oana cristina badoiu

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%

RAPORT DE VALIDARE METOCLOPRAMID

Picături orale soluţie, 0.7%

Coordonator:

Prof. dr. ing. Ana Maria JOSCEANU

Masterandă:

Oana – Cristina BĂDOIU

Pagină 1 / 31


I. Informaţii generale1. Nomenclatură

DCI: Clorhidrat de metoclopramidă

Denumirea chimică: clorhidrat de 4-Amino-5-cloro-N-[(2-dietilamino)etil]-2-metoxibenzamidă

CAS: 54143-57-6

2. Structură

Formula moleculară: C14H22ClN3O2 · HCl · H2O

Masa moleculară: 354,28

Formula structurală:

Cl

H2N OCH3

NH

O

N CH3

CH3

, HCl , H2O

3. Proprietăţi generale

Compoziţia produsului medicamentos

Compoziţia pentru 100 g produs Metoclopramid, picături orale soluţie, 0,7% este următoarea (tabel nr.1 ):

Compoziţia Cantitateapentru 100 g produs

Clorhidrat de metoclopramidă monohidrat 0,700Para-hidroxibenzoat de metil 0,100Soluţie tampon fosfat pH=3,2preparată din:

10,000

- Fosfat disodic dodecahidrat 0,177 g- Acid citric monohidrat 0,158 g- Apă purificată până la 10 gApă purificată până la 100,000 g

Pagină 2 / 31

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%Substanţa activă

Substanţa activă, clorhidrat de metoclopramidă, folosită în pentru acest produseste fabricată de Biochemical & Synthetic Products Ltd., India şi este conform Pharmacopeei Europene, ediţia în vigoare.

Excipienţi

Produsul medicamentos este dezvoltat în acord cu Regulile de bună practică de fabricaţie, folosind excipienţi standard care sunt folosiţi curent în industria farmaceutică pentru produse de acest tip. Cantităţile în care sunt folosiţi excipienţii asigură un proces de fabricaţie reproductibil şi pe de altă parte obţinerea unui produs finit cu proprietăţi optime.

Excipienţii au fost selectaţi ţinând cont de proprietăţie fizice, tehnologice şi biofarmaceutice al produsului finit (tabel nr 2):

Denumirea excipientului Funcţia în formularePara-hidroxibenzoat de metil conservant antimicrobianAcid citric monohidrat agent de tamponareFosfat disodic dodecahidrat agent de tamponareApă purificată solvent

4. Procesul de fabricaţie

Formula seriei de fabricaţie:

Mărimea seriei: Mărimea seriei comerciale de Metoclopramid, picături orale soluţie este de 35 000 flacoane echivalent la 700 kg soluţie vrac.

Compoziţia cantitativă şi calitativă a seriei (tabel nr.3)

Denumire materie primă

CantitateMetoda de referinţăPentru 100 g

produs, gPentru o seriede produs, kg

Substanţe activeClorhidrat de metoclopramidă monohidrat

0,700 4,900 Ph. Eur.

Excipienţip-hidroxibenzoat de metil

0,100 0,700 Ph. Eur.

Soluţie tampon fosfat pH = 3,2 preparată din:- fosfat disodic dodecahidrat

0,177 g 1,239 Ph. Eur.

- acid citric monohidrat

0,158 g 1,106 Ph. Eur.

- apă purificată până la 10 g 70,000 Ph. Eur.Apă purificată până la

100,000 700,00 kgPh. Eur.

Pagină 3 / 31


Schema de fabricaţie a procesului tehnologic:

apă purificată

p-hidroxibenzoat de metil

clorhidrat de metoclopramidă

Apă purificată

Fosfat disodic

dodecahidrat

Acid citric monohidrat

Apă purificată pentru

completare la masa

Pagină 4 / 31

Prepararea soluţiei tampon fosfat pH=3,2

Prepararea soluţiei de

Metoclopramid

Omogenizare

Filtrarea soluţiei

Ambalare secundară

Ambalare primară Flacoane sticlă brună de 20 mL

Etichete de flacon, prospecte, pliante

PRODUS FINIT

SOL C2

FU SOL U2

U2SOL A C2


5. Metode analitice şi condiţii de admisibilitate

Metodele analitice şi condiţiile de admisibilitate au fost stabilite pentru următoarea compoziţie (tabel nr. 4):

Denumire materie primă Cantitate g

Condiţii de calitate

Clorhidrat de metoclopramidă monohidrat

0,700 Ph. Eur.

p- hidroxibenzoat de metil 0,100 Ph. Eur.Soluţie tampon fosfat pH=3,2 preparată din:

10,000

- fosfat disodic dodecahidrat 0,177 g Ph. Eur.- acid citric monohidrat 0,158g Ph. Eur.- apă purificată până la 10,0 g Ph. Eur.Apă purificată până la 100,00 Ph. Eur.

5.1. Caracteristici si limite de admisibilitate:

Tabel nr. 5.Caracteristici şi limite de admisibilitate

Caracteristici Conditii de admisibilitateAspect Soluţie limpedeCuloare Incoloră Gust AmarMiros FărăpH-ul soluţiei 2,8 – 4,2Masa totală pe flacon, g 19,00 – 2 ,00Doza şi uniformitatea dozei picăturilor - masa totală / 10 doze, g - masa individuală/ doză, g

± 15% faţă de masa nominală determinată± 10 % faţă de masa medie determinată

- clorhidrat de metoclopramidă

Timpii de retenţie corespunzători picurilor de clorhidrat de metoclopramid, respectiv p-hidroxibenzoat de metil din cromatograma soluţiei probă sunt similari cu timpii de retenţie corespunzători picurilor de clorhidrat de metoclopramid, respectiv p-hidroxibenzoat de metil din cromatograma soluţiei standard.- p-hidroxibenzoat de metil

- clorhidrat de metoclopramidă, % g/g

0,630 – 0,697

- p-hidroxibenzoat de metil, % m/m

0,095 - 0,105

Substanţe înrudite cu clorhidratul de metoclopramid, % m/m

max.0,5

Calitate microbiologică:Număr total de microorganisme aerobe viabile:- bacterii / ml max. 103

- fungi filamentosi si levuri / ml max. 102

Escherichia coli / ml absent

Pagină 5 / 31


5.2. Metode analitice5.2.1. Aspect :Aspectul soluţiei se verifică vizual.5.2.2. Culoare: Determinarea culorii soluţiei se verifică vizual.5.2.3. Gust, miros soluţie: Determinarea gustului si mirosului soluţiei se

efectuează organoleptic.5.2.4. pH-ul soluţiei: Determinarea pH-ului soluţiei se efectuează

potenţiometric, conform Ph.Eur. în vigoare.5.2.5. Masa totală pe flacon: Masa totală pe recipient se efectuează prin

cântărirea individuală a conţinutului din zece recipiente. 5.2.6. Doza şi uniformitatea masei dozelor: Se determină conform Ph.Eur. în

vigoare.5.2.7. Identificare: clorhidrat de metoclopramid şi p-hidroxibenzoat de

metil

Se efectuează prin cromatografie de lichide de înaltă performanţă (HPLC).

Timpii de retenţie pentru clorhidratul de metoclopramidă şi p-hidroxibenzoatul de metil din soluţia probă corespund cu cei ai substanţelor de referinţă respective din soluţia etalon de lucru şi anume:

- clorhidrat de metoclopramidă ≈ 2,3 min.- p-hidroxibenzoat de metil ≈ 3,9 min.

5.2.8. Dozare: clorhidrat de metoclopramid şi p-hidroxibenzoat de metilDozarea clorhidratului de metoclopramid şi p-hidroxibenzoatului de metil se

efectuează prin cromatografie de lichide de înaltă performanţă conform Ph.Eur. în vigoare.

Standarde de referinţă şi reactivi:

acetonitril calitate HPLC clorhidrat de metoclopramidă p-hidroxibenzoat de metil acid fosforic hidroxid de tetrametilamoniu acetat de sodiu anhidru alcool metilic calitate HPLC

Prepararea soluţiilor de lucru:

hidroxid de tetrametilamoniu 10% acid fosforic 0,01mol/L tampon acetat faza mobilă: amestec tampon acetat : acetonitril (90 : 10 v/v) soluţie etalon stoc clorhidrat de metoclopramid: 1mg/mL clorhidrat de

metoclopramidă monohidrat (s.r.) în acid fosforic 0,01 mol/L. Se păstrează la frigider 5 zile.

soluţie etalon stoc p-hidroxibenzoat de metil: 1mg/mL p-hidroxibenzoat de metil (s.r.) în alcool metilic. Se păstrează la frigider 15 zile.

soluţie etalon de lucru: 1,60 mL soluţie etalon stoc clorhidrat de metoclopramidă şi 0,20 mL soluţie etalon stoc p-hidroxibenzoat de metil se aduc la balon cotat de 10 mL cu acid fosforic 0,01mol/L.

Pagină 6 / 31


soluţie probă: 0,57 g Metoclopramid picaturi orale se aduc la balon cotat de 25 mL cu acid fosforic 0,01 mol/L.

Aparatură şi condiţii de lucru

cromatograf de lichide tip Varian ProStar detector: Prostar 330 Photodiode Array setat la lungimea de unda de 254 nm coloana cromatografică Inertsil 5 ODS – 2, dimensiuni 250 x 4.6, 5µm debit faza mobilă: 1,3 mL/min regim de presiune: isocratic

Efectuarea determinărilor:

Se injectează:

320µL soluţie etalon de lucru420µL soluţie proba

Din soluţia etalon şi soluţia proba se fac câte 3 injecţii pentru care deviaţia standard relativă nu trebuie să fie mai mare de 2%.

Timpii de retenţie sunt:

5clorhidrat de metoclopramidă ~ 2,3 min6p-hidroximetilbenzoat de metil ~ 3,9 min.

Conţinutul în clorhidrat de metoclopramid anhidru se calculează folosind formula:

în care:

Apm = aria picului corespunzător clorhidratului de metoclopramid din soluţia probă

Aem = aria picului corespunzător clorhidratului de metoclopramid din soluţia etalon de lucru

Cem = concentraţia în clorhidrat de metoclopramid (s.r.) a soluţiei etalon de lucru, mg/mL

G = cantitatea de Metoclopramid soluţie orală luată în lucru, mg

25 = factor de diluţie

0,9492 = factor de transformare din clorhidrat de metoclopramid monohidrat în clorhidrat de metoclopramidă anhidru ( 336,28 : 354,27 în care 336,28 este masa moleculară a clorhidratului de metoclopramid anhidru şi 354,27 este masa moleculară a clorhidratului de metoclopramid monohidrat)

Conţinutul în p-hidroxibenzoat de metil se calculează folosind formula:

Pagină 7 / 31


în care:

Apn = aria picului corespunzător p-hidroxibenzoatului de metil din soluţia probă

Aen = aria picului corespunzător p-hidroxibenzoatului de metil (s.r.) din soluţia etalon de lucru

Cen = concentraţia în p-hidroxibenzoat de metil (s.r.) a soluţiei etalon de lucru, mg/mL

G = cantitatea de Metoclopramid picaturi orale, solutie 0,7% luată în lucru, mg.

Substanţe înrudite chimic cu clorhidratul de metoclopramid

Controlul substanţelor înrudite chimic cu clorhidratul de metoclopramid se efectueazǎ prin cromatografie de lichide de înaltǎ performanţǎ conform Ph .Eur. în vigoare şi British Pharmacopoeia (B.P.) în vigoare, monografia Metoclopramide Oral Solution.

Se utilizează o metodă de analiză lichid cromatografică (HPLC) în regim izocratic, iar evaluarea rezultatelor se face prin metoda standardului extern.

Aparatură:

cromatograf de lichide de înaltă performanţă Varian ProStar, format din următoarele module:

pompă ternară detector UV – VIS DAD autosampler soft pentru achizitia si prelucrarea datelor baie de ultrasonare balanţă analitică Kern

Condiţii cromatografice de lucru

Coloana: Inertsil 5 ODS – 2, dimensiuni 250 x 4.6, 5µm

Lungimea de undă la care se face detectia: 265 nm

Debitul de elutie: 0,7 ml/min

Durata de achiziţie: 20 minute

Volum de injecţie: 20 microlitri

Fază mobilă: se prepară o soluţie de hexansulfonat de sodiu 0,01 M în amestec apă / acetonitril = 50 : 50 (v/v); soluţia obţinută se aduce la pH = 4 cu acid acetic glacial (R).

Pagină 8 / 31

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%Reactivi, substanţe de referinţă:

- acetonitril - Merck (pentru cromatografie de lichide, regim izocratic)

- acid acetic glacial

- clorhidrat de metoclopramid

Prepararea soluţiilor de lucru:

Soluţie test 1: se ia în lucru o cantitate de Metoclopramid, picături orale, soluţie corespunzătoare la 10 mg clorhidrat de metoclopramid anhidru, se aduce în balon cotat de 10 ml, se diluează şi se aduce la volum cu fază mobilă, se omogenizează.

Soluţie test 2: într-un balon cotat de 200 ml se aduce 1ml de soluţie test 1, se diluează şi se aduce la volum cu fază mobilă, se omogenizează.

Soluţie placebo de lucru: se ia în lucru o cantitate de soluţie placebo egală cu cea luată în lucru pentru obţinerea soluţiei test, se aduce în balon cotat de 10 ml se diluează şi se aduce la volum cu fază mobilă, se omogenizează. Soluţia placebo conţine toate componentele prezente în formula produsului finit cu excepţia clorhidratului de metoclopramid.

Soluţie de referinţă : într-un balon cotat de 100 ml se aduc 0,5 mg clorhidrat de metoclopramid, se dizolvă şi se aduce la volum cu fază mobilă, se omogenizează.

Efectuarea determinării:

Conformitatea sistemului:

După echilibrarea sistemului cu fază mobilă, se injectează de 5 ori soluţia de referinţă, se integrează cromatograma şi se identifică picul corespunzător clorhidratului de metoclopramid, se înregistrează urmatorii parametri conform tabelului 6 şi se verifică încadrarea acestora în limitele definite:

Tabel 6

Parametru de sistem Limite de admisibilitateTailing pentru picul de clorhidrat de metoclopramid maxim 2

Se injectează soluţia test 2, se identifică picul corespunzător clorhidratului de metoclopramid şi se setează scala de înregistrare a aparatului astfel încât înălţimea acestui pic să reprezinte cel puţin 50 % din scală.

Se injectează soluţia test 1 şi se integrează corespunzător cromatograma obţinută.

Se injectează soluţia placebo de lucru şi se identifică picurile corespunzătoare celorlalţi compuşi prezenţi în matricea produsului finit, pentru a se putea elimina semnalul emis de aceştia.

Pagină 9 / 31


Se identifică picurile corespunzătoare substanţelor înrudite chimic cu clorhidratul de metoclopramid în cromatograma soluţiei test 1, pe baza spectrelor înregistrate pentru fiecare pic.

Evaluarea cromatogramelor

În cromatrograma corespunzătoare soluţiei test 1 aria oricărui pic cu excepţia picului principal şi a picurilor corespunzătoare matricei nu trebuie să fie mai mare decât aria picului principal din cromatograma corespunzătoare soluţiei test 2 (0,5%).

Nu se iau în considerare picurile ai căror timpi de retenţie relativi (raportaţi la timpul de retenţie al picului de clorhidrat de metoclopramid) sunt mai mici decât 0,5.

3.10.Calitatea microbiologică:

Calitatea microbiologica se verifica conform Ph.Eur. în vigoare.

II. VALIDAREA METODELOR DE DOZARE A

Metoclopramidei din produsul METOCLOPRAMID picături orale, soluţie, 0.7%

Pagină 10 / 31


1. Generalităţi2. Definiţii şi formule de calcul3. Validarea metodei HPLC de dozare a clorhidratului de metoclopramidă

1. GENERALITĂŢI

Metodologia validării are drept scop să demonstreze că o metodă de analiză corespunde utilizării pentru care a fost elaborată şi că performanţele caracteristice metodei considerate, stabilite prin studii de laborator, satisfac cerinţele necesare aplicabiliăţii metodei.

Dozarea este procedeul prin care se determină concentraţia sau activitatea unei substanţe, printr-o metodă analitică.

Validarea metodei de dozare s-a facut ţinând cont de următoarele criterii de validare:

Specificitate Selectivitate Fidelitate:

o Repetabilitateo Reproductibilitate

Exactitate Linearitate Precizie Incertitudine Limita de detecţie Limita de determinare

1. 1. Specificitatea si selectivitatea reprezintă capacitatea unei metode de a

identifica si doza numai analitul, chiar în prezenţa altor specii chimice prezente în proba de analizat.

Specificitatea presupune obţinerea unui semnal analitic provenit numai de la substanţa de analizat, iar evaluarea specificităţii se evidenţiază prin identificarea picului componentului de dozat.

Un procedeu analitic este selectiv atunci când face posibilă detecţia unui analit în prezenţa altora, prin îndepărtarea eventualelor interferenţe care pot apărea în probă.

2. Fidelitatea exprimă gradul de dispersie între o serie de măsurători ce provin dintr-un eşantion omogen, în condiţii experimentale stabilite şi este studiată sub cele două aspecte ale repetabilitătii şi reproductibilităţii.

Repetabilitatea şi reproductibilitatea sunt două extreme, prima masurâd variabilitatea minimă rezultatelor analitice, iar cea de a doua masurâd variabilitatea maximă a rezultatelor analitice.

Repetabilitatea exprimă concordanţa dintre măsurători, în aceleaşi condiţii experimentale: un singur laborator, acelaşi analist, cu aceeaşi aparatură, aceeaşi reactivi şi la intervale scurte de timp, caraterizându-se prin determinarea deviaţiei standard relative şi prin aprecierea intervalului de încredere al valorii medii la un prag de siguranţă de 95%.

Pagină 11 / 31


Reproductibilitatea se apreciază prin calcularea deviaţiei standard relative a reproductibilitaţii şi prin determinarea intervalului de încredere a valorii medii la un prag de siguranţa de 95% în condiţii experimentale diferite.

3.Exactitatea exprimă concordanţa între valoarea acceptată convenţional ca valoare adevarată şi rezultatul obţinut prin utilizarea metodei de analiză, aplicată de un număr (n) de ori. Exactitatea unei măsuratori, numită şi acurateţe, este o măsură a apropierii sau a depărtarii rezultatului ei de valoarea reală. În cazul în care nu se cunoaşte valoarea adevarată, pentru aprecierea exactităţii se utilizează media aritmetică a rezultatelor Xm, considerată ca cea mai apropiată de valoarea adevarată.

Eroarea absolută,Ea, se calculează pentru fiecare rezultat analitic şi reprezintă diferenţa dintre valoarea reală A şi rezultatul Xi al unei determinări:

Ea = A – Xi

În cazul în care nu se cunoaşte valoarea reală, în locul acesteia se utilizează media aritmetică a tuturor rezultatelor analitice obţinute Xm:

Ea = Xm – Xi, Xm = X1+ X2 + X3 + …….. + Xn / n

Eroarea relativă,Er, se calculează în toate cazurile, pentru toate determinările, dar mai ales pentru cazul analizelor efectuate pe concentraţii mici ale analitului, când eroarea absolută nu este suficientă pentru aprecierea rezultatelor. Eroarea relativă se exprimă în procente şi se calculează astfel:

Er = (Ea / A) 100 sau Er = (Ea / Xm) 100 4. Linearitatea unui procedeu de analiză constă în capacitatea sa de a conduce, în

interiorul unui interval dat, la rezultate direct proporţionale cu concentraţia substanţei de analizat, dintr-un eşantion dat; altfel spus intensitatea semnalului analitic variază proporţional cu concentraţia, într-un domeniu limitat.

2. DEFINIŢII SI FORMULE DE CALCUL

Pagină 12 / 31


1.Media (Xm): valoarea numerică obţinută prin împărţirea sumei valorilor unei serii de măsuratori identice, la numărul rezultatelor individuale din serie.2.Eroarea absolută (Ea):

Ea = Xm – Xi 3.Eroarea relativă (Er):

Er = (Ea/ Xm) 1004.Deviaţia standard (s):

s = [ (Xm – Xi)2/n-1]1/2 = [ (Ea)2/n-1]1/2

5. Deviaţia standard relativă (rsd):rsd = (s/Xm) 100

6.Intervalul de încredere al mediei la 95%:A = Xm ± t s/

unde: t = criteriul Student care caracterizează siguranţa metodei de analiză

Tabel nr.7 Valorile lui t pentru nivelul de certitudine de 95%Numărul determinărilor

6 7 18

t 2,57 2,45 2,11

A.VALIDAREA METODEI DE DOZARE A CLORHIDRATULUI DE METOCLOPRAMIDĂ

Pentru efectuarea determinărilor s-au folosit reactivi puri si substanţe de referinţă.Aparatura folosită:- Balanţă analitică Mettler-Toledo- Cromatograf de lichide de înaltă performanţă Varian-ProStar.Determinările au fost efectuate în cadrul laboratorului de cercetare de un singur

analist, la intervale de timp scurte, în zile diferite, pe serii de produs diferite şi cu acelaşi echipament de lucru.

Determinarea parametrilor de performanţă.

1. Specificitatea si selectivitatea

Specificitatea metodei de dozare prin HPLC a clorhidratului de metoclopramidă în produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0.7% se evaluează prin compararea cromatogramelor obţinute pentru:

1.soluţia probă (Fig.1)2.soluţie etalon (Fig.2)3.soluţia martor(fig.3)

Din cromatogramele prezentate în Anexa 1 reiese că metoda de dozare a clorhidratului de metoclopramidă este selectivă şi specifică, principiul activ analizat având acelaşi timp de retenţie cel al substanţei etalon. De asemenea, pentru a demonstra că semnalul măsurat este dat numai de clorhidratul de metoclopamid s-a supus cromatografierii şi o soluţie martor. Prin compararea cromatogramelor se observă că picul caracteristic clorhidratului de metodclopramidă lipseşte din cromatograma soluţiei martor.

Pagină 13 / 31

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%2. Fidelitatea

.2.1. RepetabilitateaRepetabilitatea se referă la folosirea procedurii analitice de dozare a clorhidratului

de metoclopramidă pe o perioadă scurtă de timp, în zile diferite şi cu acelaşi echipament de lucru. Seria 1 Rezultate obţinute într-o singură zi

Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidăRezultate obţinute 0,666

0,6670,6680,6650,6690,667

Nr. de valori 6Media (Xm) 0,667Deviaţia standard(s) 1,41 x10-3

Deviaţia standard relativa (rsd) 0,21%Intervalul de încredere al mediei 0,6655 - 0,6685

A = Xm ± ( t s / ) =0,667 ± ( 2,57 1,41x10-3 / ) = 0,6655 ± 0,0005

Rezultate obţinute în zile diferiteProdusul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidăZiua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6660,6670,6680,6650,6690,667

0,6670,6660,6660,6680,6690,665

0,6660,6680,6650,6670,6690,669

Nr. de valori 18Media (Xm) 0,667Deviaţia standard (s) 1,71 x10-3

Deviaţia standard relativă (rsd) 0,17%

Intervalul de încredere al mediei la 95%

0,6661-0,6679

A = Xm ± (t s ) = 0,667 ± ( 2,11 1,71x10-3/ ) = 0,667 ± 0,0009

Seria 2 Rezultate obţinute într-o singură zi

Pagină 14 / 31


Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidăRezultate obtinute 0,673

0,6700,6710,6730,6720,673

Nr. de valori 6

Media (Xm) 0,672Deviaţia standard (s) 1,51x10-3

Deviaţia standard relativă (rsd) 0,22%Intervalul de încredere al mediei la 95%

0,6704-0,6736

A = Xm ± (t s ) = 0,667 ± ( 2,57 1,51x10-3/ ) = 0,672 ± 0,0016

Rezultate obţinute în zile diferite

Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidăZiua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6730,6700,6710,6730,6740,673

0,6720,6710,6710,6730,6700,673

0,6700,6710,6720,6720,6700,673

Nr. de valori 18Media (Xm) 0,672Deviaţia standard(s) 1,30x10-3

Deviaţia standard relativă (rsd) 0,19%Intervalul de îincredere al mediei la 95%

0.6714-0,6726

A = Xm ± ( t s / ) = 0,672 ± ( 2,11 0,94x10-3 / ) = 0,672 ± 0,0006

Seria 3 Rezultate obţinute îintr-o singură zi

Pagină 15 / 31


Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidRezultate obţinute 0,648

0,6520,6500,6490,6500,651

Nr. de valori 6Media (Xm) 0,650Deviaţia standard (s) 1,41x10-3


0,6485-0,6515

Rezultate obţinute în zile diferiteProdusul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%

Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidăZiua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6480,6520,6500,6490,6500,651

0,6470,6490,6500,6480,6500,648

0,6460,6470,6480,6470,6490,648

Nr. de valori 18Media (Xm) 0,649Deviaţia standard (s) 1,23x10-3


0,6484-0,6496

Deviaţia standard a repetabilităţii este <1,5%, în concluzie metoda de dozare

HPLC propusă pentru dozarea din produsul Metoclopramid picături orale soluţie corespunde din punct de vedere al repetabilităţii rezultatelor obţinute.

2.2 Reproductibilitatea Reproductibilitatea se apreciază prin calcularea deviaţiei standard relative a reproductibilităţii şi prin determinarea intervalului de încredere a valorii medii la un prag de siguranţă de 95% în condiţii experimentale diferite. Determinările au fost efectuate de un în zile diferite şi pe serii de produs diferite.

Seria 1

Pagină 16 / 31


Produsul Metoclopramid picături orale, soluţieSubstanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidă

Ziua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6660,6670,6680,6650,6670,669

0,6670,6660,6660,6680,6690,665

0,6660,6680,6650,6670,6690,669

Nr. de valori 18Media (Xm) 0,667Deviaţia standard(S) 1,43x10-3

Deviaţia standard relativă (SR) 0,21%Intervalul de încredere al mediei la 95%

0,6663-0,6677

Seria 2Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidă

Ziua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6730,6700,6710,673 0,6720,673

0,6720,6710,6710,6730,6700,673

0,6700,6710,6720,6720,6700,673


Deviaţia standard relativă (SR) 0,15%Intervalul de încredere al mediei la 95%

0,6713-0,6727

Seria 3Produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7%

Pagină 17 / 31


Substanţa dozată Clorhidrat de metoclopramidă

Ziua 1 2 3

Rezultate obţinute

.

0,6480,6520,6500,6490,6500,651

0,6470,6490,6500,6480,6500,648

0,6460,6470,6480,6470,6490,648


Deviaţia standard relativă(SR) 0,24%Intervalul de încredere al mediei la 95%

0,6482-0,6498

Metoda de dozare a clorhidratului de metoclopramidă din produsul Metoclopramid picături orale, soluţie 0,7% este reproductibilă, deviaţia standard a repetabilitaţii fiind <1.

3 Exactitatea

Seria 1Ziua 1 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,666 0,0010,667 0,0000,668 -0,0010,666 0,0020,667 0,0000,669 -0,002

Media Xm=0,667 Ea = 0,001 Er = 0,15 %

Ziua 2 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,667 0,0000,666 0,0010,666 0,0010,668 -0,0010,669 -0,0020,665 0,002

Media Xm = 0,667 Ea = -0,001 Er = -0,15 %

Ziua 3 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,666 0,0010,668 -0,001

Pagină 18 / 31


0,665 0,0020,667 0,0000,669 -0,0020,669 -0,002

Media Xm = 0,667 Ea = - 0,002 Er = - 0,30 %


Rezultate obţinute 0,673 -0,0010,670 0,0020,671 0,0010,673 -0,0010,674 0,0020,673 -0,001

Media Xm = 0,672 Ea = 0,002 Er = 0,30 %

Ziua 2 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,672 0,0000,671 0,0010,671 0,0010,673 -0,0010,670 0,0020,673 -0,001

Media Xm = 0,672 Ea = 0,002 Er = 0,30 %

Ziua 3 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,670 0.0010,671 0,0000,672 -0,0010,672 -0,0010,670 0,0010,673 -0,002

Media Xm = 0,671 Ea = - 0,002 Er = - 0,30 %


Rezultate obţinute 0,648 0,002

Pagină 19 / 31


0,652 -0,0020,650 0,0000,649 0,0010,648 0,0020,651 -0,001

Media Xm=0,650 Ea = 0,002 Er = 0,30 %

Ziua 2 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,647 0,0020,649 0,0000,650 -0,0010,648 0,0010,650 -0,0010,648 0,001

Media Xm=0,649 Ea = 0,002 Er = 0,31 %

Ziua 3 Xm - Xi

Rezultate obţinute 0,646 0,0020,647 0,0010,648 0,0000,647 0,0010,649 -0,0010,648 0,000

Media Xm=0,648 Ea = 0,003 Er = 0,46 %

Exactitatea unei metode exprimă concordanţa între valoarea acceptată convenţional ca valoare reală şi valoarea medie obţinută prin utilizarea metodei de analiză, aplicată de un numar de “n” ori.

Exactitatea se exprimă prin regăsirea cantităţii cunoscute a substanţei de analizat, care se apreciază prin abaterea experimentală şi prin abaterea statistică.

Oblicitatea experimentală maximă la diferite concentraţii se apreciază în cadrul intervalului de linearitate:

Xr / Xa . 100 %, Xr = cantitatea găsită Xa = cantitatea teoretică

Xd = Xr - Xa

Oblicitatea rezultă din compararea datelor pentru o concentraţie găsită şi o concentraţie teoretică (TH), în domeniul de validitate presupus al metodei.

Domeniul de linearitate al metodei se situează între 80 - 120 %, în raport cu cantitatea teoretică din compusul de dozat.

Tabelul nr.8 % Xa Xr Regăsire % Xd%

80 % TH 0,531

Pagină 20 / 31


0,5320,5310,528

100,199,8099,40

0,1-0,2-0,6

100 % TH 0,664

0,6650,6630,662

100,299,8099,70

0,2-0,2-0,3

120 % TH 0,796 0,792 99,5 -0,5

Curba de regresie Xr/Xa (valori experimentale) arată o abatere coerentă, dar nesemnificativă.

Se apreciază apoi abaterea statistică globală maximă, asupra unui ansamblu de concentraţii. Dacă Xd este media abaterilor Xd obţinute la toate concentraţiile date în tabelul nr.9 se poate determina abaterea statistică cu ajutorul relaţiei:

în care:L = valoarea teoretică declarată pe eticheta medicamentului condiţionatrsd = deviaţia standard relativă a valorilor găsite în timpul determinării t = variabila Student la o siguranţă de 95 % şi pentru n-1 determinărin = numărul determinărilor, egal cu numărul de probe preparate

Deoarece deviaţia standard relativă este egală cu:rsd = 100 s / Xd se poate scrie:

Pagină 21 / 31


In tabelul nr.9 sunt date valorile oblicităţii statistice maxime:

Xd

0,10,20,60,20,20,30,5

Tabelul nr.10. Abaterea statistică

Numărul de valori (n) 7Media Xd 0,30Deviaţia standard (s) 0,183Deviaţia standard relativă (rsd) 0,061 %T 2,45L % 100Abaterea statistică maximă 0,13

Metoda de analiză propusă pentru dozarea clorhidratului de metoclopramidă din Metoclopramid este exactă, abaterea statistică maximă fiind < 1,5 %.

5 LinearitateaLinearitatea se poate cerceta utilizând datele brute, de la aprecierea oblicităţii

experimentale, ceea ce conduce la un studiu bazat pe datele înscrise în tabelul 11.

Tabelul nr.11 Liniaritatea

Pagină 22 / 31

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%Cantitatea teoretică de clorhidrat de metoclopramidă %g/g

Cantitatea de clorhidrat de metoclopramidă %g/g

(80%)0,5310,5320,5300,538

(90 %)0,478

0,4760,4790,477

(100 %)0,6640,6650,6630,662

(110 %)0,730

0,7280,7270,729

(120 %)0,796

0,7940,7960,792

Din tabelul nr.11 prezentat, reiese că pe domeniul de concentraţii ales, respectiv între 80 – 120 % din concentraţia teoretică (TH) a principiului activ, metoda de analiză este lineară, iar coeficientul de corelaţie al ecuaţiei de regresie este mai mare de 0,9990.

Din datele prezentate în tabelul nr.11 şi conform curbei de regresie se poate concluziona că se respectă linearitatea pe domeniul de concentraţii ales, pentru conţinutul de clorhidrat de metoclopramidă în produsul Metoclopramid picături orale, soluţie.

CONCLUZIE

Din datele statistice prezentate şi din rezultatele obţinute pentru satisfacerea criteriilor de validare alese, se constată că metoda de dozare HPLC propusă pentru dozarea clorhidratului de metoclopramidă din produsul este selectivă, repetabilă, reproductibilă, exactă şi lineară pe domeniul de concentraţii ales. Având în vedere îndeplinirea acestor condiţii considerăm că metoda de dozare propusă este validată.

Pagină 23 / 31


Pagină 24 / 31

Raport de validare METOCLOPRAMID, picături orale soluţie, 0.7%ANEXE

Figura 1. Cromatograma Metoclopramid 1

Pagină 25 / 31


Figura 2. Cromatograma Metoclopramid 2

Pagină 26 / 31


Figura 3

Pagină 27 / 31


Figura 4.

Figura 5.Soluţia test 1 (soluţie probă), seria 1

Pagină 28 / 31


Figura 6. Soluţia test 1 (soluţie probă), seria 2

Figura 7. Soluţia de referinţă (soluţie standard clorhidrat de metoclopramid)

Figura 8. Soluţie placebo de lucru (toate componentele din matrice cu excepţia clorhidratului de metoclopramid)

Pagină 29 / 31


Figura 9.Soluţie test 1 (soluţie probă), seria 1

Figura 10. Spectru clorhidrat de metoclopramidă

Pagină 30 / 31


Figura 11. Spectru pentru substanţe înrudite chimic (impuritate 1, identificată în soluţia 1, seria1)

Pagină 31 / 31

oana cristina badoiu

Documents