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©2016 Waters Corporation 2
为什么要用<3µm颗粒色谱柱? ——在现有LC上提速增效,未来升级UPLC
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12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 26.0 28.0 30.0
3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0
AU
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3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.0 7.0 7.5 8.0
Minutes
1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6
CORTECS C18, 1.6 µm
2.1 x 50 mm 0.65 mL/min H-Class
原始方法 HPLC+5µm柱
2.7µm柱+UPLC/UHPLC
UPLC+1.6µm柱 提速x9
溶剂节约x15
HPLC+2.7µm柱 提速x4
溶剂节约x2
Fully Porous C18, 5 µm
4.6 x 150 mm 1.00 mL/min Alliance HPLC
CORTECS C18, 2.7 µm
4.6 x 75 mm 1.85 mL/min Alliance HPLC
CORTECS C18 2.7 µm
4.6 x 75 mm 1.85 mL/min H-Class
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Agenda
小颗粒色谱柱的使用与维护要点
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍 【略】
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略 【略】
Waters相关工具集锦
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Agenda
小颗粒色谱柱的使用与维护要点
—— Analytical Chemist:“用得好,才敢用!”
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略
Waters相关工具集锦
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关注问题:
如何更好的使用与维护小颗粒色谱柱
——柱效与粒径和柱长的关系
——系统死体积对柱效的影响
——色谱柱的连接问题
——检测频率对柱效的影响
——污染与堵塞问题
——保护柱
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略
Waters相关工具集锦
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I. 柱效与柱长和粒径的关系:N 正比于 L/dp。 ——只有柱效水平相当,才能相当的分离度!
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I. 柱效与柱长和粒径的关系:N 正比于 L/dp。 ——柱压 正比于 L/dp^2。
粒径 柱规格 L/dp(柱效水平) 柱压
5µm 4.6x250mm 50,000 正比于柱长 反比于粒径^2!
3.5µm 4.6x150mm 42,857
2.7µm 4.6/3.0/2.1 x150mm 55,556
2.5µm 4.6/3.0/2.1 x150mm 60,000
1.7µm 2.1x100mm 58,823
粒径 柱规格 L/dp(柱效水平) 柱压
5µm 4.6x150mm 30,000 正比于柱长 反比于粒径^2!
3.5µm 4.6x100mm 28,600
2.7µm 4.6/3.0/2.1 x75mm 27,778
2.5µm 4.6/3.0/2.1 x75mm 30,000
1.7µm 2.1x50mm 29,400
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II. 系统死体积对柱效的影响(柱外扩散!) ——在哪里发生谱带展宽/系统扩散?
谱带展宽: 1) 从进样器开始 2) 进入、流经以及流出色谱柱 3) 进入检测器
柱外扩散 柱内扩散
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比较同一色谱柱在HPLC和UPLC上的柱效
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各品牌LC系统的谱带展宽 ——系统扩散体积大的,选配较大内径色谱柱
Chromatographic System Band Spread* Recommended Column ID
Primary Secondary
Shimadzu Prominence UFLC 41 µL
4.6 mm (5/3.5/2.xµm)
3.0 mm Alliance 2695 HPLC 29 µL
Agilent 1260 UHPLC (600 bar) 28 µL
ACQUITY Arc UHPLC(650bar) 25µL 3.0mm
(2.×µm) 4.6mm
Thermo Accela UHPLC 21 µL 3.0 mm
(2.x µm) 2.1 mm
Agilent 1290 UHPLC (1200 bar) 17 µL
ACQUITY UPLC 12 µL 2.1 mm
(1.6-1.8 µm) 3.0 mm ACQUITY UPLC H-Class w/Column Manager 12 µL
ACQUITY UPLC H-Class 9 µL
ACQUITY UPLC I-Class (FTN) 7.5 µL 2.1 mm
(1.6-1.8 µm) 1.0 mm
ACQUITY UPLC I-Class (FL) 5.5 µL
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III. 色谱柱的连接问题
谱带展宽
连接适当
连接不妥
由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽:柱效下降
连接不妥,造成漏液
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IV. 注意采样频率对柱效的影响(峰窄快时) 1Hz vs. 20Hz (色谱柱:2.5µm, 4.6x75mm)
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需要注意的问题 I~IV
如何更好的使用与维护小颗粒色谱柱
——柱效与粒径和柱长的关系
——系统死体积对柱效的影响
——柱连接的问题
——检测频率对柱效的影响
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V. 污染与堵塞问题
预防污染与堵塞问题:
1. 流动相长菌
2. 滤膜问题
3. 样品溶解性
4. 溶剂瓶(高pH流动相时)
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!!1. 微生物污染
系统中的微生物滋生,常导致色谱柱使用寿命缩短
在所有系统的水相管路中,都会发生微生物繁殖
并不只在中性pH条件下才发生
条件适合时15min就可能发生爆发式滋生
附着于溶剂瓶壁、溶剂过滤沉子、流动相管路
100%甲醇冲洗并不足以杀死和清除微生物(只能“休眠”)
SEM(电子显微镜成像):
色谱柱入口端筛板外侧
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!!微生物滋生——对吸滤头的污染
试管中的Milli-Q
纯水,取出培养,无微生物检出
在HPLC纯水流动相中已受污染的吸滤头,用Milli-Q纯水反向冲洗,冲洗出的水有大量微生物检出。污染源!!
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案例:用户发现色谱柱寿命极短,经过排查,实际上色谱柱的入口端被
乙腈溶解的膜材料主要是聚砜严重堵塞
解决办法:更换滤膜
– 推荐使用:
o Waters P/N:186003524 0.2µm 47mm GHP (有机相、水相都兼容)
色谱柱入口端被 乙腈溶解的聚砜
膜材料堵塞
!!2. 确保使用正确合格的过滤膜
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Waters提供过滤膜产品与参考信息
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过滤是必需的
– 总是使用0.2 µm 化学适宜的样品过滤膜
使用保护柱也会有帮助
离心对于去除微粒是必要的
– 通过离心可以去除所有的细颗粒,在4,000 到 12,000 rpm 下离心 5 到 30 分钟.
!!3. 样品溶解性与样品制备: ——避免样品不溶微粒与样品沉积
多奈哌齐(Donepezil)片剂溶于稀释剂中,按USP方法制备,
存在大量不溶性颗粒 (非常糟糕)
使用0.2µm滤膜过滤,仍存在非常细微的颗粒,溶液呈雾状
(仍然糟糕)
再加以离心步骤 12,000 rpm. 溶液完全澄清 (状态良好)
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案例:
UPLC 色谱柱在高pH (pH 10)条件下仅有100-200针的柱寿命
色谱柱出口端过滤片的内侧(靠近柱床一侧)被流动相溶解的硼硅玻璃严重堵塞
解决办法:
更换流动相瓶 解决办法: 使用Pyrex硼硅3.3的玻璃瓶
!!4. 使用合格玻璃材质的溶剂瓶
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工具资源——小颗粒色谱柱维护与使用指南
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常见问题:
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关注问题VI:保护柱
如何更好的使用与维护小颗粒色谱柱
——柱效与粒径和柱长的关系
——系统死体积对柱效的影响
——色谱柱的连接问题
——检测频率对柱效的影响
——污染与堵塞问题
——保护柱:精细分离项目时,需要注意柱效与连接体积!
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VI. 保护柱: ——精细分离项目时,保护柱的柱效与连接
竞争品牌,C18 UHPLC保护柱, 3.0x2mm
Waters为什么要研发保护柱? 对于市场既有UHPLC保护柱本身进行柱效测试,
发现保护柱本身质量可能存在问题(装填不足够好)
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保护柱——品质不佳对分析质量的影响
Conditions: 竞争品牌 C18, 4.6 x 50 mm, 2.6 µm column with and without a 竞争品牌 UHPLC C18 guard column; mobile phase: 75% acetonitrile/25% water (v/); flow rate: 1.7 mL/min.; temperature: 30oC.
Waters为什么要研发保护柱? 装填效果不佳的保护柱,会影响分离分析效果!
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VanGuard Cartridges
2.1mmid UPLC 一体式
2015年上市
2.1/3.9mmid UHPLC/HPLC分体式
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VanGuard——不影响分离度!
2.5µm, 4.6x150mm 不带保护柱
2.5µm, 4.6x150mm 带保护柱3.9x5mm
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VanGuard——不影响峰容量!
2.5µm, 4.6x100mm 不带保护柱
2.5µm, 4.6x100mm 带保护柱 3.9x5mm
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VanGuard分体式保护柱(UHPLC/HPLC)
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Agenda
小颗粒色谱柱的使用与维护要点
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍
– 2.7µm CORTECS柱
– 2.5µm XP柱 [BEH][HSS][CSH]
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略
Waters相关工具集锦
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CORTECS Solid-Core Technology
柱效与分离度更高
通量更高
2013
可无忧转换HPLC/UHPLC/UPLC的颗粒平台
BEH Technology
第一个 ACQUITY UPLC颗
粒
宽pH和温度范围
2004
HSS Technology
保留更长
颗粒与键合相更多选择
2006
CSH Technology
设计提供更多选择性
碱性峰形更佳
2010
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CORTECS Solid-Core Technology
柱效与分离度更高
通量更高
2013
可无忧转换HPLC/UHPLC/UPLC的颗粒平台
BEH Technology
第一个 ACQUITY UPLC颗
粒
宽pH和温度范围
2004
HSS Technology
保留更长
颗粒与键合相更多选择
2006
CSH Technology
设计提供更多选择性
碱性峰形更佳
2010
1.7/1.8µm UPLC 2.5µm XP
3.5,5,10µm HPLC
1.6µm UPLC 2.7um
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CORTECS Solid-Core Technology
柱效与分离度更高
通量更高
2013
可无忧转换HPLC/UHPLC/UPLC的颗粒平台
BEH Technology
第一个 ACQUITY UPLC颗
粒
宽pH和温度范围
2004
HSS Technology
保留更长
颗粒与键合相更多选择
2006
CSH Technology
设计提供更多选择性
在低pH条件下 碱性峰形更佳
2010
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2013推出: CORTECS 1.6µm UPLC ——推升UPLC柱效,同时柱压不变
2.1 x 50 mm column. A standard ACQUITY UPLC I-Class using 70% Acetonitrile in H2O at 30 °C
with 0.5 µL injections from a 1 µL FL injector
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2013推出: CORTECS 1.6µm UPLC ——推升UPLC柱效,同时柱压不变
2.1 x 50 mm column. A standard ACQUITY UPLC I-Class using 70% Acetonitrile in H2O at 30 °C
with 0.5 µL injections from a 1 µL FL injector
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CORTECS™实心核硅胶色谱柱
2014最新产品! CORTECS 2.7µm HPLC柱
1.6 µm UPLC 2.7 µm HPLC/UHPLC
表面多孔,
扩散快,谱带展宽窄
柱背压控制理想
Waters独家优势 实心核颗粒设计
柱效比全多孔颗粒高
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与其它品牌小颗粒色谱柱的柱压比较
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1000
1500
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3500
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Co
lum
n P
ressu
re (
psi)
Backpressure Advantage of CORTECS 2.7µm Columns
CORTECS C18+, 2.7 µm
Fully Porous C18, 2.5 µm
Competitor A Solid-Core C18, 2.6µm
Competitor B Solid-Core C18, 2.7µm
....at 25% lower backpressure than the competitor's 2.6µm Solid-Core
5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0
2.1x50mm 0.2 0.3 0.5 0.7 0.9 1.0
3.0x50mm 0.4 0.7 1.1 1.4 1.8 2.1
4.6x50mm 0.8 1.7 2.5 3.3 4.2 5.0
LV (cm/min)
Flo
w
(mL/m
in)
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高柱效,低背压: 允许HPLC系统配置4.6x150mm获得最高柱效
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Minutes
1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50
1
2 3 4
Rs
4.9
Rs
6.3
Rs
8.2
Fully Porous C18 5 µm
psi 1900 N peak 4 10,400
Fully Porous C18 3.5 µm
psi 2900 N peak 4 17,600
CORTECS C18 2.7 µm
psi 3200 N peak 4 23,600
1. Estradiol 2. Ethinyl estradiol 3. Estrone 4. Levonorgestrel
Configuration: 4.6 x 150 mm
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porous C18 300A, 5μm,4.6x250mm;
CORTECS C18 +, 2.7μm,4.6x150mm;
Pressure 3100psi
Pressure 3500psi
客户数据:CORTECS C18+ 2.7µm 4.6*150mm: 肽谱分析,常规HPLC系统上的分离效果与压力对比(相同梯度)
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应用示例:CORTECS C18+ 2.7µm 4.6*150mm: 奥美拉唑强降解物分析(Alliance HPLC系统/QDa检测器)
应用文献号:720005103ZH
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CORTECS 颗粒平台:
实心核硅胶颗粒: – UPLC 1.6µm,进一步提升UPLC性能 – HPLC 2.7µm,提高HPLC分析性能
关键优点:
– 更高柱效、较低背压 – 提高分离度 – 加快分析速度 – 无缝方法转换
5种键合相: – C18+ : 适用于碱性分析物
– C18 : 适用于酸性/中性分析物
– HILIC : 适用于高极性分析物
– C8,Phenyl 【New!】
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CORTECS Solid-Core Technology
柱效与分离度更高
通量更高
2013
可无忧转换HPLC/UHPLC/UPLC的颗粒平台
BEH Technology
第一个 ACQUITY UPLC颗
粒
宽pH和温度范围
2004
HSS Technology
保留更长
颗粒与键合相更多选择
2006
CSH Technology
设计提供更多选择性
碱性峰形更佳
2010
1.7/1.8µm UPLC 2.5µm XP,配置建议:
HPLC<=75mmL; UHPLC长度不限 3.5,5,10µm HPLC
1.6µm UPLC 2.7um
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使用超低死体积的UPLC柱硬件 – 归属于XBridge 和XSelect HPLC柱系列
设计用于承受较高压力
– 2.1 和3.0mm 可兼容UPLC压力15,000psig(1034Bar),有eCord,可配合UPLC无纸化追踪
– 4.6mm 内径柱耐压上限9,000psig(620Bar), 没有eCord
异常丰富的柱规格品种
– 柱内径:2.1, 3.0 and 4.6 mm ID – 柱长:30, 50, 75,100 and 150mm lengths
完整的键合相品种,便于方法无忧转换! – [BEH] C18, Shield RP18, C8, Phenyl, HILIC and Amide – [CSH] C18, Phenyl-Hexyl and Fluoro-Phenyl – [HSS] C18, T3, C18 SB, Cyano and PFP
2.5 µm eXtended Performance XP
Columns compatible with HPLC and UPLC
Technology
2.5 µm eXtended Performance Columns
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Compounds
1. 10-hydroxymorphine
2. Morphine-3β-D-glucuronide
3. Morphine-6β-D-glucuronide
4. Morphine
5. Morphine N-oxide
6. 6-acetylmorphine
Minutes 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80
%
0
低pH条件 0.1% HCOOH
高pH条件 0.1% NH4OH
5
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2
3
4
6
1
2
3
4,5 6
10-hydroxymorphine
Morphine-3ß–o-glucuronide
Morphine-6ß–o-glucuronide
Morphine N-oxide
6-acetylmorphine
Morphine
【应用示例】氨水体系提高碱性分析物的保留与MS响应 ——吗啡及其代谢物LCMS分析,XBridge[BEH] C18柱
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阿米替林肝细胞代谢物分析:
Amitriptyline + 16 Metabolites on
2.1 x 100mm ACQUITY UPLC™ BEH C18
Amitriptyline + 16 Metabolites on
2.1 x 100 mm ACQUITY UPLC™ HSS T3
保留时间几乎增加1倍
【应用示例】T3有效增加极性分子的反相保留 ——阿米替林肝细胞代谢物,[HSS] T3 vs BEH C18
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Mobile Phase A: 0.1% FA in H2O Mobile Phase B: 0.1% FA in ACN Flow Rate: 0.6 mL/min Gradient: 0 to 40% B in 6 min, hold Injection Volume: 0.5 µL Column Temperature: 30°C Detection: UV @ 210/254 nm Instrument: Waters ACQUITY UPLC® ACQUITY UPLC® TUV detector Sample: Goldenseal extract Column: 2.1 x 50mm, 1.7 um 1. Hydrastine 2. Canadine 3. Canadaline 4. Berberine
Particle size alone does not dictate separation
performance.
Interaction between stationary phase and
analytes is critical.
【应用示例】CSH改善甲酸体系下的碱性物载量与峰形 ——白毛茛根提取物(甲酸体系) [CSH] vs BEH
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XBridge [BEH] 颗粒平台: 亚乙基桥杂化颗粒:
– ACQUITY UPLC BEH 1.7µm: 首个也是最常应用的UPLC颗粒! – HPLC XBridge BEH 2.5,3.5,5, 10µm:广受赞誉的HPLC分析柱与制备柱!最大
可至50x250mm制备柱。
关键优点:
– 化学稳定性强,宽pH使用范围,有利于方法开发 – 通用性极佳、柱寿命强 – 有基于BEH颗粒的HILIC亲水作用色谱柱及生物制药分析专用柱 – 多种键合相选择性,UPLC-HPLC方法无缝转换
多种键合相: – BEH C18 : pH 1-12 – BEH RP18 : pH 2-11 – BEH C8: pH 1-12 – BEH Phenyl: pH 1-12 – BEH HILIC: pH 1-9 – BEH Amide: pH 2-11 – 氨基酸分析专用柱:Ultra AccqTag – 肽分析专用柱:BEH130 C18, BEH300 C18 – 蛋白分析专用柱:BEH300 C4, BEH125 SEC,BEH200 SEC, BEH Glycan Amide
亲水作用色谱(HILIC)
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ACQUITY UPLC® BEH HILIC XBridgeTM HILIC (pH 1-9)
ACQUITY UPLC® BEH Amide XBridgeTM Amide (pH 2-11)
糖 糖醇
有机膦酸 胍
合成氨基酸 门鸟氨酸
精赖氨酸
核苷酸 胆碱
三聚氰胺
水苏碱
茶碱
嘌呤 糖肽
高极性分析物,或是考虑样品制备/LCMS工作流程最简化 ——HILIC保留分离策略:XBridge[BEH]具有最强耐受性
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XSelect [HSS] 颗粒平台: 高强度硅胶颗粒:
– ACQUITY UPLC HSS 1.8µm;
– HPLC XSelect HSS 2.5,3.5,5µm
关键优点:
– T3有效增强对极性分析物的反相保留,极性分析首选柱
– T3平衡保留极性与非极性分析物,杂质方法开发首选柱(T3也是C18柱)
– 多种键合相选择性,UPLC-HPLC方法无缝转换
5 种键合相:
– T3(具有应用特色的C18):极性保留或方法开发首选柱之一
– C18:选择性与常规硅胶C18接近,便于既有QC方法提速或转换至UPLC
– C18SB:未封端,中-低pH条件下对碱性分析物有更好的保留和峰形
– PFP:对平面芳香化合物、卤代、位置异构、极性化合物的独特选择性
– CN:即可用于正相也可用于反相
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XSelect [CSH] 颗粒平台: 表面带电杂化颗粒:
– ACQUITY UPLC CSH 1.7µm;
– HPLC XSelect CSH 2.5,3.5,5µm,最大至50x250mm规格制备柱
关键优点:
– 对碱性分析物的峰形与载量极佳,首选柱
– C18与Phenyl,pH1-11,耐受性强,允许宽pH筛选
– 无缝方法转移
– 可放大制备
3 种键合相: – C18 : pH 1-11
– Phenyl : pH 1-11 ,对芳香化合物有独特选择性
– 氟苯基 : pH 1-8,对芳香化合物、卤代有独特选择性
©2016 Waters Corporation 51
Waters UHPLC柱手册
©2016 Waters Corporation 52
工具资源——Waters UPLC/HPLC柱选择卡 工具资源——Waters消耗品指南【实验室工具书】 http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=134618172&lid=10009750&locale=zh_CN
©2016 Waters Corporation 53
微信:色谱柱选择工具
关注“沃特世”微信
在底部菜单找到“资源中心”
©2016 Waters Corporation 54
应用资料——Waters网站
©2016 Waters Corporation 55
Agenda
小颗粒色谱柱的使用与维护要点
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略
Waters相关工具集锦
©2016 Waters Corporation 56
项目选择与实施策略
常规HPLC系统
o 项目选择:“清洁”样品优先!
• 制药分析:原料药/生产中控/清洁验证;
• 环境/食品:饮用水/饮料;样品SPE处理后
o 项目选择:等度条件优先!【梯度条件,需要根据色谱柱大小进行转换】
o 根据项目需要,给予合适的柱效水平(L/dp)规格配置
o 分离度足够时,使用更短的色谱柱(降低压力、进一步提速)
o 有质谱检测器(QDa)时,可使用更短的色谱柱
UHPLC与UPLC系统
o 需要更高分离度时:没有与MS串联/样品复杂/异构体时
o 不需要那么高的分离度时:有MS选择/分析目标相对较为简单时
©2016 Waters Corporation 57
柱效与柱长和粒径的关系:N 正比于 L/dp。 ——只有柱效水平相当,才能相当的分离度!
粒径 柱规格 L/dp(柱效水平) 柱压
5µm 4.6x250mm 50,000 正比于柱长 反比于粒径^2!
3.5µm 4.6x150mm 42,857
2.7µm 4.6/3.0/2.1 x150mm 55,556
2.5µm 4.6/3.0/2.1 x150mm 60,000
1.7µm 2.1x100mm 58,823
粒径 柱规格 L/dp(柱效水平) 柱压
5µm 4.6x150mm 30,000 正比于柱长 反比于粒径^2!
3.5µm 4.6x100mm 28,600
2.7µm 4.6/3.0/2.1 x75mm 27,778
2.5µm 4.6/3.0/2.1 x75mm 30,000
1.7µm 2.1x50mm 29,400
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应用示例:CORTECS C18 2.7µm 4.6x150mm ——HPLC系统上提速齐多夫定USP方法,分离度对比(I)
流动相体系: 甲醇:水 20:80 柱温 30度
应用文献号: 720005157ZH
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应用示例:CORTECS C18 2.7µm 4.6x100mm ——HPLC系统上提速齐多夫定USP方法,分离度对比(II)
如 流速=1mL/min 则 压力~2533psig
应用文献号: 720005157ZH
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客户实例: ChP2015,盐酸溴己新(杂质分析系统适应性)
16.804min
Symmetry C18, 3.5µm, 4.6x150mm
<6min
XBridge C18, 2.5µm XP, 4.6x75mm
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项目选择与实施策略
常规HPLC系统
o 项目选择:“清洁”样品优先!
• 制药分析:原料药/生产中控/清洁验证;
• 环境/食品:饮用水/饮料;样品SPE处理后
o 项目选择:等度条件优先!【梯度条件,需要根据色谱柱大小进行转换】
o 根据项目需要,给予合适的柱效水平(L/dp)规格配置
o 分离度足够时,使用更短的色谱柱(降低压力、进一步提速)
o 有质谱检测器(QDa)时,可使用更短的色谱柱
UHPLC与UPLC系统
o 需要更高分离度时:没有与MS串联/样品复杂/异构体时
o 不需要那么高的分离度时:有MS选择/分析目标相对较为简单时
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2013推出: CORTECS 1.6µm UPLC ——推升UPLC柱效,同时柱压不变
19,700
14,150
4,000
8,000
12,000
16,000
20,000
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25
Pla
tes (
4 s
igm
a)
Flow Rate (mL/min)
柱效提高 39%
或 流速提升3倍!
CORTECS UPLC 1.6 µm C18+
ACQUITY UPLC 1.7 µm BEH C18
2.1 x 50 mm column. A standard ACQUITY UPLC I-Class using 70% Acetonitrile in H2O at 30 °C
with 0.5 µL injections from a 1 µL FL injector
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【应用实例】血浆里的合成大麻定量分析 ——CORTECS UPLC C18的杰出分离 vs BEH C18 UPLC
Time0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40
%
0
Time0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40
%
0
9
3
2
1
4
5
6
7
8
10
3
2
1
4
5
6
7
8
10
9
1) AM 2223 2) RCS-4, M10 3) RCS-4, M11 4) AM 1248 5) JWH-073 4-butanoic acid
metabolite 6) JWH-073 4-hydroxybutyl
metabolite 7) JWH-018 5-pentanoic acid
metabolite 8) JWH-073 (+/-) 3-
hydroxybutyl metabolite 9) JWH-018 5-hydroxypentyl
metabolite 10) JWH-018 (+/-) 4-
hydroxypentyl metabolite
CORTECS UPLC C18 2.1 x 100 mm 1.6 µm
ACQUITY UPLC BEH C18 2.1 x 100 mm 1.7 µm
峰对5/6, 7/8 和 9/10 (同分异构体) 的完全分离,允许精确定量
CORTECS C18 vs ACQUITY UPLC BEH C18
Minutes
ACQUITY UPLC with Xevo TQD MS
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【提速增效】对于大批量样本项目 ——进一步提高流速,加快速度,而不牺牲柱效/分离度
19,700
14,150
4,000
8,000
12,000
16,000
20,000
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25
Pla
tes (
4 s
igm
a)
Flow Rate (mL/min)
39% higher efficiency
或者,提速3倍!
CORTECS UPLC 1.6 µm C18+
ACQUITY UPLC 1.7 µm BEH C18
2.1 x 50 mm column. A standard ACQUITY UPLC I-Class using 70% Acetonitrile in H2O at 30 °C
with 0.5 µL injections from a 1 µL FL injector
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【应用实例】使用CORTECS UPLC C18+ ——提高流速、提高磺胺类检测通量,而不牺牲分离度
应用文献号: 720004736ZH
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分离度要求不高的项目 XP 2.5µm vs UPLC 1.7um ——压力降低40%!
A: water with 0.1% formic acid B: acetonitrile with 0.1% formic acid Flow rate: 0.54 mL/min NSAID mixture (50-100 ug/mL) UV detection at 270 nm Gradient: 35%B to 65%B over 4.85 min, hold for 0.66 min, re-equilibrate at 35%B. Both columns were run on ACQUITY UPLC H-Class system
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
XSelect CSH C18 XP 2.1 x 75 mm, 2.5 µm
Flow rate = 0.54 mL/min
Pressure = 5,300 PSI
Peak Capacity = 34
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 x 75 mm, 1.7 µm
Flow rate = 0.54 mL/min
Pressure = 9,200 PSI Peak Capacity = 40
Tolm
eti
n
Nap
roxe
n
Fen
op
rofe
n
Ind
om
eth
acin
Dic
lofe
nac
Rs = 5.5
Rs = 6.3
UPLC柱:
分离度高15%
峰容量多20%
XP柱:
vs UPLC柱
压力降低40%!!
允许更高流速!!
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项目选择与实施策略
常规HPLC系统
UHPLC与UPLC系统
丰富的应用实例【药物质量,生物样本分析,食品安全,环境】
http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134883268&locale=zh_CN
网络讲座回放: 如何更好的使用与维护小颗粒色谱柱
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Agenda
小颗粒色谱柱的使用与维护要点
具有应用特色的Waters小颗粒色谱柱系列介绍
小颗粒色谱柱的项目选择与实施策略
Waters相关工具集锦
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工具资源——小颗粒色谱柱维护与使用指南
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工具资源——色谱柱性质贴纸
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工具资源——耗材目录(“实验室工具书”) Waters消耗品指南下载:http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=10009750&cid=511436
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