kvalifikacijjja i verifikacija performansi kod gasnih hromatografa...performansi kod gasnih...

Univerzitet u Novom SaduPrirodno-matematički fakultetPrirodno matematički fakultetDepartman za hemiju, biohemiju i zaštitu životne sredineUdruženje za unapređenje zaštite životne sredine „Novi Sad“Fondacija "Docent dr Milena Dalmacija"

Kvalifikacija i verifikacija j jperformansi kod gasnih

hromatografahromatografadr Aleksandra Tubićdr Aleksandra Tubić

Novi Sad 23-25. septembar, 2015.

SADRŽAJ

• Definicije

Uvod• Definicije• Zahtevi standarda SRPS ISO/IEC

17025:2006; tačka 5.5 – Oprema• Međuprovere (verifikacija)• Međuprovere (verifikacija)

Primeri iz naše prakse -

kvalifikacija i GC/MSD GC/µECDkvalifikacija i verifikacija

performansi

GC/MSD GC/µECD

UVODUVOD

Etaloniranje, verifikacija i održavanje opreme su osnovne aktivosti akreditovanej , j j plaboratorije kojima se obezbeđuju odgovarajuće performanse analitičkihinstrumenata i pouzdanost merenja sprovedenih u analitičkoj laboratoriji.

OdržavanjeOdržavanje“Kombinacija svih tehničkih iodgovarajućih

EtaloniranjeEtaloniranje“Postupak koji u određenim slučajevima, u prvom koraku uspostavlja odnos izmeđuodgovarajućih

administrativnih aktivnostipredviđenih za očuvanjenekog instrumenta ili

prvom koraku uspostavlja odnos između vrednosti određene veličine koju odražava etalon sa određenom mernom nesigurnošću i odgovarajućeg odgovora merlila sanekog instrumenta ili

dovođenje istog u stanje ukojem on može obavljatipredviđenu funkciju”

i odgovarajućeg odgovora merlila sa pridruženom mernom nesigurnošću, i u drugom koraku koristi tu informaciju da uspostavi odnos između dobijanih rezultata p j

VerifikacijaVerifikacijaPostupak potvrđivanja na osnovu objektivnih dokaza da određeni

p jmerenja”

Postupak potvrđivanja, na osnovu objektivnih dokaza da određeni predmet ispunjava specificirane zahteve

SRPS ISO/IEC 17025:2006

Tačka 5.5 – Oprema

• Oprema mora biti etalonirana i proverena radi potvrde ispunjenosti zahteva tačnosti i drugih specificiranih zahtevazahteva

• Oprema mora biti obeležena• Odgovarajuća dokumentacija:

• Procedure za bezbedno rukovanje, transport,

Laboratorija mora da j , p ,

skladištenje, korišćenje i planiranje održavanja merne opreme radi• Uputstvo za međuproveru instrumentaK t

poseduje pogodnu opremu

• Karton opreme• Sveska opreme• Program etaloniranja

Verifikacija opreme

Međuprovere

Rezultati testa Rezultat testa verifikacije:

verifikacije će pokazati da li je

merna oprema u skladu sa

Laboratorija mora uspostaviti

• oprema je u dobrim radnim uslovima i njene performanse se smatraju ispravnim. Zakazuje se datum sledeće verifikacijeskladu sa

specificiranim zahtevima uz

odgovarajući opseg

kriterijume prihvatljivosti

datum sledeće verifikacije• oprema nije u savršenim

uslovima rada, ali se može koristiti sa ograničenjem

• oprema se ne može tolerancije. koristiti i treba biti

popravljena, servisirana ili rashodovana

IZVEŠTAJ O MEĐUPROVERI OPREMEMEĐUPROVERI OPREME

GC - verifikacija performansi

Izvodi se proverom svih važnih modula koji čine sistem

Verifikacija GC/MSD b h P i Li T P i P iobuhvata sledeće

verifikacione testove:

Preciznost protoka

Linearnost detektora

Test signal/šum

Preciznost odnosa masa

Preciznost injektiranja

Verifikacija / /GC/ECD/FID

obuhvata sledeće


Preciznost protoka


Test šuma i drifta

Stabilnost injektiranja

testove:

GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S

Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost

Test preciznosti sprovodi se petostrukim injektovanjem standardne smeše

sledeće verifikacione

testove:

protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja

Test preciznosti sprovodi se petostrukim injektovanjem standardne smešen-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu. Kriterijum prihvatljivosti: CV (%) ≤ 1.

C14 Retenciono vreme (min)1 2.4102 2.4103 2.4114 2.4095 2.4106 2.412Srednja vrednost (min) 2.410Standardna devijacija (min) 0.001Relativna standardna devijacija, sr 0.043Koeficijent varijacije, CV (%) 0.043Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo, kriterijum

CV≤1%


Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost sledeće



Zaključak:Preciznost retencionih vremena n- 70000

75000

80000

85000

90000

Abundance

TIC: PREC_2.D\DATASIM.MS 2.410

2.996

3.890

alkana (C14, C15 i C16), sa koeficijentom variranja ≤ 1% ukazuje na preciznost protoka masenog

30000

35000

40000

45000

50000

55000

60000

65000

spektrometra.

2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50

5000

10000

15000

20000

25000

30000

Time-->



Linearnost detektora određuje se injektovanjem standardne smeše n


testove:


Linearnost detektora određuje se injektovanjem standardne smeše n-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu. Nakon završene analize izrađuje sekalibraciona kriva za C14, C15 i C16, koja daje zavisnost površine odkoncentracije standarda. Kriterijum prihvatljivosti: r ≥ 0.99

Linearnost kalibracione krive za C14 (na osnovu target jona 57)

Redni broj merenja Koncentracija (µg u injektu) Površina pika

1 0,0436 212966.7752 0 218 732496 065

14 ( g j )

2 0,218 732496.0653 0,436 1266599.88Koeficijent regresije, r 0,997Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo



C14


testove:


Zaključak:Analizom dobijenih rezultata se može 1.00e+006

Response

jkonstatovati linearna zavisnost površine pika C14, C15 i C16 od koncentracije, odn. mase analita u

5.00e+005

injektu. Detektor je u stanju da generiše linearne odgovore kada se menjaju koncentracije standarda i

00 0.2 0.4

Concentration

uzoraka. Dobijeni regresioni koeficijenti su u skladu sa kriterijumom prihvatljivosti r≥0,99.



Za ovaj test primenjuje se standard oktafluoronaftalen čija je koncentracija


testove:


Za ovaj test primenjuje se standard oktafluoronaftalen, čija je koncentracijau tragovima u dve metode tako da obuhvati oba filamenta. Nakon analizepodešavaju se integracioni parametri (masa za evaluaciju OFN je 272 m/z),pri čemu je primenjen RTE integrator i automatski se određuje S/N, kojitreba da bude 100 ili veći.

Signal/šum testSignal/šum test

Filament Izmerena vrednost Prihvatljive granice

1 124 ≥100:1

2 151 ≥100:12 151 ≥100:1



Abundance


testove:


Zaključak:Dobijeni rezultati ukazuju da je 2.2e+07

2.4e+07

2.6e+07

2.8e+07

3e+07

3.2e+07

TIC: OFN1.D\data.ms

j j jintenzitet signala oktafluoronaftalena u tragovima u odnosu na šum detektora za oba filamenta u 8000000

1e+07

1.2e+07

1.4e+07

1.6e+07

1.8e+07

2e+07

granicama prihvatljivosti ≥100:1 (124-151). 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00

2000000

4000000

6000000

Time-->



Primenjuje se standardna smeša n alkana (C C i C ) za određivanje preciznosti odnosa


testove:


Primenjuje se standardna smeša n-alkana (C14, C15 i C16) za određivanje preciznosti odnosamasa fragmenata. Određuje se standardna devijacija i relativna standardna devijacija, RSD(%) pet automatskih injektiranja za masu 1 - 57±0.03 m/z i masu 2 - 71±0.03 m/z. Određuju sepovršine pikova za svaku od masa i njihov odnos m1/m2. Kriterijum prihvatljivosti: preciznostodnosa masa ≤5%.

e1

) e 1

) osa

st

Inje

ktira

nje,

re

dnib

roj

Povr

šina

mas

e(5

7±0.

03 m

/z)

Povr

šina

mas

e(7

1±0.

03 m

/z)

Odn

os m

asa

Sred

nja

vred

nost

odno

mas

a

Stan

dard

nade

vija

cija

odno

sam

asa

Rela

tivna

st

anda

rdna

de

vija

cija

Krite

rijum

Prih

vatlj

ivos

1 698985 418267 1 671145461 698985 418267 1.67114546

2 706127 422231 1.67237128

3 682541 407982 1.67296842

4 698554 419363 1.6657502

5 787850 473678 1.6632607

6 723509 432500 1.67285318 1.670 0.004 0.250 ≤5% Prihvatljivo



Z klj č k


testove:


Zaključak:Određivanjem preciznosti odnosa masa fragmenata

t đ j d j d 1/ 2utvrđeno je da je odnos m1/m2 za alkane C14, C15 i C16 zadovoljavajući i RSD odnosispunjava kriterijum RSDispunjava kriterijum RSD odnosa masa: ≤5% i ukazuje na dobre performanse detektoradetektora.



injektiranjasledeće verifikacione

testove:


Preciznost injektiranja dokazuje se praćenjem stabilnosti retencionog vremena standarda istabilnosti površine pikova standarda n-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu.

roj

a a % a a a a og

jekt

iranj

e, re

dnib

r

ovrš

ina

(TIC

)

eten

cion

o vr

eme

redn

ja v

redn

ost

ovrš

ine

tand

ardn

a de

vija

cija

ovrš

ine

elat

ivna

stan

dard

naev

ijaci

ja p

ovrš

ine

%

riter

ijum

redn

ja v

redn

ost

eten

cion

og v

rem

en

tand

ardn

a de

vija

cija

eten

cion

og v

rem

en

elat

ivna

stan

dard

naev

ijaci

ja re

tenc

iono

rem

ena

%

riter

ijum

In Po Re Sr po St po Re de Kr Sr re St re Re de vr Kr

1 1116866 2.410

2 1127852 2.410

3 1090181 2.411

4 1117615 2.4094

5 1161139 2.410 1128268 26614 2.36 ≤5% 2.410 0.001 0.043 ≤1%

Zaključak:St bil t t i i t bil t šiStabilnost retencionog vremena i stabilnost površine ugljovodonika ukazuju na preciznost injektiranja primenom automatskog injektora.


Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznostobuhvata sledeće


Preciznost protoka


Test signal/šum

Preciznost odnosa masa

Preciznost injektiranja

Kriterijum Zadovoljava Ne zadovoljava

Preciznost protoka koeficijent varijacije CV≤1% XPreciznost protoka, koeficijent varijacije CV≤1% XLinearnost detektora, regresioni koeficijent r≥0,99 X

Odnos signal/šum (≥100:1) X

Preciznost odnosa masa (≤5%) X

Z klj č k

Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5%, retenciono vreme RSD ≤1%) X

ZaključakVerifikacionim testovima kojim je ispitana: preciznost protoka, linearnost detektora, odnos signal/šum, preciznost odnosa masa i stabilnost injektiranja t rđeno je da s isp njeni s i kriterij mii stabilnost injektiranja utvrđeno je da su ispunjeni svi kriterijumi postavljeni za verifikaciju analitičke opreme GC/MSD sistema, što ukazuje na dobre performanse analitičke opreme.

GC verifikacija performansiGC/µECD

Verifikacija GC/ECD

obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće


protoka detektora drifta injektiranja

Test preciznosti protoka je sproveden šestostrukim injektovanjemstandarda lindana i aldrina u izooktanu. Kriterijum prihvatljivosti: CV (%) ≤ 1

LindanLindan RetencionoRetenciono vremevreme (min)(min)1 9,8362 9,8333 9,8334 9,8335 9,8336 9,8376 9,837Srednja vrednost (min) 9,834Standardna devijacija (min) 0,002Relativna standardna devijacija, sr 0,019

f ( )Koeficijent varijacije, CV (%) 0,019Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo, kriterijum

CV≤1%

GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C

Verifikacija GC/ECD/FID




Zaključak:Preciznost retencionih vremena aldrina i lindana, sa koeficijentom variranja ≤ 1% ukazuje na preciznost protoka detektora sa zahvatom elektrona.


Verifikacija GC/ECD




Test određivanja linearnosti detektora izveden je injektovanjem standardnesmeše lindana i aldrina u izooktanu. Nakon završene analize izrađuje sek lib i k i li d i ld i k j d j i t ši ik dkalibraciona kriva za lindan i aldrin, koja daje zavisnost površine pika odkoncentracije standarda, odn. mase analita u injektu. Kriterijum prihvatljivosti: r ≥0,99.RedniRedni brojbroj merenjamerenja KoncentracijaKoncentracija

(pg(pg uu injektu)injektu)PovršinaPovršina pikapika

1 6,6 889,712 16 5 4625 002 16,5 4625,003 33 9962,004 66 21135,00Koeficijent regresije, r 0,9982Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatvljivo


Verifikacija GC/ECD

obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost obuhvata sledeće



ZaključakAnalizom dobijenih rezultata može se k t t ti li i t šikonstatovati linearna zavisnost površine pika lindana i aldrina od koncentracije, odn. mase analita u injektu. Detektor sa zahvatom elektrona je u stanju dazahvatom elektrona je u stanju da generiše linearne odgovore kada se menjaju koncentracije standarda i uzoraka Dobijeni regresioni koeficijentiuzoraka. Dobijeni regresioni koeficijenti su u skladu sa kriterijumom prihvatljivosti r≥0,99.


Verifikacija GC/ECD




Š

Određivanje detektorskog šuma: Izvodi se preko analize bez injektovanja supstanci. Na osnovu procedure za ručno računanje, određuje se detektorski šum i drift.

Šum se određuje preko matematičkog izraza merenja šuma u mmskala integratora u mV

i d t kt k b k A

A – merenje šuma u mmB – kompletna voltažna skala u mm (150 mm)C – atenuacija (-3)nivo detektorske buke u A

1mV =1x10-12 AŠum (A) = A/B xŠum (A) = A/B x 1x101x10--1212 A x 2A x 2CC

C atenuacija ( 3)

Šum odgovara udaljenosti između dve paralelne linije, kroz merene min i maxkroz merene min i max vrednosti i regresionu liniju.


Verifikacija GC/ECD




A – merenje drifta u mm, određuje se merenjem razlike između početka i kraja hromatograma (A/h)B k l t lt ž k l (150 )B – kompletna voltažna skala u mm (150 mm)C – atenuacija (-3)

Drift se procenjuje iz nagiba regresione praveprave.


Verifikacija GC/ECD




( ) d dŠum

ZaključakPoređenjem dobijenog nivoa šuma sa k it ij ih tlji ti ž

A (mm) srednja vrednost 0,630B (mm) teoretska vrednost 150C -3Šum (A) 1,05E-6kriterijumom prihvatljivosti može se

zaključiti da ECD detektor ne pokazuje značajan šum. Analizom dobijene drift vrednosti može se zaključiti da ECD

Šum (A) 1,05E 6Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatljivo

DriftKriterijum prihvatljivosti: NOISE (AU) ≤ 1,5 E-5

vrednosti može se zaključiti da ECD detektor ne pokazuje značajnu vrednost drifta koji nema uticaja na izvođenje analize

A (mm) srednja vrednost 2B (mm) teoretska vrednost 150C -1Drift (AU/40 min) 1,33E-5analize. Drift (AU/40 min) 1,33E 5Drift (AU/min) 6,67E-7Drift (AU/h) 4E-5Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatljivo

Kriterijum prihvatljivosti: drift (AU/h) ≤ 5E-4


Verifikacija GC/ECD




Preciznost injektiranja dokazuje se praćenjem stabilnosti retencionog vremena i stabilnosti površine pikova standarda lindana i aldrina u izooktanu.

dni

me st ne ne st

Inje

ktira

nje,

red

broj

Povr

šina

Rete

ncio

novr

e m

Sred

nja

vred

nos

povr

šine

Stan

dard

nade

vija

cija

povr

ši

Rela

tivna

stan

dard

nade

vija

cija

povr

ši

Krite

rijum

Sred

nja

vred

nos

rete

ncio

nog

vrem

ena

Stan

dard

nade

vija

cija

rete

ncio

nog

vrem

ena

Rela

tivna

stan

dard

nade

vija

cija

rete

ncio

nog

vrem

ena

Krite

rijum

1 1174,3 9,836

1245,8 58,3 4,68 ≤5% 9,8342 0,002 0,019 ≤1%

2 1184,8 9,833

3 1281,3 9,833

4 1313,0 9,833

5 1229 7 9 8335 1229,7 9,833

6 1291,7 9,837

ZaključakStabilnost retencionog vremena i stabilnost površine pikova lindana ialdrina ukazuju na preciznost injektiranja primenom automatskog injektora.


Verifikacija GC/ECD




Kriterijum Zadovoljava Ne zadovoljava

P i t t k k fi ij t ij ij CV≤1% XPreciznost protoka, koeficijent varijacije CV≤1% X

Linearnost detektora, regresioni koeficijent r≥0,99 X

Šum (≤ 1,5 E-5) i drift (≤ 5E-4) detektora X

Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5% retenciono vreme

Z klj č k

Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5%, retenciono vreme RSD ≤1%) X

ZaključakVerifikacionim testovima kojim je ispitana: preciznost protoka, linearnost detektora, test šuma i drifta, stabilnost injektiranja utvrđeno je da su ispunjeni s i kriterij mi posta ljeni a erifikacij analitičke opreme GC/ECD sistemasvi kriterijumi postavljeni za verifikaciju analitičke opreme GC/ECD sistema, što ukazuje na dobre performanse analitičke opreme.

HVALA NA PAHVALA NA PAŽŽNJI!NJI!

kvalifikacijjja i verifikacija performansi kod gasnih hromatografa...performansi kod gasnih...

Documents