LABORATORIO # 5: MICROORGANISMOS, INFECCIONES NOSOCOMIALES Y EL AMBIENTE

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REPASO…

� ¿Cuántos tipos de tinciones discutimos en el laboratorio?

� La tinción Gram, ¿de que tipo es?� ¿Utilizando la tinción Gram, que color espera

observar en una bacteria Gram +, y en una observar en una bacteria Gram +, y en una Gram -?

� ¿Cuál es la función del yodo como agente mordante?

� Según la practica del laboratorio ¿Cuáles fueron las diferencias entre Serratia marcescens y Staphylococcus aureus al observar la laminilla?

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Resumen resultados de tinciones

Tinción Gram (estructura de pared celular)

Repaso: Tinciones

Tinción de esporas Tinción de cápsula

�Definir y discutir sobre las enfermedades nosocomiales

�Conocer qué son las enterobacterias y la importancia de éstas

�Utilizar indicador de fluorescencia para

Objetivos

�Utilizar indicador de fluorescencia para identificar la presencia de microorganismos especificos

� Se adquieren durante la estadia del paciente en el hospital (intrahospitalarias), es decir, no son la causa del ingreso.

� Se asocian a instrumentación, procedimientos invasivos, pacientes graves e inmunosuprimidos.

Enfermedades nosocomiales

Pseudomonas aeruginosa Enterococcus faecium Enterococcus faecalis

MIEMBROS DE LA

FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE

� Citrobacter sp.� Enterobacter sp.� Escherichia sp.� Klebsiella sp.

Salmonella typhimuriumSalmonella enteritidis

Klebsiella sp.� Morganella sp.� Proteus sp.� Providencia sp.� Salmonella sp.� Serratia sp.� Shigella sp.� Yersinia sp.

Shigella dysenteriaeYersinia pestis

Serratiamarcescens

Klebsiella pneumoniae

� Miembros de la microbiota intestinal de la mayoría de animales y humanos.

� Son bacterias que abundan en el agua, suelo y vegetación en descomposición.

� Son los patógenos humanos más comunes

Familia Enterobacteriaceae

� Son los patógenos humanos más comunes

� Entre sus características:� Cocobacilos o bacilos� Anaerobios facultativos (crece con o sin oxigeno)� Gram negativos � No esporulados� Algunos son mótiles (flagelos perítricos)� Algunos son capsulados � Poseen pilis

Enterobacterias: Estructura antigénica

•El conocimiento detallado de la estructura antigénica resulta de utilidad para estudios epidemiológicos y en la formulación de vacunas

Se distinguen tres tipos de antígenos: antígenos:

•AgO ó antígeno somático constituido por ellipopolisacárido (LPS) de

la membrana externa.•H ó antígeno flagelar.•K ó antígeno capsular.

Enterobacterias: Factores de virulencia

••VirulenciaVirulencia: Grado de patogenicidad de un microorganismo.

•Estructuras le brindan capacidad de sobrevivencia al microorganismo.

� Endotoxinas- (LPS)Su actividad depende del componente lípido Adel lipopolisacárido. Las endotoxinas son liberadas por

lisis o en forma de burbujas de la membrana externa,impregnadas con LPS.

Enterobacterias: Factores de virulencia

� CápsulaLos protege de la fagocitosis. repelen la superficie

hidrofóbica de la célula fagocítica.

� Sistema de secreción de tipo IIIAproximadamente 20 proteínas que facilitan la secreción de factores de virulencia en bacterias hacia sus huéspedes.

�Enterobacteriaceae patógenos se clasifican en 3 grupos:

Métodos de clasificación

�Coliformes•Fermentan lactosa, microbiota normal y podrían ser patógenos oportunistas.

�Oportunistas* (no coliformes) •Provoca una enfermedad cuando el sistema inmunológico está débil.•No fermentan lactosa

�Patógenos verdaderos

� Algunas características:� Aeróbicos o anaeróbicos facultativos� Bacilos Gram-� Fermentadores de lactosa

• Producción de gas a altas temperaturas en medio con lactosa

� Colonizan el tracto intestinal de animales y humanos.

Coliformes Oportunistas

� La presencia de coliformes en el agua es indicativo de impureza y pobre tratamiento de desagües.

� Ejemplos:� Escherichia coli

� Klebsiella spp.

� Klebsiella pneumoniae

� Serratia spp.

� Enterobacter spp spp, Hafnia y Citrobacter spp

� El coliforme más común y más estudiado.

� Cepas virulentas tienen genes localizados en un plásmido virulento que le permite a la bacteria colonizar el tejido humano.

Provoca gastroenteritis por exotoxinas

Escherichia coli

� Provoca gastroenteritis por exotoxinas

� Causa más común de infecciones nosocomiales en el tracto urinario.

�Es la cepa más patogénica� Causa diarrea, colitis hemorrágica, y síndrome

hemolítico urémico (un desorden severo en riñones).

Escherichia coli O157:H7

� Las epidemias están mayormente asociadas a carne de res no cocida o a leche no pasteurizada.

� Algunas características:� Encontrado en el sistema digestivo y respiratorio de

humanos y animales� Causa infección oportunista� Produce cápsula

Klebsiella spp.

� Klebsiella pneumoniae especie más patógena.� Neumonía� Involucrada en bacteremia, meningitis, infección de heridas

Klebsiella pneumoniae

� Pigmento rojo (temperatura ambiente).� Prodigiosina

� Puede crecer en catéteres, solución salina y otros utensilios de hospitales.

Serratia spp.

utensilios de hospitales.

� Puede causar infecciones en el tracto urinario y respiratorio a pacientes inmunocomprometidos.

� Difícil de tratar por resistir varios antibióticos.

Serratia marcescens

TSA

� Encontrados en suelo, agua, vegetación y desagües.

� Reside en sistema digestivo de humanos y animales.

Enterobacter, Hafnia y Citrobacter

� Patógenos oportunistas.

� Infecciones nosocomiales en pacientes inmunocomprometidos.

� Resistentes a antibióticos.Enterobacter spp.

� Incluyen varios patógenos oportunistas

� Ej. Proteus spp.

� Gram -, anaerobio facultativo� Proteus mirabilis es la especie más común asociada a

enfermedades �Infección urinaria en pacientes que tiene un catéter por

Oportunistas (No coliformes)Enterobacteriaceae

�Infección urinaria en pacientes que tiene un catéter por mucho tiempo

�Su infección puede inducir la piedra en riñón�Resistente a muchas drogas con poder antimicrobiano.

Proteus en EMB Agar

� Miembros importantes de este grupo sonpatógenos debido a numerosos factores de virulencia.

� Sistema de secreción Tipo III � Permite la entrada de proteínas que inhiben fagocitosis

Rearregla el citoesqueleto de células eucariotas

Patógenos verdaderosEnterobacteriaceae

� Rearregla el citoesqueleto de células eucariotas� Induce apoptosis (muerte).

� Algunos ejemplos:� Salmonella spp.

� Gram-, mótil, bacilo

� Intestino de heces fecales de aves, reptiles y mamíferos.

� Se adquiere por consumo de alimentos contaminados.

� Dos patógenos importantes:S. typhimurium-causa salmonelosis

Salmonella spp.

� S. typhimurium-causa salmonelosis� S. typhi-causa fiebre tifoidea

� Patógeno de animales.� Generalmente relacionado a

cerdos.

� Tres especies importantes:� Y. enterocolitica

Yersinia spp.

� Y. enterocolitica

�Consumo de alimentos�Inflamación de intestino�Infecciones gastrointestinales

� Y. pseudotuberculosis

�Similar a Y. enterocolitica pero la inflamación intestinal es menos severa.

� Coliformes Totales- el grupo de coliformes en general (de origen fecal y no fecal). Se utilizan en aguas tratadas para observar si ocurrió contaminación.

� Coliformes Fecales- son un subgrupo de los coliformes totales, son de origen intestinal. Se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas.

Coliformes totales vs. fecales

denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas.

“Todos los coliformes fecales son totales pero no todos los coliformes totales son fecales”

� Detecta la presencia de coliformes totales y fecales simultáneamente.

� Consiste en añadir a un frasco con 100 ml de muestra el medio en polvo “Pouch” e incubar a 37°C/24hrs

.� Resultados:

� Si la muestra se torna amarillo intenso contiene

Método rápido para identificar coliformes: Colilert

� Si la muestra se torna amarillo intenso contiene coliformes totales.

� Si emite fluorescencia al exponerla en luz UV hay presencia de E. coli (coliforme fecal).

� Género Enterococcus:� Cocos Gram +� Aerobio facultativo

�Prefiere oxigeno pero esta bien sin él� Toleran altas temperaturas y altas concentraciones de

sal

Familia Enterococcaceae

� Se encuentran de manera natural en muchos organismos como parte de su flora intestinal� E. faecalis y E. faecium en humanos

� Agencia estatal y federal de Protección Ambiental lo utilizan para monitorear la calidad de agua en playas recreativas.

� Similar al método de Colilert con algunas diferencias:� Identifica microorganismos del género Enterococcus� Temperatura de incubación es a 41°C/24hrs

� Al exponer las muestras en luz UV:�Fluorescencia=Positivo (Presencia de enterococos)�No Fluorescencia=Negativo

Método rápido para identificar enterococos: Enterolert

Observar fluorescencia en

UV

24hrs.

EJERCICIO PRÁCTICO

Paso #1: Lavado de Manos

RECAPITULACIÓN…

� ¿Qué es una enfermedad nosocomial?

� Algunos factores de virulencia de las bacterias son…¿Qué son los coliformes, coliformes oportunistas y � ¿Qué son los coliformes, coliformes oportunistas y patógenos verdaderos?

� Un método rápido para identificar coliformes lo es...

¿¿Preguntas??...