51

LAMPIRAN

52

LAMPIRAN

Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Usus Halus Ayam Broiler

Menggunakan Metode Paraffin

1) Persiapan Preparat

a. Mengisolasi dan mencuci jaringan menggunakan larutan NaCl fisiologis.

b. Sampel difiksasi menggunakan larutan Bouin selama 2 hari.

c. Sampel dihedrasi menggunakan tahapan alkohol seri naik, yaitu 70 %, 80

%, 90 % dan 100 %. Setiap tahapan dilakukan selama 30 menit.

d. Melakukan clearing atau penjernihan menggunakan larutan xilol dan

alkohol 100 % dengan tahapan perbandingan 1:3, 1:1, 3:1. Masing – masing

dilakukan selama 5 menit.

e. Sampel diinfiltrasi di dalam oven dengan suhu 56ºC dengan tahapan

perbandingan xilol dan paraffin 3:1, 1:1 dan terkahir menggunakan paraffin

murni. Setiap tahapan dilakukan selama 15 menit.

f. Melakukan proses embedding atau penempelan sampel ke dalam blok

paraffin.

g. Sampel disayat menggunakan mikrotom putar dengan ketebalan 6- 8 µm.

Hasil sayatan disimpan sementara pada baki preparat.

h. Melakukan proses fiksasi, yaitu penempatan sayatan pada kaca objek diatas

heating plate dengan perekat albumen meyers. Sampel disimpan minimal 1

hari sebelum dilakukan pewarnaan.

i. Proses pewarnaan sampel.

53

2) Tahap Pewarnaan HE (Haematoksin Eosin)

a. Mencelupkan sampel secara bertahap ke dalam larutan xilol I dan xilol II

dengan masing-masing tahapan 20 menit.

b. Mencelupakan sampel kembali secara bertahap ke dalam alkohol 100 %,

90 %, 80% selama 3-5 menit dan kedalam alkohol 70% selama 30 menit

sampai warna kuning menghilang.

c. Mencelupkan sampel ke dalam larutan Haematoksilin Ehrlich selama 2-10

menit.

d. Membilas sampel dengan air mengalir hingga sayatan tampak berwarna

biru. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dalam HNO3 0,5 %

dalam etanol 70 % jika sampel belum terwarna dengan baik, ulangilah

tahapan larutan haematoksilin. Sampel di amati di bawah mikroskop.

e. Mencelupkan sampel secara bertahap kedalam alkohol 70 %, 80 %, 90 %

masing-masing selama 3-5 menit.

f. Mencelupkan sampel kedalam larutan eosin hingga sitoplasma berwarna

merah muda. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dengan alkohol

96 %, jika sampel kekurangan warna maka sampel dicelupkan kembali ke

dalam alkohol 80% dan 90 % selama 3-5 menit.

g. Mencelupkan sampel ke dalam alkohol 96 % sebanyak 5 kali.

h. Mencelupkan sampel kembali ke dalam alkohol 100 % sebanyak 3-5 kali

selama 5 menit.

i. Mencelupkan sampel ke dalam larutan xilol dan alkohol dengan

perbandingan 1 : 1 selama 3 menit.

j. Mencelupkan sampel kembali ke dalam larutan xilol I dan II masing-msing

selama 15 menit. Sampel ditutup dengan mounting agent.

54

Lampiran 2. Gambaran Villi Ileum (P0) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10

P0 U1 P0 U2

P0 U3 P0 U4

Keterangan:

a: Tinggi villi

b: Lebar apikal villi

c: Lebar basal villi

P0 U5

a

b

c

55

Lampiran 3. Gambaran Villi Ileum (P1) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10

P1 U1 P1 U2

P1 U3 P1 U4

Keterangan:

a: Tinggi villi

b: Lebar apikal villi

c: Lebar basal villi

P1 U5

b

a

c

56

Lampiran 4. Gambaran Villi Ileum (P2) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10

P2 U1 P2 U2

P2 U3 P2 U4

Keterangan:

a: Tinggi villi

b: Lebar apikal villi

c: Lebar basal villi

P2 U5

a

b

c

57

Lampiran 5. Gambaran Villi Ileum (P3) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10

P3 U1 P3 U2

P3 U3 P3 U4

Keterangan:

a: Tinggi villi

b: Lebar apikal villi

c: Lebar basal villi

P3 U5

a

b

c

58

Lampiran 6. Koefisien Variasi Bobot Badan Awal Ayam Broiler

No

Bobot Badan Awal Ayam Broiler

P0 P1 P2 P3

......................................g.....................................

1 41 44 43 41

2 44 43 37 46

3 46 40 46 50

4 47 45 43 42

5 44 48 46 49

6 42 46 49 44

7 43 44 43 44

8 41 49 39 39

9 41 46 39 47

10 42 44 46 45

11 41 43 40 45

12 43 43 45 47

13 48 43 44 46

14 47 47 43 48

15 46 48 47 39

16 46 42 38 40

17 42 44 40 46

18 45 39 48 41

19 44 38 42 43

20 39 39 41 41

21 43 43 45 42

22 44 42 44 42

23 39 46 44 47

24 35 40 43 47

25 38 40 46 43

Jumlah 1071 1086 1081 1104

Rata-Rata 42,84 43,44 43,24 44,16

Koefisien Keragaman:

n : 100

x : 43,42

∑(𝑥𝑖 − 𝑥)2 : 944,36

Sd = √∑(𝑥𝑖−𝑥)

2

𝑛

59

= √944,36

100

= √9,44

= 3,07

KV = 𝑠𝑑

𝑥 x 100%

= 3,07

43,42 x 100%

= 7,07%

Koefisien Variasi (KV) kurang dari 10% sehingga bobot badan awal ayam broiler

dapat dikategorikan seragam.

60

Lampiran 7. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Lebar Villi Ileum

Ulangan Perlakuan

P0 P1 P2 P3

.......................................(μm).......................................

1 120,05 156,74 130,59 117,09

2 161,08 127,04 139,55 137,83

3 139,35 145,36 119,96 118,11

4 117,69 150,17 152,97 131,99

5 134,54 129,48 142,64 126,33

Rata-rata 134,54 141,76 137,14 126,27

FK =(∑𝑌)2

𝑟𝑡=

(2778,871)2

20= 364112,6 JKG = JKT − 𝐽𝐾𝑃

JKT =∑𝑌𝑖𝑗2− 𝐹𝐾 =3472,21−633,48

=(120,0512+16107922+...+126,33052) – 364112,6 =2328,73

= 3472,21 KTP =𝐽𝐾𝑃

𝑑𝑏=

633,477

3= 211,16

JKP =∑𝑌𝑖

2

𝑟− 𝐹𝐾 KTG =

𝐽𝐾𝐺

𝑑𝑏=

2328,728

16= 177,42

=753,01562+⋯+631,34422

5− 364112,6 Fhit =

𝐾𝑇𝑃

𝐾𝑇𝐺=

211,159

177,4205= 1,19

=633,48

Daftar Sidik Ragam

Sumber

Keragaman

Db JK KT F hitung F tabel

(0,05)

Perlakuan 3 633,48 211,16 1,19 3,24

Galat 16 2328,73 177,42

Total 19 3472,21

Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan

probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan

lebar villi ileum ayam broiler.

61

Lampiran 8. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Tinggi Villi Ileum

Ulangan Perlakuan

P0 P1 P2 P3

.......................................(μm).......................................

1 646,31 692,10 565,55 670,77

2 408,37 606,65 659,57 575,42

3 702,54 656,53 613,47 558,75

4 752,46 664,12 651,99 499,76

5 508,87 688,89 717,12 604,33

Rata-rata 603,71 661,66 641,54 581,80

FK =(∑𝑌)2

𝑟𝑡=

(12443,6)2

20= 7742111,45 JKG = JKT − 𝐽𝐾𝑃

JKT =∑𝑌𝑖𝑗2− 𝐹𝐾 =133550,21−19523,753

=(646,31152+408,362+...+604,322) – 7742111,5 =114026,45

= 133550,21 KTP =𝐽𝐾𝑃

𝑑𝑏=

19523,75

3= 6507,92

JKP =∑𝑌𝑖

2

𝑟− 𝐹𝐾 KTG =

𝐽𝐾𝐺

𝑑𝑏=

114026,45

16= 7126,65

=3018,54422+⋯+581,80432

5− 7742111,5 Fhit =

𝐾𝑇𝑃

𝐾𝑇𝐺=

6507,92

7126,65= 0,91

=19523,75

Daftar Sidik Ragam

Sumber

Keragaman

Db JK KT F hitung F tabel

(0,05)

Perlakuan 3 19523,75 6507,92 0,91 3,24

Galat 16 114026,5 7126,65

Total 19 133550,2

Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan

probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan

tinggi villi ileum ayam broiler.

62

Lampiran 9. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Jumlah Villi Ileum

Ulangan Perlakuan

P0 P1 P2 P3 Total

................................................................................

1 51 46 47 43

2 40 47 55 50

3 45 44 62 54

4 40 47 51 47

5 43 50 38 49

Total 219 234 253 243 949

Rata-rata 43,80 46,80 50,60 48,60 189,80

FK =(∑𝑌)2

𝑟𝑡=

(949)2

20= 45030,05 JKG = JKT − 𝐽𝐾𝑃

JKT =∑𝑌𝑖𝑗2− 𝐹𝐾 =612,95−124,95

=(512+402+...+492) – 7742111,5 =488

= 612,95 KTP =𝐽𝐾𝑃

𝑑𝑏=

124,95

3= 41,65

JKP =∑𝑌𝑖

2

𝑟− 𝐹𝐾 KTG =

𝐽𝐾𝐺

𝑑𝑏=

488

16= 30,50

=2192+⋯+2432

5− 45030,05 Fhit =

𝐾𝑇𝑃

𝐾𝑇𝐺=

41,65

30,50= 1,37

=124,95

Daftar Sidik Ragam

Sumber

Keragaman

Db JK KT F hitung F tabel

(0,05)

Perlakuan 3 124,95 41,65 1,37 3,24

Galat 16 488 30,50

Total 19 612,95

Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan

probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan

jumlah villi ileum ayam broiler.

63

Lampiran 10. Dokumentasi Kegiatan Penelitian

Pembuatan Probiotik

Analisis Sampel

Probiotik

Pemeliharaan Ayam

Pengambilan Sampel Ileum

Fiksasi Sampel

64

Dehidrasi Sampel

Embedding Sampel

Sectionning Sampel

Blocking Sampel

Stainning Sampel

Mounting Sampel