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João Aprigio Guerra de Almeida
Leche h
um
ana a
lim
ento
inte
ligente
Leche h
um
ana a
lim
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inte
ligente
Ecologia
Microbiana
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Lo que es la ecología microbiana?
Es el estudio de la diversidad y de la interacción de
los microrganismos entre sí y con el medio
ambiente.
Focos de interés: Diversificación microbiana: Focos de interés: Diversificación microbiana:
aislamiento, identificación y cuantificación;
Actividades desempeñadas por los
microrganismos y sus consecuencias.
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Consideraciones
� La preocupación en reducir la mortalidad neonatal es
creciente en todos los paises.
�Se estima que solamente el año 2010, cuatro millones �Se estima que solamente el año 2010, cuatro millones
de bebés murieron en las primeras cuatro semanas
de vida, siendo tres cuartos de estos la primera
semana.
Silva, 2010
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“Alimentación del prematuro es una
cuestión de vida o muerte! ”
Carvalho, 2007
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Ocurre una imaturidade de la respuesta imune, después de lo parto, causada por:
En la especie humana
�Deficiencia en la síntesis de anticorpos;
�Deficiencia en la función neutrofílica;
�Bajos niveles de anticorpos circulantes .
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A partir de la 15ª semana ocurre el pasaje de IgG a través de la placenta, la cual pasa a ser
encontrada en la circulación.
�Este transporte es más acentuado a finales de
la gestação, a partir de la 31ª semana;
�Siendo máximo alrededor de la 35ª semana;
�Los prematuros presentan bajos niveles de Ac,
debido al pequeño tiempo de gestación. .
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� Los RNs son expuestos a los microrganismos:
�Muchos a través de los alimentos.
�En el caso de la leche materno, los microrganismos �En el caso de la leche materno, los microrganismos son originários de los mamilos, ductos lactíferos, piel
circulante y hasta de las manos.
�El proceso de colonización afecta la morfologia, fisiologia, y diferenciação del epitélio intestinal.
Falk, et al., 2003
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“Germ Free”“Germ Free”
�Alimento
�Agua
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La colonización bacteriana lenta, con número
limitado de especies, tiende a ser peligrosa por
el hecho de que el “super crecimiento” ser uno
de los factores que promueven la translocação
bacteriana bacteriana
Luego, iniciar la alimentación de RN con el
colostro de su madre, representa un gran
beneficio
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Alteraciones en la microbiota intestinal durante los primeros 7 días después del nacimiento.
Mitsuoka, 1996.
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Microrganismos que habitan los ductos
periféricos de la mama
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��Funcionan como una barrera viva Funcionan como una barrera viva
entre los ductos y el medio ambiente. entre los ductos y el medio ambiente.
Los microrganismos de la mama Los microrganismos de la mama
��Funcionan con se fueran una colonia microbiana que Funcionan con se fueran una colonia microbiana que
se defiende de otros microrganismos por medio de la se defiende de otros microrganismos por medio de la
producción de substancias semejantes a la colicinas.producción de substancias semejantes a la colicinas.
��Además de producir ácidos orgánicos de cadenas Además de producir ácidos orgánicos de cadenas
cortas. cortas.
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Conducto Conducto
mamilar
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� Inibem selectivamente microorganismos patógenos (enterobactérias)
�Metabolizam lactose produciendo ac. latico, acético,
Bifidobactérias de la leche humana
�Metabolizam lactose produciendo ac. latico, acético, fórmico y succínico que reducen el pH intestinal
�El crecimiento de las bifidobactérias es estimulado por la presencia del factor bífido, no encontrado en el LV.
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CARBOIDRATOSLactoseOligossacarídeos-N
Ácido Lático ( ↓↓↓↓ pH)
Ácidos Graxos de Cadeia Curta
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La microbiota del niño amamentada
�Componentes prebioticos estimulan la proliferação de bacterias benéficas como bifidobactérias y
lactobacillus.
� Los cuales bajan el pH intestinal e inibem la prolifiração de bacterias patógenas.
� La microbiota intestinal funciona como componente de la barrera defensiva de la mucosa intestinal.
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Colonización del trato intestinal Colonización del trato intestinal
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Lars et al, 2003
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Translocación
En el huésped normal se produce a niveles bajos y las bacterias
se matan en el camino o en los ganglio
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Epitelio especializado asociada la Placa de Peyer
Epitelio absortivo
Células M
Placas de Peyer
Los folículos linfoides dispersos
Placa de Peyer
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Tiempo de vida útil de estas células bajo refrigeración es de: 12 -14 horas
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Células de linaje Blanco
Sangre
(8000/mm3)
Sangre
(8000/mm3)
Calostro Humano
(800 - 2.000/mm3)
Calostro Humano
(800 - 2.000/mm3)(8000/mm3)
Leucócitos-PMN
Neutrófilos
(8000/mm3)
Leucócitos-PMN
Neutrófilos
(800 - 2.000/mm )
Macrófagos;
PMN
Linfócitos ( ± 10%)
(800 - 2.000/mm )
Macrófagos;
PMN
Linfócitos ( ± 10%)
X
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�Si conectan las bacterias e impiden que entre en contacto con la mucosa del intestino.
Algunos son análogos de los receptores de las
Otros oligossacarídeos
Algunos son análogos de los receptores de las células epiteliais utilizadas por los me lo para
iniciar procesos infecciosos.
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�Son absorbidos en el intestino y encontrados en la
orina.
�Su presencia en la orina, posiblemente, explique el
Otros oligossacarídeos
hecho de niños amamentadas tengan más
pequeños índices de infecciones urinárias.
�Luego, los oligossacarídeos son componentes
nutricionales y anti-infecciosos.
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Uropathogenic E. coli (UPEC)
Mulvey et al. PNAS, 2000, 97:8829
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Tipos de contaminantes MicrorbianosTipos de contaminantes Microrbianos
�Bactérias
�Leveduras
�Fungos
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Como las bacterias se reproducen
1=> 2=> 4=> 8=> 16=> 32=> 64=> 128=> 256=> 512=> 1024=> 2048=> 4096
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Temperatura de crecimiento
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Ecologia Ecologia
de la Leche Humana de la Leche Humana
Ordenhada Ordenhada Ordenhada Ordenhada
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��Aún cuando proveniente de mamas absolutamente Aún cuando proveniente de mamas absolutamente normales la leche presenta variado números y tipos normales la leche presenta variado números y tipos
de microrganismos.de microrganismos.
DonadoraDonadora
��Sus fuentes de contaminación pueden ser clasificadas Sus fuentes de contaminación pueden ser clasificadas como de origen primario y secundaria.como de origen primario y secundaria.
��Contaminación primaria (interna) Contaminación primaria (interna)
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Contaminación primaria (interna) Contaminación primaria (interna)
��VIHVIH
��HTLVHTLV--II
��HTLVHTLV--IIII��HTLVHTLV--IIII
��Virus de la hepatite BVirus de la hepatite B
��Virus de la hepatite CVirus de la hepatite C
��Citomegalovírus Citomegalovírus
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De entre las principales fuentes de contaminantes externos, se citan:
�pêlos,
�piel,
Contaminación secundaria Contaminación secundaria
�saliva,
�cabello, etc.
Normalmente, la LHO se conserva mejor cuando refrigerada, pues sus contaminantes son en su
mayoría son mesófilos.
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Región Anatómica
Microrganismo Incidencia %
Piel S. aureus 2 - 25
Nariz S. aureus 35 - 40
Los microrganismos x seres humanos Los microrganismos x seres humanos
Nariz S. aureus 35 - 40
Boca S. aureus comun
Obs: El S. aureus era considerado un microrganismo Obs: El S. aureus era considerado un microrganismo
saprófitas, actualmente es clasificado como oportunista. saprófitas, actualmente es clasificado como oportunista.
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�Pueden contaminar por medio de manos sucias, tos, espirro o conversación sobre los utensílios
con o sin la leche.
Operarios Operarios
�Los microrganismos pueden ser desalojados de las manos durante la ordenha.
�Cuánto menores las contaminaciones durante a recolecta, mejores las características
bacteriológicas de la LHO.
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Manipulador com Infecção
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Cultura del dedo infectado
Caldo TSB Agar Sangue
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Ambiente Ambiente Ambiente Ambiente ---- Productos Productos Productos Productos ---- Personas Personas Personas Personas
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Higiene de las manos
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Manos Sucias
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Manos después de lavado con agua y jabón
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Manos después de anti-sepsia con alcohol 70%
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Alianza
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Paño de limpieza
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Dinero
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Cabello
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Vestimenta adecuada
Guantes
Gorro
Protectores oculares
Mascarilla
Delantal
Pantalones
Zapatos cerrados
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��Uno de los mayores responsables por la mala calidad Uno de los mayores responsables por la mala calidad
de la leche es la falta de cuidado con los utensilios de la leche es la falta de cuidado con los utensilios
(bambas, frascos, etc).(bambas, frascos, etc).
��El gran número de microrganismos observado puede El gran número de microrganismos observado puede
UtensiliosUtensilios
��El gran número de microrganismos observado puede El gran número de microrganismos observado puede
ser explicado por su multiplicación.ser explicado por su multiplicación.
�� Los utensílios apenas higienizados pueden aumentar Los utensílios apenas higienizados pueden aumentar
la carga microbiana en hasta 30 veces. la carga microbiana en hasta 30 veces.
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� Los contaminantes del agua pertenecen a los géneros
Pseudomonas, Achromobacter, Alcaligenes,
Flavobacterium, etc. Oriundos, en su mayoría del
suelo.
Agua
suelo.
�Tales microrganismos son psicrotróficos, proteolíticos
y/o lipolíticos causando problemas en la leche
refrigerado.
�Por eso, sólo se debería emplear agua tratada.
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Outras Fontes
�En 444 moscas fueron encontradas de 5,5 x 102 a 6,6 x 106 bacterias. Media 1,2 x 106
�Si todas fueran transferidas para 50 litros de leche, cada mosca añadiría 25 bacterias/mL.
(Pinheiro, 2006)
cada mosca añadiría 25 bacterias/mL.
�Nomalmente las moscas son atraídas por el material fecal, la mayoría de las bacterias adheridas a ellas son
coliformes.
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Acción de los microrganismos en la LHO
�El sueño de una bacteria es transformarse en dos;
�Los microrganismos pueden deteriorar la leche �Los microrganismos pueden deteriorar la leche o sean responsables por enfermedades.
�Como la LHO se componen de proteínas, carboidratos y grasas, etc., queda fácil prever
los tipos de deterioración.
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�Los microrganismos varían en cuanto a sus
exigencias nutricionales y la capacidad de
utilizar los diferentes substratos que componen
la LHO:la LHO:
�Fuentes de carbono;
�Fuentes de nitrogênio;
�Fuentes de vitaminas;
�Sales minerais.
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�Mide la concentración de H+ que es represen-tada por la ecuación pH = log 1/[H+]
�Es un factor importante en la limitación de los tipos de microrganismos capaces de crecer en tipos de microrganismos capaces de crecer en
el alimento:
• Muy ácidos <4,0;• Ácidos 4,0 a 4,5;• Poco ácidos > 4,5 (Leche Humana:6,7 a 6,9).
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La leche humana coagula en pH 4,7 (punto isoelétrico de la caseína).
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�Es uno de los factores ambientales que más afectan la viabilidade y el crecimiento
microbiano.microbiano.
�La temperatura óptima para la mayoría de los patógenos y de 35°C.
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�El potencial de oxirredución (Redox) puede ser
afectado por una serie de factores.
�La presencia del oxígeno es el factor que más
contribuye para el aumento del potencial de
redox.
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�Aeróbios requieren Eh positivo: presencia de O2 (+250 a +500mV);
�Anaeróbios - requieren Eh negativo: ausencia �Anaeróbios - requieren Eh negativo: ausencia de O2 (+30 a -550 mV);
�Facultativos - se multiplican en Eh positivo o negativo (+250 a -320mV);
�Leche humana, Eh varía: de +200 a +400 mV.
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Factores que influyen en la multiplicación bacteriana
• El crecimiento de los microrganismos en la LHO obedece a una curva clásica.
10000
12000 Curva de Crescimento
EstacíonariaEstacíonaria
Curva de crescimiento
0
2000
4000
6000
8000
Tiempo (h)
Log d
o N
úm
ero
LagLag
LogLog
MuerteMuerteLog de las
Cuentagens
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Temperatura°C
Bactérias(UFC)
Tiempo de Generación
Pop.ao fines de 10
horas28 1 30 1.000.000
18 1 60 1.000
8 1 120 32
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Ruptura
Glóbulos de Grasa Grasa LibreMembrana (coalescencia)
Alteración da
Efecto de los microrganismos sobre LHO estocada de forma incorreta
Alteración da
Proteinas del Soro FloculaciónEstructura 4ª
Desestabiliz.
Micelas de Caseína CoagulaciónAcidez/Enzimas
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Por lo tanto, el frío y el calor son nuestros mayores aliado...
100
60
°C
37
18
70
-18
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Visión sin acción, no pasa de un sueño.
Acción sin visión, es mero pasatiempo.
Visión con acción puede cambiar el mundo.
Joel Barker