトリプシン

キモトリプシン

トリプシン

トリプシン

酵素濃度

キモトリプシン活性化TR感染マウスの肺組織像

（HE染色)

2013/7/17

8

感染量少ない感染量多い

キモトリプシン活性化

TR 感染マウス

接種後の日数

体重

ウイルス増殖

抗体反応

肺病変スコア

TRからトリプシン感受性復帰

ウイルス Tsrevの作出

センダイウイルスのマウス肺病原性の機構

（田代・本間）

（プロテアーゼ抵抗性の分子機構）

プロテアーゼ変異株の塩基配列―アミノ酸配列

トリプシン、キモトリプシン

プロテアーゼ変異株のトリプシン、キモトリプシン作用部位

キモトリプシン トリプシン

伊藤正恵

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（プロテアーゼインヒビターによる肺炎の治療）

トラジロール対照

プロテアーゼ変異株TRを用いる

あらたな生ワクチンの概念

キモトリプシン活性化

TRの感染防御効果

コントロール

5HA

0.5HA

0.05HA

ワクチン効果の持続

6ヶ月

8ヶ月

10ヶ月

ワクチンのブースター効果

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TR生ワクチンとコンポーネントワクチンの比較

0.5HA

0.05HA

0.005HA

1600HA

160HA

対照

TR接種量とワクチン効果

250HA

25HA

2.5HA

野生ウイルス感染マウスから同居マウスへの感染 TR感染マウスから同居マウスへの感染

センダイウイルスの溶血現象

リクエストに応えて

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溶血現象の謎

（学生実習で解決のヒントを得る）

赤血球表面への吸着 → エンベロープ融合

↓

細胞内侵入

ヘモグロビンの遊出開始

ヘモグロビンの細胞外遊出⇒ ヌクレオカプシドは残る

教科書的センダイウイルス像（Late harvest)

１．形が不揃い２．ヌクレオカプシドが見える３．溶血能あり

真のセンダイウイルス像（Early harvest)

１．丸いピチピチ粒子２．ヌクレオカプシドは

見えない３．溶血能なし

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ピチピチ粒子の血球凝集像

ピチピチ粒子による赤血球融合

ヘモグロビンは遊出しない

ピチピチ粒子を凍結融解する(Late harvest)

Late harvest による溶血

エンヴェロープの状態から見た溶血モデル