microbiología cultivo bacterias

ToMaV GramToMaV Gram

Microbiología cultivo-bacteriasMicrobiología cultivo-bacterias

Tinción de GRAM Tinción de GRAM

Gram positivoGram positivo

Gram negativosGram negativos



La La microscopia, microscopia, la construcción y el la construcción y el manejo de los microscopios, comenzómanejo de los microscopios, comenzó en en el siglo XVII con Antonie van el siglo XVII con Antonie van Leeuwenhoek y su pequeño microscopio Leeuwenhoek y su pequeño microscopio de mano.de mano.

La experimentación con microorganismos La experimentación con microorganismos casi siempre requiere su cultivo en el casi siempre requiere su cultivo en el laboratorio. laboratorio.



Anton Van Leeuwenhoek.



Microscopio de

Anton van Leeuwenhoek.



El microscopio de campo claro es más útil para la El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especimenes teñidos. Los observación de especimenes teñidos. Los

colorantes son compuestos químicos utilizados colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, para aumentar el contraste. Existen algunos,

llamados llamados colorantes colorantes vitales, que pueden añadirse vitales, que pueden añadirse directamente a una preparación en fresco; por directamente a una preparación en fresco; por tanto, colorean células vivas. No obstante, la tanto, colorean células vivas. No obstante, la

mayoría de los colorantes son solamente efectivos mayoría de los colorantes son solamente efectivos después de que los microorganismos hayan sido después de que los microorganismos hayan sido

fijados, es decir, se encuentren muertos y fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. adheridos al portaobjetos.


Microbiología cultivo-bacteriasMicrobiología cultivo-bacterias La tinción de Gram La tinción de Gram La técnica de la tinción de La técnica de la tinción de Gram Gram fue fue

desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta tinción clasifica las bacterias en dos en 1884. Esta tinción clasifica las bacterias en dos grupos: grupos: Gram positivas y Gram negativas Gram positivas y Gram negativas (Figura 3.9). (Figura 3.9). La técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción La técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste:de contraste:

1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta, 1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta, que tiñe de violeta.que tiñe de violeta.

2. Se añade el mordiente, iodo.2. Se añade el mordiente, iodo. 3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución 3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución

de acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram de acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tinción violeta, pero las Gram positivas negativas pierden su tinción violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.retienen el colorante.

4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de 4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta más intenso. color violeta más intenso.



El distinto comportamiento frente a los El distinto comportamiento frente a los colorantes de las bacterias Gram positivas colorantes de las bacterias Gram positivas y Gram negativas se debe a las y Gram negativas se debe a las diferencias existentes en sus superficies diferencias existentes en sus superficies externas. Las células Gram negativas externas. Las células Gram negativas poseen una capa de peptidoglicano poseen una capa de peptidoglicano delgada y una membrana externa. Las delgada y una membrana externa. Las bacterias Gram positivas poseen una capa bacterias Gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano v carecen de gruesa de peptidoglicano v carecen de membrana externa. membrana externa.



La tinción de Gram es extraordinariamente útil en clínica. La tinción de Gram es extraordinariamente útil en clínica. Esta técnica es, casi siempre, la primera prueba que se lleva Esta técnica es, casi siempre, la primera prueba que se lleva a cabo en la identificación de un microorganismo causante de a cabo en la identificación de un microorganismo causante de una enfermedad, aislado de un paciente. Con sólo un una enfermedad, aislado de un paciente. Con sólo un microscopio y unos cuantos botes de colorante podemos microscopio y unos cuantos botes de colorante podemos averiguar si un organismo es Gram positivo o Gram negativo, averiguar si un organismo es Gram positivo o Gram negativo, su morfología celular y su agrupación típica. Esto, a veces, su morfología celular y su agrupación típica. Esto, a veces, es suficiente para determinar con qué tipo de bacteria es suficiente para determinar con qué tipo de bacteria estamos trabajando. Es más, el tratamiento de una infección estamos trabajando. Es más, el tratamiento de una infección depende de que el agente sea Gram positivo o Gram depende de que el agente sea Gram positivo o Gram negativo, ya que algunos antibióticos actúan Sólo sobre los negativo, ya que algunos antibióticos actúan Sólo sobre los primeros, y otros sobre los segundos. La penicilina, por primeros, y otros sobre los segundos. La penicilina, por ejemplo, es más efectiva contra bacterias Gram positivas; ejemplo, es más efectiva contra bacterias Gram positivas; mientras que la estreptomicina y la tetraciclina actúan sobre mientras que la estreptomicina y la tetraciclina actúan sobre ambas.ambas.


Microbiología cultivo-bacteriasMicrobiología cultivo-bacterias NOTAS CLINICASNOTAS CLINICAS En primer lugar haga una tinción de GramEn primer lugar haga una tinción de Gram Un muchacho de diecinueve años que estaba perfectamente Un muchacho de diecinueve años que estaba perfectamente

por la mañana, comenzó a sentirse mal por la tarde. Sus por la mañana, comenzó a sentirse mal por la tarde. Sus padres lo encontraron paseándose por la casa en ropa interior, padres lo encontraron paseándose por la casa en ropa interior, jurando murmurando entre dientes. Cada vez se encontraba jurando murmurando entre dientes. Cada vez se encontraba más agitado y hostil. Finalmente, con la ayuda de un vecino, lo más agitado y hostil. Finalmente, con la ayuda de un vecino, lo metieron a la fuerza en un coche y lo llevaron a urgencias. metieron a la fuerza en un coche y lo llevaron a urgencias. Aunque su extraño comportamiento podía ser debido a las Aunque su extraño comportamiento podía ser debido a las drogas, tenía una fiebre de 40C, lo cual sugería una infección. drogas, tenía una fiebre de 40C, lo cual sugería una infección. Se le tomaron muestras de sangre, orina y líquido Se le tomaron muestras de sangre, orina y líquido cerebroespinal (obtenido mediante punción lumbar). En unos cerebroespinal (obtenido mediante punción lumbar). En unos minutos el médico de urgencias tuvo el diagnóstico. Una tinción minutos el médico de urgencias tuvo el diagnóstico. Una tinción de Gram del líquido cefalorraquídeo reveló la presencia de de Gram del líquido cefalorraquídeo reveló la presencia de numerosos diplococos Gram negativos (bacterias esféricas en numerosos diplococos Gram negativos (bacterias esféricas en parejas). Se trataba de parejas). Se trataba de Neisseria meningitidis, Neisseria meningitidis, causa común de causa común de la meningitis bacteriana en adultos jóvenes. El diagnóstico la meningitis bacteriana en adultos jóvenes. El diagnóstico precoz mediante la tinción de Gram, permitió un tratamiento precoz mediante la tinción de Gram, permitió un tratamiento rápido y la completa recuperación de la infección que rápido y la completa recuperación de la infección que amenazaba su vida.amenazaba su vida.

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