kum pulan jurnal scientia

Upload: surahman-bio

Post on 15-Jul-2015

1.166 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Volume 1, Nomor 1

Tahun 2010

ISSN : 2087-5045

0

DAFTA R I SIANALISA KANDUNGAN FLAVONOID DAN AKTIFITAS ANTIOKSIDAN DARI REMPAH TUMBUHAN OBAT SUMATERA BARAT Deddi Prima Putra dan Verawati 1 -7

ISOLATION OF Vibrio parahaemolyticus FROM BEEF MARKETED 8 -1 3 IN PADANG, to xR TARGETED IDENTIFICATION, AND AMP LIFICATION OF tdh AND trh GENES ON ISOLATES USING POLIMERASE CHAIN REACT ION Eka Fitrianda, Marlina dan M. Husni Mukhtar EFEKT IFITAS BROMELAIN KASAR DARI BATANG NENAS (Ananas Comosus L. Merr) SEBAGAI ANTIPLAK DALAM PASTA GIGI Fif i Harmely, Henny Lucida dan M. Husni Mukhtar FOR MULASI KRIM E KSTRAK ETANOL DAUN UBI JALAR ( Ipomea Batatas.L.)UNTUK PENGOBATAN LUKA BAKAR Farida Rahim, Mimi Aria dan Nurwani P.A AKTIFIT AS EKSTRAK ETANOL BIJI JINTAN HITAM (Nigella sati va Linn.) TERHADAP TITER ANTIBODI DAN JUMLAH SEL LEUKOSIT PADA MENCIT PUTIH JANTAN Suhatri dan Yufri Aldi PENETAPAN POLA RESISTENSI ANTIBIOTIKA (Vib rio Parahaemolyticus) HASI L ISOLASI DARI CUMI-CUMI ( Loligo vulgaris) DAN KEPITING BAKAU (Scylla serratta) Ria Afrianti, Marlina dan M. Husni Mukhtar AKTIVITAS ANTI INFLAMASI DAR I EKSTRAK ETANOL DAUN BUNGA KEMBANG BULAN (Tithonia diversifolia A. Gray) TERHADAP MENCIT PUTIH BETINA Verawati, Mimi Aria dan Novicaresa M PENGARUH LAMA PENYIMPANAN PADA SUHU KAMAR DAN LEMARI PENDINGIN TERHADAP KANDUNGAN PROTEIN PADA DADIH KERBAU DENGAN METODA KJELDAHL Regina Andayani , Revi Yenti dan Wi wit Gustiva PENGARUH PERBANDINGAN ETANOL AIR SEBAGAI PE LARUT EKSTRAKSI TERHADAP PEROLEHAN KADAR FENOLAT DAN DAYA ANTIOKSIDAN HERBA MENIRAN (Phylantus niruri.L.) Harrizul Rivai dan Martinus PROFIL PENGGUNAAN KOMBINASI ANTI DIABETIKA ORAL DENGAN INSULIN PADA PENDERITA DIABETES MELITUS TIPE 2 DI SMF PENYAKIT DALAM RSUD Dr. ACHMAD MOCHTAR BUKITTINGGI Radjuddin Dahlan dan Hansen Nasif PENGARUH ASUPAN PROTEIN DAN MIKRONUTRIEN (Zat Besi Vit. C dan Vit. A) TERHADAP KADAR HEMOGLOBIN Erina Masri Scientia, V ol. 1, N o. 1, 2010 ; halaman 1 58 ISSN : 2087-5045 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia (STIFI) Perintis Padang 14-19

20-25

26-33

34-38

39-45

46-51

52-59

60-65

66-73

SC IENT IAJURNAL FARMASI DAN KESEHATANTERBIT DUA KALI SE TAHUN SETIAP BULAN FEBRUARI DAN AGUSTUS

D E W AN RE D A K SIPenanggung Jawab : Prof. H. Syahriar Harun, Apt Pemimpin Umum : DR.H.M. HusniMukhtar,MS, DEA, Apt Redaktur Pelaksana : Verawati, M.Farm, Apt Eka Fitrianda, M.Farm, Apt Sekretariat : Afdhil Arel, S.Farm, Apt Khairul Dewan Penyunting : Prof.H. Syahriar Harun,Apt Prof.DR.H. Amri Bakhtiar,MS,DESS,Apt Prof.DR.H. Almahdy, MS, Apt DR.H.M. Husni Mukhtar, MS, DEA, Apt Drs.H. Radjudin Dahlan, M.Pharm, Apt DR.Hj. Marlina, MS, Apt Drs. Yufri Aldi, MSi, Apt Hansen Nasif, SSi, Sp.FRS, Apt Drs. B.A. Martinus , MSi Hj. Fifi Harmely, M.Farm ,Apt Farida Rahim, M.Farm, Apt Revi Yenti, M.Si, Apt Verawati, M.Farm, Apt Ria Afrianti, M.Farm ,Apt Eka Fitrianda, M.Farm, Apt

Penerbit : Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia (STIFI) Perintis Padang ISSN : 2087-5045 Alamat Redaksi/Tata Usaha STIFI Perintis Jl. Adinegoro Km. 17 Simp. Kalumpang Lubuk Buaya Padang Telp. (0751)482171, Fax. (0751)484522e-mail : [email protected] website : www.stifi-padang.ac.id

Scientia, V ol. 1, N o. 1, 2010 ; halaman 1 58 ISSN : 2087-5045 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia (STIFI) Perintis Padang

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

ANALISA KANDUNGAN FLAVONOID DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI REMPAH TUMBUHAN OBAT SUMATERA BARAT1

Deddi Prima Putra1, Verawati2 Fak. Farmasi Universitas Andalas 2 STIFI Perintis ABSTRACT

Antioxidant activity and total flavonoid content of five medicinal plant and species of West Sumatera have been measured. There are Jahe (Zingiber officinale Rosc), Kunyit (Curcuma domestica Val), Kencur (Kaemferia galanga Linn ), Lengkuas (Alpinia Galanga Linn), and Pala (Myristica fragrans Houtt). Antioxidant activity and total flavonoid were measured by Spectrophotometer UV-Visible using DPPH reagent for antioxidant activity and Alumunium Chloride for total flavonoid, Quercetin was used as standard compound. The result showed that three of plants have highest antioxidant activity with IC50 ( total ethanol extract, liphofilic fraction and hydrophilic fraction) against DPPH 20 g/ml 80.62, 69.35, 109.98 g/ml for jahe total, jahe lipofil, jahe hidrofil , 68.21, 47.09 g/ml for kunyit total, kunyit hidrofil, 50.08, 71.67 g/ml for pala total, pala hidrofil. There were total flavonoid of Jahe (Zingiber officinale Rosc), Pala (Myristica fragrans Houut), Kunyit (Curcuma domestica Val), 0.85; 0.54; 19.77 g/g respectively (quercetin equivalent). Keywords : Antioxidant, Flavonoid, medicinal plants

PENDAHULUAN Obat asli Indonesia merupakan obat yang berasal dari tumbuhan, hewan, atau bahan mineral. Pada umumnya obat asli Indonesia belum mempunyai data klinik dan penggunaannya berdasarkan pengalaman. Pengolahan obat asli Indonesia masih sederhana dengan menyeduh bahan tumbuhan kering atau segar dengan air panas, kemudian air seduhan ini di minum. Oleh karena itu bahan obat asli Indonesia perlu distandarisasi, sehingga manfaat dan keamanannya dapat dipertanggungjawabkan. Dengan demikian tumbuhan obat asli Indonesia dapat dikembangkan menjadi obat fitofarmaka (Depkes, 1981). Rempah sudah lama dikenal di Indonesia. Makanan sehari-hari kita mengandung paling tidak satu jenis rempah. Rempah punya arti lebih dari

sekedar penambah rasa hidangan, tapi rempah juga sebagai tumbuhan obat. Rempah tumbuhan obat ini berpotensi besar memerangi sederet panjang penyakit dan masalah kesehatan seperti kanker, jantung, diabetes melitus, dan arterosklerosis. Pemicu timbulnya penyakit ini salah satunya adalah adanya radikal bebas (Rungkat, 1994). Radikal bebas ini adalah senyawa kimia yang mempunyai satu atau lebih elektron tidak berpasangan. Senyawa ini bersifat tidak stabil dan sangat reaktif. Untuk mencapai kestabilan, molekul harus mencari elektron lain sebagai pasangan. Reaksi rantai ini dapat menimbulkan pengrusakan sel yang berujung pada mutasi sel dan apabila merusak organ yang memiliki fungsi tertentu dapat menimbulkan penyakit degeneratif. Radikal bebas dalam kehidupan sehari-hari dapat dijumpai seperti akibat metabolisme yang

1

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

berlebihan atau berasal dari lingkungan seperti asap rokok, polusi udara, bahan kimia beracun, pestisida, radiasi sinar UV (Raharjo, 1992; Silalahi. 2001; Youngson. 2005). Untuk menanggulangi efek dari radikal bebas ini, secara alami tubuh mempunyai benteng yang dapat mencegah serangan radikal bebas tersebut yaitu enzim (katalase) ataupun antioksidan yang berasal dari luar tubuh yang umumnya berasal dari makanan. Kegunaan utama dari antioksidan adalah menghentikan atau memutuskan reaksi berantai dari radikal bebas dengan cara menyediakan dirinya bereaksi dengan radikal bebas itu sendiri. Dengan kata lain, antioksidan dapat menyelamatkan sel-sel tubuh dari kerusakan, akibat serangan radikal bebas (Karyadi. 1997). Antioksidan dapat berasal dari alam dan sintetik. Antioksidan alam lebih disukai karena efek sampingnya kurang. Salah satu sumber antioksidan alam yang terdapat pada tanaman adalah flavonoid. Seperti beberapa tanaman dari Famili Zingiberaceae seperti rimpang kunyit (Curcuma domestica rhizoma, val), rimpang kencur (Kaemferia galanga rhizoma, Linn), rimpang jahe (Zingiber officinale rhizoma, Rosc), rimpang lengkuas (Alpinia galanga rhizoma, Linn, Willd), dan dari tanaman famili Myristicaceae seperti buah Pala (Myristica fragrans, Houtt). (Rukmana. 1994; Rukmana. 1995). Berdasarkan potensi rempah tersebut sebagai obat dan adanya kandungan flavonoid di dalamnya maka dilakukan penelitian untuk menentukan kadar flavonoid total dalam rempah secara spektrofotometer dengan menggunakan Alumunium klorida kolorimetri dan penentuan aktivitas antioksidan menggunakan metode radikal DPPH (Zhinshen, 1999; Molyneux, 2004).

METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat Alat yang digunakan berupa seperangkat alat maserasi, rotary Evaporator (BUCHI ), labu rotary, Erlemeyer berbagai ukuran, corong, kapas, pipet tetes, pipet mikro, botol, vial, label, spatel, alumunium foil, timbangan digital, spektrofotometri UVVis Pharmaspec 1700 (shimadzu ), mesin penghalus ( Brook Crompton), pisau, tabung reaksi, rak tabung reaksi. Bahan Bahan yang digunakan adalah rempah-rempah seperti rimpang kunyit (Curcuma domestica, val), rimpang lengkuas (Alpinia galanga, Linn, Willd), rimpang jahe (Zingiber officinale, Rosc), rimpang kencur (Kaemferia galanga, Linn) dan buah pala (Myristica fragrans, Houtt), etanol 96 %, heksan 96%, metanol, DPPH, Natrium asetat 1 M, AlCl3 10%, Aquadest, Quersetin, Aquadest. Pembuatan Ekstrak Sampel Serbuk sampel sebanyak 5 g diekstraksi dengan menggunakan pelarut yang berbeda sehingga diperoleh 3 macam ekstrak yaitu : a. Pembuatan ekstrak etanol total (ekstrak total) yaitu 5 gram sampel di ekstrak dengan etanol 96% sebanyak 25 ml selama 2 x 24 jam. Kemudian maserat disaring dan filtrat dikentalkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental total. Pembuatan ekstrak heksan (ekstrak lipofil) yaitu 5 gram sampel di ekstrak dengan heksan 96%

b.

2

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

sebanyak 25 ml selama 2 x 24 jam. Kemudian maserat disaring dan filtrat dikentalkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental lipofil. c. Pembuatan ekstrak etanol setelah heksan (ekstrak hidrofil) yaitu ampas dari hasil ekstraksi dengan heksan di ekstraksi lagi dengan etanol 96% sebanyak 25 ml selama 2 x 24 jam. Kemudian maserat disaring dan filtrat dikentalkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental hidrofil. Aktivitas Antioksidan

Penentuan Total

Kandungan

Flavonoid

Penentuan Sampel

Kandungan flavonoid total ditentukan dengan metode kolorimetri menggunakan Aluminium klorida. Sebanyak 2 ml dari larutan ekstrak(1mg/ml) ataupun larutan standar kuersetin (100; 80; 60; 40; 20; 10; 5 g/ml) ditambah 0,1 ml AlCl3 10 %; 0,1 ml Na asetat 1M dan 2,8 ml air suling. Kocok homogen lalu biarkan selama 30 menit. Ukur serapan pada panjang gelombang 415 nm. Total kandungan flavonoid sampel dinyatakan sebagai kesetaraan gram kuersetin/100 gram sampel kering. HASIL DAN PEMBAHASAN

Aktivitas antioksidan ditentukan dengan metode DPPH (Molyneux, 2004). 0,2 ml larutan sampel (1 mg/ml, 100, 50 dan 25 g/ml) atau larutan stndar kuersetin (0,1; 0,2; 0,4; 0,6 g/ml) di dalam vial, ditambah 3,8 ml larutan DPPH (20 g/ml). Campuran larutan dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit di tempat gelap. Serapan diukur pada panjang gelombang maksimum DPPH yaitu 517 nm. Absorban kontrol yaitu DPPH (20 g/ml) dalam metanol juga diukur. Aktivitas antioksidan sampel dinyatakan sebagai persentase inhibisi dihitung dengan rumus : Abs. kontrol Abs. Sampel x 100 % Abs. kontrol Dengan menggunakan persamaan linear dari data stndar maka dapat dihitung IC50 stndar kuersetin sedangkan IC50 sampel dihitung dengan metoda analisa probit menggunakan finney.

Setelah dilakukan penelitian mengenai analisa kandungan flavonoid total dan aktivitas antioksidan dari tanaman obat dan rempah Sumatera Barat didapatkan hasil bahwa dari 5 macam sampel rempah (jahe, kunyit, kencur, lengkuas,dan pala) didapatkan tiga sampel memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi yaitu jahe, kunyit dan pala. Ketiga rempah ini ditentukan IC50 nya yakni konsentrasi sampel yang mampu merangkap radikal DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC50 maka semakin aktif sampel tersebut sebagai antioksidan.

3

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Tabel I. Nilai IC50 sampelNo 1 Nama sample Jahe.BS.Total Konsentrasi 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 50 25 100 % Inhibisi 52.96 36.14 21.51 69.31 49.24 32.41 69.89 47.61 29.06 63.38 44.93 26.58 58.63 39.45 22.54 52.81 36.59 21.95 57.22 39.12 23.08 35.54 17.50 8.83 50.72 28.18 15.09 92.58 58.26 28.04 89.59 65.76 42.12 85.9 59.09 30.27 60.85 43.82 21.48 73.09 49.72 25.95 78.36 49.72 29.4 76.18 IC50 90.56

Jahe.BS.Lipofil

57.67

Jahe.Bkt.Total

60.68

Jahe.Bkt.Lipofil

68.98

Jahe.Bkt.Hidrofil

79.3

Jahe.Ap.Total

90.62

Jahe.Ap.Lipofil

81.4

Jahe.Ap.Hidrofil

140.66

2

Kunyit.BS.Total

97.92

Kunyit.BS.Hidrofil

46.81

Kunyit.Bkt.Total

32.44

Kunyit.Bkt.Hidrofil

46.51

Kunyit.Ap.Total

74.27

Kunyit.Ap.Hidrofil

47.97

3

Pala.BS.total

54.44

4

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045 Pala.BS.Hidrofil 50 25 100 50 25 100 50 25 43.38 23.72 88.47 57.56 31.85 58.81 36.09 16.45 61.55

Pala.Bkt.Total

45.69

Pala.Bkt.Hidrofil Keterangan : AP BS Bkt : Alahan Panjang : Batu Sangkar : Bukit tinggi

81.8

Dari data IC50 sampel dan IC50 stndar kuersetin, maka diperoleh suatu nilai jumlah sampel yang akan memberikan aktivitas antioksidan yang setara dengan 1 mg kuersetin.Tabel II. Aktivitas Antioksidan dari Sampel Setara mg Kuersetin

No

Nama sampel

Nilai IC50 aktivitas antioksidan terukur (g/ml) 80.62 69.35 109.98 68.21 47.09 50.06 71.67

Aktivitas antioksidan 1g ekstrak setara mg kuersetin (mg) 182.39 156.9 248.82 154.32 106.53 113.26 162.16

Jahe. total 1 Jahe. lipofil Jahe. hidrofil Kunyit. total 2 Kunyit. lipofil Kunyit hidrofil Pala. total 3 Pala. lipofil Pala. hidrofil

Pada pengukuran absorban flavonoid total untuk penentuan kurva kalibrasi kuersetin pada panjang gelombang 415 nm di dapat persamaan regresi y = - 0,016 + 0,017x dengan koefisien korelasi 0,999, simpangan baku 0,0106371, batas deteksi 0,114942 g/ml, batas kuantisasi 4,216 g/ml.

Pada pengukuran flavonoid total tiap gram sampel kering setara kuersetin diperoleh kadar flavonoid total dari masing-masing sampel dimana kadar paling tinggi adalah pada ekstrak etanol kunyit 19.70 g/g diikuti kencur 0.92 g/g, Jahe 0.84 g/g, pala 0.54 g/g, lengkuas 0.52 g/g.

5

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Tabel III. Kandungan Flavonoid total sampel Konsentrasi Flavonid (g/ml) 10.62 8.1 10.83 9.85 1,51 157.55 71.99 142.67 124.07 45,71 8.5 8.64 11.03 9.39 1,42 4.53 9.27 5.02 6.27 2,60 4.96 4.05 4.50 0,64 Kadar Flavonoid tiap 5 g serbuk kering (g/g) 0.91 0.70 0.93 0.84 0,13 25.03 11.43 22.66 19.70 7,26 0.84 0.85 1.09 0.92 0,14 0.37 0.76 0.41 0.52 0,21 0.60 0.49 0.54 0,078

Nama Sampel

Jahe.BS.Total Jahe.Bkt.Total Jahe.AP.Total Rata-rata SD Kunyit.BS.Total Kunyit.Bkt.Total Kunyit.AP.Total Rata-rata SD Kencur.BS.Total Kencur.Bkt.Total Kencur.AP.Total Rata-rata SD Lengkuas.BS.Total Lengkuas.Bkt.Total Lengkuas.AP.Total Rata-rata SD Pala.BS.Total Pala.Bkt.Total Rata-rata SD

6

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Dari penelitian yang telah dilakukan dapat diketahui dari data IC50 aktivitas antioksidan dan penentuan kadar flavonoid total bahwa ekstrak yang kadar flavonoidnya tinggi mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi. Jadi kemungkinan senyawa yang mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi adalah golongan flavonoid yang terdapat pada ekstrak polar atau fraksi hidrofil terutama pada jahe, kunyit dan pala.

KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa dari 5 tanaman yang berasal dari 3 daerah, kadar flavonoid yang tinggi terdapat pada kunyit, jahe dan pala setara kuersetin berturut-turut : 19.77; 0.85;0.54 g/g terhadap sampel kering. Ekstrak hidrofilik memberikan aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan ekstrak lipofilik.

Rukmana, R., 1995. Temulawak Tanaman Rempah Oba, Kanisius, Yogyakarta. Rukmana, R., 1994. Kencur, Kanisius, Yogyakarta. Rungkat, F., 1994. Radikal Bebas dan Patofisiologi Penyakit, Proseding Seminar : Senyawa Radikal dalam Sistem Pangan : Reaksi Biomolekuler, Dampak terhadap Kesehatan dan Penangkalan, Bogor. Silalahi, J, 2001. Free Radicals and antioxidant Vitamin in Degenerative Disease, The Journal of Indonesian Medical Association : II (5), 1-13. Youngson, R, 2005. Antioxidant : Vitamin C dan E For Health, diterjemahkan oleh Susi Purwoko, Jakarta. Zhinshen, J., T. Mengcheng and W. Jianming, 1999. The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals. Food Chem., 64: 555559.

DAFTAR PUSTAKA Direktorat Pengawasan Obat Tradisional Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Departemen Kesehatan RI, 1981. Modifikasi Peraturan Perundang undangan Obat Tradisional, Jakarta. Karyadi, E, Antioksidan, Resep Sehat dan Umur Panjang. http//www.indomedia.com/intisari /1997/juni/antioksidan.htm Molyneux, p. 2004. The Use of Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, J. Sci. Tecnol, 26(2), 211-219. Raharjo, M, 1992. Tanaman Berkhasiat Antioksidan, Penebar Swadaya, Jakarta.

7

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

ISOLATION OF Vibrio parahaemolyticus FROM BEEF MARKETED IN PADANG, toxR TARGETED IDENTIFICATION, AND AMPLIFICATION OF tdh AND trh GENES ON ISOLATES USING POLIMERASE CHAIN REACTION1

Eka Fitrianda1, Marlina2, M. Husni Mukhtar2 STIFI Perintis Padang, 2 Fakultas Farmasi Universitas Andalas Padang ABSTRAK

Sebanyak 40 isolat V. parahaemolitycus telah berhasil diisolasi dari sejumlah sampel daging sapi mentah yang dikoleksi di Pasar Raya Padang. Isolasi dilakukan dengan menggunakan medium CHROMagarTM Vibrio. Terhadap 40 isolat tersebut dilakukan identifikasi dengan metoda Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk mengamplifikasi gen toxR. Gen tersebut merupakan gen yang sangat spesifik pada spesies V. parahemolyticus. Selanjutnya, dengan metoda yang sama juga dilakukan amplifikasi terhadap gen pengkode produksi toksin hemolisin (tdh dan trh) yang merupakan faktor virulen utama pada bakteri tersebut. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa seluruh isolat V. parahaemolyticus terbukti memiliki gen tox-R, namun tidak ada satu isolat pun yang memiliki gen pengkode toksin hemolisin baik tdh maupun trh. Key words: Vibrio parahaemolyticus, toxR, tdh, trh

INTRODUCTION V. parahaemolyticus is one of bacterias actively studied in various parts of the world because of its ability in causing diarrhea. V. parahaemolyticus was first isolated in food poisoning outbreak in Japan in the early 1950s. Currently, V. parahaemolyticus has become one of food contaminant pathogens with the highest prevalence in Asian countries (Pan et al, 1997). The main clinical manifestation of infection due to V. parahaemolyticus is gastroenteritis, in which the main symptoms include abdominal cramps, nausea and vomiting. Most strains of clinical V. parahaemolyticus produce major virulence factor that is a thermostable direct hemolysin (TDH) and showed hemolysis activity on Wagatsuma agar (KP positive strains). Another virulence

factor, "TDH-related hemolysin" (TRH), usually associated with KP negative strains or with urease positive strains (Kelly and Stroh, 1989). Based on the Shirai et al (1990) report, molecular epidemiological studies show a close relationship between the hemolysin coding genes in these bacteria (tdh, trh, or both) with the ability to cause disease. In V. parahaemolyticus, "thermostable direct hemolysin" (TDH) and the "TDH-related hemolysin" (TRH), whose production is encoded by the tdh and trh are the important virulence factors for the development of gastroenteritis. Therefore, the genes are referred to as the important virulence coding genes in V. parahaemolyticus. Although V. parahaemolyticus is a marine bacterium that has long been associated with diarrhea after eating raw or not cooked perfectly seafood, but

8

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

some recent researches showed that V. parahaemolyticus has also found on food samples which are not seafood categories. Research conducted by Marlina et al (2007) for example, has successfully isolated these bacteria from pensi (Corbicula moltkiana prime) collected in lake Singkarak. The isolated strains are known to carry hemolysin toxin-producing genes (tdh and trh) which are the major virulence factors of V. parahaemolyticus. Another study conducted by Zulkifli et al (2009) on the cockles collected from rivers in Padang showed similar result. In this study we isolated V. parahaemolyticus from beef samples and identified them by examining on their toxR gene. We also detected their virulent factors coding genes by amplificating tdh and trh genes on these isolates. The method used to identify and amplify tox-R, tdh and trh genes is "Polymerase Chain Reaction" (PCR). Polymerase Chain Reaction (PCR) is a major breakthrough in molecular diagnostics, and lately has been widely used to identify genes from different species of bacteria including V. parahaemolyticus. According to Gelfand et al (1998), this is due to the high sensitivity level of this method. MATERIALS AND METHODS Equipments and materials PCR machine (Eppendorf Mastercyclergradient ), Eppendorf tubes, micro pipette (Eppendorf ), centrifugator (Eppendorf Minispin ), laminar air flow (Esco ), vortex (Mixer VM-1000), incubator (Gallenkamp ), rotary shaker incubator (Bigger Bill Digital ), colony counter (Stuart scientific ), the elektrophoresis device, transilluminator, polaroid film, the test

sample, V. Parahaemolyticus AQ4037 (positive control for the toxR and trh genes), V. parahaemolyticus AQ3815 (positive control for tdh gene,), Salt Polimixin Broth (SPB), distilled water, NaCl, CHROMagarTM Vibrio (CHROMagarTM), Luria Bertani (LB) Broth, Luria Bertani (LB), 5X Colorless GoTaq Reaction, 10X Ex Taq buffer solution, 2.5 mM dNTP solution, GoTaq DNA polymerase, agarose, tris-borateEDTA (TBE), a blue dye, 100 bp ladder, ethidium bromide, and three pairs of primers, namely: toxR-4: 5'GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3' and toxR-7: 5'ATACGAGTGGTTGCTGTCATG-3' for the detection of toxR gene, TDH D3: 5'CCACTACCACTCTCATATGC-3 and TDH D5: 5'GGTACTAAATGGCTGACATC-3' for detection of tdh gene, TRH R2: 5'GGCTCAAAATGGTTAAGCG-3' and TRH R6: 5'CATTTCCGCTCTCATATGC-3' for detection of trh gene. Sampling The test samples in this study were 15 raw beef samples. Samples were taken from traders in Pasar Raya Padang. To avoid contamination, samples were taken in a way directly entered by the merchant into sterile containers, immediately stored in containers and taken to the laboratory for testing. V. parahaemolyticus Isolation 10 gram sample was added in to 100 ml Salt Polimixin Broth (SPB) media and incubated at 37C for 24 hours. These cultures were inoculated using a needle loop onto surfaces of CHROMagarTM Vibrio previously been

9

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

poured and allowed to solidify in a petri dish. After incubated for 24 hours at 37C, purple colonies formed were suspected as colonies of V. parahaemolyticus. Each single suspected colony was inoculated into the Luria Bertani (LB) Broth containing 3% NaCl and incubated in a rotary shaker incubator at 37C for 24 hours. DNA template preparation Before the amplification of genes using PCR method, DNA of control and testing bacteria were extracted using boil cell extraction (BCE) method. 1 ml LB broth culture centrifuged at 12,000 rpm for 1 min, the supernatant removed, while the sediment was added with 500 mL sterile distilled water and then suspended using vortex. The suspension formed was heated for 10 minutes in boiling water and immediately put into the refrigerator with a temperature of -20C for 10 minutes. Subsequently centrifuged at 12,000 rpm for 3 minutes and the supernatant were transferred into a new Eppendorf tube. The supernatant were the DNA template to be used for amplification of genes by PCR method. toxR, tdh and trh genes amplification Identification of toxR, tdh and trh genes in V. parahaemolyticus were done using PCR method. DNA template which had been prepared previously inserted into the Eppendorf tube for PCR machine and combined with other PCR components. The type and amount of each PCR components as shown in table below:Table 1. PCR components Component Buffer solutiona 2,5 mM dNTP Amount(l) 5,0c 2,5d 2,0

Primer 1b Primer 2b Aquadest GoTaq DNA Polymerase DNA Templatea

1,0 1,0 15,0c 17,4d 0,1 1,0

5x Colorless GoTaq Reaction Buffer for the detection of tdh and trh genes, 10x Ex Taq buffer solution for the detection of toxR gene b Primer pairs are suitable for each gene c For the detection of tdh and trh genes d For the detection of toxR gene Eppendorf tube is then inserted into the PCR machine and amplification was performed using program which is suitable for detection of each gene as shown in table below:Table 2. Stage for tox-R gene amplification (23 cycles) Stage Predenaturation Denaturation Annealing Extention Elongation Temperature ( oC ) 96 94 63 72 72 Time (minute) 5 1 1,5 1,5 7

Table 3. Stage for tdh and trh genes amplification (33 cycles) Temperatur Time Stage e (minute) o ( C) Predenaturation 96 5 Denaturation 94 1 Annealing 55 1 Extention 72 2 Elongation 72 7

After all of the stages in the PCR process were completed, the results of this amplification were colored using blue dye and then separated along electrophoresis process on 1% agarose gel in 1x TBE. Electrophoresis was performed at 100 V voltage for 20 minutes with 1 x TBE as the mobile phase. The 100 bp ladder was used as a

10

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

marker for determining the size of amplification product. After the electrophoresis process was completed, agarose gel was stained with ethidium bromide solution (0.5 mL/ml). Electrophoresis result which was observed by UV transilluminator will form separate bands which were distinguished by the number of their base pairs (bp). The size of toxR, tdh and trh amplification product were 368 bp, 251 bp and 250 bp respectively. Size estimation of each product was done through comparison with 100 bp ladder. Results were then documented by polaroid film. RESULTS AND DISCUSSION Of 15 raw beef samples which were examined, we successfully isolated suspected V. parahaemolyticus colonies from 3 samples. The presence of suspected V. parahaemolyticus in samples characterized by the formation of purple colonies on the surface of CHROMAgarTM Vibrio medium.

targeting on toxR gene was performed to all of these isolates using PCR method. toxR gene is a gene that is very specific to the V. parahemolyticus species. The PCR method to detect this gene has been reported (Lee et al, 1995) as a very useful method to confirm the presence of this species in samples. Dileep et al (2003) also states that the detection of toxR gene by PCR method to detect V. parahaemolyticus is more sensitive than biochemical identification. toxR positive isolates showed 368 bp band in electrophoresis gel. In this study, out of total of 40 tested isolates, all (100%) showed toxR positive results.

Figure 2. Electrophoresis gel of toxR positive V. parahaemolyticus isolates: lane 1-11 were positive toxR isolates, lane 12 was positive control, lane 13 was 100 bp ladder.

The same result have been reported by Zulqifli et al (2009), all of CHROMagar Vibrio isolates from cockles gave positive results on testing of toxR using PCR method. Previously, V. parahaemolyticus has been isolated from various places around the world. Tanil et al (2005) succeeded in isolating V. parahaemolyticus from seawater in Peninsular, Malaysia. V. parahaemolyticus isolates also been isolated from coastal waters of western United States (Okuda et al, 1997). A study recently conducted by Sujeewa et al (2009) succeeded in isolating V. parahaemolyticus from shrimp samples in Malaysia. Generally, non-clinical V.

Figure 1. Suspected V. parahaemolyticus colonies on ChromagarTM Vibrio

CHROMagar Vibrio is a selective media for identification of V. parahaemolyticus with a higher level of differentiation compared to TCBS medium (Kudo et al, 2001). From 3 of 15 samples which were examined, we successfully isolated 40 suspected V. parahaemolyticus. Identification

11

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

parahaemolyticus were isolated from marine waters or food samples from the sea, because V. parahaemolyticus is a bacteria that normally lives in this habitat (DePaola et al, 2000). It makes the results of this research is interesting for further explored, because V. parahaemolyticus isolates were isolated in samples which were not derived from the sea environment. Similar results have also found in other study (Marlina et al, 2007), where a number of V. parahaemolyticus isolates carrying tdh gene were isolated from Corbicula moltkiana, a species which lives in lake Singkarak. Similarly, other publication also showed that V. parahaemolyticus isolates was isolated from cockles live in rivers around Padang, Indonesia (Zulkifli et al, 2009). Furthermore, studies are necessary to investigate whether the presence of V. parahaemolyticus in samples is the result of bacterial adaptation capabilities on low-salt environment, or is the result of cross-contamination when samples are marketed in the market. Major virulence factor coding genes in V. parahaemolyticus are tdh and trh. The presence of these genes represent the level of pathogenicity of V. parahaemolyticus isolates. In this study, 40 toxR positive isolates were detected for the present of tdh and trh genes by amplification using PCR method. As a result, none of the isolates has tdh or trh gene. This suggests that V. parahaemolyticus isolates in this study are not virulent isolates. According to Nishibuchi and Kaper (1995), only few V. parahaemolyticus isolates carrying the virulent genes (tdh or trh), and they are called virulent isolates. The existence of these genes in V. parahaemolyticus isolated from nonclinical samples are rarely detected. In contrast, more than 90% of V.

parahaemolyticus isolates from clinical samples have tdh or trh gene (DePaola et al, 2000). This such result also seen in V. parahaemolyticus previously isolated from cockle samples in Padang, where the overall toxR positive isolates have no tdh or trh gene (Zulkifli et al, 2009). However, other studies seem to successfully detect the presence of these virulence genes in environmental samples (Sujeewa et al, 2009; Marlina et al, 2007). CONCLUSION All of 40 V. parahaemolyticus isolates isolated from beef samples marketed in Pasar raya Padang were having toxR gene, but none of them has tdh or trh gene. BIBLIOGRAPHY DePaola, A., C. A. Kaysner, J. Bowers and D. W. Cook. 2000. Environmental investigations of Vibrio parahaemolyticus in oysters after outbreaks inWashington, Texas, and New York (1997 and 1998). Appl Environ Microbiol 66:464954 Dileep, V., H. S. Kumar, Y. Kumar, M. Nishibuchi and I. Karunasagar. 2003. Applicationof polymerase chain reaction for detection of Vibrio parahaemolyticus associated with tropical seafoods and coastal environment. Lett Appl Microbiol 36:4237. Gelfand, D. H., T. J. White, M. A. Innis, J. J. Sninsky. 1998. PCR protocols: A guide to methods and amplifications. Academic Press. New York. Kelly, M. T. and E. M. Stroh. 1989. Urease-positif, Kanagawanegatif Vibrio parahaemolyticus from patients and the environment in the Pacific

12

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Northwest. J. Clin. Microbiol. 27: 2820-2822 Lee, C.Y., S.F. Pan and C. H. Chen, 1995. Sequence of a cloned pR72H fragments and its use for detection of Vibrio parahaemolyticus in shell fish with PCR. Applied and Environmental Microbiology 61: 1311-1317. Marlina, S. Radu, C. Y. Kqueen, S. Napis, Zunita Zakaria, S. A. Mutalib, and M. Nishibuchi. 2007. Detection of tdh and trh genes in Vibrio parahaemolyticus isolated from Corbicula moltkiana prime in West Sumatera Indonesia. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 38:349-355. Nishibuchi, M., and J. B. Kaper. 1995. Thermostable direct hemolysin gene of Vibrio parahaemolyticus: a virulence gene acquired by a marine bacterium. Infect. Immun. 63:20932099. Okuda, J. M. Ishibashi, S. Abbott, J. M. Janda and M. Nishibuchi. 1997. Analysis of the Thermostable Direct Hemolysin (tdh) Gene and the tdh-Related Hemolysin (trh) Genes in Urease-Positive Strains of Vibrio parahaemolyticus Isolated on the West Coast of the United States. Journal of Clinical Microbiology. 35: 19651971 Pan, T. M., T. K. Wang, C. L. Lee, S. W. Chien, and C. B. Horng. 1997. Food-borne disease outbreaks due to bacteria in Taiwan, 1986 to 1995. J. Clin. Microbiol. 35: 1260-1262 Shirai, H., H. Ito, T. Hirayama, Y. Nakamoto, N. Nakabayashi, K. Kumagai, Y. Takeda, and M. Nishibuchi. 1990. Molecular epidemiologic evidence for association of thermostable

direct hemolysin (TDH) and TDH-related hemolysin of Vibrio parahaemolyticus with gastroenteritis. Infect. Immun. 58: 35683573. Sujeewa, A. K. W., A. S. Norrakiah and M. Laina. 2009. Prevalence of toxic genes of Vibrio parahaemolyticus in shrimps (Penaeus monodon) and culture environment. International Food Research Journal 16: 8995 Tanil, G. B., S. Radu, M. Nishibuchi, R. A. Rahim, S. Napis, L. Maurice and J. W. Gunsala. 2005. Characterization of vibrio parahaemolyticus isolated from coastal seawater in peninsular Malaysia. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 36 No. 4. Zulkifli, Y., N. B. Alitheen, S. Radu, S. K. Yeap, M. B. Lesley and A.R. Raha. 2009. Identification of Vibrio parahaemolyticus isolates by PCR targeted to the toxR gene and detection of virulence genes. International Food Research Journal 16: 289296

13

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

EFEKTIFITAS BROMELAIN KASAR DARI BATANG NENAS (Ananas comosus L. Merr) SEBAGAI ANTIPLAK DALAM PASTA GIGI Fifi Harmely1), Henny Lucida2), M. Husni Mukhtar2) 1) Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia (STIFI) Padang, 2) Fakultas Farmasi Universitas Andalas Padang ABSTRACT The effectivity of crude bromelain from steam pineapple have been done as antiplaque by plaque control record methods. The formula of toothpaste was crude bromelain 5% and abrasive 40% with proteolytic activity 6.584 unit/mg equivalent 98.84 % (F3C). The crude bromelain 5% in toothpaste has antiplaque effectivity noteqivalent with control (p0,05). Keyword: crude bromelain, toothpaste, proteolytic activity, antiplaque effectivity PENDAHULUAN Di Indonesia, penderita gigi berlubang jumlahnya tidak sedikit. Hasil Survei Kesehatan Nasional 2002 menunjukkan, prevalensi gigi berlubang di Indonesia berkisar 60 %, yang berarti dari sepuluh orang enam diantaranya menderita gigi berlubang (Nugraha, 2008). Plak gigi adalah lapisan lunak yang terbentuk dari campuran sisa-sisa makanan serta bakteri yang diperantarai oleh saliva yang melekat pada permukaan gigi. Plak tersusun oleh 80% air dan 20 % sisanya terdiri dari beberapa komponen seperti protein 40 50 %, karbohidrat 13 17 % , lipid 10 14 % dan abu 10 % dan komponen mineral seperti kalsium dan posfor, yang dihitung dari berat kering plak.( Wilkinson, 1982). Lapisan lembut ini akan membentuk suatu matriks pada gigi dimana bakteri dapat melekat. Jika plak tidak dibersihkan, maka lama-kelamaan mikroorganisme yang berkontak pada permukaan gigi akan menyebabkan karang gigi ( kalkulus ) dan menimbulkan karies pada gigi (Cracken,1982). Untuk kesehatan dan mencegah kerusakan gigi dibutuhkan suatu zat antiplak dalam pasta gigi yang saat ini erat kaitannya dengan kandungan fluorida. Munurut Pakaj (2004) pasta gigi yang mengandung fluorida tidak cocok untuk anak-anak di bawah 4 tahun. Hal ini juga dipertegas dengan adanya intruksi oleh Badan Pengawasan Obat dan Makanan untuk menarik seluruh produk pasta gigi untuk anakanak yang masih mengandung fluorida di atas 500 ppm. Berdasarkan laporan pemakaian pasta gigi yang mengandung fluorida mempunyai efek samping perlu dicari alternatif mendapatkan formula pasta gigi dari bahan alam, salah satunya adalah bromelain dari nenas ( Ananas comosus L. Merr var. Queen ). Proses ekstraksi bromelain dilakukan secara maserasi dalam larutan buffer posfat pH 7,0 ( Darwis dan Sakara, 1990, Ramli, Fauzi dan Krisna, 1990).

14

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Penggunaan enzim di dalam pasta gigi ditujukan untuk membantu pemecahan protein, karbohidrat dan lipid dari makanan. Dextran merupakan produk metabolit dari bakteri, adanya zat ini memegang peranan penting dalam membentuk plak pada gigi. (Wilkinson ,1982). Suatu produk bermerek dagang yang sudah beredar adalah pasta gigi Enzim . Metoda yang digunakan untuk pengujian anti plak adalah metoda rekam kontrol plak yang diperkenalkan oleh OLeary dkk, dan digunakan untuk memantau kontrol plak pada pasien dan juga banyak digunakan pada klinik klinik gigi ( Dalimunthe 2008), Untuk pengukuran terlebih dahulu gigigeligi diwarnai dengan perwarna plak (disclosing solution, disclosing gel atau disclosing tablet) yang dicatat adalah ada atau tidaknya deposit yang terwarnai pada batas dentogingiva pada empat permukaan (Dalimunthe 2008 ). Berdasarkan hal tersebut, perlu dilakukan pengujian efektifitas antiplak bromelain kasar dan dibandingkan dengan formula basis dan sediaan pembanding kepada sukarelawan. METODE PENELITIAN Alat Alat-alat gelas standar laboratorium(Pyrex), timbangan analitik (Pioneer), lumpang dan alu, spektrofotometer UV-Vis (UVmini1240), kaca mulut.

Bahan Bromelain kasar, bromelain standar ( Bernofarm), bahan tambahan formulasi (Brataco Chemika), dental plague disclosing gel (Global Care) dan air suling. Sukarelawan Sukarelawan dalam penelitian ini sebanyak 15 orang berumur antara 18 24 tahun dan diminta kesediaannya untuk menggunakan sediaan pasta gigi selama penelitian dengan mengisi blanko dan menandatangani surat pernyataan sebagai sukarelawan. Sebelum perlakuan kepada sukarelawan terlebih dahulu diberikan penjelasan tentang tujuan penelitian dan informasi lain yang terkait dengan pemakaian pasta gigi. Untuk menilai keadaan plak gigi, pemeriksaan gigi sebelum dan setelah pemakaian pasta gigi dilakukan oleh dokter gigi.

Pelaksanaan Penelitian Pembuatan Pasta Gigi Bromelain Kasar Formula Pasta Gigi Bromelain (Lieberman 1989; Wilkinson 1982) Pasta gigi bromelain dibuat dengan konsentrasi bromelain 5% dan abrasive kalsium karbonat 40% seperti terlihat pada tabel di bawah ini:

15

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Tabel 1. Formula pasta gigi bromelain Komposisi Formula Bromelain Kasar Kalsium karbonat Gliserol Larutan sorbitol 70 % Natrium Karboksimetil sellulosa Sakarin Natrium benzoat Natrium lauryl sulfat Oleum menthae piperitae Air suling sampai Basis (g) 40 18 10 1,0 0,2 0,1 1 0,3 100 formula (g) 5,0 40 18 10 1,0 0,2 0,1 1 0,3 100

Cara Pembuatan Bromelain Kasar

Pasta

Gigi

Na CMC ditabur diatas air panas (15 x jumlah Na CMC), didiamkan selama 15 menit, diaduk homogen (massa 1). Kalsium karbonat digerus, ditambah bromelain digerus ditambah gliserol diaduk homogen, ditambahkan larutan sorbitol 70 % dan diaduk homogen ( massa 2). Massa 1 ditambahkan ke massa 2 diaduk sampai homogen (massa 3). Sakarin dan natrium benzoat dilarutkan dalam sisa air, aduk homogen, dimasukkan ke dalam massa 3, digerus homogen. Natrium lauryl sulfat ditambahkan ke dalam massa 3, diaduk homogen sampai terbentuk massa pasta. Oleum menthae piperitae dimasukkan terakhir, diaduk sampai homogen dan kemudian dimasukkan ke dalam tube.

menggunakan pasta gigi 3 kali sehari pada pagi, sore dan pada malam hari. Pengujian ini dilakukan terhadap 5 orang panelis untuk setiap formula pasta gigi bromelain dengan syarat panelis tidak menggunakan pasta gigi lain, tidak menggunakan larutan penyegar mulut atau larutan pencuci mulut lainnya. Parameter yang diamati kemampuan menghilangkan plak setelah menggunakan pasta gigi. Untuk pelaksanaan pengujian ini digunakan gel pink tua dental plague disclosing gel yang dipakai sebelum menggunakan pasta gigi dan setelah menggunakan pasta gigi selama 1 minggu. Selama pengamatan akan dipantau oleh dokter gigi sampai selesai perlakuan. rumus perhitungan Plak Indeks :Skor RKP =

Jumlah Permukaan gigi dengan plak

x 100 %

Jumlah seluruh permukaan gigi

Uji Efektifitas Anti Plak Pasta Gigi Bromelain dengan Metode Rekam Kontrol Plak (RKP) (Delimunthe 2008) Pengujian ini dilakukan untuk menilai efek pemakaian pasta gigi sebagai anti plak dengan cara

Setelah skor plak didapat, kemudian dihitung nilai selisih skor plak sebelum dan sesudah pemakaian pasta gigi bromelain dengan menggunakan rumus : Nilai selisih = Skor Plak sebelum Skor Plak sesudah

16

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Analisis Data Untuk menilai efektifitas antiplak bromelain dalam pasta dianalisis menggunakan statistik analisis varian satu arah yaitu antara basis pasta, pasta gigi bromelain kasar dan sediaan pembanding enzim . HASIL DAN PEMBAHASAN Uji antiplak pasta gigi bromelain kasar dilakukan selama 7 hari. Parameternya adalah % RKP sebelum dan setelah perlakukan. Dari hasil perhitungan rata-rata persentase Rekam Kontrol Plak ( RKP ) adalah 3,04 %, 8,72 % dan 8,90 % untuk formula basis ( F0 ), pasta gigi bromelain ( F3 ) dan pasta gigi pembanding ( P ) secara berturut-turut. Hasil ini memperlihatkan bahwa plak dapat berkurang dengan menggunakan basis pasta yang mengandung abrasif kalsium karbonat dan surfaktan natrium lauril sulfat yang ada dalam formula. Proses pengurangan plak ini terjadi secara fisika dengan persentase penurunan plak yang rendah. Proses

pengurangan plak juga dipengaruhi oleh frekwensi, lama dan cara menggosok gigi (Ariningrum, 2000). Pada sediaan uji pasta gigi bromelain diperoleh persentase penurunan (RKP) yang lebih tinggi ( 8,72 % ) dan mendekati pasta gigi pembanding (8,90%). Daya anti plak disebabkan adanya kemampuan bromelain untuk mengurangi dan menghilangkan plak yang terbentuk. Proses pengurangan plak dari pasta gigi bromelain kasar diduga karena kemampuannya untuk memecah atau menguraikan protein saliva disamping juga terjadi secara fisik dengan adanya abrasif dalam pasta. Menurut Hidayah (2000) bromelain dapat memecah ikatan glutamin-alanin dan arginin- alanin yang merupakan asam -asam amino penyusun protein. Penelitian dilakukan pada gigi tiruan resin akrilik . Dugaan lain adalah bromelain dapat memutuskan ikatan protein dari sisa makanan yang menempel pada gigi. Makanan sangat berpengaruh sekali terhadap jumlah plak yang terbentuk. (Tarigan , 1990)

Tabel 2. Hasil pengujian efektifitas antiplak pasta gigi bromelain kasar % RKP No Panelis X (%) Formula Sebelum Sesudah 1 F0 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 65,6 65,3 65,3 65 62,5 69,1 68,5 65,3 66,1 70,3 62,9 66,9 69,1 70,1 69,5 62,5 62,9 62 62 59,1 60,8 59,6 57,2 56,4 61,7 52,4 57,1 60 62 62,5 3,1 2,4 3,3 3 3,4 8,3 8,9 8,1 9,7 8,6 10,5 9,8 9,1 8,1 7

3,04% 0.391 %KV=12,86

2

F3

8,72% 0.626 %KV= 7,17

3

P

8,9% 1.384 %KV= 15,55

17

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045 Keterangan : F0 F3 P X X KV

: : : : : :

Basis pasta gigi formula C konsentrasi abrasif 40 % Formula pasta gigi bromelain konsentrasi 5 % Pasta gigi pembanding ( Enzim ) Nilai selisih Rekam Kontrol Plak (RKP) Rata rata nilai selisih Rekam Kontrol Plak (RKP) Koefisien variansi

Hasil uji statistik dengan analisis varian satu arah memperlihatkan terdapat perbedaan yang bermakna antara formula basis ( F0 ) dengan pasta gigi bromelain ( F3C) dan pasta gigi pembanding ( P ) pada p > 0,05, danpersentase plak Duncana

tidak terdapat perbedaan yang bermakna antara pasta gigi bromelain ( F3 ) dengan pasta gigi pembanding ( P ) pada p < 0,05. Hasil uji statistik dapat dilihat pada tabel di bawah ini.

perlakuan F0 F3 pembanding Sig.

N 5 5 5

Subset for alpha = .05 1 2 3,0400 8,7200 8,9000 1,000 ,759

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.

KESIMPULAN Dari penelitian yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan sebagai berikut Bromelain kasar 5% dalam pasta gigi mempunyai efektifitas antiplak yang tidak berbeda nyata dengan sediaan pembanding ( p< 0,05) dan berbeda nyata dengan formula basis pada p > 0,05. SASARAN Kepada peneliti selanjutnya disarankan untuk mengembangkan formula pasta gigi dan menguji stabilitas pasta gigi bromelain kasar sehingga pada akhirnya dapat

DAFTAR PUSTAKA Anonim, 2007, USP 30/ NF 25, Vol III, The National Formulary, USA. Anonim, 1994, Farmakope Indonesia, edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakata. Anonim, 1989, Materia Medika Indonesia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia , Jakarta. Anonim, 1985, Formularium Kosmetika Indonesia, cetakan pertama , Jakarta. Anonim, 1979, Farmakope Indonesia, edisi III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakata. Anonim, 1974, Ekstra Pharmakope Indonesia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Ansel, H. C 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi edisi IV, Diterjemahkan oleh Farida Ibrahim, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta.

18

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

Balsam, S. M and Sagarin, E, 1985. Cosmetics, Vol 1, 2nd ed, Science and Technology, New York. Butler, H., 1992. Pochers Perfumes Cosmetics and Soap, Vol III, Charpman and Hall, London, 1992. Cracken, A. W, and R. A, Cowson,1982 Clinical and Oral Microbiology, Hemisphere Publishing Corp, New York. Daliemunthe, S.H, 2008. Periodonsia, FKG Universitas Sumatera Utara, Medan. Glider WV and MS Hargrove., 2002.Using Bromelain in Pineapple Juice to Investigte Enzym Function., Lincoln. Herdyastuti, N,2006. Isolasi dan Karakterisasi Ekstrak Kasar Enzim Bromelain Dari Batang Nenas (Ananas comosus L. Merr), J Penel. Hayati,12, 75 77. Herijulianti, E., T. S Indriani, dan S.Artini, 2002, Pendidikan Kesehatan Gigi, EGC, Bandung. Hidayah ,A.N., S,Wijaya dan Sulistyaningsih.,2000,Enzim Bromelain dari Bongkol Nenas sebagai Bahan Pembersih Gigi Tiruan Resin Akrlirik, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember. Kelly G.S. 1996 .Bromelain : a literature review and discussion of its therapeutic applications. Altern. Med. Rev. 1: 405-410 Lachman, L. HA. Lieberman and J.L Kaning , 1989. Teori dan Praktek Farmasi Industri,edisi III, Diterjemahkan oleh S. Suyatmi, Universitas Indonesia press, Jakarta. Maurer HR., 2001. Bromelain; Biochemistry, pharmacology and medical use., Cell Mol, Life , Sci., 58 (9). Mori S, Ojima Y, Hirose T, SasakiT, Hashimoto Y.( 1972) The clinical

effect of proteolytic enzyme containing bromelain and trypsin on urinary tract infection evaluated by double blind method . Acta Obstet Gynaecol Jpn.19(3) :147153. Ngampanya B., and S Phongtongpasuk , 2006; Effects of Sucrose Concentration on Crude Bromelain Production of in Vitro Culture of Pineapple ( Ananas comosus var. 2Pattavia ). Kasetsart J. Nat. Sci , 40 : 129-134 . Nugraha, A.W., 2008. Steptoccus mutans Si Plak Dimana-mana, Fakultas Farmasi USD, Jogjakarta: 1-5. Ota, S E. Mutta, 1985. Reinvestigation of Fractionation and Some Properties of Proteolitically Active Components of Steam and Fruit Bromelain, J. Biochem, 98, 219 228. Ramli W., M.Fauzi., D.S.,Khrisna. 1990, Proses Penghasilan Bromelin Daripada Batang Nenas., Pertanika 13(1) .113-121 Rukmana, R., 1996 . Nenas Budidaya dan Pasca Panen, Kanisius, Yogyakarta.. Shahid SK, Turakhia NH, Kundra M, Shanbag P, Daftary GV, and, Schiess W 2002. Efficacy and safety of phiogezym-aprotease formulation, in septis in chidren. Assoc Physicians India. Apr 50527-31. Tarigan, R, 1990 , Karies Gigi, Hipokrates, Jakarta.. Voight, R, 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi edisi V, Diterjemahkan oleh S. Noerono, Universitas Gadjah Mada Press, Yogyakarta. Wilkinson, J and R.J.Moore, 1982. Harrys Cosmetology, George Goodwin HC, London.

19

SCIENTIA VOL. 1 NO. 1 2010 ISSN : 2087-5045

FORMULASI KRIM EKSTRAK ETANOL DAUN UBI JALAR ( Ipomoeae batatas. L.. ) UNTUK PENGOBATAN LUKA BAKAR Farida Rahim, Mimi Aria, Nurwani Purnama Aji STIFI Perintis - Padang

ABSTRACT Formulation of cream for treatment of burns has been studied. Cream formula consisting of 3% ethanol extract of sweet potato leaves as an active ingredient. Cream bases used in this study were variated with and without Virgin Coconut Oil (VCO). The formulas was evaluated for their organoleptic, homogeneity, pH, type of cream, particle size distribution, skin irritation test and effects on burns. The evaluation results showed that ethanol extract of sweet potato leaves can be formulated in creams which are physicaly stable and provide a healing effect on burns, which were tested on animals. The results showed that the F1B formula has the fastest healing effect on burns (7 days). From the statistical calculation using one-way analysis of variation (ANOVA) we found that sweet potato leaf ethanol extract containing cream provide healing on burns, which the value of F count treatment is smaller than the F table at 0.05. Keywords: Ipomoeae batatas, cream, VCO, burns

PENDAHULUAN Negara Indonesia merupakan salah satu negara agraris yang memiliki potensi untuk mengembangkan buahbuahan tropis, tanaman holtikultural, sayur-sayuran dan tanaman pangan. Banyak sekali tanaman di Indonesia yang memiliki potensi besar untuk dikembangkan secara komersil, salah satunya digunakan sebagai bahan obat (Rukman, 1997; Argomedia, 2008). Salah satu jenis tumbuhan yang digunakan sebagai obat tradisional adalah ubi jalar (Ipomoea batatas L.) dari famili Convolvulaceae. Bagian tumbuhan ubi jalar yang digunakan adalah daun yang mengandung beberapa senyawa seperti saponin, flavonoid, polifenol dan umbinya mengandung beberapa senyawa seperti protein, lemak, karbohidrat, kalsium, fosfor, zat besi, vitamin A, vitamin B1, vitamin B2, vitamin C (Rukmana,1997).

Virgin coconut oil merupakan minyak yang berasal dari buah kelapa (Cocos nucifera) tua segar yang diperoleh pada suhu rendah (