lampiran-lampiran - etheses.uin-malang.ac.idetheses.uin-malang.ac.id/472/11/10620084...
TRANSCRIPT
94
LAMPIRAN-LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian
Persiapan alat-alat dan bahan-
bahan
Sterilisasi Ruang Alat-alat
Pembuatan Media
Sterilisasi Media
Sterlisasi Eksplan
Inisiasi Kalus
HASIL
95
Lampiran 2. Skema Kerja Analisis Kandungan Klorofil Kalus
Ditimbang bahan (kalus) 2 gram
Dihancurkan/digerus dengan mortal
martil
Ditambahkan 50 ml aceton 85% dan
biarkan selama 4 jam lalu saring
Diambil 5 ml filtrat dan encerkan
hingga 25 ml dengan aceton
Diamati absorbansi pada 663 dan
645 nm
HASIL
96
Lampiran 3. Tabel Komposisi Media Murashige & Skoog (MS)
Stok Senyawa Per liter Stok Pemakaian
Stok Per liter medium
A
B
C
D
E
F
NH4NO3
KNO3
KH2PO3
H3BO3
Kl
NaMoO4.2H2O
CoCl2. 6H2O
CaCl2. 2H2O
MgSO4. 2H2O
MnSO4. 4H2O
ZnSO4. 4H2O
CuSO4. 5H2O
NaEDTA
FeSO4. 7H2O
82,500 g
95,000 g
34,000 g
1,240 g
0,166 g
0,050 g
0,005 g
88,000 g
74,000 g
4,460 g
1,720 g
0,005 g
7,460 g
5,560 g
20,00 mL
20,00 mL
5,00 mL
5,00 mL
5,00 mL
5,00 mL
1.650,000 mg
1.900,000 mg
170,000 mg
6,200 mg
0,830 mg
0,250 mg
0,025 mg
440,000 mg
370,000 mg
22,300 mg
8,600 mg
0,025 mg
37,300 mg
27,800 mg
Myo-inositol
Glisin
Niasin
Piridoksin-HCl
Tiamin-HCl
10,000 g
0,200 g
0,050 g
0,050 g
0,010 g
10,000 mL 100,000 mg
2,000 mg
0,500 mg
0,500 mg
0,100 mg
Sukrosa
Agar
Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan Media dalam 250 ml aquades
1. Media A1D0 (10% air kelapa + 0 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 25 ml air kelapa + 0 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
2. Media A2D0 (15% air kelapa + 0 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 37,5 ml air kelapa + 0 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
3. Media A3D0 (20% air kelapa + 0 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 50 ml air kelapa + 0 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
4. Media A1D1 (10% air kelapa + 1 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 25 ml air kelapa + 1 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
5. Media A2D1 (15% air kelapa + 1 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 37,5 ml air kelapa + 1 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
97
6. Media A3D1 (20% air kelapa + 1 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 50 ml air kelapa + 1 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
7. Media A1D2 (10% air kelapa + 2 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 25 ml air kelapa + 2 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
8. Media A2D2 (15% air kelapa + 2 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 3,75 ml air kelapa + 2 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
9. Media A3D2 (20% air kelapa + 2 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 50 ml air kelapa + 2 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
10. Media A1D3 (10% air kelapa + 3 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 25 ml air kelapa + 3 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
11. Media A2D3 (15% air kelapa + 3 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 37,5 ml air kelapa + 3 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
12. Media A3D3 (20% air kelapa + 3 mg/l 2,4-D)
1,1075 gr MS + 1,75 gr agar + 7,5 gr gula + 50 ml air kelapa + 3 mg/l 2,4-D
+ aquades sampai volume mencapai 250 ml
Lampiran 5. Tabel Data Hasil Pengamatan
1. Tabel Pengamatan Waktu Inisiasi Kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Perlakuan Ulangan
Total Rata-
rata Air
Kelapa
2,4-
D 1 2 3 4
10%
0 - - - - - -
1 6.2 6.4 6.4 6.8 25.8 6.45
2 6.6 6.4 7.2 6.4 26.6 6.65
3 5.2 5.4 5.6 5.4 21.6 5.4
15%
0 - - - - - -
1 6.4 5.8 5.6 7.8 25.6 6.4
2 6.2 6.6 6.6 6.4 25.8 6.45
3 7.4 6.6 7 7.2 28.2 7.05
20%
0 - - - - - -
1 5.6 6.6 6.6 6 24.8 6.2
2 6.4 6.8 6.6 6.4 26.2 6.55
98
3 6.8 6.4 6.6 6.6 26.4 6.6
2. Tabel Pengamatan Berat Basah Kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Perlakuan Ulangan Total
Rata-
rata Air
Kelapa
2,4-
D 1 2 3 4
10%
0 0 0 0 0 0 0
1 0.266 0.254 0.216 0.162 0.898 0.2245
2 0.2696 0.286 0.25 0.418 1.2236 0.3059
3 0.165 0.232 0.217 0.206 0.82 0.205
15%
0 0 0 0 0 0 0
1 0.286 0.4 0.3982 0.31 1.3942 0.34855
2 0.154 0.18 0.256 0.226 0.816 0.204
3 0.314 0.4174 0.308 0.208 1.2474 0.31185
20%
0 0 0 0 0 0 0
1 0.358 0.391 0.32 0.398 1.467 0.36675
2 0.304 0.406 0.278 0.25 1.238 0.3095
3 0.29 0.286 0.114 0.22 0.91 0.2275
3. Tabel Pengamatan Persentase Pertumbuhan Kalus, Respon Kalus, Tekstur
Kalus, dan Warna Kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
No Perlakuan
Persentase
Pertumbuhan
Kalus
Respon
Kalus
Tekstur
Kalus
Warna
Kalus
1 A1D0 * + * Coklat
2 A2D0 * + * Coklat
3 A3D0 * + * Coklat
4 A1D1 100% +++ Remah kuning
5 A2D1 100% +++ Remah kuning
6 A3D1 100% +++ Remah kuning
7 A1D2 100% +++ Remah kuning
8 A2D2 100% +++ Remah kuning
9 A3D2 100% +++ Remah kuning
10 A1D3 100% +++ Remah Kuning
11 A2D3 100% +++ Remah kuning
12 A3D3 100% +++ Remah kuning
99
Keterangan : * : Eksplan tidak membentuk kalus namun
mengalami pembengkakan
(+) : Eksplan membengkak atau kalus hanya terbentuk
di salah satu ujung eksplan
(++) : Kalus tumbuh pada sebagian permukaan eksplan
(+++) : Kalus tumbuh pada seluruh permukaan eksplan
4. Tabel Hasil Analisis Kandungan Klorofil Total (mg/kg) kalus Alfalfa
(Medicago sativa L.) dengan menggunakan Metode Spektrofotometer
Perlakuan Ulangan
Total Rata-
rata Air
Kelapa
2,4-
D 1 2 3 4
10%
0 0 0 0 0 0 0
1 22666.6
5
23002.9
9
22704.6
8
23283.3
3
91657.6
5
22914.
4
2 24794.7
3 25776.3 26363.2
26152.6
7
103086.
9
25771.
7
3 26771.6
8 26197.7
27415.6
3
27458.0
6
107843.
1
26960.
8
15%
0 0 0 0 0 0 0
1 25353.1 25651.7
2
26742.2
1 25732.7
103479.
7
25869.
9
2 29179.3
2
29402.5
6
30012.4
6
28189.5
9
116783.
9 29196
3 31094.0
9
30187.3
2
30636.7
2
30764.5
5
122682.
7
30670.
7
20%
0 0 0 0 0 0 0
1 27687.1
1
27507.2
3
28506.9
1
28161.8
8
111863.
1
27965.
8
2 29844.6
6
31204.8
8
30493.6
4
29505.2
1
121048.
4
30262.
1
3 30985.9
7
30804.0
3
32426.2
6 32233
126449.
3
31612.
3
100
Lampiran 6. Analisis Data Perhitungan ANOVA
1. Hasil ANOVA Pengaruh 2,4-D yang dikombinasikan dengan air kelapa
terhadap waktu inisiasi kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:Data
Source
Type III Sum
of Squares df Mean Square F Sig.
Model 3678.239a 15 245.216 1.241E3 .000
Airkelapa .965 2 .482 2.442 .103
Auksin 451.883 3 150.628 762.281 .000
Ulangan .689 3 .230 1.163 .339
Airkelapa *
Auksin 7.015 6 1.169 5.917 .000
Error 6.521 33 .198
Total 3684.760 48
a. R Squared = .998 (Adjusted R Squared = .997)
2. Hasil Uji DMRT 5% 2,4-D terhadap waktu inisiasi kalus Alfalfa (Medicago
sativa L.)
Data
Duncan
Auksin N
Subset
1 2
1 12 6.350
3 12 6.350
2 12 6.550
Sig. .307 1.000
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
Based on observed means.
The error term is Mean
Square(Error) = .198.
101
3. Hasil Uji DMRT 5% pada interaksi antara 2,4-D dengan air kelapa terhadap
waktu inisiasi kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Data
Duncan
Perlak
uan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5
3 4 5.400
7 4 6.200
4 4 6.400 6.400
5 4 6.450 6.450
1 4 6.450 6.450
8 4 6.550 6.550
9 4 6.600 6.600
2 4 6.650 6.650
6 4 7.050
Sig. 1.000 .227 .082
4. Hasil ANOVA Pengaruh 2,4-D yang dikombinasikan dengan air kelapa
terhadap berat basah kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:Data
Source Type III
Sum of
Squares
df Mean
Square
F Sig.
Model 2.927a 15 .195 71.954 .000
Airkelapa .016 2 .008 2.859 .072
Auksin .722 3 .241 88.779 .000
Ulangan .014 3 .005 1.676 .191
Airkelapa *
Auksin
.087 6 .014 5.317 .001
Error .090 33 .003
Total 3.017 48
a. R Squared = .970 (Adjusted R Squared = .957)
102
5. Hasil Uji DMRT 5% (2,4-D) terhadap berat basah kalus Alfalfa (Medicago
sativa L.)
Data
Duncan
Auksin
(2,4-D) N
Subset
1 2 3
1 12 .000000
4 12 .248117
3 12 .273133 .273133
2 12 .313267
Sig. 1.000 .248 .068
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
Based on observed means.
The error term is Mean Square(Error) = .003.
6. Hasil Uji DMRT 5% interaksi antara 2,4-D dengan air kelapa terhadap berat
basah kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Data
Duncan
Perlak
uan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
1 4 .000000
5 4 .000000
9 4 .000000
7 4 .204000
4 4 .205000
2 4 .224500
12 4 .227500
3 4 .305900
11 4 .309500
8 4 .311850
6 4 .348550
103
10 4 .366750
Sig. 1.000 .578 .160
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
7. Hasil ANOVA Pengaruh 2,4-D yang dikombinasikan dengan air kelapa
terhadap kandungan klorofil total kalus Alfalfa (Medicago sativa L.
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:Data
Source
Type III Sum
of Squares df Mean Square F Sig.
Model 2.831E10a 15 1.887E9 7.630E3 .000
Airkelapa 1.067E8 2 5.335E7 215.703 .000
Auksin 7.121E9 3 2.374E9 9.598E3 .000
Ulangan 2251277.946 3 750425.982 3.034 .043
Airkelapa *
Auksin 3.725E7 6 6207535.927 25.099 .000
Error 8161675.711 33 247323.506
Total 2.831E10 48
a. R Squared = 1.000 (Adjusted R Squared = 1.000)
8. Hasil Uji DMRT 5% 2,4-D terhadap kandungan klorofil total kalus Alfalfa
(Medicago sativa L.)
Data
Duncan
Auksi
n N
Subset
1 2 3 4
1 12 .0000
2 12 2.5583E4
3 12 2.8410E4
4 12 2.9748E4
Sig. 1.000 1.000 1.000 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means.
The error term is Mean Square(Error) = 247323.506.
104
9. Hasil Uji DMRT 5% air kelapa terhadap kandungan klorofil total kalus
Alfalfa (Medicago sativa L.)
Data
Duncan
Airkel
apa N
Subset
1 2 3
1 16 1.8912E4
2 16 2.1434E4
3 16 2.2460E4
Sig. 1.000 1.000 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
Based on observed means.
The error term is Mean Square(Error) =
247323.506.
10. Hasil Uji DMRT 5% interaksi antara 2,-4 D yang dkombinasikan dengan air
kelapa terhadap kandungan klorofil total kalus Alfalfa (Medicago sativa L.)
Data
Duncan
perla
kuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5 6 7 8
1 4 .0000
5 4 .0000
9 4 .0000
2 4
2.2914
E4
3 4
2.5772
E4
6 4
2.5870
E4
4 4
2.6961
E4
10 4
2.7966
E4
7 4
2.9196
E4
105
11 4
3.0262
E4
8 4
3.0671
E4
12 4
3.1612
E4
Sig. 1.000 1.000 .798 1.000 1.000 1.000 .290 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
106
Lampiran 7. Gambar Hasil Pengamatan Induksi Kalus Alfalfa (Medicago sativa
L).
1. Perlakuan A1D0 (Air kelapa 10% dan 2,4-D 0 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
107
2. Perlakuan A2D0 (Air kelapa 15% dan 2,4-D 0 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
108
3. Perlakuan A3D0 (Air kelapa 20% dan 2,4-D 0 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
109
4. Perlakuan A1D1 (Air kelapa 10% dan 2,4-D 1 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
110
5. Perlakuan A2D1 (Air kelapa 15% dan 2,4-D 1 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
111
6. Perlakuan A3D1 (Air kelapa 20% dan 2,4-D 1 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
112
7. Perlakuan A1D2 (Air kelapa 10% dan 2,4-D 2 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
113
8. Perlakuan A2D2 (Air kelapa 15% dan 2,4-D 2 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
114
9. Perlakuan A3D2 (Air kelapa 20% dan 2 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
115
10. Perlakuan A1D3 (Air kelapa 10% dan 2,4-D 3 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
116
11. Perlakuan A2D3 (Air kelapa 15% dan 2,4-D 3 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
117
12. Perlakuan A3D3 (Air kelapa 20% dan 2,4-D 3 mg/l)
Pengamatan Awal Pengamatan Akhir
Ulangan 1
Ulangan 1
Ulangan 2
Ulangan 2
Ulangan 3
Ulangan 3
Ulangan 4
Ulangan 4
118
Lampiran 8. Gambar alat-alat dan bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian
Timbangan Analitik Timbangan
Autoklaf
Refregenator
Hotplate Strirer
Kompor + panci pemanas
Oven
LAF (Laminar Air Flow)
119
(Media MS, Gula, Agar, NaOH,
HCl, Indikator pH, Biji Alfalfa,
2,4-D, Karet dan Plastik tahan
panas, botol kultur, spatula, gelas
ukur dan stirer)
(Cawan petri, bayclin(clorox),
korek, alat-alat diseksi, plastik
wraping)
(alkohol 70%, Alkohol 96%, dan
Spirtus)
(air steril, botol steril)
(media steril)
(Rak inkubasi)
120
Lampiran 9. Foto Kegiatan Penelitian
(Biji Alfalfa yang sudah
berkecambah dalam keadaan
aseptik (umur 8 hari))
(Inisiasi kotiledon Alfalfa dalam
media MS
121
122