meme kanserİ kÖk hÜcrelerİnİn gen ekspresyon …...erçetin p, ukk 2013 slayt 4 / 14...

Slayt 1 / 14 Erçetin P, UKK 2013

MEME KANSERİ KÖK HÜCRELERİNİN GEN EKSPRESYON

PROFİLİ

Sait Murat Doğan, A. Pınar Erçetin, Zekiye Altun, Duygu Dursun, Safiye Aktaş

Dokuz Eylül Üniversitesi Onkoloji Enstitüsü, İzmir


Meme Kanseri

Kadınlarda en sık görülen kanser tipi

Kanser ölümlerinde 2.sırada

Tedavisi;

Tümörün büyüklüğü, evresi, büyüme hızına ve moleküler karakteristiklerine göre değişmekte

Karsinogenezinde başlıca;

– p53, c-myc, BRCA1, BRCA2, HER2, bcl genleri sorumlu

– karmaşık moleküler karakteristiği nedeniyle sıklıkla araştırma konusu


Normal kök hücrelerle benzer özelliklere sahip

Kendini yenileme

Birçok hücreye farklılaşma

Tümör oluşturma yeteneği

Belli bir kanser içinde bulunan her tür

hücreye dönüşebilme

Tümör içinde bir alt populasyon

İlaç direnci , Relaps, Metastaz !!!

Heterojen tümör populasyonundan izole etmek için özelleşmiş hücre yüzey belirteçleri kullanılmaktadır

Kanser Kök Hücresi


Çalışmanın Amacı

Farklı moleküler ve biyolojik karakteristikteki meme kanseri hücrelerinin kök hücrelerindeki gen ekspresyon profilindeki farklanmaları ortaya çıkararak yeni moleküler hedefler bulunması amaçlanmıştır.


Materyal ve Metod

Materyal: CD44+ CD24- manyetik işaretli izolasyon kiti (MagCellect)

Meme kanseri hücre hatları ve ortamları

– MDA-MB-231

– MCF-7

– HTB-133

– HTB-20

RNA izolasyon kiti (QIAGEN)

cDNA sentez kiti (QIAGEN)

PAHS-131Z (meme kanseri ilişki 84 genlik array) (QIAGEN)


Materyal ve Metod Metod:

Hücre hatlarının kültüre edilmesi

Manyetik yolla CD44+CD24- meme kanseri kök hücre izolasyonu

Kök ve kontrol hücrelerinden total RNA izolasyonu

RNA saflığı ve miktarının spektrofotometrik ölçümü

cDNA sentezi

RT-PCR ile PAHS-131Z gen array

SA Bioscience’ın data analysis expression sayfasında (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php) heat

map ve clustergram ekspresyon analizlerinin yapılması

http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php


Materyal ve Metod Hücre Hatları:

Hücre Adı ER PR HER2 Alt Tipi Tümör Tipi Kaynak

MDA-MB-231 (HTB-26)

- - - Bazal B Metastatik Adenokarsinom

Pleural Efüzyon

MCF-7 (HTB-22) + + - Luminal Metastatik Adenokarsinom

Pleural Efüzyon

BT474 (HTB-20)

+ + + Luminal İnvaziv Duktal Karsinom

Primer Tümör

T47D (HTB-133) + + - Luminal İnvaziv Duktal Karsinom

Pleural Efüzyon

MCF-7 (HTB-22)

MDA-MB-231 (HTB-26)

BT474 (HTB-20)

T47D (HTB-133)


CD44 moAb

Materyal ve Metod CD44+CD24- Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Manyetik İzolasyonu :

CD24 moAb

NEGATİF SELEKSİYON (CD24-) POZİTİF SELEKSİYON (CD44+)

CD

44

+ CD

24

- me

me

kanse

ri kök h

ücre

eld

esi


MCF-7 (ER+ PR+ HER2- metastatik adenokarsinom) kök hücrelerinde taşıyıcı protein ailesinden SLC39A6 (160 kat) TFF3 (11 kat), transkripsiyon faktörü XBP1 (14 kat), RB1 (11 kat), MAPK3 (50 kat) gen ekspresyonları artarken; hücre-matriks ilişkisinde etkili ADAM23 (60 kat), migrasyon ve proliferasyon ilişkili PLAU (37 kat), antioksidan enzim kodlayan GSTP1 (41 kat), steroid hormon reseptörü AR (35 kat), anti-apoptotik BCL2 (20 kat), invazyon ve metastaz ilişkili MMP2, MMP9 (10 kat) ve DNA hasarı tamirinde görevli MGMT (7 kat)gen ekspresyonları belirgin azalmıştır.

Bulgular


Bulgular

BT474 (HTB-20, ER+ PR+ HER2+ invaziv duktal karsinom) kök hücrelerinde epiteliyalden mezenkimale dönüşümde etkili CTNBB1, DNA hasarı ve apoptoz ilişkili CDKN1A ve transkripsiyon faktörü JUN genlerinin ekspresyonları belirgin artarken (≥10 kat);

Nükleer steroid hormon reseptörü PGR, TFF3, hücre proliferasyonu ilişkili MKI67 ve nükleer steroid hormon reseptörü ESR1 gen ekspresyonları azalmıştır (≥20 kat).

≥10 kat


Bulgular

T47D (HTB-133, ER+ PR+ HER2- invaziv duktal karsinom) kök hücrelerinde anjiyogenez ilişki VEGFA gen ekspresyonu artarken (60 kat), epiteliyal hücrelerin mobilitesinde etkili TFF3 gen ekspresyonu belirgin olarak azalmıştır (21 kat).


MDA-MB-231 (ER- PR- HER2- metastatik adenokarsinom) meme kanseri hücre hattının kök hücrelerinde MMP9 (79 kat) ve MKI67 (24 kat) gen ekspresyonları belirgin azalırken ABCB1 ve SLC39A6 gen ekspresyonları artmıştır (3 kat).

Bulgular


Farklı meme kanseri kök hücrelerinin normal meme kanseri hücrelerine kıyasla meme kanseri ilişkili gen ekspresyonlarında belirgin artış ve azalışlar saptanmıştır.

Bu değişikliklerin başlıca hücre-hücre ilişkisi, anjiyogenez, tümör migrasyonu ve proliferasyonu ve DNA hasar tamiri ilişkili genlerde olduğu saptanmıştır.

Yeni tedavi hedeflerinin bu değişiklikleri de hedef alacak şekilde planlanması uygun olacaktır.

Ayrıca doğada tek tip meme kanseri kök hücresi bulunmamakta olup farklı fenotipte meme kanserlerinin kök hücrelerinin farklı ekspresyon göstermesi, kanser başlatıcı hücre deyimi kullanılmasının daha mı kullanışlı olacağı sorusunu gündeme getirmektedir.

Tartışma

meme kanserİ kÖk hÜcrelerİnİn gen ekspresyon …...erçetin p, ukk 2013 slayt 4 / 14...

Documents