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Fotos: Farfán, 2009
M Sc. SOLANGE BENÍTEZBacterióloga. UCMC
Universidad Nacional de Colombia
Asohofrucol Universidad Nacional de Colombia
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural
I. A. Ph.D. LILLIANA HOYOSProfesora Asistente
Universidad Nacional de Colombia
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Caracterizar mediante técnicas biológicas, bioquímicas y
moleculares el agente etiológico de la enfermedad mancha
de aceite incidente en cultivos de gulupa (Passiflora edulis
Sims) en zonas productoras de Colombia.
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Objetivo IV
Pruebas bioquímicas Pruebas moleculares
Objetivo III
Pruebas de patogenicidad en gulupa. Análisis de cortes histopatológicos
Objetivo II
Pruebas de hipersensibilidad en pimentón.
Objetivo I
Observaciones en campo y obtención de aislamientos.
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Muestras de Gulupa y Maracuyá.
El Peñol
CajamarcaIbaguéVilla Rica
GarzónGigante
La Argentina
San Martín
GranadaSan Bernardo
Venecia
Buenavista
ManizalesSta. Rosa de Cabal
La praderaLa UniónToro
Roldanillo
Características generales de las zonas recolectadas:
•15‐20 C°.
•1.400‐2.300 msnm.
•1‐3 años.
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Benítez y Hoyos , 2009. Rev. Col. Cie. Hort.
La mayoría de aislamientos a partir de muestras de hojasafectadas corresponden a un 59 %, lo cual es un indicativode que los síntomas iniciales de la enfermedad demancha de aceite son foliares (tipo III).
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Día 1-3
Día 7 Día 8-9
Día 14-15 Día 20
Día 30 Día 45
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Tejido sano de gulupa.
Corte trasversal de hoja infectada en estado 4.
Avance de lesión.
Corte trasversal hoja sana de gulupa, nervadura central.
Corte trasversal de hoja infectada asociada lesión a nervadura
Disrupción celular y algunas fibras de pared celular
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Árbol de análisis filogenético obtenido por Neighbour Joining de secuencias ADNr 16S de aislamientos bacterianos patogénicos obtenidos de gulupa. MEGA 4.1. Bootstrap: 1000 réplicas.
I.
II.
Xanthomonasaxonopodis
Stenotrophomonas sp.
Fotos: Farfán, 2009
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PCR anidada para la confirmación del agente causal específicamente pv. passiflorae.
Munhoz, 2009.
•
•
•
641 pb
520pb
641 pb
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Pruebas bioquímicas: Sistema de Identificación API 20NE® Pruebas moleculares
Familia: Xanthomodaceae Familia: Enterobacteriaceae
Amplificación y secuenciación de ADNr 16S Amplificación de región específica de ITS 16S‐23S. pv. passiflorae
Xanthomonas axonopodis
X. campestris Stenophomonas sp.
E. cloceae o E. amylovora
Pantoea aglomerans
Xanthomonas axonopodisR‐22580
Stenophomonassp.LMG 11002, 957 y 11087
E. cloceae
Pantoea agglomerans P5WAM y AE10
Aislamientosanalizados
15/22 1/22 3/22 2/22 1/22 10/18 5/18 1/18 2/18 0/10
N° total de aislamientos analizados
22 18 10
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0
7
14,3
28,6
42,9
54,7457,1 57,1
71,4
85,7
98,9
1 3 5 7 9 11 13 15 20 30 45
Índices d
e Severid
ad% (P
roceso de la enfermed
ad).
Días Pos‐Inoculación (Tiempo).
Estado 0.
Estado 1.
2 X104 UFC/4cm2
(Fase epifítica).
Periodo de Incubación: Penetración e infección
Inicio de manifestación de síntomas:
Colonización (fase exponencial).
Estado 2.
Estado 3.
Inicio de Necrosis: Desarrollo de factores de
patogenicidad. Actividad metabólica.
Manifestación de síntomas:
Establecimiento y resistencia a estrés
oxidativo etc.
Necrosis: 2 x 109
UFC/4cm2. Capacidad máxima por cm2.
Observación de síntomas en otros órganos: P, C y E, traslado de población bacteriana. Necrosis
generalizada, defoliamiento.
Disrupción del PL
Halos aceitosos en tallos y presencia de síntomas en hojas ascendentes.
Dispersión de población bacteriana por haces vasculares.
Mora et al., 2009 reportan que la incidencia en los lotes infectados varía del 30% al 95% donde los factores ambientales que favorecieron el desarrollo y la incidencia de esta enfermedad fueron una precipitación media de 3,29 mm, temperatura media de 20,8°C, humectación de la lámina foliar 366,5 por minuto y una humedad relativa media de 72.1%.
Xanthomonas axonopodis en gulupa (P.edulis Sims)
1 X108 UFC/4cm2
(Clorosis).
Estado 4.
Fase de Establecimiento (Est I)Colonización I.Infección I Establecimiento
estableInfección II Enfermedad ‐
Coloniza. II
Fase Patogénica (Est II)Las condiciones favorables de la enfermedad de “Mancha de aceite” es:•HR: 70-90%•T: 20-30°C•Alta humedad de la lámina foliar para su diseminación.
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Patovariedad en X. axonopodis:
•No hubo coincidencia en los productos deamplificación con primers específicos•No se puede concluir con certeza si es o no X.axonopodis pv. passiflorae.
Fotos: Farfán, 2009
Los agentes bacterianos causales de la enfermedad de “Mancha de aceite” en gulupa (P.edulis) son X. axonopodis y Stenotrophomonas sp.
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Síntomas:
•Lesiones iniciales manchas acuosas de bordes irregulares, acompañadas de necrosis y normalmente de color amarillento en el ápice o lámina lateral de las hojas. • Prevalencia de lesión tipo III•Cuando el progreso de la enfermedad es máximo ocurre desprendimiento foliar (pérdida de área fotosintética)• Halos aceitosos en otros órganos como frutos, tallos y flores.•Enfermedad sistémica.
Fotos: Farfán, 2009
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Histología:
Las masas bacterianas se alojan principalmente en los espacios intercelulares del parénquima lagunar y cortical.En estados avanzados de la enfermedad se observan masas bacterianas en los haces vasculares.
Enfermedad de mancha de aceite :
Fase I: Infección y establecimiento de inóculo. Periodo de incubación 5 días hasta el inicio de manifestación de síntomas.Población bacteriana aumentó 100.000 veces hasta el 7 día pos-inoculación.
Fase II: Enfermedad.Movimiento de inoculo a otras localizaciones de la planta dispersión de síntomas.
Fotos: Farfán, 2009
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