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Les virus émergents et techniques deLes virus émergents et techniques de
détection
Dr. Cordey Samuel
Laboratoire de Virologie, Hôpitaux Universitaires de Genève
Centre National de Référence pour les Infections Virales Emergentes, Hôpitaux Universitaires de Genève
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Epidémie : Développement et propagation rapide d’une maladie contagieuse, le plus
souvent d’origine infectieuse, dans une population.
Endémie : Persistance d’une maladie infectieuse au sein d’une population ou d’une région.
Exemple: Hépatite A en Thaïlande
Exemple: Epidémie Ebola en Ouganda, rougeole
Pandémie : Epidémie étendue à toute la population d’un continent, voire au monde entier.
Exemple: HIV, Grippe
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Principales causes de décès
dans le monde
Nature, 430: 242 (2004)
Environ 15 millions des 57 millions de décès annuels
(>25 %) sont dus directement aux maladies infectieuses
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Chikungunya
West NileE. coli 0104:H4
H1N1 2009
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Virus présents depuis toujours
D’après Principles of Virology, Flint, Vol1, 3rd Ed
850 av JC 1500 av JC
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Virus et hommes
� Variole: a détruit des civilisations entières et tué > 1 milliard
d’êtres humains.
� La pandémie d’influenza de 1918: > 40 mio victimes.
La pandémie de VIH: > 40 mio victimes.� La pandémie de VIH: > 40 mio victimes.
� Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales.
� Réservoir animal incontrôlable.
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� Virus : génome de petite taille: de 1’700 à 1’200’000 nucléotides,
peu de protéines
� Influenza: 8 gènes (10 protéines)
� Virus herpès: plus de 80 gènes
� Bactéries: génome de 650’000 à ~13'000’000 nucléotides, 500 à
8000 gènes
� Homme: génome = 3 billions de nucléotides (=3x1012), 20’000 à
25’000 gènes
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Virus: définition et propriétés
– Structure simple.
– Agent infectieux qui a besoin d’une cellule (ribosomes +
mitochondries…).
– Le virus se désintègre dans la cellule pour que son
génome dirige la synthèse des composants viraux.génome dirige la synthèse des composants viraux.
– Les composants viraux synthétisés s’assemblent dans la
cellule hôte pour former des virions.
– Libération par la cellule et poursuite des cycles d’infection
(avec destruction ou non de la cellule).
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1. Attachement et reconnaissance d’un récepteur
spécifique sur une cellule « permissive »
2. Réplication
3. Libération
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Réplication du matériel génétique dans une cellule
ADN ADN ARNm Protéine
ADN polymérase ADN dépendante
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Influenza: ARN- segmenté HIV: 2 génomes d’ARN +
Nature des acides nucléiques
Hépatite B: ADN partiellement
double brin circulaire Poliovirus: ARN +
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Rhinovirus Enterovirus
VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C∞ 3D∞
818611 1601 2312 3161 3587 3872 4838 5069 5132 5681 7061
ENTEROVIRUS
Rhinovirus A Rhinovirus BEnterovirus C
(Poliovirus)Enterovirus A Enterovirus DEnterovirus BRhinovirus C
Rhinovirus Enterovirus
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Mutations
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Les mutations conférant un avantage vont être
sélectionnées (espèce dominante)
La majorité des mutants ne sont pas viables mais d’autres acquièrent des avantages:
– Meilleure “fitness”– Echappement à la réponse immune– Passage de la “barrière des espèces”– Passage de la “barrière des espèces”– Acquisition de nouveaux traits de virulence– Meilleure transmissibilité
Conséquences potentielles:
– Rend la création de vaccins très difficile (HIV, HCV)– Les virus deviennent résistants aux traitements (trithérapie HIV)– Emergence de “nouveaux virus”
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Unit of genetic distance
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Evolution virale
« ancêtre » �
��
« progéniture »
�
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Le réassortiment
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La recombinaison
Nature Reviews Microbiology 9, 617-626 (August 2011)
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2008
Evolution par
accumulation de
Pas d’avantage
accumulation de
mutations
Pas d’avantage
Reassortant
= Avantage
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PR
ES
SIO
N S
ELE
CT
IVE
2012
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PR
ES
SIO
N S
ELE
CT
IVE
2008 2012
PR
ES
SIO
N S
ELE
CT
IVE
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réplication
Cycle viral: au niveau de la cellule
Défense immune
et réponse de l’hôte
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Virus respiratoires
• 1ère cause d’infections chez l’homme
• 1ère cause de rhinopharyngites
• Sinusites
• Otites• Otites
• Prescription antibiotiques
• Infections bactériennes secondaires
• "1ère" cause d’exacerbations
• Asthme
• COPD (bronchite chronique-emphysème)
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Rhinovirus A, B, C, >140 serotypes RNA
Influenza A (H3N2,H1N1..) ,B ,C RNA
RSV A and B RNA
Parainfluenza Type 1, 2, 3 and 4 RNA
Metapneumovirus A1, A2, B1, B2 RNA
Human Virus Species/Sub-Sero-Genotypes
Metapneumovirus A1, A2, B1, B2 RNA
Coronavirus OC43, E229, HKU1, NL63 RNA
Enterovirus >100 serotypes RNA
Adenovirus 7 species, > 50 serotypes DNA
Bocavirus 4 species DNA
Polyomavirus KI, WU, Merkel… DNA
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Immunité
Protection immune limitée:
• Variabilité des sérotypes.
• Réponse immune non protectrice.
• Réponse immune de courte durée (?).
• Evolution des antigènes viraux (influenza).
• Réponse humorale vs. Cellulaire (?).
• Absence de vaccin « universel ».
– But: immunité muqueuse
• Réinfections fréquentes.
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Influenza
Influenza A
Influenza B
Influenza C
H3N2
H1N1
H1N2
H5N1
H7N7
Seasonal
Swine Flu 2009
2007 2008 2009 2010 2011 20122007 2008 2009 2010 2011 2012
H1N1 seasonal
H1N1p 2009
Influenza B
H3N2
Oseltamivir R
Oseltamivir S
2012 vaccine
« escape »
Amantadine R
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Virus Influenza
• Hemagglutinine:
• Adaptation à l’hôte
• Tropisme
• Transmission
• Réponse immune• Réponse immune
• Neuraminidase (NI):
• Résistance antivirale
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Transmission
Réservoir
Animal
Vecteur Humains
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Transmission virale entre humains
ContactGouttelettes- aérosols
Verticale: femmes enceintesVerticale: femmes enceintes
ou allaitement
Transmission sexuelle
Le plus efficace?
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Cycle viral: réservoir et transmission
Etc…
= chaîne de
transmission
Pré-requis: • Production de virus infectieux facilement
transmissibles + opportunité de transmission
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Transmission virale
« Vaccin = éradication »« Vaccin = éradication »
Réservoir = Humains
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Réservoir
Barrière d’espèces
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Barrière d’espèces
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Facteurs influençant l’efficacité de transmission:
– Mode de transmission
– Période de contagiosité
– Immunité de la population
Taux « R » d’efficacité de transmission (nombre moyen
d'infections secondaires causées par une personne infectée)d'infections secondaires causées par une personne infectée)
R > 1 : Epidémie
R = 1 : Seuil
R < 1 : Diminution du nombre de personnes infectées à
chaque « génération » de l’agent
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R = 1R = 1
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H1N1 1918 Avian origin
Swine
origin H1N1
2009
Eurasian
Swine H1N1
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H5N1, pas adapté à l’Homme
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Hong Kong: 1924Hong Kong: 1924Hong Kong: 1924Hong Kong: 1924
Facteurs pouvant expliquer l’émergence de certains virus
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Déforestation, intrusion dans des zones
« préservées » jusqu’à aujourd’hui
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Transmission par un vecteur
intermédiaire
Réservoir
Animal
Vecteur
IntermédiaireHumains
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Exemple de distribution d’A. aegypti:
1970 2002
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L’incidence a progressé de manière spectaculaire da ns le monde entier au cours des dernières décennies (en 50 ans, multiplic ation ~30x).
40% de la population mondiale exposée au risque.
Estimations OMS: chaque année, de 50 à 100 millions de cas dans le monde, 500 000 pers. atteintes de dengue sévère.
Très forte proportion d’enfants, environ 2,5% de mo rtalité.
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Raisons de la propagation de la dengue
Extension de l'aire de distribution géographique
– virus
– vecteurs
- Croissance rapide des populations urbaines
- Changements climatiques
- Moins de campagnes d’éradication des moustiques
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Symptômes cliniques:
- Fièvre
- Eruption cutanée
- Arthralgies
Une forme hémorragique existe, mais elle est relativement rare!
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Chikungunya (arbovirus)
Famille: Togaviridae, genre Alphavirus
Enveloppé, ARN+
Isolé en Tanzanie la 1ère fois en 1952
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Europe
Inde
Afrique
Inde
RéunionPays
La Réunion (777’000)
Inde (gouvernement)
Inde (estimation réelle)
Cas (2005-2006)
258’000 cas (38%)
1’4 mio cas
6’5 mio cas
Mortalité/100’000
91.8
91.8
276
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Chikungunya: adaptation et mutation GPE1
(A226V)
Mars 2005:
100% souches : A226
Vir
ém
ie
Jours
Avril 2006: 90% A226
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Europe
Inde
Afrique
Inde
Réunion
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Europe
Inde
Afrique
Inde
Réunion
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Europe
![Page 55: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/55.jpg)
Aedes albopictus: Moustique tigre
vecteur Chikungunya + Dengue
Septembre 2010, Nice, France: 2 cas de Dengue acquises
localement, pas d’historique de voyage
2010, Key West, Floride: nombreux cas documentés, vecteur A.
aegypti
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West Nile virus: NYC 1999
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Transmissibilité et réservoir: West Nile
Humain
Moustique
Oiseaux Cheval
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West Nile: USA 2008
19992005
2000
2008
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Nombre de cas humains de West Nile
aux USA/an
8000
10000
12000
0
2000
4000
6000
19
99
20
00
20
01
20
02
20
03
20
04
20
05
20
06
20
07
20
08
20
09
20
10
20
11
cas
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Grèce 2011
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Italie 2008-2010
![Page 62: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/62.jpg)
Roumanie juillet-octobre 2010
![Page 63: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/63.jpg)
Virus Ebola
Trends in Microbiology Allison Groseth, Heinz Feldmann and James E. Strong
Volume 15, Issue 9, September 2007, Pages 408-416
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The Lancet, Early Online Publication, 16 November 2010
![Page 65: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/65.jpg)
![Page 66: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/66.jpg)
Yosemite National Park Hantavirus Infection
• Total de 9 cas confirmés : 3 décès
• 8/9 exposés durant un séjour au Curry Village
• 1/9 exposé probablement durant un séjour au High Sierra Camps (25 km du Curry Village)
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Rodents in the United States that Carry Hantavirus
Deer Mouse Habitat(Peromyscus maniculatus)
Cotton Rat Habitat(Sigmodon hispidus)
Rice Rat Habitat(Oryzomys palustris)
White-footed Mouse
Habitat(Peromyscus leucopus)
Sin Nombre Virus Black Creek Canal virus Bayou virus New York
virus
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![Page 69: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/69.jpg)
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Ixodes ricinus: biotopes à risque
• Zones humides
• Forêts feuillus et mixtes (sous-bois), zones herbeuses (1.5m)
• Jardins: rare
• En général absent à plus de 1’000 m d’altitude• En général absent à plus de 1’000 m d’altitude
• Risque maximum: printemps et début automne
• Il existe un vaccin contre ce virus
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Encéphalite virale à tique (OFSP):
décembre 2012
Foyers naturels connus
(régions d'endémie)
Encéphalite à tiques 2011 2010 2009
Nombre de cas en Suisse 178 93 116
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Rougeole, quelques chiffres (données OMS)
• En 2009 : 220’000 cas déclarés dans le monde
• En 2008 : 164’000 décès dans le monde = 18 par heure
• 95% des décès surviennent dans les pays possédant une mauvaise structure
sanitairesanitaire
• La vaccination a permis de chuter de 78% le mortalité rougeoleuse entre
2000-2008
• > 83% des enfants dans le monde ont reçu au moins 1 dose de vaccin
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• Otite (7-9%)
• Pneumonie (6%)
• Diarrhée (6%)
• Encéphalite (très rares)
Complications
Encéphalomyélopathie (ADEM)(1/1000) 5-30%
~30% séquelles
Encéphalite rougeoleuse à corps d’inclusion (MIBE, immunosupprimés)
~100%
Panencéphalite sclérosante subaiguë (SSPE) (1/100000) 100%
†
†
†
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![Page 76: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/76.jpg)
![Page 77: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/77.jpg)
![Page 78: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/78.jpg)
![Page 79: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/79.jpg)
Conclusions
![Page 80: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/80.jpg)
http://www.nytimes.com/imagepages/2012/07/15/opinion/15cover-grph.html
![Page 81: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/81.jpg)
Prédictions et virus émergents
• West Nile virus
• SARS
• Chickungunya
• Influenza A H1N1d’origine porcine• Influenza A H1N1d’origine porcine
![Page 82: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/82.jpg)
Conclusions: survie d’un virus
• Un virus persistera chez l’humain si les conditions
suivantes sont présentes:
- Réservoir νννν- Transmissibilité νννν- Transmissibilité νννν- Population cible non protégée νννν
• Pas de cerveau, pas de stratégie mais une capacité
évolutive
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Méthodes de DiagnostiqueMéthodes de Diagnostique
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La détection d‘une infection virale
Sérologie:
• Dépistages des anticorps
Méthodes directes Méthodes indirectes
• Dépistages des anticorps
Détection par culture:
• Effet cytopathogène (CPE)
• Caractérisation
Détection directe:
• Microscopie électronique
• Détection d’un antigène
• Détection du génome
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Diagnostique Routine
SEROLOGIE (ELISA) PCR (real-time RT-PCR) CULTURE (difficile)
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SEROLOGIE (ELISA) PCR (real-time RT-PCR) CULTURE (difficile)
Sérum Plasma / Urine / LCR /
Frottis oropharyngés
Urine/ Frottis oropharyngés /
Lymphocytes sang périph.
Compter 2-6 heures Compter 3-5 heures Compter plusieurs jours
2 types d’Ag : 1) provenant de culture de cellules
infectées (Vero)
2) provenant vecteur expression
(baculovirus) = IgM/IgG contre
nucléocapside�Ag de meilleure
qualité
Cible généralement le gène de la
nucléocapside
Cellules Vero (rein de singe),
B95a
Bilan de grossesse (IgG)
Bilan de vaccination (IgG)
Diagnostique (IgM + IgG)
(ex. si rash présent)
Diagnostique
(avant/pendant/après rash)
Génotypage
Diagnostique
Se fait sur des prélèvements
obtenus lors des stades
prodromiques + éruptifs
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Sérologies IgM
IgG
PCR
Relevant pour ce virus
Peu de chance de détecter le virus
après 5 jours
Exemple du virus de la Dengue
4-5 jours
15 jours
après 5 jours
fièvre +
symptômes
Virémie IgM IgG
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![Page 89: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/89.jpg)
[N]
ELISA: Sensibilité / Spécificité
100% Sensibilité 100% Spécificité
[OD]
Non infectésInfectés
Cut-Off
Cut-off est une estimationarbitraire
100% Sensibilité80% Spécificité
100% Spécificité70% Sensibilité
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Yosemite National Park Hantavirus Infection
• Total de 9 cas confirmés : 3 décès
• 8/9 exposés durant leur séjour au Curry Village
• 1/9 exposé probablement durant un séjour au High Sierra Camps (25 km du Curry
Village)
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Late Symptoms
•Low blood pressure
• Acute shock
•Vascular leakage
•Acute kidney failure
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~2 mois entre 1er cas et alerte CDC
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• Nested PCR : Pan-hantavirus
• Nested PCR : Sin Nombre Specific
• 2 Real-time PCR : Sin Nombre Specific
Sin Nombre
Dobrava
Puumala
Haantan
Seoul
Saaremaa
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ALERTE CDC Analyses sérologiques OK pour ~10 cas
6 jours
1 jour: mettre au point les tests PCR
5 jours: attente des réactifs (analyses PCR+sérologiques)
Diagnostique 100% OK sérologies pour > 150 cas + analyse PCR
6 jours5 jours: attente des réactifs (analyses PCR+sérologiques)
2 Biologistes 100% + 1 Technicien de laboratoire
![Page 95: Les virus émergents et techniques de détection...La pandémie de VIH: > 40 mio victimes. Notre ADN est composé de 5-8% de séquences virales. Réservoir animal incontrôlable. Virus](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022071117/6000c0ea4a388b399527234c/html5/thumbnails/95.jpg)
MERCI