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Mitobuilding: exercitar a mitocôndria
O efeito do Resveratrol na actividade mitocondrial
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Ana Rita Costa Afonso Maria Salomé de Basso Temudo
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Muitas patologias humanas, tais como o envelhecimento ou a diabetes , estão associadas à diminuição da função mitocondrial. Compostos que que estimulam a mitocôndria podem ser usados como terapia. O Resveratrol é um composto que tem efeitos benéficos no tratamento da doença cardiovascular, tem actividade anti-tumoral e estimula a mitocôndria.
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Mitocôndria
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1. Isolamento de Mitocôndrias:
5 Centrifuga
6
7
2. Quantificação de proteínas
Espectrofotómetro
8
3. Ensaios de consumo de oxigénio e potencial:
Eléctrodo de TPP+
Eléctrodo de oxigénio
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Estudos Preliminares- Potencial
Controlo Resveratrol
10
Estudos Preliminares- Potencial
208
210
212
214
216
218
220
222
224
Controlo Resveratrol
Potencial inicial (succinato)mV
Potencial inicial (succinato)mV
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Controlo Resveratrol
Lag Phase
Lag Phase
11 Resveratrol Controlo
Estudos Preliminares- consumo de O2
12
Estudos Preliminares- consumo de O2
0
50
100
150
200
250
Estado 3 V FCCP
Controlo
Resveratrol
0
10
20
30
40
50
60
70
Controlo Resveratrol
Estado 4
V oligomicina
0
1
2
3
4
5
6
7
8
Controlo Resveratrol
I.C.R.
ADP\O
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4. Electroforese e transferência (western Blot)
Electroforese em gel de poliacrilamida
Transferência para membrana de PVDF
VersaDoc
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5. Análise da expressão genética;:
5. 1Extrair RNA( tecido de fígado) Máquina de PCR
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5. Análise da expressão genética;:
5.2 Quantificar e analisar RNA
Padrão
Electroforese de RNA
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5. Análise da expressão genética;:
5.4 Sintetizar cDNA 5.5 qPCR
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Cultura de células:
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7. Ensaios células ROS\potencial
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
CTL
HFFAS
HFFAS+RESV
Ensaios potencial:
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
CTL HFFAS HFFAS+RESV RESV
Série1
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Ensaios ROS:
Leitor de placas
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8. Dinâmica mitocondrial