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MMMMÉÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁÁÁÁLISES LISES LISES LISES MICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLÓÓÓÓGICOS GICOS GICOS GICOS PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE
QUALIDADE DE QUALIDADE DE QUALIDADE DE QUALIDADE DE ALIMENTOSALIMENTOSALIMENTOSALIMENTOS
Controle de Qualidade na indústria Alimentos
USFM- 19/09/2009
MMMMÉÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁÁÁÁLISES LISES LISES LISES MICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLÓÓÓÓGICOS GICOS GICOS GICOS PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE PARA CONTROLE DE
QUALIDADE DE QUALIDADE DE QUALIDADE DE QUALIDADE DE ALIMENTOSALIMENTOSALIMENTOSALIMENTOS
Controle de Qualidade na indústria Alimentos
USFM- 19/09/2009
Msc. Vania Tronco
VERUS SEGURANÇA AMBIENTAL E ALIMENTAR
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ESCOLHA DOS MÉTODOS
DE ANÁLISES
FERRAMENTAS PARA GARANTIR A
QUALIDADE DA SUA PRODUÇÃO
ESCOLHA DOS MESCOLHA DOS MÉÉTODOS TODOS
DE ANDE ANÁÁLISESLISES
FERRAMENTAS PARA GARANTIR A FERRAMENTAS PARA GARANTIR A
QUALIDADE DA SUA PRODUQUALIDADE DA SUA PRODUÇÇÃOÃO
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ANANANANÁÁÁÁLISES LISES LISES LISES MICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLÓÓÓÓGICAS SÃO GICAS SÃO GICAS SÃO GICAS SÃO FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:
ANANANANÁÁÁÁLISES LISES LISES LISES MICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLMICROBIOLÓÓÓÓGICAS SÃO GICAS SÃO GICAS SÃO GICAS SÃO FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:FUNDAMENTAIS PARA:- segurança alimentar
- qualidade geral dos alimentos produzidos
- medidas profiláticas
-comercialização no mercado internacional e
nacional
- segurança alimentar
- qualidade geral dos alimentos produzidos
- medidas profiláticas
-comercialização no mercado internacional e
nacional
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EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E
RAPIDEZRAPIDEZRAPIDEZRAPIDEZ
EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E EFICIÊNCIA E
RAPIDEZRAPIDEZRAPIDEZRAPIDEZ
medidas tomadas na hora certa
Garantia de resultados
medidas tomadas na hora certa
Garantia de resultados
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Conceitos básicos de prevenção e controle da contaminação alimentar e doenças transmitidas
alimentos sugerem:
• Melhorar qualidade higiênica de alimentos crus (BPP ou BPA);
• BPF utilizando tecnologias de processamento adequadas;
• BP em toda a cadeia alimentar.....
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GAP - Boas Práticas Agrícolas
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GMP GMP -- Boas PrBoas Prááticas de Fabricaticas de Fabricaççãoão
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SSOP /PPOH(Sanitation Standard Operating Procedures ) PROCEDIMENTOS PADRONIZADOS DE
OPERAÇÃO DE SANITIZAÇÃO:
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PRP - Programa de Redução de Patógenos
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NOVOS MNOVOS MNOVOS MNOVOS MÉÉÉÉTODOS PARA TODOS PARA TODOS PARA TODOS PARA ANANANANÁÁÁÁLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOSNOVOS MNOVOS MNOVOS MNOVOS MÉÉÉÉTODOS PARA TODOS PARA TODOS PARA TODOS PARA ANANANANÁÁÁÁLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOSLISES DE ALIMENTOS
1. simplificação dos tradicionais
2. atividade enzimática
3. atividade antigênica
4. moleculares
5. combinação
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- capacidade física operacional
-volume de testes analíticos
- rastreabilidade
- validações internacionais, nacionais e internas
-rapidez na liberação de resultados
-Capacidade e custo de estocagem
- custo / benefício
ESCOLHA DO MESCOLHA DO MESCOLHA DO MESCOLHA DO MÉÉÉÉTODO TODO TODO TODO DIAGNDIAGNDIAGNDIAGNÓÓÓÓSTICOSTICOSTICOSTICO
ESCOLHA DO MESCOLHA DO MESCOLHA DO MESCOLHA DO MÉÉÉÉTODO TODO TODO TODO DIAGNDIAGNDIAGNDIAGNÓÓÓÓSTICOSTICOSTICOSTICO
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Métodos RápidosMétodos RápidosMétodoRápido
Por que utilizar?
RapidezSeletiv idade
Aprovação SensibilidadePraticidade
Escolha
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Métodos rápidos:
• Vantagens em tempo de análise e liberação de
resultados analíticos
• Possibilidade de eliminar etapas de trabalho intensivo
• Potencial para automação
• Sempre cumprem com procedimentos de incubação
ainda necessariamente
• ELISA e PCR são dominantes
• Falta de um procedimento comum de validação
• A maioria apresenta dificuldade de aceitação para fins
oficiais
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Métodos rápidos:
• Avanços em Métodos de Contagens de células viáveis• Miniaturização e Kits de Diagnóstico, Técnicas de
Identificação Bioquímica• Métodos baseados em anticorpos• Separação Imunomagnética • Ensasios baseados em ácidos nucleicos• Biosensores• Microships• Citometria de Fluxo• Técnicas baseadas em Bacteriófagos• ATP bioluminescência• Bioluminescência adenilato quinase• Riboprinter e Pulse-Field Gel Electroforese
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Os Métodos Microbiológicos
podem ser divididos em:
�“tradicionais”
(“convencionais”)
�métodos rápidos
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IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA pode
ser feita por avaliação
características microbianas
IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA pode
ser feita por avaliação
características microbianas
FENOTÍPICAS
GENOTÍPICAS
FENOTÍPICAS
GENOTÍPICAS
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METODOLOGIAS METODOLOGIAS
DISPONDISPONÍÍVEISVEIS
- Metodologia tradicional
- Padrão ouro
- “Kits” prontos
- ELISA tradicional
- ELISA – kit visual
ou automatizado.
O QUE CONSIGO
VISUALIZAR !
FENOTFENOTÍÍPICASPICAS
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Problemas com os métodos tradicionais:
�Sensibilidade insuficiente�Especificidade: nem sempre ocorre(podem
haver falsos negativos)�Repetibilidade: nem sempre se o teste for
repetido por um mesmo operador inúmeras vezes se obtém o mesmo resultado
�Reprodutibilidade: capacidade de gerar resultados estatísticamente iguais (nem sempre ocorre)
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Métodos convencionais:
• Os métodos convencionais usam a cultura de microrganismos em placas contendo ágar
• São laboriosos e consomem muito tempo operacional
• 84% de todos os testes são baseados na contagem de células viáveis
• Requerem controle de agências regulatórias nacionais e internacionais para controle oficial
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TRADICIONAL TRADICIONAL ––limitalimitaçções provões provááveis:veis:
Depende da integridade fisiológica bacteriana
- Injúria, alterações - processamento;
- Controles - meios de cultura, pessoal e
equipamentos e tempo.
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- Quantidade/qualidade
- provas bioquímicas;
- Padrão de decisão
- Chaves dicotômicas
TRADICIONALTRADICIONAL
MULTIPLICIDADE DE ETAPAS
LIMITAÇÕES
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TRADICIONALTRADICIONAL
Dependendo do no. de análises:
- perigo de contaminação cruzada;
- muitas etapas a serem validadas;
- limitada área física e pessoal.
LIMITAÇÕES
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TRADICIONALTRADICIONAL
BIOINDICADORES - KITS
- maior no. análises/dia
- diminuição de etapas validadas
- menor perigo de contaminação
- devem ser aprovados/validados
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![Page 36: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/37.jpg)
Métodos rápidos alternativos como Técnica fluorogênica: adiciona o MUG ( 4 metil umbeliferil beta-D-glucoronídeo):
• Através da enzima beta-glucoronidase (maioria das cepas de E.coli) o MUG é transformado em uma umbiliferona fluorescente quando observada na luz ultravioleta de onda longa (após 24 hs)
• Aplicação prática: esta determinação éfundamental na avaliação da condição higiênica do processamento de alimentos( a técnica tradicional tubos(NMP) muito lenta pode durar até 5 dias!
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Métodos para Contagens de microrganismos:baseados na multiplicação
microbiana
• Método tradicional (plaqueamento);• Método de plaqueamento em espiral;• Placas Compact Dry;• Placas de Petrifilm;• Placas do Simplate;• Métodos alternativos: para NMP (técnica
fluorogênica);• Métodos alternativos: adição de substratos
cromogênicos:(adição de X-Gal, X-Gluc., Salmon.-Gal no isolamento de microrganismos)
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COMPACTCOMPACTDRYDRY
Enzimas cromogênicas:
revela características
específicos de um grupo,
gênero ou espécie.
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Placas de Compact Dry:
- Prontas para uso
- Reduz as horas de trabalho.
- Permite aumento de produtividade e eficiência.
- Uso em análises de matérias primas ou produtos acabados como
alimentos, bebidas, carne e outros.
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VANTAGENS DO COMPACT VANTAGENS DO COMPACT DRYDRY
� Shelf life de 18 a 24 meses sem refrigeração.
� Atende às BPL - maior segurança por possuir tampa.
� A amostra se difunde sozinha e rapidamente pela placa, sem
necessitar de difusores ou outros instrumentos.
� Sem limite de empilhamento - menor espaço na incubadora.
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- Espaço tridimensional - excelente crescimento dos bolores e
leveduras.
- Facilidade para checar ou repicar as colônias - forma idêntica
ao que faria nas placas tradicionais.
- Rápida manipulação – sem etapas de preparação de meios
de cultura, esterilização de vidraria, etc.
- Manual traduzido em vários idiomas, inclusive português.
VANTAGENS DO COMPACT DRYVANTAGENS DO COMPACT DRY
![Page 43: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/43.jpg)
DISPONIBILIDADE
TCContagem
total
YMBolores eleveduras
ECColif. totaise E. coli
CFColiformes
termotolerantes
![Page 44: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/44.jpg)
O QUE POSSO ANALISAR?
TCContagem total
YMBolores eleveduras
![Page 45: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/45.jpg)
O QUE POSSO ANALISAR?
CFColiformes fecais
ECColiformes totaise E. coli
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COMO ANALISAR?
As placas já
possuem tudo o que
você precisa!
É só abrir e adicionar 1mL da amostra ou da diluição e incubar pelos tempos/temperaturas recomendados!
![Page 47: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/47.jpg)
Compact Dry TCCompact Dry TC
Para contagem total
de bactérias viáveis.
BactBactéérias formam colôniasrias formam colônias vermelhasvermelhas
Resultados em
24 a 48 horas
![Page 48: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/48.jpg)
Compact Dry YMCompact Dry YM
Contagem de bolores
e leveduras.
Leveduras formam colôniasLeveduras formam colônias azuis ou azuis ou verdesverdes
Resultados em
3 a 5 dias
![Page 49: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/49.jpg)
Compact Dry ECCompact Dry EC
Contagem de coliformes
totais e E. coli
E. coliE. coli forma colônia forma colônia azul azul Coliformes totais formam colônias Coliformes totais formam colônias vermelhasvermelhas
Resultados em
24 horas
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Compact Dry CFCompact Dry CF
Contagem de coliformes
totais
Coliformes totais formam colônias Coliformes totais formam colônias esverdeadasesverdeadas
Resultados em
18-24 horas
![Page 51: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/51.jpg)
![Page 52: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/52.jpg)
APROVAAPROVAÇÇÕESÕES
Certificado Performance Tested Method AOAC:
- Compact Dry EC:110402
-Compact Dry CF:110401
-- Compact Dry TC: 010404
- Compact Dry YM:100401
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![Page 54: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/54.jpg)
![Page 55: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/55.jpg)
Monitoramento de HigieneMonitoramento de HigieneMonitoramento de HigieneMonitoramento de Higiene
• Necessidade de se desenvolver métodos de
tempo real para monitorar procedimentos de
limpeza e higienização(detecção de resíduos de
matéria orgânica e ATP de células bacterianas
• Métodos devem ser baratos, robustos
• ATP bioluminescência
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Sistema detecta:�ATP residual em superfícies�A molécula de ATP pode ser encontrada em
células viáveis; células não microbianas (sangue, carne..)
�Sistema rápido para monitoramento de higiene de processos produtivos na indústria alimentícia
�Sistema preventivo para tomada de medidas rápidas e efetivas(resultado em tempo real)
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PRINCPRINCÍÍPIO DO TESTEPIO DO TESTE
TECNOLOGIA TECNOLOGIA
DEDE
RECICLAGEM RECICLAGEM
ESTABILIDADE !ESTABILIDADE !
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Mecanismo da reação�Luciferina (LH2)+ATP+Mg++______enzima
luciferase ____forma___complexo ELH2+AMP+PP
�Em presença de oxigênio temos: oxiluciferina+AMP +CO2+ LUZ (medida com Luminômetro)
• AMP (Adenosina Monofosfato)• ATP( Adenosina Trifosfato)• PP (Pirofosfato)• ELH2 (complexo luciferase-luciferina-AMP)
![Page 59: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/59.jpg)
LUMITESTERLUMITESTER
![Page 60: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/60.jpg)
Passar o aplicador LuciPac na superfície previamente definida
REALIZANDO O TESTEREALIZANDO O TESTE
![Page 61: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/61.jpg)
REALIZANDO O TESTEREALIZANDO O TESTE
Voltar o aplicador no tubo e injetar o pino para abrir a cápsula dos reagentes.
![Page 62: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/62.jpg)
Agitar o LuciPac várias vezes para que o líquido escoe .
REALIZANDO O TESTEREALIZANDO O TESTE
![Page 63: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/63.jpg)
Colocar o LuciPac na câmara do Lumitester, fechar a tampa.
ENTER
REALIZANDO O TESTEREALIZANDO O TESTE
![Page 64: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/64.jpg)
LENDO O RESULTADO!LENDO O RESULTADO!
Limiar 1 ou inferior A (aceito)
Limiar >1 e < 2 B (atenção)
Limiar 2 excedido C (rejeitado)
ENTER – LEITURA EM 10 SEGUNDOS !
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RESUMINDO ...RESUMINDO ...
LEITURA DOS RESULTADOS !
10”
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![Page 67: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/67.jpg)
![Page 68: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/68.jpg)
![Page 69: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/69.jpg)
![Page 70: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/70.jpg)
![Page 71: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/71.jpg)
Imunoensaios:
• ELISA (com tecnologias diversas),
Imunocromatografia
• Sistemas totalmente automatizados
• Novos anticorpos recombinantes e técnicas de
impressão molecular para melhorar a
sensibilidade e versatilidade
![Page 72: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/72.jpg)
Devem possuir
APROVAÇÃO !
FENOTFENOTÍÍPICASPICAS
ELISA KITELISA KIT
![Page 73: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/73.jpg)
- Resultados - qualidade dos anticorpos;
- sensibilidade x especificidade;
- Relação quantitativa Ag x Ac – variabilidade;
- Nível de detecção – pode variar com o sorovar.
FACILITAM A ROTINA TESTES DE TRIAGEM !
ELISA ELISA -- KITKIT
![Page 74: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/74.jpg)
- Resultados devem ser confirmados;
- Versatilidade quanto aos alvos;
- Capacidade operacional compatível
com o número de análises necessárias.
- LIMITAÇÕES - falsos positivos??
ELISA ELISA -- KITKIT
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![Page 76: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/76.jpg)
Fundamento dos testes ELISA:
![Page 77: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/77.jpg)
REAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO• ELISA: Ensaios Imunoabsorventes de Enzima Ligada
1. Se adiciona a amostra suspeita
2. Ac primários não são facilmente removíveis da fase sólida
3. No caso de ser positiva, os Ag ficam presos aos Ac primários fixados
4. Ac primários selecionados se fixam
5. Se adicionan Ac secundários marcados com enzima contra Ag buscados
6. Os Ac secundários se unen ao AG
7. Se libera substrato complementar a enzima
8. Se o conjugado se formou, reage com o substrato por colorimetría
![Page 78: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/78.jpg)
Lateral Flow System para
Listeria, Salmonellae E.coli O 157
Lateral Flow System para
Listeria, Salmonellae E.coli O 157
![Page 79: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/79.jpg)
LFS™ Listeria sp
DuPont
Resultados em 40 a 42 horas.
![Page 80: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/80.jpg)
Amostra +
meio LFS
c/
suplemento
.
Incube
a 30ºC -
40 – 48
horas.
Ferva em BM por 5
minutos.
Adicione a fita LFS e aguarde 10 min.
Adicione a
amostra ao tubo.
Retire a fita e realize
a leitura.
(-)
(+)
LFS Listeria
LFS Listeria
LFS Listeria
LFS™ Listeria sp – minimize
etapas com confiabilidade
![Page 81: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/81.jpg)
LFS™ E. Coli O:157rapidez na triagem
Resultado em 8 a 18 horas
![Page 82: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/82.jpg)
LFS™ E. Coli O157resultados em 8 hs
Pese a
amostra
no meio
LFS.
Incube
a 42ºC
por 8 a
18 hs.
Ferva
em BM
por 5
minutos.
Adicione
a fita
LFS no
tubo
Adicione
0,5mL ao
tubo de
prova.
Após 10 min.
realize a leitura.
LFS Listeria
![Page 83: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/83.jpg)
LFS™Salmonella
Resultados em
27 horas
![Page 84: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/84.jpg)
LFS™ Salmonella
Amostra +
o meio
LFS
Incube
a 42oC /
8 a 18
hs.
Adicione
1mL do
TT Hajna
ao tubo.
Ponha a
fita LFS
no tubo.
Repique
1mL em TT
Hajna, -19
hs/42oC
Após 10 min
realize a leitura.
![Page 85: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/85.jpg)
Teste de ELISA (lateral flow system):
![Page 86: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/86.jpg)
![Page 87: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/87.jpg)
![Page 88: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/88.jpg)
![Page 89: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/89.jpg)
![Page 90: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/90.jpg)
MÉTODOS GENOTÍPICOS
- Segurança e rapidez nos resultados.
- Disponível para patógenos e bioindicadores.
![Page 91: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/91.jpg)
METODOLOGIAS
DISPONÍVEIS
GENOTÍPICAS
- PCR tradicional
- PCR automatizado
- PCR “real time”
EFICIÊNCIA NA
DETECÇÃO !
![Page 92: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/92.jpg)
- Dependente da seleção e qualidade do “primer”
- Necessidade de otimização das reações;
- Muitas e delicadas etapas.
GENOTÍPICOS – PCR tradicional
INCOMPATÍVEL COM A ROTINA DE UMA INDÚSTRIA
![Page 93: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/93.jpg)
- Mão de obra especializada; ambiente adequado;
- Perigo de contaminação.
GENOTÍPICOS
PCR
tradicional
![Page 94: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/94.jpg)
BAX SYSTEM
AUTOMATIZADO
UM MUNDO DE INOVAÇÕES
TECNOLÓGICAS DISPONÍVEL
PARA A GARANTIA DOS
ALIMENTOS !
![Page 95: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/95.jpg)
- “Primers” já testados e validados;
- Aprovações e validações.PESQUISAS CONSTANTES GARANTINDO DIFERENÇAS
TECNOLÓGICAS !
BAX BAX –– PCR automatizadoPCR automatizado
Qualitativo /QuantitativoQualitativo /Quantitativo
FACILITA A ROTINA E DIMINUI INTERFERÊNCIAS !
![Page 96: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/96.jpg)
Método de PCR para análises de patógenos
BAX SystemBAX System®®
![Page 97: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/97.jpg)
Detecção de DNA ou RNA
• PCR automatizado
• PCR em tempo real
EFICIÊNCIA NA
DETECÇÃO !
BAXBAX®® SYSTEMSYSTEM
![Page 98: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/98.jpg)
METODOLOGIAS
DISPONÍVEIS
GENOTÍPICAS
- PCR tradicional
- PCR automatizado
- PCR “real time”
EFICIÊNCIA NA
DETECÇÃO !
![Page 99: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/99.jpg)
• “Primers” testados e validados;
• Aprovações e validações.
• PESQUISAS CONSTANTES
GARANTINDO DIFERENÇAS
TECNOLÓGICAS !
FACILITA A ROTINA
E DIMINUI INTERFERÊNCIAS !
BAXBAX®® SYSTEMSYSTEM
![Page 100: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/100.jpg)
ETAPAS
- Pré-enriquecimento;
- Extração do DNA;
- Amplificação;
Resultados rastreáveis
POUCAS ETAPAS = MENOR no. DE CONTROLES E
VALIDAÇÕES INTERNAS
BAXBAX®® SYSTEMSYSTEM
![Page 101: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/101.jpg)
![Page 102: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/102.jpg)
Método automatizado e simplificado
•1. Prepare o DNA
•2. Amplifique o DNA
•3. Detecte o DNA
![Page 103: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/103.jpg)
O que acontece com os tubos no Bax®?
O que acontece com os tubos no Bax®?
![Page 104: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/104.jpg)
INTRODUÇÃO
- O que é PCR?
Reação em Cadeia da Polimerase
Desenvolvido em 1983 por Kary Mullis.
Prêmio Nobel em Química – 1993;
Cópias idênticas de determinada sequência de
DNA
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CONCEITOS - PCR
ANÁLISE
GENOTÍPICA
![Page 106: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/106.jpg)
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATCCCAGAT
TAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGATATCTGCT
CONCEITOS - PCR
Cópias identicas da sequência
de DNA alvo
![Page 107: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/107.jpg)
PRIMER
• Sequência especifica - sequencia do DNA alvo;
• Regiões altamente conservadas.
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATCCCAGAT
TAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGATATCTGCT
PRIMERS
![Page 108: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/108.jpg)
Aumento da temperatura
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGAT
TAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGAT
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTA
Com o aumento da temperatura, a fita de Com o aumento da temperatura, a fita de DNA se separa.DNA se separa.
Como ocorre a reação?
![Page 109: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/109.jpg)
Com a queda da temperatura, os primers Com a queda da temperatura, os primers se ligam a fita de DNA complementar.se ligam a fita de DNA complementar.
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATCCCAGAT
TAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGATATCTGCT
Temperatura mais Baixa
Como ocorre a reação?
![Page 110: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/110.jpg)
Polimerase deDNA
dNTPs
Polimerase deDNA
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATCCCAGAT
AC A
C
TG
G
G
Iniciador
Molécula de DNA en cuestión
TAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGATATCTGCT
ACA
C
T
Com o auxCom o auxíílio da Taq polimerase e os dNTPs a lio da Taq polimerase e os dNTPs a ccóópia da fita pia da fita éé iniciadainiciada
Como ocorre a reação?
![Page 111: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/111.jpg)
2 cópias exatas da molécula de
DNA em questão
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGAT
ATCTGCTGCTAATCCGATACGTGTCCCAAGGGTCTATAGACGACGATTAGGCTATGCACAGGGTTCCCAGAT
AmplificaçãoDe uma molDe uma moléécula de DNA cula de DNA
obtobtéémm--se 02 molse 02 molééculas idênticas!!culas idênticas!!
![Page 112: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/112.jpg)
- “Primers” já testados e
validados;
- Aprovações e validações.
PESQUISAS CONSTANTES
GARANTINDO DIFERENÇAS
TECNOLÓGICAS !
BAX® SYSTEMSYSTEM
Qualitativo /QuantitativoQualitativo /Quantitativo
FACILITA A ROTINA E DIMINUI INTERFERÊNCIAS !
![Page 113: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/113.jpg)
TRANSCRIPTASE
REVERSA - rRNA
![Page 114: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/114.jpg)
RiboPrinter® System• Perfil genético Ribogrupo da bactéria ou
bolores e leveduras;• Técnica “Southern Blot” resultados em 8hrs;
• Biblioteca Nacional – Lanagro / MAPA;• Biblioteca atualizável – Mundial!
![Page 115: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/115.jpg)
Como o RiboPrinter® System Funciona
![Page 116: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/116.jpg)
COMO FUNCIONA:
• O DNA purificado sofre cortes por ação enzimática ( EcoRI ou PstI ou PvulI), neste processo de preparação do DNA.
• LISE – rompe a célula• DESPROTEINIZAÇÃO– limpa
debris• DIGESTÃO – enzima de
restrição (e.g., EcoRI) “corta”DNA em fragmentos específicos.
![Page 117: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/117.jpg)
O QUE ACONTECE:
![Page 118: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/118.jpg)
COMO FUNCIONA:
• Os fragmentos de DNA resultantes da ação enzimática são separados (por peso molecular) pelo processo de eletroforese em gel de agarose e transferidos para a membrana (Southern Blot), onde sofrem hibridização com a sonda de hibridização fluorescente, a qual seleciona os fragmentos originários da ação das enzimas de restrição.
![Page 119: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/119.jpg)
COMO FUNCIONA:
• Os fragmentos ficam fixados na membrana e então a câmara CCD registra a imagem da membrana.
• É feita análise e interpretação dos dados.
![Page 120: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/120.jpg)
Imagem Digitalizada
![Page 121: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/121.jpg)
RiboPrint® Patterns Demonstra Claramente a Diferenciação
![Page 122: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/122.jpg)
Identificação & Caracterização
![Page 123: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/123.jpg)
![Page 124: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/124.jpg)
Resultados:
• Após 8 horas têm-se a “impressão digital da bactéria”, sendo
possível identificar a real fonte de contaminação, melhorar ação de antibióticos mais específicos, fazer um estudo completo e confiável da taxonomia bacteriana e muito mais.
![Page 125: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/125.jpg)
INDÚSTRIA ALIMENTOS NECESSITA MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS QUE SEJAM:
• Precisos
• Rápidos
• Fáceis de utilizar
• Flexíveis
• Confiáveis
• Econômicos
• Acompanhamento e suporte técnicos contínuos
![Page 126: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/126.jpg)
VANTAGENS DOS MÉTODOS RÁPIDOS:
• Especificidade e confiabilidade;
• Aprovações e aceitações internacionais;
• Acompanhamento oficial de desempenho;
• Rapidez e agilidade na liberação de resultados!
![Page 127: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/127.jpg)
VANTAGENS DOS MÉTODOS RÁPIDOS:
• Facilitam a aplicação das boas práticas de laboratório;
• Diminuição do número de etapas de trabalho;
• Diminuição do erro analítico;
• Melhoria da qualidade dos processos;
![Page 128: MÉÉÉTODOS DE ANTODOS DE ANTODOS DE ANÁ …jararaca.ufsm.br/websites/departamen/download/cqia_09/... · mmmÉmÉÉÉtodos de antodos de antodos de anÁ ÁÁÁlises lises microbiolÓmicrobiol](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022030408/5a887e327f8b9a882e8e40e9/html5/thumbnails/128.jpg)
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Não ter nenhum resultado é
melhor do que ter um
resultado errado
Nascimento (2005)