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Area Inmunología metodos utilizados en inmunologíaTRANSCRIPT
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Métodos inmunoanalítico
s
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MÉTODOS INMUNOANALITICOS
• Características de un inmunoanálisis
• Marcadores de antígenos y anticuerpos
• Ensayos homogéneos y heterogéneos
• Clasificación
• Métodos inmunoanalíticos sin marcadores
• Analizadores automáticos para inmunoanálisis nefelométrico y turbidimétrico.
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MÉTODOS INMUNOANALITICOS
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Visión global
• Visualizar (con instrumentos)• Marcador
• Homogéneos• Heterogéneos
• Competitivos• No competitivos
Visualización
Separación
Reacción
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Clasificación
• Sin marcador
– Inmunoprecipitación
Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
– Aglutinación
Particuloinmunoanálisis
• Con marcador
– Enzimoinmunoanálisis
– Fluoroinmunoanálisis
– Radioinmunoanálisis
– Quimioinmunoanálisis
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Inmunoprecipitación
• Precipitación (formación de un complejo visible) resultante de la combinación de un antígeno y un anticuerpo
– Simple - Radial– Doble - Cohete – Electroinmunodifusión– Inmunoelectroforesis
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Antígeno Anticuerpo soluble
soluble
insoluble
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Inmunodifusión radial
y = bx+a
y = (diametro)2
b = pendiente
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Título
Inmunodifusión doble
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Identidad antigénica: Se fusionan las líneas
Identidad antigénica parcial: aparece “espolón”
Falta de identidad: Se cruzan
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Electroinmunodifusión
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Electroforesis
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Inmunoelectroforesis
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Inmunoelectroforesis
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Inmunoelectroforesis en cohete
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Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
1 .-Inmunoprecipitación
2.- Detectarlo por métodos ópticos basados en la dispersión de la REM
I0
ID
Región UV
visibleIR
ID
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Dispersión de luz según el tamaño de partícula
.
Rayleigh
Partículas grandes
Tamaño partícula <
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Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
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REM dispersada Turbidimetría y nefelometría
Nefelometría
Turbidimetría
Particuloinmunoanálisis
Detección mediante técnicas basadas en dispersión
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REM dispersada Turbidimetría y nefelometría
Nefelometría
Turbidimetría
Turbidancia = log I0/I
Señal a 90º
Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
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Señal
Tampón
Atg Ac
Punto final
Tiempo Tiempo
Señal
Lectura a punto único
Atg+Ac1ª lectura
Segunda lectura
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Lectura múltiple
Concentración de antígeno
Señal
Zona de medida Zona de seguridad
Intervalos de tiempo de 0,1 y 0,2 s
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Análisis nefelométrico en flujo continuo
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Proteinas que se pueden determinar por inmunonefelometria
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Aglutinación
Reacción inmunoquímica que produce la formación de agregados insolubles de “partículas” (células, bacterias, perlas..) recubiertas con antígenos o anticuerpos.
- Directa
- Indirecta
Prueba de Combs (directa e indirecta)
- Inhibición de la aglutinación
1 Atc (completo)+Ag
2 Aglutinación
1 Atc (incompleto)+Ag
2 NO Aglutinación
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Aglutinación indirecta
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Aglutinación directa
Tratamiento de eritrocitos con enzimas
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Demostrar presencia de anticuerpos incompletos (no aglutinantes)contra antígenos ABO y Rh de los eritrocitos
utilizando antiinmunoglobulina como segundo anticuerpo
Detecta el AC en los
eritrocitos
Analiza el suero para
buscar anticuerpos lavado
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Particuloinmunoanálisis
• Sin marcador homogéneos– Miden la aglutinación como señal
de la reacción atg- ac
– Partículas:
– Inorgánica: metal
– Biológica (Celular): microorganismo, eritrocito
– Orgánica inerte: Polisacárido, bentonita, liposomas Latex
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Aglutinación
Determinación de antígenos
Determinación de anticuerpos
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Inhibición de la aglutinaciónCompiten
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Factor reumatoideNo se une al anticuerpo aislado,sí se une cuando cuando forma complejos
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ELISA
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WESTERN BLOT
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CITOMETRIA D E FLUJO
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Sensibilidad
MÉTODO SENSIBILIDAD (g/ml)
Precipitación en gel 30
Precipitación en anillo 18
Aglutinación bacteriana 0,05
Fijación de complemento 0,05
Hemaglutinación pasiva 0,01
Inhibición de la hemaglutinación 0,005
Inmunofluorescencia 0,005
ELISA 0,0005
Neutralización bacteriana 0,00005