Malassezia :

un género emergente en micología clínica

Bioq. Silvana RamadánCEREMICFac. Cs. Bioq. y FarmacéuticasUNR

MalasseziaReino: FUNGYDivisión: BASIDIOMYCOTAClase: USTILAGINOMYCETESOrden: MALASSEZIALES

Género: MALASSEZIA

M.furfur (1889)M.sympodialis (1990)M.obtusa ( 1996)M.globosa (1996)M.sloffiae (1996)M.restricta (1996)

LIPOFÍLICAS

M.pachydermatis (1935) NO LIPOFÍLICA

M. dermatis (2002)M. equi (2002)M. japónica (2003)M.nana (2004)M.yamatoensis (2004)M. cuniculi sp nov. (2010)

LIPOFÍLICAS

Pared celular

multilaminada

Brotes enteroblásticos

Malassezia COMENSAL �tronco� miembros superiores� espalda� frente� lóbulo retroauricular� nuca

Factorespredisponentes

Patologías cutáneas Patología sistémica

� Pitiriasis versicolor� Foliculitis� Dermatitis seborreica� Dermatitis atópica� Psoriasis� Pustulosis neonatal� Onicomicosis� Otitis� Papilomatosis confluente

o reticulada

Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor

Factores predisponentes: ◊ susceptibilidad genética◊ enf. de base debilitantes◊ desnutrición◊ aumento del cortisol plasmático◊ altas temperaturas y humedad

Infección superficial crónica, benigna con hipo o hiperpigmentación de la piel

Edad: pubertad, jóvenes y adultos

Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor

Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor

Patogenicidad de Malassezia:

Actividad queratolítica: ruptura mecánica o química de la queratina de las células

Producción de enzimas: lipooxigenasas, producción de lipoperóxidos que dañan las membranas celulares

Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor

Probables mecanismos de la despigmentación de la piel:

Bloqueo en la transferencia del melanosomaal queratinocito

Producción de productos indólicos que bloquean la luz UVA, UVB

Inhibición de la producción de melanina por la presencia de ác. azelaico, inhibidor por competición de la Tirosinquinasa

FoliculitisFoliculitis

Características clínicas: pápulas pruriginosas y pústulas que se localizan en tronco, brazo, cuello y cara.

Factores predisponentes: embarazo, leucemias, SIDA, diabetes, pacientestransplantados, corticoterapia, antibióticoterapia, estrés.

Patogenia: crecimiento exacerbado de las levaduras en el folículo y liberación de metabolitos que producen inflamación e irritación

Dermatitis seborreica/ CaspaDermatitis seborreica/ Caspa

DS: descamación e inflamación en áreas del cuerpo ricas en glándulas sebáceas.Características

clínicasCaspa: forma menos severa, descamante pero no inflamatoria

Patogenia: * aumento del crecimiento de Malassezia en la zona afectada

* respuesta inmunológica del hospedero

Descamación e inflamación de regiones del cuerpo rica en glándulas seb

Dermatitis Dermatitis atatóópicapica((Eczema Eczema AtAtóópicopico/ / SmeSme. Dermatitis). Dermatitis)

Factores predisponentes: factores genéticos, defectos en el SI, daño en la integridadde la piel como barrera defensora, estrés emocional.

Las levaduras de Malassezia estarían actuando como alergenos.

Especies más frecuentemente asociada:M. sympodialis (Canadá, SueciaM. restricta, M. globosa (Japón)M. sympodialis, M. globosa, M. furfur (Arg.)

Enfermedad multifactorial con inflamación crónica disparada por varios alergenos con ciclos de exacerbación y remisión

Enfermedad sistEnfermedad sistéémicamica

Neonatos prematuros o noAdultos inmunosuprimidos

alimentación parenteral

Especies más frecuentemente relacionadas: M. furfurM. pachydermatis

Procesamiento de la muestra

1º Examen microscópico con Azul de Lactofenol e Hidróxido de potasio al 20% + calor

Escamas, secreciones

Hemocultivos

1º Examen microscópico con May Grünwald-Giemsa

Extracción de la muestra

Piel: Con cinta scotchRaspado con bisturí estéril y recuperación en portas flameados

Sangre: Extracción para hemocultivo

32ºC- 5-7 días

CULTIVO POSITIVO

Examen microscópicocon A. de Lactofenol

Examen macroscópico Preservación y almacenamientode la cepa

Identificación

FenotípicaGenotípica

2º Siembra en los medios de cultivo :

* Sabouraud-Glucosa + Ac. de oliva estéril* Agar Dixon modificado* Leeming y Notman

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA (continuación)

Examen microscópico directo

Levaduras

Filamentos

CULTIVO POSITIVO

EXAMEN DIRECTO DE LA COLONIA

Azul de Lactofenol-400 XAzul de Lactofenol-1000 X

Caracterización fenotípica de las cepas de Malassezia

1) Reacción de la catalasa

2) Utilización de compuestos Tween

3) Desdoblamiento de la esculina

4) Test de termotolerancia

20

4060

80

5) Asimilación de Aceite de Ricino

Malassezia spp.

Sub-cultivo en Sb-Glucosa

Utilización de Tweens

M.pachydermatis 2080

60 40

+ -+ +

+ +

+ +

+

++- - -

- -

M.sympodialis M.furfur M.slooffiiae

Aceite de ricino(+)M.furfur

(-)

Pba. de la esculinaM.sympodialis(+)

(-)M.slooffiae

Catalasa(-)M.restricta

(+)

Pba. de la esculina

M.globosa M.obtusa(-) (+)

(+)(-)

CHROMagar Candida- modificado

Kaneko et al., Med Mycol, 2005

•BILIS DE BUEY

•GLICEROL

•MONOESTEARATO DE GLICEROL

•TWEEN 60

M. pachydermatis

M.sympodialis

M.globosa

M.furfurM.slooffiae

M.obtusa

M.restricta

M.dermatis

M.japonica

CHROMagar Malassezia- Tween 40

Kaneko et al., Med Mycol, 2006

Kaneko et al., Med Mycol, 2007

ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN

•CHROM-MALASSEZIA MODIFICADO

•AGAR ESCULINA-TWEEN 60

•AGAR SABOURAUD – GLUCOSA

•REACCIÓN DE LA CATALASA

•Presencia de pp.

•Morfología

M.pachydermatis

Kaneko et al., Med Mycol, 2007

ALGORITMO DE TRABAJO

Cultivo en CHROMagar-Malassezia mod.

AUSENCIA DE PP.PRODUCCIÓN PP.

Sub-cultivo en SBG

Esculina-tween 60

M.sympodialis

M.dermatis

M.globosa

+_

D +E+

D+E-

D-E-

Catalasa

M.restricta

-GrandeRosa p.rugosa

M.furfur

M.japonica

M.slooffiae

Esculina-tween 60

D+E-

D+E+

D-E+

M.obtusa

Caracterización genotípica de las cepas de Malassezia

PCR-FINGERPRINTING

Modificación del método RAPD

Cebador único : M 13 (5’ -GAGGGTGGCGGTTCT-3’)

Amplifica regiones minisatélites

Estable y reproducible

Nested-PCR (Sugita et al., 2001) PCR anidada. Se trabaja desde laMUESTRA CLÍNICA

PCR-REA (Guillot et al., 2000// Giusiano et al., 2003) Análisis derestricción enzimática

�PCR-RFLP (Gupta et al., 2000// Guillot et al., 2000//Mirhendi et al., 2005)� Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción.

9

1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 bp

10000

3000

1500

1000

750500

250/500

9

Calle 1: 1kb ladder, calle 2: M. sympodialis, Calle 3: M. pachydermatisCalle 4: M,furfur, Calle 5: M. slooffiiae, Calle 6: 1 Kb ladder, Calle 7: M. restrictaCalle 8: M.obtusa, Calle 9: M.globosa, Calle 10: M.globosa, Calle 11: 1 kb ladder

INFORME ESCRITO

Examen directo: Se observan elementos levaduriformes y/o

filamentos compatibles con Malassezia spp.

Cultivos: Se obtuvo desarrollo de Malassezia spp.