LAPORAN PRAKTIKUM

LAPORAN PRAKTIKUM

TEKNIK PENANAMAN ATAU ISOLASI BAKTERI

Hari/ Tanggal:

Materi

:

Teknik penanaman atau isolasi bakteri

Tujuan

:

Untuk mengetahui dan memahami cara menginokulasi mikroorganisme.

Dasar Teori

Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agarmenghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1998).Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi) yaitu :1. Menyiapkan ruanganRuang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidakterjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataanserum vaksin dan sebagainya. 2. Pemindahan dengan dengan pipetCara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni (Pelczar, 1986).3. Pemindahan dengan kawat inokulasi kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus jugaboleh berupa kolongan yang diametrnya 1-3mm. Dalam melakukuan penanaman bakterikawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyalaapi saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala (Pelczar, 1986).Teknik InokulasiAda beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme yaitu : Metode gores Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni.Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadang berbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya sama yaiitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan. Ada beberapa teknik dalam metode goresan, yakni :Goresan T

Goresan Radian

Goresan sinambung

Metode tusuk Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (Winarni, 1997).Teknik Isolasi Dan PemurnianTeknik isolasi mikroba untuk memisahkan dan mengidentifikasi, jenis mikroba dari biakan dapat diklasifikasikan berdasarkan sifat pertumbuhan yang nampak pada media.Metode penanaman pada agarPada metode penanaman pada agar, jika sedikit saja sel diletakkan dalam medium agar, maka tiap sel akan tumbuh menjadi koloni yang terpisah. Jika suspensi sel cukup diencerkan, koloni akan terpisah dengan baik, sehingga masing-masing memiliki kemungkinan tinggi untuk diturunkan menjadi sel tunggal. Namun untuk membuat yang demikian, penting untuk mengambil satu tipe koloni yang diinginkan, memasukkan ke dalam air dan menanamnya kembali ke agar. Dengan mengulangi prosedur ini beberapa kali menjamin untuk memperoleh biakan murni. Metode PengenceranMetode yang sedikit dapat dipercaya adalah pengenceran. Suspensi diencerkan seri dan contoh masing-masing pengenceran ditanam pada agar. Jika hanya sedikit contoh dari pengenceran tertentu menunjukkan pertumbuhan, diperkirakan bahwa beberapa dari biakan tadi dimulai dari sel tunggal. Metode ini tidak digunakan kecuali jika penanaman pada agar tidak dimungkinkan karena beberapa alasan. Gambaran yang tidak diinginkan dari metode ini adalah bahwa metode ini hanya dapat digunakan untuk isolasi tipe organisme yang dominan dalam populasi campuran.Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu:1. Isolasi Pada Agar CawanPrinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah diinkubasi berasaldaris atu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada agar cawan,yaitu: metode gores kuadran dan metode agar cawan tuang. Bila metode gores kuadran dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme, dimana setiap koloni berasaldari satu sel.2. Isolasi Pada Medium CairMetode isolasi pada medium cair dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan (medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu dilakukan pengenceran dengan beberapa serial pengenceran. Semakin tinggi pengenceran peluang untuk mendapatkan satu sel semakin besar.3. Isolasi Sel TunggalMetode isolasi sel tunggal dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar yang tidak dapat diisolasi dengan metode agar cawan/medium cair. Sel mikroorganisme dilihat dengan menggunakan perbesaran sekitar 100 kali. Kemudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun micromanipulator, yang dilakukan secara aseptis.

Alat dan Bahan

Alat :

-Ose tumpul

-Ose tusuk

-Lampu bunsen

-Rak tabung

-Korek api

-Incubator

Bahan :

Media padat

MC

T.S.I.A

S.I.M

S.C

Media cair

B.G.L.B

Bakteri

Cara Kerja

Media Padat

MAC. CONKEY AGAR PLATE

-Ujung plot diberi kode menggunakan spidol

-Panaskan ose tumpul hingga berpijar,tunggu sampai dingin

-Ambil bakteri dengan ose tumpul lalu

-Goreskan ose ini pada permukaan Nutrien Agar, dimulai dari bagian

pinggir cawan petri, secara tidak terputus digerakkan kekiri dan kekanan

sampai seluas seperempat luas permukaan media-tutup ulasan dan tunggu hingga kering

-Dibuka kembali lalu lakukan penggoresan ke arah kanan

-Panaskan kembali ose tumpul agar steril

T.S.I.A

-Panaskan ose tusuk agar steril

Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api-Ambil bakteri dari agar menggunakan ose tusuk

-letakkan pada tabung lalu di geser dalam bentuk zig zag

-Tusukkan 2-3 x sampai dasar

-Tutup kembali tabung reaksidengan kapas

-Panaskan kembali ose tusuk agar steril

S.I.M

-Panaskan ose tusuk agar steril

-Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api-Ambil bakteri dari agar menggunakan ose tusuk

-Tusukka ose tersebut sampai dasar

-Tutup kembali tabung reaksidengan kapas

-Panaskan ose tusuk setelah digunakan

S.C

-Panaskan ose tumpul agar teril

-Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api-Ambil bakteri dari agar menggunakan ose tumpul

-Goreskan di media dalam bentuk zigzag

-Tutup kembali tabung reaksidengan kapas

-Panaskan kembali ose tumpul setelah digunakan

Media Cair

BGLB

Pembahasan

Kesimpulan

Daftar pustaka

http://yazura08.blogspot.com/2012/03/laporan-inokulasi-bakteri.html