lp 4 - diagnosticul in infectia cu herpesvirusuri
DESCRIPTION
VirusologieUMF "Carol Davila" Bucurestianul IIITRANSCRIPT
DIAGNOSTIC IN INFECTIA CU
HERPESVIRUSURI
• Alfa-herpesvirusuri
• Beta-herpesvirusuri
• Gamma-herpesvirusuri
Subfamilia Herpesvirusuri umane Sediul latentei
Alfaherpesvirinae Herpes simplex 1
(HSV1-facial) -HH1
Herpes simplex 2
(HSV2-genital) - HH2
Virus varicelo-zosterian (VZV) - HH3
Neuroni senzitivi din
rãdãcina posterioarã a nervilor spinali şi nucleii senzitivi ai nervilor cranieni
Betaherpesvirinae Virus citomegalic
(CMV) -HHV5
Virus Herpetic uman 6 - HHV6
Virus Herpetic uman 7- HHV7
Limfocitul T,
monocite, organe solide (plamâni, rinichi) +/- epiteliul glandelor salivare
Gamaherpesvirinae Virus Epstein Barr
(EBV) - HHV4 HHV8 (asociat sarcomului Kaposi)
Limfocitul B,
endoteliu capilar
Diagnostic in infectia cu
ALPHAHERPESVIRUSURI
orientare clinica
leziuni veziculare
HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)
HERPES SIMPLEX 2 (HSV2) VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)
GINGIVOSTOMATITA
HERPETICA
HERPES GENITAL
PRODUSE PATOLOGICE
• Lichid vezicular
• Tampon conjunctival
• Tampoane vaginale, lavajul cervico-
vaginal, tampon uretral
Recoltare recomandata in cazul
leziunilor active (50% sanse de izolare virala)
Directii de diagnostic
• Izolare virala – dg de electie
• Diagnostic direct =
– PCR
– Imunofluorescenta directa
• Diagnostic indirect - valoarea testelor
serologice
Sincitiu = celule balonizate, multinucleate
Incluzii acidofile = corpii Cowdry A
Reactia de
Imunofluorescenta
directa test specific, reproductibil, ieftin
• Amprenta se va usca bine:
pp. amprentat direct pe lama
• Imersie in acetona la 2-8°C timp de 10 minute
si uscare.
ID
PP
Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei
• Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37° C)
• Spalare
• Citire la MO in lumina UV
ID
PP
Anticorpi monoclonali marcati cu
ITC fluoreceina sau
rhodamina anti epitopi specifici
de la nivelul anvelopei
-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd
-polipeptide (HSV2) =78-82kd
•PCR-metoda mai sensibila de
confirmare a dg. de infectie cu HSV
• util mai ales in:
- detectia infectiei in excretia asimptomatica
- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri
discordante
- eficienta supresiei replicarii virale in terapia
antivirala (encefalita herpetica)
• Serologia singura nu este
considerata ca dg de confirmare
ci se alatura testelor de dg. direct.
Diagnostic in infectia cu
BETAHERPESVIRUSURI
CMV
Directii de diagnostic
• Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane / Shell vials (24h). Dupa 2 zile se poate observa ECP / detecta antigene timpurii prin RIF(pp: lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant, urina
• IF directã pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara
• PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic
• ELISA de capturã pentru anticorpi anti CMV IgM; ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.
Shell vials
Cell culture
ECP CMV
RIF – evidentierea Ag pp65 cu Ac antipp65
marcati fluorescent
Diagnostic serologic al infectiei
cu CMV la gravide
PRIMA TESTARE
Diagnostic in infectia cu
GAMAHERPESVIRUSURI
EBV
•ELISA si IF
•anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA,
anti EA)
•anticorpi anti nucleari (anti EBNA)
(pp=ser)
•PCR pentru ADN EBV
• (pp=biopsie tisulara, sânge integral)
Diagnostic in infectia cu virusuri
herpetice
Diagnostic in infectia cu
herpesvirusuri
• Alfa-herpesvirusuri
• Beta-herpesvirusuri
• Gamma-herpesvirusuri
HERPESVIRIDAE
• ALPHAHERPESVIRINAE
• HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)
• HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)
• VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)
• BETAHERPESVIRINAE• CITOMEGALIC (CMV)
• HUMAN HERPESVIRUS 6 (HHV6)
• HUMAN HERPESVIRUS 7 (HHV7)
• GAMAHERPESVIRINAE• EPSTEIN BARR (EBV)
• HUMAN HERPESVIRUS 8 (HHV8)-KAPOSI ASSOCIATED
Diagnostic in infectia cu
alfaherpesvirusuri
-
orientare clinica
leziuni veziculare
HSV 1
HSV 2
PRODUSE PATOLOGICE
• Lichid vezicular
• Tampon conjunctival
• Tampoane vaginale, lavajul cervico-
vaginal, tampon uretral
Recoltare recomandata in cazul
leziunilor active (50% sanse de izolare virala)
Directii de diagnostic
• Izolare virala – dg de electie
• Diagnostic direct =
– PCR
– Imunofluorescenta directa
• Diagnostic indirect - valoarea testelor
serologice
Izolare virala – diag. de electie
DIAGNOSTIC DE ELECTIE
Izolare virala-HSV 1 si 2: ECP apare la 2-3 zile cu raspandire rapida
-VVZ: ECP apare lent, focalizat cu raspandire in 1-2 saptamani
• HEp2
• HEK
• NCI-H292
• RD
• MR-5
• Culturi primare de rinichi de iepure
• Culturi diploide de fibroblaste
Sincitiu = celule balonizate, multinucleate
Incluzii acidofile = corpii Cowdry A
Sanse crescute de izolare
-in primoinfectie
-in stadii incipiente vs. in cazul aparitiei
crustelor
-in cazul leziunilor veziculare fara
suprainfectie
Diagnostic direct
Reactia de
Imunofluorescenta
directatest specific, reproductibil, ieftin
• Amprenta se va usca bine:
pp. amprentat direct pe lama
• Imersie in acetona la 2-8°C timp de 10 minute
si uscare.
ID
PP
Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei
• Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37° C)
• Spalare
• Citire la MO in lumina UV
ID
PP
Anticorpi monoclonali marcati cu
ITC fluoresceina sau
rhodamina anti epitopi specifici
de la nivelul anvelopei
-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd
-polipeptide (HSV2) =78-82kd
IFD in celule epiteliale
Celule negative
Testul este
1. pozitiv daca pe lama sunt cel
putin 2 celule fluorescente
2. negativ daca sunt cel putin 20 de
celule fara fluorescenta
3. invalid daca nu sunt cel putin 20
de celule pe lama
•PCR-metoda mai sensibila de
confirmare a dg. de infectie cu HSV
• util mai ales in:
- detectia infectiei in excretia asimptomatica
- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri
discordante
- eficienta supresiei replicarii virale in terapia
antivirala (encefalita herpetica)
• Serologia singura nu este
considerata ca dg de confirmare
ci se alatura testelor de dg. direct.
Teste serologice specifice
Serologia singura nu este considerata ca dg de confirmare ci se alatura testelor de dg. direct.
Exista mai multe tipuri de teste EIA aprobate de FDA. Se utilizeaza in urmatoarele cazuri:
• In dg de infectie cu HSV-2 sau HSV-1 la pacientii simptomatici ce prezinta culturi virale negative sau care nu au fost testati in momentul evaluarii initiale.
• Identifica infectia acuta sau latenta cu HSV-1 sau HSV-2 la pacientii cu prezentare clinica atipica.
• Se efectueaza la partenerii sexuali ai pacientilor cu dg. confirmat pentru a determina o posibila infectie subclinica sau asimptomatica
• Diagnosticarea femeilor insarcinate asimptomatice cu infectie HSV-2 sau HSV-1 la nivel genital pentru a preveni riscul transmiterii materno-fetale in momentul traversarii canalului de nastere
• Determinarea tipului de HSV pentru semnificatie prognostica. Recurentele sunt mai frecvente in cazul infectiei cu HSV-2 decat cu HSV-1.
Diagnostic in infectia cu
betaherpesvirusuri
CMV
Transmiterea materno-fetala a
CMV
Prenatal- malformatii congenitale severe
(microcefalie, retard mental, anomalii
osoase)
Perinatal- “boala cu incluzii citomegalice a
nou-nascutului”( hepatosplenomegalie,
icter, anemie hemolitica)
Postnatal- infectie asimptomatica sau
asemanatoare mononucleozei
Directii de diagnostic
• Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane. Replicare lenta , ECP apare dupa 14-20 zile (citomegalie si incluzii intranucleare tipice in “ochi de bufnita”). (pp: lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant, urina)
• IF directã pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara
• PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic
• ELISA de capturã pentru anticorpi anti CMV IgM;ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.
ECP CMV
Diagnostic serologic al infectiei
cu CMV la gravide
PRIMA TESTARE
Diagnostic in infectia cu
gamaherpesvirusuri
EBV
EBV
• EIA si IF
• anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA)
• anticorpi anti nucleari (anti EBNA)
(pp=ser)
• PCR pentru ADN EBV
(pp=biopsie tisulara, sânge integral)
Precizati tipul de reactie reprezentata in sirurile de godeuri C, D, E si principiul tehnicii.
Pentru ce viroze tehnica aceasta este de electie si ce simptome clinice prezinta
pacientul?
Precizati tipul de reactie si infectiile virale care pot fi
diagnosticate cu aceasta.
Un pacient cu leziuni veziculare in “buchet”
dispuse la nivelul comisurii bucale - se
prezinta pentru diagnostic.
Precizati produsele patologice, reguli de
transport, metode de izolare virala si
tehnica optima de diagnostic rapid
Ce tip de ECP este prezentat in figura urmatoare: Precizati
virusurile care pot determina astfel de modificari