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Cada minuto hay alguien

que necesita sangre.

Es alguien que te necesita a vos

NUEVAS TECNICAS DE FRACCIONAMIENTO DE HEMOCOMPONENTES

…del fraccionamiento manual al

automatizado

THEI Cristina Arechabala THEI Beatriz Maddonni

Dra. Mónica I. Puppo Centro Regional de Hemoterapia Garrahan - 2014




METODOS DISPONIBLES PARA OBTENER CONCENTRADOS PLAQUETARIOS (CP)

1-SANGRE ENTERA

PLASMA RICO EN PLAQUETA (PRP) = CP Individuales

BUFFY COAT (BC) = Pooles

2-AFERESIS




SISTEMA DE CALIDAD

a. Basado en políticas nacionales y normativas internacionales

b. Procedimientos operativos documentados y validados

c. Reporte de errores e incidentes

d. Personal entrenado y evaluado

e. Equipamiento e insumos validados y aprobados para su uso




PUNTOS CRITICOS DE LA PRODUCCION PLAQUETARIA

• Selección del donante (POE AT DON 03) = AAS - AINES

• Extracción (POE AT DON 05)

– Lavado y la asepsia del pliegue codo

– Derivación de los primeros 30 ml

– Estandarización de volúmen y tiempo de extracción <15’ con balanzas agitadoras que controlan el volúmen, el flujo y el tiempo de extracción

– Peso Bolsa 523-619 gr

• Almacenamiento previo al procesamiento (POE COMP 04)

– Tiempo < 8 hs (PRP) (o 20 hs para BC)

– Temperatura 20 a 24ºC




Preparación de CP a partir de PRP - POE COMP 04 Centrifuga Refrigerada Thermo Fisher Scientific - Validación

1. VELOCIDAD

2. TIEMPO

3. TEMPERATURA

4. CC CONCENTRADOS PLAQUETARIOS

5. CC GLOBULOS ROJOS




Preparación de CP a partir de PRP (POE COMP 04)

• 1º centrifugación SE a 22ºC, 3.20 min a 2630 RPM para separar PRP y GR

• 2º centrifugación del PRP 22ºC 5 min a 4100 RPM para separar CP y el plasma

• CP deben descansar 1 hora y luego de irradiadas se almacenan 20 hs en agitación a 20 - 24ºC




Preparación de CP a partir de PRP (POE COMP 04)




PREPARACION DE POOLES LEUCORREDUCIDOS POE COMP 05

Seleccionar 3 o 4 CP Isogrupo <24 hs y unirlos en forma estéril con conector




PREPARACION DE POOLES LEUCORREDUCIDOS POE COMP 05

Rotular la bolsa del filtro con los Nº de c/ CP, filtrar, homogeneizar, llenar, rotular y separar la bolsita de muestra p/ realizar el control bacteriológico (POE COMP 14)




RESULTADO: POOLES de 3 a 4 unidades de CP a partir de PRP

• Isogrupo ABO

• Leucorreducidos <24 hs

• Irradiados

• Con control Bacteriológico




Preparación de Pooles = Ventajas

1. Tamizaje de contaminación bacteriana prealmacenamiento

• 1 test x pool= reduce costos y trabajo

2. Leucorreducción prealmacenamiento • Previene producción de citoquinas durante el

almacenamiento

• Previene la aloinmunización postransfusional

• Componentes de bajo riesgo para CMV

3. Conservación x 5 días 20-24ºC (vs 4horas para pooles preparados en circuito abierto)




Procesador Automático de Sangre Entera -REVEOS-

Centrifuga refrigerada computarizada que procesa simultáneamente 4 unidades de sangre entera

Contiene un cabezal con 4 vasos fijos donde se ubican bolsas cuádruples

Cada vaso contiene una prensa hidráulica que permite separar las diferentes fracciones de la sangre centrifugada




Procesador Automático -REVEOS-

Separa la unidad de sangre entera en

• Plasma

• Concentrado de glóbulos rojos

• Plaquetas interinas => Pooles

• Buffy coat

Combina en una misma plataforma

• Balanceo de las unidades

• Centrifugación

• Separación de componentes

• Sellado de las tubuladuras




Procesador Automático de Sangre Entera - REVEOS

Protocolo de validación

Evaluar la calidad de los hemocomponentes obtenidos después de la separación automática con el procesador multi unidades




PROTOCOLO DE VALIDACION DEL EQUIPO REVEOS

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OBJETIVO

1. Evaluar el procedimiento de Procesamiento Automático de unidades de sangre entera con el Sistema Reveos en sus dos modalidades, Fresh y Overnight.

2. Evaluar los descartables utilizados

3. Evaluar la calidad de los productos obtenidos:

• CGR

• Plasma

• Pooles de plaquetas




RESPONSABLES DE LA VALIDACION

De la realización de la validación:

THEI Arechabala Cristina

THEI Maddonni Beatriz

De la supervisión de la validación:

Dra. Mónica Puppo

Dr. Sebastián Oknaian

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DESCRIPCIÓN DEL SISTEMA:

1. Bolsa de sangre Reveos

2. Dispositivo Reveos

3. Software Reveos System




DISPOSITIVO REVEOS




Bolsa de sangre Reveos:




PROTOCOLOS DE PROCESAMIENTO REVEOS

PROTOCOLO FRESH: SE reposa de 2 a 8 horas previo procesamiento

PROTOCOLO OVERNIGHT

SE reposa de 8 a 18 horas previo

procesamiento




MUESTRAS REQUERIDAS (número y tipo)

1. Evaluación del procedimiento de Procesamiento Automático:

- 500 unidades de SE con protocolo 3C Fresh

- 500 unidades de SE con protocolo 3C Overnight

2. Evaluación de los descartables:

- bolsas de sangre Reveos

- pooling set para plaquetas y solución aditiva de plaquetas

3. Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados: se controlarán

- 64 GR (32 F y 32 ON),

- 64 plasmas (32 F y 32 ON)

- 64 pooles de CP (32 F y 32 ON)




CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:

1. Evaluación del Procedimiento de Procesamiento Automático

El procedimiento debe ser eficiente (tiempo versus cantidad de productos obtenidos y desempeño del equipamiento)




CRITERIOS DE ACEPTACION:

2. Evaluación de los descartables

Inspección visual: aguja buen bisel, anticoagulante no turbio, empaque sellado, tubuladura no tapada ni acodada

Compatibilidad con los procedimientos vigentes.





3- Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados:

GLÓBULOS ROJOS:

Hematocrito: 50 - 70%

Hemoglobina: 40 g/bolsa

Hemoglobina libre < 600 mg/dL (<0.8%)

Peso 289 -441 g (ref. Datos históricos)

K+ a los 42 días: <51.8 mEq/l (ref. Evaluation of the properties of components prepared and stored after holding of whole blood units for 8 and 24 hours at ambient temperatura. Transfusion 2011; 51S: 7S.)

Leucocitos residuales < 5 x 106/bolsa

Cultivo negativo

Inspección visual: ausencia de hemólisis y coágulos






POOLES DE PLAQUETAS:

Recuento de Plaq > a 5,5 x 1010 x el número de unidades que componen el pool.

pH > 6,8

Peso de pooles de 3 unidades > 210 g y pooles de 4 unidades > 280 g.

Leucocitos residuales < 5 x 106 leucocitos/bolsa

Cultivo negativo

Inspección visual: observación de swirling






Plasma:

Peso > 193 g (referencia: Datos históricos)

Concentración de Factor VIII ≥ 0.70 UI/mL (%)

Factor V ≥ 0.70 UI/mL (%)

von Willebrand ≥ 0.70 UI/mL (%)

fibrinógeno ≥ 150 mg/dL




INICIO DE LA VALIDACION




Puesta en Funcionamiento del Sistema Reveos

1. Seleccionar el procedimiento (3C)

2. Introducir los código de barras de:

• Nº de identificación de donante

• Nº de lote y marca del descartable TRAZABILIDAD

• Nº operador

3. Cargar el conjunto de 4 bolsas de sangre

4. Realizar el procedimiento (17’)

5. Descargar el conjunto de 4 bolsas




Funcionamiento del Sistema Reveos




COMPONENTES OBTENIDOS Buffy Coat




COMPONENTES OBTENIDOS Concentrado de Glóbulos Rojos

AGREGADO DE SAG MANITOL

FILTRADO PREALMACENAMIENTO

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COMPONENTES OBTENIDOS Unidades de Plaquetas Interinas (IPU)

• IPU provenientes del procesamiento Fresh quedan en agitador para armar los pooles al día siguiente (no más de 24 horas desde su procesamiento)

• IPU provenientes del procesamiento Overnight quedan en agitador durante 2 horas antes de armar el pool.

IPU: unidades hiper concentradas de plaquetas en 30 ml plasma




ARMADO DE POOLES CON EL POOLING SET Y LA SOLUCION ADITIVA




• Isogrupo ABO

• Leucorreducidos < 24 hs

• En solución aditiva (Títulos de aglutininas naturales <1/32)

• Con control Bacteriológico

• Irradiados

ARMADO DE POOLES CON EL POOLING SET Y LA SOLUCION ADITIVA

¿PLASMA? => FREEZER




RESULTADOS DE LA VALIDACION

Se procesaron 898 unidades de SE :

339 procesadas con Protocolo 3C Fresh (500)

559 procesadas con Protocolo 3C Overnight (500)




PROCEDIMIENTO

El procesamiento con el sistema REVEOS es mas rápido y el equipo es fácil de usar (user friendly)

No es necesario balancear las unidades antes de colocarlas en la centrifuga

Es un solo ciclo de centrifugación 17’

No requiere la separación manual





DESCARTABLES

No se observaron eventos relacionados a la inspección visual

Fueron compatibles totalmente con los procedimientos vigentes (bolsa de derivación de los primeros 30 ml, solución aditiva, filtro de leucorreducción de CGR y de Plaquetas)





Calidad de los CGR procesados por Sistema Reveos (67)

Cultivo Negativo (67) Leucocitos residuales (14) 0.21 x 10(6) leucocitos/bolsa (SD 0.17)

REFERENCIA Peso 289 -441 g Vol: 280 +-50 ml Hto: 50 - 70% Hb: >40 g/bolsa Hb libre < 600 mg/dL % hemolisis <0.8% K+ : <51.8 mEq/l Cultivo negativo Leuc. residuales < 5 x

106/bolsa




Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – Recuento de Plaquetas (n 40)

NOTA

• 4 pooles de 4 tuvieron un recuento < al límite de aceptación (22.0 x 10¹º): Rango de 15.85 a 21.06 x 1010 Todas las unidades provenían de procesamiento Fresh

• 4 pooles de 3 tuvieron un recuento < al límite de aceptación (16.5 x 10¹º): Rango de 12.01 a 14.08 x 10¹º todas las unidades provenían de procesamiento Fresh




pH promedio: 7.15 (SD 0.09)

• No hubo pooles con valores inferiores al límite de aceptación.

• 27 Pooles Fresh: – pH promedio: 7.13 (SD 0.10)

• 11 Pooles Overnight: – pH promedio: 7.19 (SD 0.04)

Ref: pH > 6,8

Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – pH (n 38)




Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – PESO (n 39)

Pooles de 3 unidades interinas (n= 15)

• Peso promedio: 278.7g Desvío estándar 11.1g.

• No hubo pooles con valores < al límite de aceptación (210 gr)

Pooles de 4 unidades interinas (n= 24)

• Peso promedio: 302.8g Desvío estándar 14.6g.

• Un pool tuvo un peso 279g < al límite de aceptación (280g)




Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – Leucocitos residuales (n 38)

• Leucocitos residuales promedio: 0.07 x 10(6)leucocitos/bolsa (SD 0.12 x 106)

• No hubo pooles con valores superiores al límite de aceptación.

• 27 Pooles Fresh: Leucocitos residuales promedio: 0.04 x 106 leucocitos/bolsa (DS 0.06)

• 11 Pooles Overnigth: Leucocitos residuales promedio: 0.13 x 106 leucocitos/bolsa (DS 0.20)




Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos

Cultivo (n 38)

Todos los resultados fueron negativos.

Inspección visual (n 40)

El swirling en todos los pooles fue de 4+.




Calidad de los Plasmas procesados por Sistema Reveos (n 66)

Referencias: Peso > 193 g, Factor VIII ≥ 0.70 UI/mL (%), Factor V ≥ 0.70 UI/mL (%), von Willebrand ≥ 0.70 UI/mL (%), fibrinógeno ≥ 150 mg/dL




COMENTARIOS FINALES

• La estandarización de los procesos y de los componentes

• La repetibilidad de los resultados de los controles

• La trazabilidad de todo el proceso de producción: operador, procedimiento, unidades e insumos

• La ausencia de complejidad para el manejo del equipo

• Como los pooles se resuspenden en solución aditiva, se estudiaron adicionalmente, 31 pooles de CP, para la titulación de anticuerpos naturales anti A y anti B, resultando < a 1/32

• Permite procesar unidades hasta 18 hs después de extraídas




• El sistema Reveos permite mejorar la

eficiencia del fraccionamiento,

reduciendo el tiempo de procesamiento,

estandarizando la preparación y

manteniendo la calidad de los

hemocomponentes

COMENTARIOS FINALES

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