nguyên lý sắc ký ion và sắc ký lọc gel

8/17/2019 Nguyên Lý Sắc Ký Ion Và Sắc Ký Lọc Gel

1/6

Nguyên lý sắc ký ion và sắc ký lọc gel

1.Sắc ký ion

Sắc ký trao đổi ion (Ion Exchange, sắc ký viết tắt là IEC) là đại lý trao đổi ion nhưgiai đoạn vn !h"ng !h#$, c%c thành !h&n !ha đ'ng a tr*n trao đổi ion v+i c%cđại lý trao đổi ion cn -.ng s kh%c -i/t c0 hi/1 lc ràng -1'c h2i gi3a k4ch thư+cvà t%ch $'t loại sắc ký

Phát triển 5$ 6787, 9ho$!son và nh3ng ngư:i kh%c trong vi/c nghi*n c;1 c%c chc t%ch rJaA [rotein @ế1 ràng -1'c đư>c t%ch rJa đ&1 ti*nA 5gư>c lại$a trQn trao đổi cation c0 đi/n t4ch ưMng cDa !rotein, !rotein ràng -1'c -\i tng&n n2ng đ' $1Zi trong rJa giRi hoc tng đ' !L cDa rJa giRi t%ch rJaAHot !"ng c# thể

Ti$n %& lý và !'ng g'i c"t]i/c sJ Kng ngoại t/ nư+c ion đF rJa sạch $'t lư>ng nh^ cell1lose nghi=n n%t _àng kết tDa c%c hạt đF đR$ -Ro s đ2ng nh


2/6

trao đổi, trao đổi cation đư>c sJ Kng cho axit b ki=$ b axit d1% tr?nh, o đ0, trQnch1ng kết lư>t L loại trao đổiAfJa cell1lose trư+c khi sJ Kng cn -.ng v+i đ' !L $ong $1Zn và s;c $ạnh ionAC0 $'t đại lý đổi cn -.ng nga@ cR trư+c khi đ0ng g0i -ong -0ng c't loại -^ ư+i

%! s1ng chết, c0 l>i cho đ' !hn giRi đư>c cRi thi/nA9rK c't cài đt và sa1 đ0 giRi h! cDa

!hạ$ vi !hK tr%ch đZi i/n, trong khi s ch ý n*n đư>c s;c $ạnh ion thc $Kc đ4ch nà@A C%c chc t%ch đạt @*1 c&1, khZi lư>ng $N1 !hRi !h h>!, kh`ng vư>td1% s;c chG1 tRi cDa c'tA VhR nng chG1 tRi c't c0 thF đư>c sJ Kng đF t4nh to%nkhR nng trao đổi, thư:ng là tr*n c%c đại lý đF đổi lng $N1cDa 6 bH tổng sZAfJa giRiPO đư>c kết h>! v+i c%c $N1 trư+c khi trao đổi ion, -.ng c%ch tha@ đổi !L hoc

tha@ đổi cư:ng đ' ion cDa li*n h>! t%ch rJa, cUng c0 thF tha@ đổi đ' !L và s;c$ạnh ionA F c%c thành !h&n hoàn toàn t%ch -i/t cDa c%c !h;c tạ!, thư:ng c&n !hRi&n &n tha@ đổi đ' !L ha@ s;c $ạnh ion, !hưMng !h%! đMn giRn nhc !hn loại và s;c $ạnh ion \ !L kh%c nha1 đO đư>cth*$ vào, đF c%c thành !h&n kh%c nha1 &n &n t%ch rJaA VF tW khi rJa giRi nà@cDa !L và tha@ đổi s;c $ạnh ion, sZ lư>ng c%c thành !h&n cDa khZi lư>ng rJa giRicng $'t lc $'t rJa giRi đ' tinh khiết k$ tưMng t, !h h>! đF t%ch tZtA C%ch tZtnhc kết nZi v+i container và, khi "ng chR@1ng Gch vào c't tW container đ&1 ti*n, container th; hai sj t đ'ng giRi !h%! -ổs1ng, -.ng c%ch tr'n $'t giRi !h%! cDa container đ&1 ti*n v+i "ng chR@ hmn h>!vào c't đF khR nng !hKc vK graient đ/$ rJa giRiA 9Q! tr1ng đ&1 ti*n cDa c%ccontainer c0 sn tại -c t4nh theo c`ng th;c sa1P


3/6

C p Cqb(CqbC6) (6b]) q69rong đ0 6, q đại i/n cho kh1 vc $t cắt ngang cDa hai containerP C6, Cq,tưMng ;ng, n2ng đ' cDa 1ng Gch trong thng ch;a ] là tu l/ lư1 lư>ng tổng khZilư>ngA Vhi 6 p q khi $'t $à1, khi 6 q khi lw$ graient, 6 q khi l2i

graientA+&) giải (hải !á( ,ng các yêu c-u s)u*① t4ch rJa giRi là đD l+n, thư:ng nhi=1 l&n khZi lư>ng giư:ng, đF t%ch c%c đnh nisj kh`ng d1% đ`ng đcA② đ' Zc tZi đa là đD cao đF cho !h! c%c vQt li/1 hct%chA③ graient kh`ng tng d1% nhanh, ch là$ cho -ạn $1Zn i ch1@Fn vng đến !h&nc1Zi cDa c't trong trạng th%i giRi h! chng (Hb6$l Zng) th1 thQ! rJagiRi đư>c đo -.ng Zng đF c0 đư>c $'t sắc đ2A 9heo $Kc đ4ch thJ nghi/$ kh%cnha1, c0 thF là $'t !hưMng !h%! !h%t hi/n !h h>! (x%c đGnh hoạt t4nh sinh hTc,xt nghi/$ $i_n Gch, vv) đF x%c đGnh $` h?nh vG tr4 trong c%c sRn !h#$ $ong$1Zn, và !hKc h2i c%c sRn !h#$ $ong $1ZnA9%i sinh c%c -' trao đổi ion trao đổi ion và -Ro d1Rn c%c c't c0 thF đư>c t%i sinhAChXng hạn như trao đổi ion cell1lose c0 sn q$ol P 5aCl c't rJa giRi, nế1 c0A6$oly5aL asor-ate $ạnh rJa c't, nế1 chc tạo ra v+i ,q natri azitA

2.Sắc ký lọc gel Sắc ký lTc gel (sắc ký lTc gel) !hưMng !h%!, !hưMng !h%! sắc ký loại trW cUng

đư>c -iết đến hoc !hưMng !h%! sàng !hn tJ chD @ế1 a vào k4ch thư+c và h?nhạng cDa c%c !rotein, chng cDa c%c !rotein đư>c c%ch l@ và tinh khiếtA C'tcDa ch


4/6

hmn h>! cDa k{ th1Qt sắc kýA 9hư:ng chR@ ra đại !hn tJ đ&1 ti*n, c%c !hn tJ nh^chR@ ra ngoàiA

.ơ bảnC"n đư>c gTi là !hn tJ sàng sắc ký, sắc ký lTc gel, sắc ký r@ k4ch thư+cA C0 $'t

cc ng1@*n hi/n trạng, h

5ế1 $Kc đ4ch cDa th4 nghi/$ là c%c đại !hn tJ trong $N1 và t%ch c%c !hn tJ nh^,o h/ sZ !hn -Z cDa chng trong $'t s kh%c -i/t đ%ng kF, s t%ch -i/t nà@ c"n

đư>c gTi là nh0$ t%ch -i/t, và c0 thF đư>c sJ Kng Se!haexbqH và bH, c%c !e!tie nh^ và c%c chng !hn tJ thc sJ KngđF khJ $1Zi Se!haexb6, b6H và ~iobelb!bq hoc 8, nế1 $Kc đ4ch cDa thJnghi/$ là đF lc gi3a b6, nhưng !hong trào chQ$ cDa vQt li/1 n*n đư>c gi3a € và 8A

32 el ch1#n -G $` h?nh c't gel đư>c chTn, c%c hạt keo lM lJng trong nư+c cng ch


5/6

ngoàiA 9 nhi*n sưng $'t th:i gian ài, nhi/t đ' c0 thF tng tZc sưng, ngha làtrong $'t cZc nư+c sì khoRng -n gel ư+t &n &n n0ng đến g&n sì, 6bq gi: đFđạt đư>c $'t s $\ r'ng đ&@ đD gel h"a tanA 50ng !hưMng !h%!, đạt đư>c th:igian và khJ trngA

el loaingP c't Tc cZ đGnh $t đ

ký là thZng nhng $N1 làkh`ng l+n hMn khZi lư>ng giư:ng gel H b6A 'c lQ! v+i n2ng đ' $N1 và h/ sZ

!hn !hZi, n2ng đ' $N1 c0 thF đư>c tng l*n, nhưng c%c vQt li/1 trTng lư>ng !hn

tJ l+n hMn, đ' nh+t cDa 1ng Gch là$ tng s tQ! tr1ng, s ch1@Fn đ'ng !hn tJc"n hạn chế, đ' nh+t tưMng đZi cDa c%c $N1 và 1ng $ì kh`ng d1% 6,Hb (q) $N1sa1 khi gia nhQ! "ng ổ cắ$ $\, đF c%c $N1 th$ nhQ! vào giư:ng gel, ch khi -=$t $N1 v+i chiếc giư:ng -= $t gel -?nh thư:ng, và sa1 đ0 th*$ $'t vài $l rJagiRi rJa tư:ng đF là$ cho n0 vào chiếc giư:ng gel sa1 khi tcsJ Kng nhi=1 l&n, $à kh`ng c&n đi=1 trG đc -i/t, kh`ng Rnh hư\ng đến hi/1 ;ngt%chA F ngn chn ` nhi_$ gel, sắc ký c0 thF đư>c th*$ vào sa1 khi Aqsoi1$ azie đ&1 ti*n, trư+c khi c%c đại lý kh1#n sắc ký tiế! theo sj đư>c loại -^đF tr%nh nhi_1 v+i vi/c x%c đGnh 1ng $ìA[hưMng !h%! !hKc h2i

5ế1 -ạn kh`ng c"n sJ Kng c0 thF đư>c t%i chế, c%ch tiế! cQn ch1ng là rJa gelđư>c r%o nư+c, rJa sạch v+i , B, BH ethanol $


6/6

ethanol, đF r%o nư+c, rJa sạch v+i ether ethanol, đF r%o nư+c, nMi kh` r%oA ‚+t !hưMng !h%! -Ro d1Rn nhà nư+c cDa -n gel đO đư>c th*$ vào c%c t%c nhn kh%ngkh1#n hoc rJa $'t nư+c n2i h

nguyên lý sắc ký ion và sắc ký lọc gel

Documents