noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for gabab, µ-opioid and nk-1...

10
Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABA B , m-opioid and NK-1 receptors Marta Pinto, Deolinda Lima, Jose  Castro-Lopes and Isaura Tavares Institute of Histology and Embriology, Faculdade de Medicina and IBMC, Universidade do Porto, Alameda Professor Hernani Monteiro, 4200±319 Porto, Portugal Keywords: antinociception, double immunocytochemistry, pain, rat Abstract Modulation of nociceptive transmission at the brainstem involves several neurochemical systems. The precise location and speci®c characteristics of nociceptive neurons activated in each system was never reported. In this study, the presence of GABA B , m-opioid, and neurokinin-1 (NK-1) receptors in brainstem nociceptive neurons was investigated by double-immunocytochemical detection of each receptor and noxious-evoked induction of the c-fos proto-oncogene. Noxious cutaneous mechanical stimulation signi®cantly increased the proportions of neurons double-labelled for Fos and GABA B receptors in several brainstem regions, namely, the reticular formation of the caudal ventrolateral medulla (VLMlat and VLMrf), lateral reticular nucleus, spinal trigeminal nucleus, pars caudalis (Sp 5 C), nucleus of the solitary tract, dorsal reticular nucleus, ventral reticular nucleus, raphe obscurus nucleus and dorsal parabrachial nucleus (DPB). For m-opioid receptors, the proportions of double-labelled neurons in noxious-stimulated animals were higher than in controls only in the VLMlat, VLMrf, Sp 5 C, DPB and A 5 noradrenergic cell group. As for the NK-1 receptor, no signi®cant differences were found between control and stimulated animals. According to these results, neurons expressing GABA B , m-opioid and NK-1 receptors at several pain control centres of the brainstem are differentially involved in processing nociceptive mechanical input. The data provide the de®nition of new supraspinal targets for selective modulation of nociceptive neurons in order to de®ne better strategies of pain control. Introduction The transmission of nociceptive information is modulated at several brain regions that collectively form the endogenous pain control system. Stimulation of system components produces hypoalgesia and inhibits nociceptive spinal dorsal horn neurons (Gebhart & Randich, 1990; Willis & Westlund, 1997). Noteworthy is the simulta- neous involvement of the system in the modulation of autonomic, affective and cognitive functions that are known to affect and to be in¯uenced by nociceptive transmission (Lima, 1997). The character- ization of neuronal circuits speci®cally involved in pain control is important in order to develop pain control strategies that avoid side- effects resulting from interference with other functions. Neurochemical characterization of the pain control system was mainly established in pharmacological studies, which evaluated the effects of local application of receptor ligands on pain responses. The most exhaustive studies refer to opioid receptors, namely the m-opioid subtype which has been shown to play a major role in the hypoalgesia induced by morphine injected intracerebroventriculary (i.c.v.; Gogas et al., 1996) into the periaqueductal grey (PAG; Jensen & Yaksh, 1986), mesencephalic reticular formation (Haiger & Spring, 1978) or rostroventromedial medulla (RVM; Levy & Proud®t, 1979; Azami et al., 1982; Yaksh & Melzach, 1999). More recently, other receptors have been shown to be important for supraspinal pain control. These include the B subtype of g-aminobutyric acid (GABA) receptors (GABA B ) and neurokinin-1 (NK-1) receptors. Hypoalgesia is pro- duced by the GABA B agonist baclofen injected i.c.v. (Liebman & Pastor, 1980; Sha®zadeh et al., 1997) or microinjected into the PAG (Levy & Proud®t, 1979) or RVM (Hammond et al., 1998). The involvement of GABA B receptors in pain modulation from the RVM is more complex as both hypoalgesia and hyperalgesia were reported, depending on the baclofen dose (Thomas et al., 1995; Hammond et al., 1998). The involvement of supraspinal NK-1 recep- tors in pain modulation was recently shown as i.c.v. injection of substance P (SP), the preferential ligand of the NK-1 receptor, induces hypoalgesia (Importa & Broccardo, 2000). A speci®c aspect of the question is the participation of NK-1 receptors in the stress produced during noxious stimulation, namely the regulation of cardiovascular and endocrine responses. Intracerebroventricular administration of NK-1 receptor antagonists inhibits cardiovascular changes produced in the formalin test (Culman et al., 1997). Immunohistochemical detection of GABA B , m-opioid and NK-1 receptors in the brain further supported an involvement in pain mod- ulation by showing a clear prevalence ofimmunoreactive neurons in pain- control centres (Nakaya et al., 1994; Margeta-Mitrovic et al., 1999). However, the presenceofsuchreceptorsinbrainstem nociceptive neurons was never demonstrated because of the inadequacy of technical approaches. For example, autoradiographic mapping with 2-deoxyglu- cose was used to demonstrate functional activity in the brainstem (Neto et al., 1999), but the technique lacks spatial resolution (Sharp et al., 1993). Electrophysiological evaluation of single-neuron responses gives infor- mation about a reduced number of cells and is hardly compatible with neurochemical characterization (Fields et al., 1991). More recently, the activation of immediate-early genes, namely the c-fos proto-oncogene, has been used to detect large numbers of nociceptive-responding brain- stem neurons (Harris, 1998) and the technique can be combined with the characterization of neuronal receptors (Todd et al., 2002). European Journal of Neuroscience, Vol. 17, pp. 1393±1402, 2003 ß Federation of European Neuroscience Societies doi:10.1046/j.1460-9568.2003.02586.x Correspondence: Professor Isaura Tavares, as above. E-mail: [email protected] Received 19 September 2002, revised 24 January 2003, accepted 29 January 2003

Upload: marta-pinto

Post on 06-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

������������ �� �� ���������� �� ��������� �������������������� �� ������ �������� ��� ���� ���������

����� ������ �������� ����� ���! "����������� ��� #����� $������������� � ���� �� ��� ����� ��� ���� ��� � ������� ��� ����� ���������� � ���� � ���� ������ ������������ �� !"#$ ���� ������

��������% ��������&���� ��� ���������'������� &���� ���

��������

���������� � ���������� ������������ �� �%� ��������� ������ ������ ������%������ �&�����' $%� ������� �������� ��� �����(��%������������� � ���������� ������� �������� �� ���% �&����)�� ���� ��������' #� �%�� ����&� �%� �������� � ������ ��������� �������������� *����+ ��������� �� ��������� ���������� ������� )�� ������,���� �& ��������������&���%������ ��������� � ���%�������� ��� ������������ ��������� � �%� ����� ����������,���' ������� ��������� ���%������ ����������� ��,��(�����& ����������%� ����������� � ������� ��������������� �� -�� �������� ��������� �� ������ ��������� ��,����� �����&� �%� ��������� �������� � �%� ������ ������������ ������� *.����� ��� .��� +� ������� ��������� �������� ������ ���,������ �������� ���� �������� */�0"+� �������� �%� �������& ������ ������ ��������� �������� ������ ��������� �������� ���%� �������� ������� ��� ������ ��������%��� ������� *���+'-�� �������� ���������� �%� ����������� � ��������������� ������� �� ������������������ �������)��� %�,%�� �%�� �� �������� ���& �� �%�.������ .��� � /�0"� ��� ��� �0 ����������,�� ���� ,����' �� �� �%� ���� ��������� �� ��,��(���� �� ������� )��� ���� ���)���������� ��� ���������� �������' ��������, �� �%��� �������� ������� ���������, ������ �������� ��� ���� ��������� �� ������ ����������� ������� � �%� ��������� ��� �� ���������& ������ �� ���������, ���������� ���%������ �����' $%� ���� ������ �%� ��(������ � ��) ����������� ���,��� �� �������� ���������� � ���������� ������� �� ����� �� ��(�� ������ ������,��� � ���� �������'

#�����������

��� ��������� �� �� ����� �������� � �������� �� �������

���� ������ ���� ���� ����� ��� ��� ���������� ��� ������

������ �������� �� ����� �������� ����� �� ����������

��� ����� �� ����� ����� ������ ���� ������� �������� �

���� �� ����� ��� � �������� ���!"# $���%����� � ��� �����&

����� ��������� �� ��� ����� � ��� �������� �� ������ �

���� ��� ��� ������ ��� ���� ���� ��� '��%� �� ���� � ��� �� ��

�(��� �� �� �� ����� ��������� �)�� ���!"# ��� ���� ���&

*���� �� �������� � ��� ��� + ���� ������� � ��� ������ �

������� � ����� �� ������� ��� ������ ��������� ���� ���� ���&

���� �� �������� ��� ��������� � %�� ����� ��� ����#

$���� �� �� ���� ���*���� �� ��� ��� ������ ����� %��

���� ���������� � ����� ���� �� ������� %� � ��������� ���

���� �� �� �� �� ���� ���� �� �� ����� ������ �� ��� ���������# ���

��� �,������� ������ ����� �� ���� �� ������� ����� ��� �&����������� %� � ��� ���� ���%� �� ���� � �-�� ���� � ��� ����������

��� �� �� ������ �-� ��� ���� ����������� ����� �# #�#� �����

�� ��#� ���." ��� ��� ����/���� ��� ���� �01�� 2����� � 3�'���

��4."� ���� ����� ��� ���� ������� �5���� � ������ ��!4" ��

���������������� ������ ��67� )��� � 0����+�� ��!�� 1*�

�� ��#� ��48� 3�'�� � 7��*� �� ����"# 7��� �� ������ ����� �� ������

���� ���� ���%� �� �� ������� ��� ���������� ��� ������# �����

� ���� ��� 9 ������� �� �&�������� � � ��191" �� ��������1919" ��� �����'��&� �$:&�" �� ������# 5��������� � ���&

�� �� �� ��� �1919 ������ �� ����� �-� ��� # #�# �)���� �

0������ ��4�� ���+*���� �� ��#� ���!" �� ���-� ��� ��� ��� 01�

�)��� � 0����+�� ��!�" �� �67 �5���� �� ��#� ���4"# ���

��������� �� �1919 �� ������ � ��� �������� ��� ���

�67 � ��� ����, �� ���� ���������� ��� ����������� %���

��������� �������� �� ��� �� ����� ���� ������ �� ��#� ���;�

5���� �� ��#� ���4"# ��� ��������� �� ���������� $:&� �� ��&

���� � ��� �������� %�� �� ����� ���%� �� # #�# �-� ��� ��

������� � 0 ��0"� ��� ����������� ����� �� ��� $:&� �� ������ ��� ��

���������� �<����� � 9�� ����� 8���"# 1 ��� + ���� � �� ���

/������ � ��� ���� ����� �� $:&� �� ������ � ��� ������ ����� ��

����� ��,��� ��������� ����� ��� ��������� �� ������� ����

��� ���� ��� ���������# <���� ����������� ���� ���������� ��

$:&� �� ����� ���������� ����� ������� ���� ������ ����� ��

� ��� ������ ���� �=���� �� ��#� ���!"#

<������� �� �� ���� ��� �� �1919� �&���� ��� $:&��� ������ � ��� ���� ������� ��������� �� ��������� � ��� ��&

�����������%��� ������������ ��������� ���������� ����&

������ ������ �$�'��� �� ��#� ���>� 7������&7���� �� ��#� ����"#

5�%����� ��������� ����� ��� ���������������� ������������

%�� ����� ����������� �� ���� �� ��� ����/�� � �� �� �� ��

������ ���# ?�� �,����� ������������� ����� %�� 8&���,����&

��� %�� ���� �� ���������� ��� ����� � ���� � ��� ������� �$���

����#�����"���� ��� �� ��/�� �� '������� �������������������#� ���@"#

A�� ����������� �� ��������� �� �����&������ ��������� ���� ����&

���� ����� � ���� �� ����� �� ���� ��� � ������ ������� %��

����� �� �� ���� ���*���� �?���� �� ��#� ����"# 7��� �� ������ ���

� ������ �� �����&����� ������ ����� ��� &��� �����&�� ������

��� ���� ���� �� ���� � ����� ������ �� �� �����&��������� ����&

��� ������� �5����� ���4" ��� ��� �� ��/�� �� �� �����%�� ���

���� ���*���� �� �������� �� ������ ����� �� ��#� 8��8"#

����� ��� �� �� �������� �� � ���� ��� ��� ���������� ���� � ��������� �� ����� �������� �� ���������

��B��#��>.C-#�>.�&�;.4#8��@#�8;4.#,

�������� �� ��B 0�������� <����� �������� �� �����#

A&��B �����D��#��#��

����!�� �� �����"#�� ����� ��!���� �� �� ��$ ����� �������� �� �� ��$ ����

Page 2: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

<� ��� ������� ������ %� ����� ��� ��� ��� �� �� ���� &

��� �� &��� �,�������� � ������ �� ��,��� � ��� �� ��������

��������� %�� ��������� ��� �1919� �&���� �� $:&��� ������ � ������� �������# ��� ����� � ��� �� ����������

��� ��������� �� ����� �� ������ � ���������� �������� ��

�� ����� ��������� � ����� �� ������� ���� ��� ��������� ��

�������� ���������#

��������� ��� ���%���

����� ����������

1���� ��� ���� ���� �@@�E>�� �" ������ ��� ��� ����� �� ���

������'�� <������� �� � �� � �F����� 0�������" %��� ������ �����

����������& ��� ����& ��������� ������� �88 �=� ����� �� ����4#�� � �� 88#�� �" %�� ���� � ��� �� ���� ��� %����# A,�������

%��� ����� ��� � � ����� � %�� ��� A������� =����� =��� �

G�� ��� �4.C.��CAA=" ��� ��� ��� �� �������� ��� ��� �������&

��� � ����� �H������ ��4@"# �� ��� ����� � ������ ��

��� �,��������� ��� ���� %��� ������� ������ �� � ��� ��� ;E!�

����� ��� ; ���� ������ ��� �,������# 9��� ��� ���� ������ ��� ���

�,������� %��� �������� ���%��� �4#�� � ��� �8#�� �# 1����

%��� ���������*�� %�� ���� ������������ #�# �;��C'� ����

%���� ��� ��� ��� ��� 8��C'� ���� %���� .� ��� ����

�����%���� ��� ������� �"# <� ��� ������ ����� � � ."� ��� �����%��� ��� ���-� ��� �� ��� ������� ��������� ���� ��������� 8 � �����

����������# <� ��� �������� ����� � � ."� ����� %��� ������� ����,��� � ��� �� �������� �� � ����� ��� ���� �� ��� ������ ��

��� ���� ��������� �������� �� ��#� ���@"# 9��(�� ��� ���� �'� ��

��� ���,�� ������� ���� � �� ��� ���� ���� %�� �� ��� ���� ���

����� 8� %�� � ���&����� ��� ���� ��� 8 �# 1���� %��� ����

�������� ������� ��� �� ����� ����� %�� ���) �� �&���� ��&

����I� �������� �����%�� �� !;�) �� � +,���� ������� �������

>J ��������������� ��� �>J � � � � � �#�7 ��������� ������

�09"� �5 .#�# ��� ������� %�� ������ ��� ����� � +,���� ���

> �� �����%�� �� @�J �� ���� � �#�7 ���������&�������� ����� �09�"

��������� ���� �� > �=# =������ ���*�� �� ���� �>�&�&�� '" %���������� ���� ��� � 09�#

������� ���������

A���� ������ �� ��� ���� ��� >� � �� ����" %�� ������ ������ ����� ������ �8�� ����&�� ��� ��������# ��� +��� ��������� ��� �� �� ���� ��� ��� ��� ����� %�� ����� �������# A� �

����� %�� ������� �� ��� �� ��� ����� ������&���������

��� ������# 1 +��� ��� ��� %�� �������� ������ ��� �� ��� �� ������

�����%�� �� ��������� �� ?�� ������# �� �� ����� �� '������

������� � ������ � �� � ����� ������� %�� ��� ���� ��

����� ��� 8 � � � 09� ������� ������� �#@J ����� K&���

�09��"� �#�7 ��� �� ��� ��J ����� ���� ����� �� � ��� ����

��� �� � %� � ��� �� ������ ������� %�� �����# 1 ����� ��

������� ������ ��� �1919 �� ����� �19�;@�� =�� ��� L�1"

%�� ���� �� � B �� ���� ��� !8 � �� > �=� �����%�� �� � ���������� �������&����� �� ������� �� � B 8�� �6� ���� L�1"# ��� �������

������ ��� �&���� ��1 ����>� $���� �� L�1" ��� ��� $:&��19 ;�.�� =�� ��" �� ������ %��� ����� � ����� ��� �����

����� ������ �� � B �; ��� ��� � B 8;�� ��������� �� ��� �����������

�����%�� �� � ���������� �%�� ���&����� ������� �� � B 8�� �G�'��

G����'"# 1�� �� ���� %��� ���� ��� ����� �� ��� 19= �����

�6� ������� 6� ���" %�� G19 �� �������� �� ��� ���� ���������

�������� �� ��#� ���!"# ?����%�� �������� %����� � 09��� �� ����

%��� � ������ � � ����� ���&?�� ���� ����� ������� �1�;� F� �&

����� ������" �� � B �� ���� �������� �� ��� ����������� �����%��

�� � ���������� �%�� ���&����� �������� �� � B 8�� �G�'�"# ��� ?��

������ ��� ����� � %�� �������� �� ��� ����������E��'����

����������� ������� �6� ���" �� � B ����� �����%�� �� ��� ?��� 9���

������� �9����� �� ��#� ��44"# �� ���� %��� ������ �� ������&

����� ������ ������ � 5��� ���� ��� ���������� %�� 0������#

<� ����� �� ������ �������� ��� ������ ������� �� �� ��� ������

��� �� ������� �� ����� ��� ���� ��� ������&���������� %��

��������� ��� ?�� �� ��� 19= ����� %�� ��� G19 �������

�� ������ ������������ %�� �����&����� �G���� '� ��!>"�

������ � ,���� ��� ������ � A�'��#

��� ��� + �� �� ��� ����� ������� %�� ���� �� ��� ��������#

9� ���� �������� ������ $:&� ��� �&���� �� ������ %��� ����� ���� ��� ��� �� �� ��� ���&?�� �������� ��� ������� � ����� � ��

����&��� ��� � ��� ������ ��������� ��� ����� %�� �� '��

�� ����� �� ��� ���&?�� ������� �� �� ���&?�� ������� ����� �

����� ���� � ��8�>:� �������� L:" �� � B .��� �����%�� �� � ���&������� ���'�� ���&����� ������� �� � B 8�� �G�'�"� �� �� �����

�� � �� ��� �� ������ �������� ���� � ��� ������ ������ ���#

��� ����� ���� �� ��� ���&?�� ������� �� ��� ���� � ��� ������� ��

&��� �������� ��� ��� ����� �� ��� �� ������ ������� �� ���

����� ��� �������� ������ �� ��� ������&������ ���� %� � ���

�� ����� ���� �� ���+ ��� ����&��� ��� � �����#

������� �� ������

=���� �� �� ���%��� �� �� ���� ������ ��� ��� ?�� ���

������������ %�� �����&����� %��� ������� ��� ��� �������

�� �� %��� ������ � ����� �� 0�,��� � ����� ����4"# �����

�������� �� ��� ����� ������������� ������ �6)7" %��� ��������B

�" ��� ������� ��� ���� �� ���� �)��"� %�� �� ���� ������� �)��"

��� ����� ������� �)���" ��������� �" ��� ��� ���� �������

���� 6)7��� �������� �� ��#� ���@� ������� � )�� ���>"� �� ����

���%��� ��� )�� ��� ��� ����� ������� �� ����� ���� ������

���;="� ��� �" ��� ������ ��� ���� �������� ���� ���� 6)7��

�?�# �"� ���� ���%��� ��� �� ���� ������ �1�" ��� ��� )�� ���

��������� �� ��� ������# ��� M1; �����I ���������� �� ��� ������ ����

�� �� ���� �� ��� ����������� ����� 1;� ���%��� ��� ������ �������

�� ���� ��F" ��� ��� ��� ��� ������� �� ���� �0�;6)"#

?��&������ ��� �<�" ������� � ����� � ��� ������&������

�� ���� %��� ������� �� ��� ���� �� �� ���%���� ���� � ����

��� ����� ���� ��������� ��� �������� ��� '��%�� ��� �,��������

�����# 1������ �� ��� ��*���� �� �� ������ ��� ?�� ������ %��

�������� � ������� ����� %�� ���+ ��� ������� ��� �� ���

�������I� �&����� ���%��� ��� ������ �� ?��&<� ������� � ������

��� ��,���&�������� �����# <� ����� ������� ��� ��� ����

��� ����� %�� ���� �� ���� ������� ������ ��� �� � �� ����� ��

������&������ ���� ��� ?�� ��� ��� ��� �� ����� �������&��������

�������"# �� �����&�������� ������� %��� ���� ������ � ��� ���

�� ���� %�� ����� � ��� ����� �� �� ��# <� �� � ������� ������

��� ���������� �� ������&������ ������� ��� �� � �� ����� � ���

����� ��������� �� ������� ������ ��� ��� ���� �� ����� %���

������� �� ��� �������I� �&����� ���%��� ������ ��� ��������

�����#

1������

��� ����������������

?�� ������ %�� ���� ��� �� ��� ���%� �� ���� ��� ����� ������ ���

��� �� ���� ����� ����� ������ G19 �� ?��� 9��� �� ��������

�?�� 8 ��� @"# ��� ��������� �� ?��&<� ������� � ��� ������� ��

������ ��� �������� ����� � �� ���� � ?�# � ��� ��������� �

� /��������� ����� � ?�# ># <� ��,���&�������� ������ ���

�@�> 7# 0��� �� ��#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

Page 3: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

����� �� ?��&<� ������� ���+ ����� � ������ ���� ������� � ���

6)7���� )��� 6)7�� �?�# 81 ��� 9"� ��;=� �� ���� �� ��� �������

��� � ����� ?�# 8= ��� G"� ������ ��� ���� �� ���� �G��"� �������

��� ���� �� ���� �6��"� �� ���� ����� ��� ���� ����"� ������ ����&

��� ��� �� ���� �G09" ��� 1; ����������� ����� �?�# 8A ��� ?"#

������� ����������������

�� ����� ������ ���� %�� ����+�� �� � ���%� ��� ����� ����

��� ��� ���� ���� �,������ �� �� �� ���&����� �������� �?�# @"# <� ���

��� �� ��� $:&� �� ������ ������ ���� ������� �������� �� ���

������� ������# $������ ������ ��� ��� ��� �1919�� ����� � ����� �� ��� 6)7���� )��� 6)7��� ��;=� ���� G���

6��� ����������� �� ���� ���"� ������ ���� �� ���� �� ����� ��8"�

����� �� �� ����� �� ���� ����� ������� ��� ��"� ������ �����

�� �� �� ����� G09� �� �� �������� �)="� 1; ������ ��������

�� ���� ���"� ��������� ���� �� ���� �<0"� ����� ���� �� ��� ������

��� ���� �� ���� �0�="� ������� ��� ���� ��=" ��� ������ ��� �&

���# $������ ������ ��� ��� ��� �&���� �� ����� � ����� �� ���6)7���� )��� 6)7��� ��;=� ���� G��� 6��� ����� �� ��� G09� 1;������ ��� ��������� �� ���� �6�"� <0� ��� ����� �� ����� �=� 0�=�

���� ����� ��� ���� �� �� ��� 01�# $������ ������ ��� ���

��� $:&� �� ����� � ����� �� ��� 6)7���� )��� 6)7��� ��;=� ����

G��� 6��� ��� �� �� ����� ������ �� ����� ��� �8� ����� �� ��� G09�

1; ������ ��� 6�� �=� ����� �� ����� <0 ��� 01�#

���� �# G����� ��� ��� ��� ��������� �� ?��&<� �� ��� ������ %�� ?��� 9���� � ��� ������� �� ������ ����� ����" ��� �������� ����� ����" �����#��� ������ ����� ����� � �� ���� �� ���� �� ��� ����� � � ������� ��� ��� ��������� ���� � ����� �� 0�,��� � ����� ����4"# ��� ����� ����� �� ��������� ����� � �� ������� �� ��� �� ���� � ���������# A� � ��� ���������� ��� �������# ��� ������ ���� � ��� ��� ����� �� ��� ���������� ��� 6)7��# ?������������� ��� )��#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

7������ �� ������ �� �� ����� ������� ������� �@�;

Page 4: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

1� ��� ������ �������� ��� ������&������ ������� �� ������ ��

������� �� %��� ����� ���%��� ��� ������ �� ������� <� ��� �� �

�� ����� � �������� ��� ������ ����� �?�# ;"#

����� ��������

G�����&������ ������� %��� �� ���*�� �� ��� ����� ����� �� ���

�� ���� ������ ��� ?�� ������ ���������� �� ��� ���%� G19 ���&

����� �� ��� �� ����� ������ ��� �?�# @"#

?�� �1919 ����&���� �� ������� ������&������ ������� � ������ ��� ��� ������ �������� �?�# ."# ��� ���������� �� ������&������

������� ��� �1919 � �������� ����� %��� ����� ���� � ������

����� � ��� 6)7���� )��� 6)7��� ��;=� ���� G��� 6��� ��� ���

G09 �?�� @1 ��� ."# <� ������ ������ ��� ��������� � ��� G09 ��

��������� � ��� )���# ?�� ��� �&���� �� ������ ��� ���������� ��

������&������ ������� � �������� ����� %��� ����� � ���

6)7��� 6)7���� ��;=� G09 ��� 1; ����� �?�� @9 ��� ."# ���

� ������ � ��� ���������� �� ������&�������� ���� ������� ������

��� ��������� � ��� G09 �� ��������� � ��� 1; �����# $������

������&�������� ��� ��� $:&� �� ����� %��� ������� ���� �� ���

6)7���� ��;= ��� ��� �?�� @= ��� G� ��� ."� ��� �� ���+ ���

������� �� %��� �������� ���%��� ��� �%� �,�������� ������#

����������

����� ��������� �� ��� ���������

��� ���������� �� ��� ?�� ������ ���� ��� �� ����� �� �����

� ������ �� ������� ������� %�� ��������� �����������

���� 8# 0���� �������� �� ��� 6)7 �1 ��� 9"� ��� �= ��� G" ��� 1; ����� �A ��� ?" ��� ��� ?��&<� �� �� � ����� � ������ �1� = ��� A" ��� ��,����������� �9� G ��� ?" �����# � ��� ����� ����#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

�@�. 7# 0��� �� ��#

Page 5: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

�:��'���� ���>"# 5�%����� �� ��� ���� '��%������ ����� �� ?��

�,������� � ��� ������� � �������� �� 8 � �� ��,��� � ��� ��

�������� �� ��� �'� %�� ���� �������� ��� ��� +��� ��# =&���

��� ��� � ����� � ����� ��������� ���%� �� ���� ���� � �� &

����� ��� ����� �)����N�&7��� �� ��#� ���@� ��� � G��� ���>�

2���� � 9���� ���;� ������� �� ��#� ���4"# 5�%����� ��� ��%

+����� ������ ���� ���� �� � ������ �� ���� � ���� � ��,���

�������� ������# $�,���&���'�� &��� ��� ��� %�� ���

���� ��� ��������� � ��� ��� ��� 1; ����������� ������ ������

��� �� � ���� ���� ����� ���� ���� � ��� �������� �1 ��� �

���� �� ����� 9������ � �������� ����"# =&��� ��� ��� � ��� ��;=

�� ��,��� ����� �������� %�� �� ���,�� ��� +���� �� ���

����������� ����%�� � ������� �������� �� ���� ���� � ��� ��

���� �0����� � ?����� ����"# 5�%����� ��� ������� ��� � ��������

%�� �� ��� ��� ����������� �� ������� %� � ���%�� ���� �����

����� ������� ���� ���� � ��� ��������� �� ������������ ����

�� ��� ��;= �G��� �� ��#� 8���"#

����� ������� ������� ��������� �� ������� ����������

��� �� ���� �� �1919 �� ������ � ��� ������ ������� ����� �=$�"

��� ���� ���%� �� ���� ��� �� ����� ��� ������ �9�%��� �� ��#�

��4!"� � ��� �����*���� �:������ �� ��#� ���!" ��� �����&

���� @# 0���� �������� �� �� ���� ������ ��� ��� ��� ?��&������ ��� �1919 �1"� �&���� �9" �� $:&� �= ��� G" �� ������# ?��&<� �� �� �����%�����" �������+�� �� ���� ����� ������ ������� ������ ��� ���� ��� ��� �� ������ ���� ����%�" ��� �� ���*�� �� ��� ���%� ��� ����� �� ��� ���'���� ��� ������������ ������&�������� ������� �� ��� ����� �� �� ���������� �� ���%� ���'���� ��� ' ����%�"# � ��� ����� ;��#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

7������ �� ������ �� �� ����� ������� ������� �@�!

Page 6: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

�� ������ �7������&7���� �� ��#� ����"# 1 ���� ��������� ��

��� �� ����� %�� �������� ���� � ��� �������# 5�%����� �� ������

�1919&<� ��� ������ ������� �������� � ��� ������ �� �������

%��� ���� ���# <� � ������� �� �,���� ��� /��������� ������� ��

�1919 �� ������ �� ����� =$� ������ � ����� �� �������� ���

�,���� � �� ������� ������� ������� ��#

��� ��� ������� �� ������� %�� �1919 �� ������ ���� �,�������

?�� %��� /��� ��% � ������ ������ ������ ��� 8J �� ��J# <�

����� ���-� ��� �� ��,��� �������� ����� ��� ������� %���

� ������ ������� �@E!&����" � ��� ������� ����� ��������� �����

��� 6)7� ��;=� ���� G��� 6��� ��� ��� G09# ����� +����� ���� ��

� ������ ��������� �� �1919 �� ������ � ��� �������� ��

�� ����� ��� ����� �� ��� ������� �� ����� ������ ��� '��%�

�� ���� ���� � ��� �������� �2����� ���8"# F�� ����� ������� ���

��+���� �� ��% ������� ������� ��� ���� ���� �� �1919 �������

��� ��� ������# ��� ���������� �� �� ����� � �� � �������

������ ����� ��%����� ����� � ����, ���� �� �� ��� ��������� ���

������� �� ����� ����������� ���-� ���� ��� ��� �67

����� � ���� ����� ����� ��� ������������ �������� �� ��� ����

������ �� ��#� ���;� 5���� �� ��#� ���4"#

������� ������� ������� ��������� ��������� ����������

1 ������ �� ��,��� � ��� �� �������� �� ������� %��

�&���� �� ������ � ��� ���� � � ��% �� ����� ������� ������������ ��� ��� ���� ������� �� ��� 6)7� ��;=� G09 ��� 1;����������� �����# ��� ���� ��� �,������� �������� � ������

��� ������� ������� �� ���� ��� ���� # #�# ���������� ��

�&���� ������� �)��� � 0����+�� ��!�� ?� �� �� ��#� �����"# <��� �� ������ %�� ���%� �� ���� �� �� ��� ������ ��� �����

���-� ��� � ��� 6)7 �� ��;= ���������� �� ��#� ��4@� F������

�� ��#� ��4.� F����� � �������� ��4.� G���� �� ��#� ���."# <� �

��������� ������� ���� �&���� �� ������ ��� ������������ ������� ����� � ��� ������� �?� �� �� ��#� ����"#

1��� ���� �� ������ � ��� 01� �� �67 ����� �� ��������

������� ��� � ������ �� ��� 01�E�67E����� ����%�� �?���� �

9������ ��4�� ?���� �� ��#� ����"# 9� ���� � ������ �� �&���� ��& ������ ����� �������� � ���� �G������$����� ��4>� 7 ?��*����

��44"� � ��� ���� ������ ���� ������ �������� � �� ���� ��

��������� �� ��� 01�E�67E����� � ��# ��� %���� �� � �����

���� ># $����� ����� �A7" �� ?��&<� ������� � ��� �������# <� �� � ������ ��� ���� ��������� ������� ������ �� ������� ������ � >� � �� ����� ��'�� ���8�� �������� ���������� ��� ������ ����� �,���� �� ���� ������ � ������ ���� ��� ����" ��� ��,���&�������� ����� ����" �����# ?�� ����������� ��� )��#�%� �#�;� ��%� �#��� ���%� �#���#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

�@�4 7# 0��� �� ��#

Page 7: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

������� ������ �� �191��� ������� ����� ���� ���� �� ���

01�E�67 �� �67E����� ����%���� %� � ������� �&���� �� ��&���� �?���� � 9������ ��4�� ?���� �� ��#� ����� :����*��� �

���������� ���4"# ��� ������ � �� �� ����� ������� ������ �&���� �� ������ � ��� 6)7� ��;=� G09 ��� 1; ������ ����� %�� �

��� ������ �� �191��� ������� �����&7������ �� ��#� ��4@"�

�������� ���� ���� � ������ �� ��� ���� ��� �,�� � �����

������# 1 ������� �� ����� ���� �� ��� ���������� �� �&

�/��� ���� �� �� ������ �� ���������� ��� ��� + ����� ����

���%��� ������� ��� �191��� ������ � ��� �������#

!�" ������� �������

��� ��������� �� $:&� �� ������ � ��� ������� ����� � � ��������

%�� ���� �������� ��������� �7���� �� ��#� ���@� $�'��� �� ��#� ���>"�

�, ��� ��� ��� ����� � �� $:&� �� ������ � ��� )=# ��� ���� ��(� �

������� �� � ��� �������� �� ��� �������� � �� � � ���� � ��%

������ �� $:&�&<� ������� � ��� )= %�� �������� �7���� �� ��#�

���@� $�'��� �� ��#� ���>"#

��� ��������� �� �0� ��� ����������� ����� �� $:&� �� ������� �

��� ��������� �� ��� ����� ��� ��� ���� ������ ���������� �G����

� 5���� ����"# ��� ����� � �� &��� � ������ � ������� �������

�,������� $:&� �� ������ ���� �� �,������ �� ��� ������ �� ���

��,��� ������ �� �� ��� �� ' �� ��,���&���'�� ������# <���� ��&

�������� ���� �-� ��� �� �0 ����� �� ����� ����� � �������� ��

���� �� ��� �� �� ���� �������� �?����� '�� �� ��#� ��!4�

$����-� �� ��#� ��48"# ?���������� $:&� �� ����� '�� '��� �

�������� ��� ��������� �� � ��� �� ��,��� ������ ��� ��� ��

������� �� �� �� �������� �)��� �� ��#� 8���"# 9� �������� # #�#

���������� �� $:&� �� ����� ���������� �������� ������� ����

��� ���� �� ��������� ��,��� ��������� %� � �� ���� ����

���������� $:&� �� ������ ��� ���� ������� � ��� ���������

�� ������� ���� ��������� �� ������ ��� �� �� ��� �=���� �� ��#�

���� ;# $����� ������A7" �� ������� ������ ��� ��� �1919� �& ���� �� $:&� �� ������ � ��� ������� �� ������ ���� ��� ����" ��� ��,���&�������� ����� ����" �����# ?�� ����������� ��� )��#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

7������ �� ������ �� �� ����� ������� ������� �@��

Page 8: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

���!� 9������ �� ��#� 8���"# <� ��� ����� �� � ������ �� ����� ���� ���

��,��� �������� ����� �� ���� � ��� ������� ����� � ����� ��

������� ���� �� ����� �� ������ �������� �� ��#� ���!"# G��� �

��,��� �������� ����� ��� ��� ���� ���� � ����� �� ��������

��� ���� �� $:&� �� ������ � ��� �������� �� ��� �������#

"����������

1 ����� �� ��� ������� �������� �1919 �� ������ ���� � �-�� ���� �

������� �� ����� ��� ����� �� � ��� �� ��,���# ?������&

���� �1919 ��� �&���� �� ������ ������ �� �� ������������������� � ��� ����� �� �� ����� � ��� �� �������� �

���� � ������� �� ��# ��� ������ � �� ��� ����� ���� ���%���

�191��� ��� ������� ������ � ��� �������� � ��� ����&

��� ����� ��������� � ��� ������� ����� ����� �� �� ��������#

7��� ���������� ��� ���� ����� �� ��� �1919 ��� �&������ ����� ������ � ��� ���� ����� ���� ��� ������ �� ��� ���

������� ����� ��� �� ���������� � ����� �� ������� ���� ���

����� �� �� ������ ��� ��� ������#

����)���,������

��� %��' %�� ��������� �� ���-� � ��# 0F=�<C$�AC@4�;8C8��� �� ?=��������'�� 0�� 0������ ��� 9�� ?��������#

������������

��� ������ ���� �� ���� �� ��� ������ �8� ����������� �� ����� 1;� ����� ����� 1; ����������� ��� ������ 1�� ������ �� ����� =$�� ������������� ������ =�� ������ �� ����� G0�� ������ ���������� ��������� ����� G09� ������ ������� ��� �� ����� G�� ����� ������ �� �����

���� .# 0�� ������ ������A7" �� ������&�������� ������� ��� �1919� �&���� �� $:&� �� ������ %�� ?�� ������ � ��� ������� �� ������ ���� ��� ����" �����,���&�������� ����� ����" �����# ?�� ����������� ��� )��# �%� �#�;� ��%� �#��� ���%� �#���#

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

�>�� 7# 0��� �� ��#

Page 9: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

G��� ������ ��� ���� �� ����� A �� �,������ ������ �� ����� �191� �&�������� � �� �� ������ ������� ��� ���� �� ����� ��� ��� �� �� �����# #�#� ���� ����������� ����� <A��� ����� ����� ������ <F� ������ �����:?� :�O��'��&?��� �� ����� )=� �� �� ��������� )0�� ������� ����������& ������� �� ����� )��� ������� ��� ���� �� ����� )��� ������� ��� ���� �� ��������� ������� ����� )���� ������� ��� ���� �� ����� ����� ������� ����� $:&�������'��&�� 09� ��������� ������� 09�� ���������&�������� ������ 0=�������� ������� ��� ���� �� ����� 0�=� ������ ��� ���� �� ����� ����� �����0�;6)� ��� ��� ������� ������� �� ����� ������������� ����� ��� ���������� �� ��,� ������� �� �������� ��� ����� ����� �� ����� ���� �������� ���� �� ����� ���� ����� ������� �� ����� �6)� ���������������������� ���� �� ����� �67� ������� ���������� ������� �F� ������� ��������� �� ���� �� ��� ������� ��� �� �0� ������� � 0� ��;=� ����� ��������� ����� ����� ����� ��;<� ����� ������� �� ����� ��������� ����� ��;F������ ������� �� ����� ���� ������� �������� �� ����� 6�� ����������� ����� 6)7� ����� ������������� ������� 6)7���� ����� �������������������� ���������� ������� 6)7��� 6)7 ��� ���� ������� ����� ���� ���6)7���� 609� ������� ������� ��� �� ����� 6��� ������� ��� ���� �� ����#

1� �������

1 ���� �#1# � ���� �� 1# �����" 1���� ����� ��� ������� ������������� ����� �� �� ��� �� �� �������� � ��� �� ���� ��� ��� ����������� ���� ��� ����� ��������� ��� ��� ����� ������� %�� � ��� ��������

1*�� 2#� )�%����� 7#9# � �������� 7#5# ���48" ��� ��������� �� �� ������� ����� ���������� �������� ��� �� ���� ����� ����� �� ��� ������������� �� �� ����� ���� ��������� ������� ���������� %�� ��� ���-� ��� �� ��/��� %�� � ��� ������

9������ �#� 1��������� :# � ����� �# ���44" 6����*���� �� =��0 ��� =�1�&�'� ������ ���� � ����+�� ������� ������� �� ����� ����,&���� ��� ��'���� ����������� ��*��� ��� ����� &��� ���� ����������

9������� 2#� ���*������ 5#� 5�������� �#� L����� �# � =����� 2# �8���"�� ��'�� �� ����� ������ ��� &��� �,������� � ��� ��� ���� �����%��������&��� �� ���� �������� ��� ��� ��������

9�%���� $#�#� 5������ 1#)# � 0� �� �# # ���4!" �1911 ��� �1919�� ����� ��������� � ��� ��� ������ ������� ������ �������� ��� ���� �����

9������� A# � �������� �#5# �����" =���� ���*���� �� ��� ����� ���������� �� ����� ��� ��� 1; ��� ������ &��� ���� ���� ��������

=����� 2#� :���� �#� F��������� =# � L����� �# ����!" A��� � �� �� ��'���� ����� ������ � ��� ���� �� ������� ���� ��� ���������� ����������� ������� �� %'��"� (�� )'���� ��� ������

G���� ?#� 7��� 7#� �� �� =������ 7#6#0# � ����� A# �8���" 2�% �� ���������� �� �������� �� ���� << ������������ ��������� �� ��� � ��� ����(�� &��� ���� ��� ������ �

G���� '� 0#2# ���!>" 1 ��� ����� ���� ��� ������ ������ ���� )��' ������� �� ��

G����� =#1# � 5���� �#0# ������" 1 ���� ��� ����� ���� < �����'��&�&������ ������� � ��� ������� ����� � ��� ���� �������� ��� �����������

G����� =#� )� ���� 0#� =����� �# � ���� 1# ����." A��� �� �� ������ ���-� ���� ��� ��� ������� ������� ����, �� ��� ������ ���� ���� ���� (�� ������� ���� ��������

G������ 1# # � $����� �#1# ���4>" A�� ������������ �� ������ %'��"����� �!�� �� ��������

?����� 5#)# � 9������ 1#<# ���4�" A��������� ��� ������ � ������ ������� ���� � ������� �� ������ )�(�#��* �� %�� � � !"# $�� %$&$�'�()���*�$�+!"' � ,,� �������

?����� 5#)#� 5��� ���� 7#7# � 7����� 0# �����" $�������������� ��� ����� ��������� � ���� + � �!� ��������� ��� ����� �

?����� '��� 2#7#� 9����� 6#� 5������ =#A# � A�%����� 2#G# ���!4" G��� � ������ ������� � 0 �� �� �����B ������� ���� �� ���������� ������ ���� ������� �� ������

?� ��� 0#$#� ��*�� =#� ����� <#� L��� �# � ��-�� �#$# �����" =���� ���*������ � ��� �� %�����%�� ��������� ��� ���� �� �� �&� �& ��� �&����������� � ����� ��� �&���� �� ����� '�� '��� �� &��� ���� ��������

�������� �#?# � ���� �� 1# �����" 9������ �������� �� �� ������ ��-��..� ���� � /�"(��� ���� ������ &��� ���" ,��'� ��"� �� &�'�!����0) � �$��1 � 2)��� ��#� 3�4 5)"�� ,,� �� �� ��

������ :#�#� =��� 5#2#� 9�� �'��� �#<#� )����� 2#G# � 9������ 1#<# ����."<������ �� ��,�� ������&���'�� ��� �������� ��� �������� ���&�'������� ���� � ��� ����� ��� �� ��� ��� �� ���������� ������� %�� ���� ��� �

5����� 5#2# � ������ G#G# ���!4" 1 ������� �� ��� ������� ������������ ���� �� �� �G&1��8" 7��&��'��������� ��� ������ � ������� ����� ��� ���� ������� �� ����� -��� ����� �� ����������

5����� G#� $������ 6# � ������ G#1# ����4" <������� �� �����������������*�� ��� ����� ������ ��� ��� ��� ����������� ����� �� �� ���-� ��� �� �� ����� � ��� ���������� ������ �� ��� ���� ��������-����� ���� �����

5����� 2# ����4" L��� &��� �� � �������� ��'�� �� ���� &��� ��� &���� �������

<������ �# � 9�� ����� 7# �8���" A��� �� �� ���������� ���������� ��0�&�0< ��� 0�&:<<� �%� ������ �� ��'�� �������� �� �� ����� ���� ���� %�������� ��� �������

2������ �#�# � 3�'��� �#)# ���4." =������� �� ��� ����� ����� � ��� ��� ��� ����� ���� �� ����� ������ � ��� ����/���� ��� ���� ���������� ��� �������� ������� ������ � ��� ��� �� ������ �� ���-� ����� ��/��� &��� ���� ��� ��������

2����� �#)# ����8" G�� ����� ������ �� �� ������ �� 6$����+�"'� �� ������)'� . ����� %������� / �� %�� � � ��� 0���� �� / �� ����1 ��� �� � �)��/�"� �� �$���"�� -�"'�"� 7����� ,,� ������ �

2����� �#)# � 9���� �# # ����;" $�,��� ����&���'�� ?��&�'� ������ &���� � ��� ��� ������ %�� ������ �� ��� ��� ������ ��� ��������� ��"�� ������� ��� ������

:����*���� 1#A# � ���������� 7# # ����4" ���������� �� �& ��� �&������ ������ �� �191��� ������� � ��� ������ ������� ������ � ���&�� ����� ����� ������� � ���� �� ��"�� ������� ��� ��� ��

:������� :#� 5������ :#� 5��� 2#� ?���� 0#2#� 9� ����� �#� 7 '��� �#2#�7 7������ �#� 1����� =#� 9������ 5#� ?������� 5# � 9������� 9# ����!"A,������� ����� �� �1919 �� ����� �� ����� ������ �� ��������� �������� �� ������� ������ �� ������

:��'���� �#)# ����>" A,������� �� &��� ������ �� ������ ������ ���������� ������� ,��� ����#����� �� ������

)���� 2#7#1#� F����� �#� ��*�� =#� G� ?����� =#� 5���� �#0# � =������� ?#�8���" G�+ �� � �� ���� ��� ��� ����������� �� � %�� � �������� ����� �� ��'�� $:&� �� ����� ����� �������� ��� �� � �� ��

)����N�&7���� 7#� <�������� 0#� 0����� 2# � 7���N����� G# ����@" ����� ���������� ���� ����� ������� � �� ��� ����� ��� �� ����� ����� ���������� �� �,������� �� ?��� 2�� ��� :��,&8> �������� �������� ��� �������� ��

)���� �# � 0����+�� 5# ���!�" 1������� ����� �� �� ���-� ��� ���� ����� ��� ������ �� ���� ��� ����� �� �� %'��"�� ��� �� �

)����� 2# � 0������ �# ���4�" 1���� ����� ���� �� �� �� �������� �� �� ���� ��������� ���� ����������� �� �� %'��"�� ����� �����

)�� G# ����!" ?�� ����� ������ �� ��������� �� ����� ����%���� %�� �!�� �� �����

7����� 5#� :���� 5# � ������� 7# ����@" G�������� �� ��� ������� � 0�� ����� �$:&� �� �����" � ��� ������ ������� ������,��� &��� ���� ���� ��

7������&7���� � 7#� 7���� � <#� ����� �#� 2��� )# � 9������ 1#<# �����"<������� �� �� �� ��*���� �� �1919 �� ������ � ��� ��� ������������� ������ �� ��"�� ������� ���� ��������

7 ?��*���� <# ���44" ��� �� � ����� �������� ���� � ������������������ ��� ��������

$�'���� 3#� :���'�� �#� �������� �#� $�'����� �# � 7*���� $# ����>"<������� �� �� �� ��*���� �� ������� � 0 �� ����� � ��� ������������� ����� �� ��� ����� ���� �� ��"�� ������� ��� ������

$����-�� 2#�#� ��� ��*&?��� �� ?#� ���*��� 2# � G�� ��� 2# ���48" 1������ � ���� �� ������� � 0 � ����B �������� ������ �� ��&��'������ ��������-��� ����� �� ���

$���� ?#)#� � ����� '� 2#� 1������� 1#� =�����&)����� 2#7#� 9���������� 0#�H�������������� # � ������ �#�# �����" ���������� ������ � ���� ������ � ��� ��� ����� ��-����� ������������������� ��� ��� ������

F������� 2#)#� 7,���� #� G������ �#� 9�������� 7#=# 2�� G�� ��� �#5#������� G#1# � 9����� �# ���4." ��� �������� ������ ����B � ������ ������ �,������� �� ����� ���� �� �� ��� ��� ���� ������� �� ��,��� ������� ��������� �� ���������

F������7#5# ��������� �#?# ���4." F���� ������� ��� �����&�������� �(��� �� �� ��� �������� �� �� ����� ��� ��� ������� ��� ���� �� ������ ��� ���� &��� ���� �� ��������

0�,���� �# � ������ =# ����4" )'� �� &��� � ��������(�� ������ ����� >�����# 1 ��� 0����� ��� G���#

0������ :#G# � ?����� #7# �����" ��� ����������� ����%�� ��� �� ���������������� �� ��� ���� �� ����������� ���-� ���� � ��� ���� ��2������ ��� ��� �����

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

7������ �� ������ �� �� ����� ������� ������� �>��

Page 10: Noxious-evoked c-fos expression in brainstem neurons immunoreactive for GABAB, µ-opioid and NK-1 receptors

�������� )#� ��**��� �#� ���� 7#� ���� � �# � 9�� �� �# ����4" A,��������� &��� ������ ���� � ��� ��� ���������� ������ �����%�� ��,����� ���� ��������� &��� ��� &���� ��� � ����

���������� 2#0#� 0 '���� =# � 9������ 2#�# ���4@" 1������� ��� ����� ���� ����� ����� �� �� ������ ���-� ��� ��� ����� ������� ����,� %�� � ��� � �� �

���+*����� 7#� �������� �#� H��������� 7#�# � 5����� 9# ����!"<��������� �� �1919 �� ������ � ��� ����� ����� ��� �� �� �� ������ ��� ������ ����� 3� � %'��"������ �� ���� �

������?#�#� ������ �#7#��%�������#1# ����@"7������ �����%�� ����������������B &��� ��# 8&���,���� ���� ����� �!� ����#����� �� �� �����

���� G# # � G��� �#1# ����>" =&��� �,������� � ��������� �������& ������ ��� ������� ��� ������ ���� �����%�� ��,��� ���� ��&��� �������� ��� �� � ��� �

����&7������� 2#� )�'���� 1#:#� 9���� 1#�#� 6������� 2#)#� A������ 0#�5���� ?#�# � F�������� F#0# ���4@" ?��� ��������� �� �������� ��� �191� ������� �� ��� ��� ������� ������ ��� ��� ���

�������� <#� 1����� 1#� 1����&��,���� 1# � )�� G# ����!" )����� ����� ����� ������������� ������ ��� ' ��� �����������&��� �� �������� ��,���&���'�� &��� �,������� � ��� ��� ����� ���� �� �� %�� � ��������

�������� <# � )�� G# ����>" G�� ����� ���-� ���� ��� ��� ����� ��������������� �� ��� �����+ �� �� ���� ������ ���� �� ��� ��� ����� ���� (��&��� ���� ��� � ��

�������� <#� )�� G# � =����� 1# ����@" $������ � ��� �����+ �������� ���� �� ��� ��� ���-� ��� �� ��� �������� ��� ���� ��������,����� &��� ����� ��,��� �������� �� ��� �'�� &��� ���� ����������

������ G#� 7 ��%��� 7# � 5����� G# ����;" 7 ���-� ��� �� �� ������ ��� ���������� ������ �� ����B ����� ����� �� ��% ����� �������������� �� ��� ������ �� %'��"� (�� )'���� ���� ������

����� 1#2#� 0��'�N�� H#� ��'�� �#=#� 5������ =#� ���� =# � ?������� )# �8��8"���-� ��� ������� � ���� < �� ��� ����� ��� %�� ��� �����'�� �� �������� ���� ����� ��������� �� ������� � 0& ������� ��������� ��� ������� ����,��� ��������� �� ��������� ��� ��������

���� #G# � �������� :#$# ����!" $���������� �� ��� ��� ����� ��� ����� ����%��� ���� ������� ���� �� ��� � �����'$������ ��� ������

3�'��� �#)# � 7��*� �� 0#G# �����" =����� ����� ����� �� �� ��������������� �� ����� ���� � ������� �� ������ )�(�#��* �� %�� �� !"# $�� %$&$�'�()��� *�$�+!"' � ,,� � ������

H������ 7# ���4@" A�� �� �������� ��� ���������� �� �,����������� � ��� ��� ������ %�� � ��� ��������

� 8��@ ?�������� �� A������� $����� �� � �� ����� ����� ��� �� �� �������� �� � ��� �@�@E�>�8

�>�8 7# 0��� �� ��#