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8/16/2019 Lab 3 Bioq Imprimirdocx

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UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLAFACULTAD DE INGENIERÍA

Laboratorio N° 4

AMILASA EN GERMINACIÓN

Bloque: FC-PREAGR04A2M

Profesora: LOAYZA GUTIERREZ, LILLYAN TERESA

Alumnos:

CONISLLA DE LA CRUZ, Andrea

CURI OCHOA, Ines

LEWANDOWSKY BOCANEGRA, David

LIMA – PERÚ2015-01


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I. RESUMEN

ACTIVIDAD DE LA ENZIMA AMILASA DURANTE LA GERMINACIÓN

Durante la formación de las semillas, se acumulan grandes cantidades de

sustancias de reserva, los cuales servirán para el crecimiento y desarrollo de laplántula. El carbohidrato de reserva más importante es el almidón, constituye del45 al 58% del peso seco y se localiza en el endospermo.

Durante la germinación, el almidón se degrada por un conjunto de enzimas, entrelas cuales está la α-amilasa. La concentración de esta enzima es muy baja en lasemilla, pero a medida que germina, se incrementa, alcanzando un máximo a los 6días.

II. INTRODUCCION:

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran las velocidades de lasreacciones, tienen una temperatura y pH optimo en la que su actividades máxima,es por esto que su funcionamiento se ven afectado al cambio de estos dosfactores, incluso si la temperatura llega a subir a un nivel extremo puededesnaturalizar a la enzima de forma irreversible. Mediante un test colorimétricocon Lugol y almidón se midieron las absorbancias de las 3 muestras a diferentesconcentraciones y se construyó una curva de calibración, con la que se pudocorroborar. Observamos también la actividad enzimática α-amilasa salival sobre elalmidón, según la desaparición de sustrato medido a través de la absorbancia con

un espectrofotómetro, a diferentes temperaturas. A continuación los invito a leer.

III. OBJETIVOS

Determinar la variación en la actividad enzimática de la enzima α-amilasa,

en los diferentes puntos de germinación, 2,4y 6 días.


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IV. MATERIALES

Semillas germinadas: 1, 4 y 5

d

í

a

s

Centrífuga

Espectrofotómetro Tubos de centrífuga

Mortero Pipetas de 1 ml y 10 ml


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Beakers de 50 ml Solución de lugol

Fiola 25 ml Solución de almidón

Tampón acetato 50 mM pH 4,8


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V. PROCEDIMIENTO

PARA GERMINACIÓN DE 4 DÍAS.

PASO :1

• tomar 5 semillas de ada tiempo

de germinaion. retirar el

oleoptilo y dear el endospermo.

PASO :2

•Triturar con cuidado en un

mortero las semillas con una

cantidad de tampón acetato

PASO :3•Filtrar utilizando tocuyo.

Enrazar en una fiola de 25 ml

con tampón acetato.

PASO:4

PASO :6

Colocar en tubos de centrífuga,

parte del extracto y centrifugar

a 3500 rpm por 5 minutos.

Decantar el sobrenadante

y mantenerlo en tubo de ensayo.


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TUBO MUESTRA

TUBO BLANCO

En un

tubo deensayo

• Pipetear 1ml de

tampon + 1ml de

almidón

• Luego, agregar 1mldel etrato enimatio +

10 ml de agua

destilada y agitar.

Despues

de 10

minutos.

• Agregar 1ml de

lugol.

• agitar.

Despuesde 10

minutos

• Leer en elespetrootometro

a 620nm.

en un

tubo de

ensayo

• Agregar 1mlde tampon.

agitar

• y agregar

10ml de agua

+ 1ml de

almidón.

calcular• La actividad

enzimatica.


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VI. RESULTADOS

1. Calcular la actividad enzimática para cada tiempo de germinación, según

fórmula.

Germinación de 2 días

DATOS:

Volumen de la Fiola: 25 ml

Absorbancia:

Blanco: 0,95

Muestra: 0,619

FÓRMULA:Donde.

A=Absorbancia del blanco

B= Absorbancia de la muestra

V= Volumen de aforo.

N= N° semillas

ΔA=()

ΔA =

ΔA =

La actividad enzimática de la germinación de la cebada dentro

de 4 días es 0,1655.


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Germinación de 4 días

DATOS:Volumen de la Fiola: 25 ml

Absorbancia:

Blanco: 1,238

Muestra: 0,831

FÓRMULA:Donde.




N= N° semillas

ΔA=()

ΔA =

ΔA =

La actividad enzimática de la germinación de la cebada dentro

de 4 días es 0,2035.


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Germinación de 6 días:

DATOS:

Absorbancia

Blanco: 1, 039

Muestra: 0,751

Volumen de la Fiola

25 ml

FÓRMULA:Donde.




N= N° semillas

ΔA =()

ΔA =

ΔA = 0,144

La absorbancia de la germinación de la cebada de 6 días es de 0,144


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VII. DISCUSIONESResultados de la germinación de 2 días

0,1655

Resultados de la germinación de 4 días

Resultados de la germinación de 6 días

Observación:

La germinación de seis días

tiene mayor actividad

enzimática por lo tanto

mayor amilasa, ya que la

amilasa aumenta de

acuerdo a los días que va

germinando.


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VIII. CONCLUSIONES

En este presente laboratorio llegamos a la conclusión de que la actividadenzimática mide el comportamiento de la amilasa en germinación, en los distintospuntos de germinación, en este caso fue de dos, cuatro y seis días. Asimismoaprendimos a realizar la germinación a partir de granos de cebada y viendo sudesarrollo hasta el conteo de los días previstos, la amilasa lo encontramos en elsobrenadante transcurrido los 5 minutos. Como también aprendimos que a mayoramilasa, mayor actividad enzimática y menor color.

Así mismo se descubrió que a mayor almidón menor hidrolisis. La amilasaaumenta de acuerdo a los días que ha germinado.

IX. BIBLIOGRAFIA

bioquímica 5ta ediciónLubert Steyer, Jeremy Berg574.192

2003

bioquímica 3ra edición

Lubert, Stryer574.1921990

Manual de prácticas bioquímica 2da ediciónSergio Sánchez, Sonia Uribe.574.1922008

bioquímica 5ta ediciónRobert bohinski.574.192

B681991

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