CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO Y DE SERVICIOS N 13

Manual de inmunologaAplicar tcnicas Inmuno hematolgicasLaboratorio clnico

Profesora Almudena Francs Navarro Grupo: 4 L

Turno: vespertino

Alumno: Ruz Garca Alfredo

Determinacin de aglutingenos y aglutininas

Objetivo Aprender a realizar la tcnica de determinar los tipos de aglutinina y aglutingeno que corresponden a cada grupo sanguneo y la correspondiente reaccin al combinar aglutingenos y aglutininas. Fundamento Cuando se mezclan suero y glbulos de distintas personas puede ocurrir que tales mezclas permanezcan homogneas o bien que aparezca aglutinacin. Este fenmeno observado primero por Landsteiner permiti asentar el concepto de compatibilidad sanguina, tan importante en la prctica de las transfusiones. Generalidades La aglutinacin se produce por la actuacin de los anticuerpos (Ac) del suero o aglutininas sobre los antgenos (Ag) de los glbulos rojos o aglutingenos. De acuerdo a la existencia de los diversos aglutingenos y aglutininas los individuos pueden clasificarse dentro de 4 grupos sanguneos bsicos. La clasificacin admitida en la actualidad, de acuerdo a la recomendacin del Comit de Higiene de la Sociedad de las Naciones es la de Landsteiner (Sistema ABO) que establece la existencia de 4 tipos: Grupo O: este grupo no tiene aglutingenos pero si 2 aglutininas, alfa y beta.

Grupo A: este grupo tiene aglutingeno A y aglutininas beta. Grupo B: este grupo tiene aglutingeno B y aglutininas alfa. Grupo AB: este grupo tiene ambos aglutingenos y ninguna aglutinina. De acuerdo con esta clasificacin se deduce que el grupo sanguneo est determinado por la presencia o ausencia de aglutingenos y aglutininas.

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Material: y y y y y y y y y Material necesario para la extraccin de sangre 4 tubos de ensaye de 13 x 100 con tapn de hule 1 pipeta Pasteur con bulbo de hule (talle largo) Centrifuga Gradilla Pipeta graduada Pipeta autoclavable Solucin salina (NaCl 0.9%) E .D.T.A. al 10% Tcnica 1. Se extraen 6ml de sangre venosa los colocamos en un tubo de ensayo con anticoagulante para obtener plasma y se extraen 3ml de sangre sin anticoagulante para realizar los lavados eritrocitarios 2. El tubo con 3ml. lo mezclamos con solucin salina hasta tres cuartas partes del tubo realizamos 3 lavados de esta forma para obtener la suspensin de eritrocitos y centrifugamos. 3. Centrifugamos el tubo de 6ml. Para obtener el plasma. 4. Con la pipeta tomamos 4.9ml. de solucin salina y aforamos en un tubo limpio posteriormente tomamos 0.1ml. de la suspensin de eritrocitos 5. Con la dilucin obtenida mezclamos 2 gotas de esta con 2 gotas de cualquier tipo sanguneo 6. Centrifugamos y observamos si hay aglutinacin o no.

Resultados Plasma A + paquete globular B Aglutina

Plasma AB + paquete globular O Aglutina Plasma B + paquete globular AB Aglutina Plasma O +paquete globular A Aglutina

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Conclusin Como pudimos observar se concluye que la aglutinacin se da cuando cierto tipo de aglutingeno es mezclado con cierto tipo de aglutinina. Por ejemplo cuando plasma de tipo A que contiene anticuerpos para B se mezcla con paquete globular de B que contiene antgenos para B provoca que ocurra una aglutinacin.

Bibliografa

y

http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/grupos.htm

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Determinacin de grupo sanguneo y Rh con placa Objetivo Realizar la determinacin de grupo sanguneo y Rh en placa de crista as como Interpretar los resultados de esta tcnica. Fundamento La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema ABO. Este mtodo separa los tipos de sangre en cuatro categoras: y y y y Tipo: A Tipo: B Tipo: AB Tipo: O

de una persona tambin depende de la herencia de sus progenitores. El tipo de sangre o grupo sanguneo Conocer el grupo sanguneo de cada individuo es algo fundamental hoy da. En muchos casos, ya sea por accidente, por operacin o cualquier otra situacin, se pueden requerir transfusiones sanguneas. Para ello, se debe conocer el grupo sanguneo del individuo en cuestin as como su Rh para garantizar que se le suministra la sangre adecuada. Generalidades Los grupos sanguneo son una forma de clasificar la sangre, dependiendo de ciertas caractersticas que pose, estas dependen de los antgenos que los glbulos rojos presentan en su superficie y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los antgenos y el factor RH. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin inmunolgica que puede desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte. El austriaco Karl Landsteiner design los grupos sanguneos a principios del s. XX. Despus fue premiado con el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina en 1930 por sus trabajos en la caracterizacin de los tipos sanguneos AB0. O----45% A----41% B----10% 4|Pgina

AB---4% Tcnica MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS y y y y y y Material necesario para la extraccin de sangre Suero Anti-A Suero Anti-B Suero Anti-Rh Placa para grupo sanguneo Aplicadores de madera

1. Se extraen de 3- 5ml de sangre por puncin venosa 2. colocamos una gota de sangre en cada espacio de la placa A, B, O y AB .Despus colocamos 3. con el aplicador de madera mezclamos para homogenizar esperamos para ver si hay la aglutinacin correspondiste segn esto podremos determinar si es A- o A+, etc. Segn sea la aglutinacin en los espacios Resultados Los resultados indican que la persona tiene un tipo de sangre O Rh + ya que no aglutino ni en A, B o AB solo aglutino en O. Conclusin Con esto podemos decir que l tipo O tambin indica el Rh si O aglutina no importa cul sea el tipo indica que es positivo y sino aglutina indica que segn el tipo es negativo es negativo. Si fuese A Rh positivo aglutinara en A, AB y en O Si fuese A Rh negativo aglutinara en A y en AB Bibliografas y y http://cdpenbhumana.blogspot.com/2009/03/determinacion-de-gruposanguineo.html http://www.juntadeandalucia.es/averroes/recursos_informaticos/concurso20 01/accesit_4/gruposanguineo.html

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Rosa de Bengala

Objetivo: Que el alumno sea capaz de diagnosticar brucelosis por medio de tcnicas de laboratorio (Rosa de Bengala)

Fundamento: Prueba de aglutinacin rpida en placa para la deteccin temprana de aglutininas especficas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis) Generalidades: Se utiliza un antgeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la deteccin de aglutininas especficas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnstico temprano. Materiales: Reactivos: y y y Antgeno Rosa de Bengala Control positivo de Brucella Control negativo de Brucella

Equipo: y y y Placa prueba (se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observacin de los resultados) Pipetas desechables El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 L

Tcnica: 1. Recoleccin de sangre utilizar nicamente el suero 2. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero. 3. Utilizando la pipeta automtica adicione 30 L de la muestra del paciente en un crculo de la placa. 6|Pgina

4. Mezcle suavemente al antgeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogneo, despus coloque 30 L en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloc la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador, (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles. 5. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos 6. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resuelto. Importante: Despus de este tiempo la lectura ya no es vlida

Resultados: La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenz a mezclar. Este es un tiempo lmite ptimo en el que se da un espacio para la observacin de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, adems de que se pueden presentar reacciones no especficas. No aglutinacin suero negativo Cualquier cantidad de aglutinacin presencia de anticuerpos especficos suero positivo

Conclusin: Por medio de esta tcnica se ayuda al temprano diagnstico para brucelosis una enfermedad bacteriana que algunas veces se ocasiona por la ingesta de carne contaminada con la bacteria

Bibliografas: Rose J. E Roepke M. H AM. J. vet Res 1957, 18.550-555 Nicoletti P JAVMA. 1967, 151. 1778-7793 Join FAC/WHO Expert Committee on Brucellosis 6. Report Ginebra 1986

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Factor reumatoide

Objetivo: Que el alumno sea capaz de aplicar tcnicas para el correcto diagnstico de artritis reumatoide por medio de la prctica Factor reumatoide Fundamento: El factor reumatoide pertenece a un grupo de anticuerpos dirigidos contra la estructura terciaria modificada de la fraccin Fc de la inmunoglobulina igG. Su presencia se relaciona con enfermedades tales como: Artritis reumatoide y Lupus Eritematoso Generalizado entre otras. Generalidades: Como resultado del descubrimiento del factor reumatoide, se han desarrollado varias tcnicas para su identificacin y cuantificacin. Las tcnicas generalmente ms tiles han sido los procedimientos de aglutinacin en los cuales se emplean partculas de ltex de pliestireno cubiertas con una capa de gamma globulina humana adsorbida. El factor reumatoide presente en la muestra reacciona con el material cubierto originando una aglutinacin visible de las partculas de ltex inertes. Licon diagnstico de artritis reumatoide es una prueba rpida en placa que aglutina inmunoglobulinas anormales en suero conocidas como factor reumatoide en presencia de partculas de ltex sensibilizadas con gamma globulina humana.

Material Reactivos y Antgeno adsorbido o partculas de ltex 8|Pgina

y y y

Antgeno control positivo Antgeno control negativo Diluyente concentrado (regulador glicina-salina pH 8.2 concentrado)

Equipo y y y y Placa de reaccin Pipetas desechables Cronometro Lmpara de luz intensa

Tcnica: Mtodo cualitativo: o Obtener 3.0mL de sangre por puncin venosa o Centrifugar y separar el suero o Colocar en una gradilla 1 tubo (13x100 mm) o Depositar 1mL del frasco N 4 (diluyente concentrado diluido) o Aadir 0.05mL de suero problema o Despus de haber agregado el suero problema la dilucin obtenida es 1:20/ esta lista para su uso o En un anillo de la placa depositar una gota del frasco N 2 (suero control positivo) o En un tercer anillo depositar una gota del frasco N 3 (suero control negativo) o Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco N 1 (ltex) previamente resuspendido o Mezclar manual mente la placa de reaccin durante 2 minutos o Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz Resultados: El resultado fue negativo-ausencia de aglutinacin

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Bibliografas: y Llov, Panush R. cell Mediaet innmunity in Rhehumatoid Arthriis, Jourment Rheumatology. 1977: 231-44. y Segond P, et al Depresses Primary in vitro antibody response in rheumatoid arthritis clin exp immunology 1973. 93, 196-204 y Kunkel, H G, William R G Ann Hev Med 15:37, 1964

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Agentes febriles

Objetivo: Que el alumno se capaz de diagnosticar Salmonella typhi, S. enteritis y S.paratyphi por medio de tcnicas de laboratorio. Fundamento: La infeccin causada por microorganismos de diversas especies produce entre otros sntomas una marcada elevacin de la temperatura tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis as como las paratifcideas causadas por S. paratyphi A y B y el tifo causado por el gnero Rickettsias Generalidades: Debido a la dificultad existente para el aislamiento de lasRickettsias sp el antgeno empleado para la determinacin de anticuerpos es el de Proteus OX-19 el cual presenta una reaccin cruzado con bacterias del genero de Rickettsias La reaccin de Huddleson es un mtodo serolgico que detecta anticuerpos contra B.abortus-B.melitensi y Brucelosis. Material: y y y y y y y y Tfico O Tfico H Paratfico A Paratfico B Proteus OX-19 Suero control negativo Suero control positivo Placa de vidrio

Tcnica: y Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a probar: 0.08ml, 0.04ml, 0.02ml. 0.01ml y 0.005ml (el suero debe estar totalmente claro Agitar el antgeno al utilizar para tener una suspensin uniforme 11 | P g i n a

y

y

y y y y

Aadir 30L de la suspensin de antgeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40L) Mezclar el antgeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero Girar la placa manualmente o utilizando, un agitador mecanico (120 rpm) durante 2 minutos Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinacin macroscpica Se recomienda incluir controles positivo y negativo.

Resultados: Hubo resultados negativos ya que no hubo presencia de aglutinacin Conclusin: Esta prctica es esencial ya que ayuda al diagnstico de salmonella ya que esta se encuentra en algunos alimentos mal preparados (lcteos) Bibliografas: y y y Dyer R.E J.A.M.A 124:1165,1944 Flix .A Brit , MD J., 11:597. 1942 Spink WW. Amer J. CIn Path, 22:201, 1952

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Protena C reactiva

Objetivo: El alumno ser capaz de aplicar tcnicas para la identificacin de aglutinacin por partculas por ltex presentes en la sangre

Fundamento: Tillet y Francis concluyeron en 1930 que la reaccin que se origina en el suero de pacientes que sufren de enfermedades inflamatorias precipita con un extracto de pnuemococo no proteico llamado polisacrido C. La protena que causa este tipo de reaccin fue llamada protena C reactiva. Como un fenmeno no especifico el incremento en la concentracin de protena C reactiva se puede presentar en cualquier proceso inflamatorio agudo (ya sea infeccioso o no infeccioso).

Generalidades: La concentracin de protena C reactiva generalmente se encuentra por debajo de 6mg/L en el suero de adultos sanos y en enfermedades inflamatorias estos valores frecuentemente se incrementan en un lapso de 4 a 8 horas despus de presentarse un evento agudo alcanzando niveles aproximadamente de 20 a 500mg/L. Varios mtodos unmunoprecipitacion se han desarrollado para la deteccin de protena C reactiva. El principio del procedimiento presentado involucra una reaccin inmunolgica entre la protena C reactiva (como antgeno) y el anticuerpo correspondiente adsorbido a las partculas de ltex (ltex sensibilizado con Antiprotena C reactiva).

Material Reactivos:

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y y y y y y y

Antisuero adsorbido a partculas de ltex. ( ltex Anti-PCR) Suero control positivo Suero control negativo Diluyente glicina salina concentrado pH 8.2 Equipo: Placa de reaccin Pipetas desechables

Tcnica:

y y y y y y y y y y y y

Obtener 3.0mL de sangre por puncin venosa Centrifugar y separar el suero Colocar en una gradilla 1 tubo (13x100mm) Depositar 0.95mL del frasco N 4(diluyente glicina-salina concentracin pH 8.2) diluido Aadir 0.05mL del suero problema Despus de haber agregado el suero problema la dilucin obtenida ser 1:20 y estar lista para su uso En un anillo de la placa depositar 0.05mL del suero diluido En otro anillo depositar una gota del frasco N 2 (suero control positivo) En un tercer anillo depositar una gota del frasco N3 (suero control negativo) Aadir a cada uno de los tres anillos una gota del frasco N 1 (ltex protena c reactiva) previamente re suspendido Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz directo

Resultados: Los resultados de la prueba fueron negativos ya que en la placa reaccin no presento aglutinacin

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Conclusin: La prueba de protena c reactiva es esencial para el diagnstico temprano de partculas de ltex en la sangre de una persona y con esto un eficaz tratamiento

Bibliografas: y y y Harrison F Wood et aL The Occurrence During Accute Infections of a protein normal present in the blood j esp. medical Van Lente Frederick .Ph D. The diagnostic utility of C Reactive Protein, Human Patology. 1982. 13(12) 106-5 Ziegenhagen, G., Drahovsky. D : Klinsche Bedeutn desC reaktiven proteins . Med. Kiln. 78:21-35(1983)

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Prueba de embarazo

Objetivo: Realizar un examen de embarazo mediante sangre u orina Fundamento: Es una prueba que mide una hormona llamada gonadotropina corinica humana (GCH), producida durante el embarazo. Esta hormona aparece en la sangre y en la orina de las mujeres embarazadas hasta 10 das despus de la concepcin. Generalidades: Las pruebas HUMAPREG son pruebas inmunocromatograficas de un paso. La muestra (orina o suero) migra a travs de la membrana. Si la hCG est presente en la muestra, esta reacciona con los anticuerpos monoclonales especficos contra la a-hCG formado un inmunocomplejo, el cual esta marcado con un colorante rojo. Estos complejos se unen en el rea de resultado y son movidos por anticuerpos contra B-hCG y forman la lnea de prueba roja. Los anticuerpos inmovilizados anti-ratn capturan el exceso de reactivo para tomar una lnea control roja. Esta ltima aparece si la prueba ha sido realizada correctamente. El resultado positivo esta indicando por dos lneas rojas, el resultado negativo, si solamente es visible la lnea de control roja- valores de hCG tan bajos como UI/I dan un resultado positivo, proporcionando alta seguridad para el diagnstico temprano del embarazo. Siendo una prueba cualitativa, la intensidad de las lneas no afecta la interpretacin. Materiales: y Placas de prueba selladas individualmente, con desecante, en envoltura de aluminio. Contiene colorante rojo, anti-a-hCG ( ratn monoclonal) y anticuerpos anti-raton-lgG (cabra) Pipetas.

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Tcnica: y Las muestras deben estar a temperaturas ambiente. Los TEST almacenados en refrigeracin deberan ser llevados a temperatura ambiente. Retira la cantidad necesaria de pruebas, abra la envoltura poco antes de usarla. 16 | P g i n a

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Orina, suero: coloque el TEST en posicin horizontal sobre la mesa, usando PIP. Adicione 2 gotas completas de muestra en la ventana de muestra (S) en la parte inferior del TEST. Asegrese que cada gota se absorba completamente antes de agregar el siguiente. Orina alternativamente le TEST puede ser colocada en pocin vertical dentro de un contenedor de muestra. Asegrese que el lquido cubre just la ventana de nuestra. Una inmersin de la prueba ms all de la ventana de muestra impide un desarrollo correcto de la prueba. Dejar el TEST en la orina 10 minutos. Un resultado positivo fuerte es visible normalmente dentro de tiempo corto. Para muestras con concentraciones de hCG cerca del lmite de deteccin, el tiempo de lectura podra extenderse hasta 4 minutos (suero) y 10 minutos (orina)

Resultados: Los resultados de la paciente fueron negativos.

Conclusin: Las pruebas de embarazo se pueden utilizar para determinar la viabilidad de un embarazo. Se puede hacer una serie de exmenes de sangre cuantitativos, habitualmente con una diferencia de 2 a 3 das. Bajo un nivel de hCG de 1,200 mIU/mL, el hCG suele duplicarse cada 48-72 horas, aunque un aumento de 50-60 por ciento todava se considera normal Bibliogrficas:

www.human.de/data/gb/vr/ap-hcg-pdf

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Triniy Biotech Uni-Gold HIV

Objetivo: La prueba para HIV uni.Gold de Trinity Biotech es un ensayo individual para la deteccin de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total. Fundamento: El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) se ha reconocido como el agente etiolgico del sndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El HIV se ha aislado de: a) Numerosos pacientes con SIDA y desordenes relacionados b) Miembros asintomticos de grupos de alto riesgo de SIDA c) Pacientes sin otros factores de otro riesgo quienes han contrado SIDA despus de recibir transfusiones sanguneas

Generalidades: Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangre total al rea de muestras, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Los anticuerpos IgG especficas para las protenas recombinadas del HIV-1 y HIV-2, reaccionaron con los antgenos unidos a las partculas de oreo coloidal. El complejo partculas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatogrficamente a travs de la membrana o las regiones de prueba y control del cartucho de prueba.

Materiales: y Cartuchos de prueba (cada cartucho oro coloidal marcado con protenas HIV recombinadas, protenas HIV recombinadas como zona de prueba y una lnea de control. Reactivos de lavado (reactivo individual para sangre toral, suero o plasma) 18 | P g i n a

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Pipetas desechables Cronmetro Equipo de toma de muestra de sangre

Tcnica: y y y y y y y Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeracin atemperen 20 minutos o temperatura ambiente Tome el nmero de cartuchos de prueba Uni-Gold HIV de Trinity Biotech Marque cada prueba con la informacin apropiada del paciente Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total) Colocando la pipeta sobre el rea de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60L) cuidadosamente Adicione dos gotas (aproximadamente 60L) del reactivo de lavado Permita que transcurran exactamente 10 minutos para que la reaccin ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de los 10 minutos de tiempo de incubacin. Los resultados son estables aproximadamente durante 5 o 10 minutos

Resultados: Los resultados fueron negativos ya que solo aparece una lnea en el rea de control lo que nos indica un resultado negativo Conclusin: Esta prueba es esencial para aquellas personas en las que son sexualmente activa y promiscuas ya que el VIH como todos sabemos es una enfermedad de transmisin sexual. Bibliografas: y Kaplan EH, Heimer R (1995). HIV incidence among New Haven needle exchange participants: updated estimates from syringe tracking and testing data. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retrovirol.10 (2): pp. 175 176..

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Bell DM (1997). Occupational risk of human immunodeficiency virus infection in healthcare workers: an overview.. Am. J. Med.102 (5B): pp. 9 15. European Study Group on Heterosexual Transmission of HIV (1992). BMJ.304 (6830): pp. 809813

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VDRL-USR

Objetivo Que el alumno tendr las bases para realizar con xito el diagnstico de la prctica de VDRL Fundamento La sfilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum, transmitida habitualmente por contacto sexual Generalidades El diagnstico descansa en la serologa; los mtodos determinan dos clases de anticuerpos: 1) Tipo cardiolipina no treponema e inespecficos y 2) los antitreponemas especficos. La facilidad para su determinacin ha hecho que los del tipo cardiolipina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales ya sean exmenes individuales o encuestas de poblacin, la variante tcnica ms comnmente empleada es la llamada VDRL (Venereal Disease Research Laboratory ) que determina la iloculacion en placa (cuantitativa) del antgeno con cardiolipina y lecitina. Materiales Reactivos Antgeno en suspensin estabilizado Control positivo Control negativo Equipo Aguja N 21 sin bisel Pipetas desechables Placa cncava Agitador mecnico Cronmetro Microscopio

Tcnica Mtodo cualitativo:

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1. En un anillo de una placa cncava deposite 0.05 ml de suero problema. 2. En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie del anillo. 3. Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado previamente re suspendido, en cada una de las muestras utilizando la aguja N 21 sin bisel. 4. Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 100 rpm durante 4 minutos. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporacin de las muestras, por lo tanto, la placa en rotacin puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida previamente con una gasa. 5. Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular de 10 X

Interpretacin: Control positivo Presencia de floculacin mediana o grande Control negativo Ausencia de floculacin

Mtodo cuantitativo: Seleccionas los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. Colocar en una gradilla 6 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos . Agregar a cada uno 0.5 ml de solucin salina 0.9%. Depositar 0.5 ml de suero, al tubo N 1 al y mezclar. Pasar 0.5 ml del tubo N 1 al tubo N 2 mezclar. Pasar 0.5 ml del tubo N 2 al tubo N 3 mezclar. Continuar esta operacin hasta el tubo N 6. Depositar 0.05 ml de cada una de las diluciones sobre las diferentes anillos de la placa cncava 9. Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado (VDRL) utilizando la aguja N 21 sin bisel a cada una de las diluciones 10. Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm durante 4 minutos 11. Leer al microscopio con objetivo y ocular de 10 x 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Interpretacin: 22 | P g i n a

El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presenta un resultado positivo. Ejemplo : Si se presenta floculacin hasta el tubo N 3 esta es la dilucin 1:8 por lo tanto el ttulo ser 1:8

Resultados Los resultados de la prueba de VDRL fueron negativos, ya que no hubo aglutinacin Conclusiones Por medio de tcnicas de laboratorio se puede diagnosticar si una persona padece de alguna enfermedad en este caso se practic el examen de VDRL el cual ayuda a diagnosticar sfilis (enfermedad de transmisin sexual)

Bibliografas: y y y Harris. A . et al. A microfloculacin test for syphillis using cardiolipin antigen. Preliminary report. Journal venereal disease information, 27 ;169-174. 1946 Harris. A . et al. the VDRL slide flocculation test for syphilis supplementary report journal venereal disease information. 29: 72-75.1948 Kumate.j , Gutierrez G. Manual de infectogia . 5 ed. Ediciones mdicas del hospital infantil de Mxico, Mxico 1977, pp 296, 303

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Antiestreptolisinas O

Objetivo: Determinacin del ttulo de antiestreptolisina en el suero de personas con infecciones por estreptococos del grupo A.

Fundamento: En las infecciones causadas por estreptococo B-hemoltico, se libera Estreptolisina-O de la bacteria estimulando la produccin de anticuerpos Antiestreptolisina-O (ASO). La presencia y el nivel de estos anticuerpos en una muestra de suero pueden reflejar la naturaleza y severidad de la infeccin

Generalidades: Esta prueba de Estreptolisina utiliza una suspensin buffer estabilizada de partculas de ltex de poliestireno recubiertas con Estreptolisina-O, cuando el reactivo de ltex se mezcla con una muestra de suero que contenga anticuerpos hacia Estreptolisina-O, ocurre la aglutinacin. El reactivo de latex es producido de manera de que la aglutinacin tome lugar nicamente cuando el nivel de anticuerpos hacia Estreptolisina-O sea igual o mayor a 200 iU/mL, este un nivel indicativo de enfermedad por estudios clnicos y epidemiolgicos.

Materiales: Reactivos: y y y y ASO reactivo de latex , cat , 1126 (tapa blanca) ASO control positivo, cat.N 1127 (tapa roja) Control negativo, cat N. 1992 (tapa verde) Buffer Glicina-salina (20x) concentrado, cat. 1191

Equipo: y y y Placa 6 anillos Pipetas/agitadores desechables Cronometro 24 | P g i n a

y y y

Fuente de luz tubos y gradillas Pipetas serolgicas Agitador mecnico

Tcnica: y y y Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente Agite suavemente en el frasco del reactivo de ltex para dispersar y resuspender las partculas de ltex. No agitar excesivamente. Aada una gota de la muestra del paciente no diluida utilizando una de las pipetas desechables, en un crculo de la placa. Tambin coloque una gota de los controles positivo y negativo en los otros crculos separados dentro de la misma placa. Agite suavemente el frasco de ltex. Coloque una gota del reactivo de ltex junto a la gota de muestra de suero en cada una de los crculos ocupados. Mezcle ambas gotas con el agitador-mezclador desechable incluido, cubriendo por completo la superficie del circulo Agite manualmente la placa por 2 minutos de manera q la mezcla rote suavemente y despacio dentro de los crculos o coloque la placa en un rotor automtico a 80-100 rpm Despus de 2 minutos examine cada crculo para observar la ausencia o presencia de aglutinacin

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y

Resultados: Los resultados fueron normales ya que estuvo entre los limites estndar de la prueba por lo que el resultado es sano (normal)

Conclusin: La dispersin de los valores de anticuerpos antiestreptolisina O no se correlaciona con la variabilidad de las concentraciones de protena C reactiva de alta sensibilidad e IgG, lo que sugiere que los valores obtenidos de pacientes 25 | P g i n a

clnicamente sanos, no se modifican por un potencial proceso inflamatorio subyacente o por la concentracin srica.

Bibliografas: y y y Rantz L. D., DiCaprio JM Randall E. Am J. Med sci., 24,1952 Klein Cl, Applied Microbiology, 21 : 999.1971 Data on file, Stanbio Laboratory

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