laborat Órne met Ódy - szu.sk imunolÓgia... · typy imunity z hľadiska efektorového...
TRANSCRIPT
![Page 1: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/1.jpg)
CELULCELULÁÁRNA IMUNOLRNA IMUNOLÓÓGIAGIALABORATLABORATÓÓRNE METRNE METÓÓDYDY
PRIETOKOVPRIETOKOVÁÁ CYTOMETRIACYTOMETRIA
RNDr. Mira Horváthová, PhD.
ÚKIA, LF SZU v Bratislave akademický rok: 2014/2015
![Page 2: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/2.jpg)
Oddelenie klinickej imunológie
• Laboratórium bunkovej imunológie a prietokovej
cytometrie
• Imunochemické laboratórium
• Laboratórium tkanivových kultúr
![Page 3: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/3.jpg)
Typy imunityz hľadiska efektorového
humorálna imunita
sprostredkovanáprotilátkami, komplement, CRP
bunková imunita
celulárnafagocyty, NK bunky, lymfocyty
![Page 4: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/4.jpg)
Základné formy bunkovej imunity
získaná imunitašpecifická, adaptívna
vrodená imunitanešpecifická, prirodzená
druhová, kmeňová, individuálna
NešpecifickáFagocytujúce bunky
Bunky NKBazofily, žírne bunky
ŠpecifickáCD4+ lymfocytyCD8+ lymfocyty
Pamäťové bunky CD45RO
Zložky
![Page 5: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/5.jpg)
Bunková imunita
Imunita, ktorú realizujú bunky patriace do imunitného systému.
špecifická bunková imunita
T- a B-lymfocyty
prirodzená alebo nešpecifická bunková imunita
profesionálne fagocyty - neutrofily, eozinofily, monocyty/makrofágy
prirodzené cytotoxické bunky - NK bunky
bazofily, žírne bunky (mastocyty)
dendritické bunky – bunky prezentujúce antigén – predstavujú spojku medzi nešpecifickou a špecifickou zložkou imunity
![Page 6: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/6.jpg)
QuickTime™ and a TIFF (LZW) decompressor are needed to see this picture. QuickTime™ and aTIFF (LZW) decompressorare needed to see this picture.
adaptívnaimunita
natívna imunita
Bunkové línie
Robert Beatty mcb.berkeley.edu
![Page 7: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/7.jpg)
• dostatočne široké spektrum vhodných imunologických metód
• znalosť klinickej hodnoty imunologických vyšetrení
• racionálna indikácia imunologických vyšetrení
• komplexné hodnotenie výsledkov vyšetrení s klinickým stavom
Predpoklady racionálnej diagnostiky
![Page 8: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/8.jpg)
VyVyššetrenie bunkovej imunityetrenie bunkovej imunity
• analýza živých buniek• správny odber
EDTA, heparín• uchovávanie vzoriek pri
izbovej teplote• rýchly transport materiálu
do laboratória
• krv
• BAL
• cerebrospinálna tekutina
• synoviálna tekutina
![Page 9: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/9.jpg)
StanovenieStanovenie imunologickýchimunologických parametrovparametrov
•Akútne štádium ochorenia •Skríningové vyšetrenia•Monitorovanie liečby
• Autoimunita
• Zápal
• Hypersenzitivita
• Alergia
• Imunodeficiencia
• Normálna funkcia
• Deficiencia alebo funkčnánedostatočnosť
• Hyperaktivita alebo neprimeranáaktivita
![Page 10: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/10.jpg)
Sledovanie bunkových imunitných Sledovanie bunkových imunitných
mechanizmovmechanizmov
• Počet leukocytov a diferenciálny leukogram
• Vyšetrenie subpopuláciílymfocytov
• Expresia adhezívnychmolekúl
• Funkčná aktivita T a B lymfocytov, NK buniek
• Funkcie neutrofilov, bazofilov, eozinofilov,
monocytov/makrofágov
![Page 11: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/11.jpg)
Laboratórne metódy klinickej imunológie
MikroskopiaBurkerova komôrka
Krvný náter
Fuchs-Rosenthalová komôrka
Hematologický analyzátorKrvný obraz
Diferenciál
Prietokový cytometerRelatívny a absolútny
počet leukocytov
Počet leukocytov a diferenciálny leukogram
![Page 12: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/12.jpg)
Krvný náter I.
The Image Atlas - Carden Jennings Publishing Co., Ltd.
lymfocytmonocyt
![Page 13: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/13.jpg)
The Image Atlas - Carden Jennings Publishing Co., Ltd.
neutrofil
eozinofil
bazofil
Krvný náter II.
![Page 14: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/14.jpg)
Hematologické analyzátory
plne automatizovanplne automatizovanéé systsystéémymy -- krvný obrazkrvný obraz (KO) a/alebo (KO) a/alebo diferencidiferenciáálny lny popoččet et ((DiffDiff) ) –– rerežžim KO alebo KO/im KO alebo KO/DiffDiff
dva základné princípy merania - optický (analýza prechádzajúceho svetla, rozptýleného svetla, fluorescencia) a impedančný
z merania získavame informacie o počte buniek (kvantitatívna analýza) a veľkosti, tvare a zložení buniek (kvalitatívna analýza)
princípy meraní môžu byť na jednotlivých analyzátoroch rôzne kombinované
technológie využívajú: : absorbanciu, cytochémiu, fokusovanú prietokovúimpendanciu; laserový systém charakterizuje bunkový povrch, tvar a reflektivitu
princíp variability impedancie -- bunky so slabou elektrickou vodivosbunky so slabou elektrickou vodivosťťou ou prechprecháádzajdzajúú úúzkym kalibrovaným otvorom,zkym kalibrovaným otvorom, prerupreruššujujúú tok prtok prúúdu du –– stanovenie stanovenie popoččtu tu ččastastííc a ich vec a ich veľľkosti na zkosti na zááklade poklade poččtu a výtu a výššky elektrických impulzovky elektrických impulzov
![Page 15: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/15.jpg)
Typy hematologických analyzátorov
� s 3-populačným diferenciálnym rozpočtom WBC
� s 5-populačným diferenciálnym rozpočtemWBC
![Page 16: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/16.jpg)
WBC = leukocyty, RBC = erytrocytyWBC = leukocyty, RBC = erytrocytyNE#, NE% = NE#, NE% = neutrofilyneutrofilyLY#, LY% = LY#, LY% = lymfocytylymfocytyMO, MO% = MO, MO% = monocytymonocytyEO#, EO% = EO#, EO% = eozinofilyeozinofilyBA#, BA% = BA#, BA% = bazofilybazofily
HgbHgb = hemoglob= hemoglobíín, HCT = n, HCT = hematokrithematokrit (relat(relatíívny objem erytrocytov vo vny objem erytrocytov vo vzorke krvi), MCV = stredný objem erytrocytov, MCH = stredný objvzorke krvi), MCV = stredný objem erytrocytov, MCH = stredný objem em hemoglobhemoglobíínu, MCHC = strednnu, MCHC = strednáá koncentrkoncentráácia hemoglobcia hemoglobíínu v erytrocytenu v erytrocyte , , RDW = RDW = šíšírka distriburka distribuččnej krivky erytrocytov, PLT = nej krivky erytrocytov, PLT = trombocytytrombocyty, MPV , MPV = stredný objem = stredný objem trombocytovtrombocytov
Krvný obraz a diferenciKrvný obraz a diferenciáálny polny poččet leukocytovet leukocytov
![Page 17: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/17.jpg)
Referenčné hodnoty leukocytov v krvi
% 10e3/ul
WBC 4,0 - 11,0
NE 45,0 - 70,0 NE# 2,0 - 7,50
LY 20,0 - 40,0 LY# 1,50 - 4,00
MO 3,0 - 10,0 MO# 0,20 - 0,80
EO 1,0 - 5,0 EO# 0,04 - 0,35
BA 0,0 - 0,5 BA# 0,00 - 0,10
![Page 18: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/18.jpg)
Hodnotenie výsledkov
� neutropénia (napr. HIV, SLE, TBC, protizápalové lieky, antihistaminiká)
� lymfocytopénia - znížená tvorba (napr. SCID); zvýšená deštrukcia (napr. SLE, myastenia gravis, cytostatická)
� eozinopénia (napr. kortikosteroidy, hemodialýza, akútne infekcie, trauma)
� lymfocytóza (infekčné ochorenia vírusového pôvodu)
� eozinofília (napr. astma bronchiale, alergická granulomatóza, eozinofilová leukémia)
� leukocytóza (napr. Wegenerova granulomatóza)
� neutrofília (infekčné ochorenia bakteriálneho pôvodu)
![Page 19: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/19.jpg)
Laboratórne metódy klinickej imunológie
E-rozetové testyIzolácia lymfocytov
Mikroskopiafluorescenčná
Prietokový cytometer
Subpopulácie lymfocytov
![Page 20: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/20.jpg)
Izolácia lymfocytov(napr. Ficoll-Verografin, Telebrix)
lymfocyty - prstenec
granulocytyerytrocyty
Ficoll-Verografínový gradient
plazmakrvné doštičky
![Page 21: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/21.jpg)
E-rozetové testy
� určovanie počtu T-lymfocytov na základe tvorby E roziet
� hviezdicovitá adherencia ovčích erytrocytov na ľudskú T bunku cez LFA-3/CD2 interakciu
� aktívne a celkové E rozety - v závislosti od pomeru Ery/Lya doby odčítania
![Page 22: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/22.jpg)
Prietoková cytomteria
� zlatý štandard stanovenia bunkových populácií
� rýchla metóda
� senzitívna
� automatizovaná
� štatistické spracovanie
![Page 23: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/23.jpg)
Optický systém cytometra
bunková suspenzia
nosnákvapalina
laser
šošo
vky
prietokovákomôrka
vzorka
filtre
fluores
cenčn
ý
detektor
fluor
esce
nčný
detekto
r
šošovky
šošo
vky
počítač
procesor signálov
bočný svetelný rozptyl
predný svetelný rozptyl
![Page 24: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/24.jpg)
Imunofenotypizácia
analýza heterogénnej bunkovej populácie, charakterizácia bunkových subpopulácií
Princíp:Bunky označené rôznymi fluorochrómami prechádzajú jedna za druhou prietokovou komôrkou cytometra, v ktorej ich pretína laserový lúč
Rozptýlené svetlo a emitovaná fluorescencia sú rozdelené systémom hranolov, optických filtrov a zrkadiel podľa vlnovej dĺžky emitovanej fluorescencie.
![Page 25: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/25.jpg)
Metóda: : Imunofenotypizácia leukocytovv ľudskej periférnej krvi
• odber krvi do EDTA
• inkubácia krvi s monoklonovou protilátkou značenou fluorochrómom
• lýza červených krviniek lyzačným roztokom
• zastavenie reakcie
• analýza vzoriek na prietokom cytometri
![Page 26: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/26.jpg)
Identifikácia buniek – CD znaky
� CD (Cluster of Differentiation; súbor povrchových znakov)
� T-lymfocyty: CD3+, CD3+CD4+ (pomocné), CD3+CD8 (cytotoxické)
� aktivované T-lymfocyty: CD3+HLADR+
� B-lymfocyty: CD19+
� NK bunky: CD3-CD(56+16)+
� monocyty/makorofágy: CD14+
� leukocyty: CD45+
� CD4/CD8 = IRI, imunoregulačný index
![Page 27: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/27.jpg)
Referenčné hodnoty diferenciačných antigénov lymfocytov
% absolútny počet
10e3/ul
CD3+ 64,00 - 81,90 0,77 - 2,20
CD3+CD4+ 36,50 - 53,90 0,39 -1,34
CD3+CD8+ 21,80 - 36,40 0,50 - 0,99
CD3-CD(16+56)+ 4,00 - 27,00 0,09 - 0,50
CD3+/HLA-DR+ 2,40 - 11,80 0,04 - 0,38
CD19+ 7,20 - 18,40 0,10 - 0,53
CD4/CD8 IRI 0,90 - 2,60
![Page 28: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/28.jpg)
Povrchové adhezívne molekuly
veľká rodina imunoglobulín - napr. ICAM-1 (CD54), VCAM (CD106), CD2, LFA-3 (CD58), signalizačné receptory CD28 a CTLA-4 a ich ligandy CD80 a CD86, antigénne špecifické receptory TCR a BCR, MHC gp I a II, koreceptory lymfocytov CD4 a CD8 a inéintegríny - CD11a/CD18, CD11b/CD18, CD11c/CD18selektíny - CD62L, CD62P, CD62Emucíny - MAdCAM, GlyCAM-1, CD43
Aktivačné markery
CD69 (lektín)CD25 (receptor pre IL-2)CD71 (transferín)HLADR
![Page 29: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/29.jpg)
Význam imunofenotypizácie
� diagnostika a klasifikácia primárnych a sekundárnych imunodeficitov
� určovanie pôvodu a klasifikácia leukémií a lymfómov
� monitorovanie imunoterapie a chemoterapie u imunodeficientných stavov a malígnych ochorení
� diagnostika a monitorovanie autoimunitných ochorení
� monitorovanie imunity po transplantácii orgánov
� posudzovanie stavu imunity pri infekcii vírusom HIV
![Page 30: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/30.jpg)
LaboratLaboratóórne metrne metóódy klinickej imunoldy klinickej imunolóógiegie
Fagocytárna aktivita %
Fagocytárny indexMikroskopia
Prietoková cytometria
Respiračné vzplanutietest INT
Chemiluminiscencia
Prietoková cytometria
Cídna aktivitaMikroskopia
Prietoková cytometria
Funkčné testy granulocytov
![Page 31: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/31.jpg)
Fagocytózanešpecifická imunitná odpoveď
� profesionálne fagocyty - Ne, Eo, Mo/Ma
� funkcia fagocytov
efektorová - fagocytóza a eliminácia mikroorganizmov za účasti baktericídnych látok (napr. defenzíny) a hydrolytických enzýmov (napr. lysozým)
regulačná - produkcia cytokínov, prostaglandínov, leukotriénov a pod.
![Page 32: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/32.jpg)
Proces fagocytózy
1. rozpoznanie a adhézia
2. ingescia a tvorba fagozómu
3. fúzia lyzozómu a fagozómu –fagolyzozóm, degranulácialyzozómu
4. usmrtenie, inaktivácia a degradácia
5. exocytóza - vylúčenie
![Page 33: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/33.jpg)
Metóda: Fagocytárna aktivita a fagocytárny index
test sleduje ingesciu častíc fagocytmi
• FA - % fagocytujúcich buniek, ktoré obsahujú 1 a viac pohltených častíc
• FI - priemerný počet častíc, ktoré pohltil jeden fagocyt
• mikroskopia: May-Grünwald a Giems-Romanovski roztok
• prietoková cytometria: fluorescenčne značené častice
![Page 34: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/34.jpg)
Referenčné hodnoty - fagocytóza
FA % 75,00 - 95,00
FI 1,25 - 4,00
![Page 35: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/35.jpg)
Respiračné vzplanutie
� aktivácia NADPH-oxidázy - vznik NADP+ a superoxidovéhoradikálu O2
-, z ktorého ďalšími reakciami vzniká tzv. singletový kyslík, peroxid vodíka a hydroxylový radikál –tzv. reaktívne kyslíkové intermediáty (ROI)
� účinným mikrobicídnym prostriedkom fagocytov je aj oxid dusnatý (NO), produkuvovaný enzýmovým komplexom NO syntáza - vznik reaktívnych intermediátov dusíka (RNI)
![Page 36: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/36.jpg)
Stanovenie respiračného vzplanutia
INT testdôkaz schopnosti fagocytov produkovať superoxid a ďalšie reaktívne formy kyslíka
zafarbenie roztoku jódnitrotetrazólia (INT) pri inkubácii leukocytov a fagocytovateľných častíc; intenzita zafarbenia je úmerná schopnosti leukocytov usmrcovať baktérie po ich fagocytóze
chemiluminiscenčný test
chemiluminiscencia - fenomén svetelnej emisie oxidačných produktov chemických reakcií, uvoľnenie energie; amplifikátorsvetelnej energie je luminol; detekcia luminometrom
![Page 37: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/37.jpg)
Stanovenie respiračného vzplanutia- prietoková cytometria
sledovanie produkcie kyslíkových radikálov
• nefluorescenčná látka vstupuje do buniek a oxiduje sa v nich (napr. dihydrorhodamin 123→rhodamin 123, DHE→EB)
• po excitácii svetlom vlnovej dĺžky 488 nm dochádza k emitácii zeleneného alebo červeného svetla
![Page 38: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/38.jpg)
Stanovenie mikrobicídnej aktivity fagocytov
sledovanie ingescie a schopnosti fagocytov usmrtiť mikrób
� určuje sa počet usmrtených mikróbov fagocytmi
� mikroskopické vyhodnotenie - farbenie mŕtvych mikróbov metylénovou modrou
� prietoková cytometria - intracelulárne poškodenie baktérií alebo kvasiniek sa stanoví propidium jodidom po izolácií leukocytov a ich osmotickej lýze
![Page 39: LABORAT ÓRNE MET ÓDY - szu.sk IMUNOLÓGIA... · Typy imunity z hľadiska efektorového humorálnaimunita sprostredkovaná protilátkami, komplement, CRP bunkováimunita celulárna](https://reader037.vdocuments.mx/reader037/viewer/2022102822/5be4493509d3f2f9648c4917/html5/thumbnails/39.jpg)
Význam funkčných testov granulocytov
dagnostika primárnych/sekundárnych deficiencií fagocytózy a sledovanie funkčných a metabolických porúch fagocytov
napr. chronická granulomatózna choroba, deficiencia myeloperoxidázy, deficiencia tuftsínu, syndróm lenivých leukocytov, deficiencialeukocytovej adhézie, prechodná dysfunkcia neutrofilov, Downovsyndróm, kryoglobulinémia