REKOMBINASI

Matakuliah Genetika (BIO612206) Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Lampung

Priyambodo, M.Sc.

priyambodo@fmipa.unila.ac.id staff.unila.ac.id/priyambodo

KLONING GEN MELALUI REKOMBINAN DNA

Rekombinan DNA merupakan gabungan materi DNA dari sumber materi

genetik yang berbeda.

Teknik rekombinan DNA merupakan dasar dari teknologi rekayasa

genetik

atau manipulasi genetik.

Teknik rekombinan DNA juga menjadi dasar untuk analisa genetika

molekular,

antara lain untuk mengkarakterisasi gen, promoter.

Prinsip dari teknik rekombinan DNA yakni adanya DNA yang berperan

sebagai

pembawa atau vektor (misal:plasmid, fagmid, yeast artificial

chromosome/YAC)

dan fragmen DNA yang akan disisipkan.

Perkembangan teknologi rekombinan DNA sudah sangat pesat, sudah

banyak

produk yang dihasilkan maupun pemahaman tentang proses biologi

molekular

yang menggunakan bantuan teknik rekombinan DNA.

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

5

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

6

Prinsip dasar dari teknik rekombinan DNA

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

7

Pemotongan dan penyambungan DNA pada teknik rekombinan DNA

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

8

Salah satu teknik membuat konstruksi DNA rekombinan yakni menggunakan plasmid alami dengan menggantikan gen X (kecuali bagian promoternya/arsir kuning) dengan gen Cat (chloramphenicol acetyltransferase). Ekspresi dari gen Cat dapat diuji dari aktivitas Cat yang menghasilkan produk berupa CAM (chloramphenicol).

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

9

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

10

Enzim Endonuklease Restriksi

(Enzim Restriksi) • Endonuklease restriksi mengkatalisis pemotongan DNA pada

daerah tertentu yang mempunyai urutan nukleotida yang

spesifik.

• Urutan nukleotida pada DNA yang dapat dibaca sama dari kiri

ke kanan atau sebaliknya disebut urutan palindromik,

misalnya urutan 5’ AAGC 3’ akan terbaca sama dengan 3’

CGAA 5’.

• Enzim restriksi akan mengenali daerah palindromik dan

memutus ikatan fosfodiester dari rantai DNA.

• Endonuklease restriksi memiliki banyak jenis dan masing-

masingmemilikiurutan palindromik yang khas.

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

11

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id

12

Konstruksi plasmid vektor pBR322.

staff.unila.ac.id/priyambodo priyambodo@fmipa.unila.ac.id