Kore’ de Tavuk ve Domuz Kore’ de Tavuk ve Domuz Dışkısından İzole Edilen Dışkısından İzole Edilen E.faecalisE.faecalis İzolatlarının İzolatlarının Virulans Etmenlerinin Virulans Etmenlerinin BelirlenmesiBelirlenmesi

GİRİŞGİRİŞ

EnterococcusEnterococcus cinsi, insan ve cinsi, insan ve hayvan doğal florasında hayvan doğal florasında bulunduğu gibi bazı yiyecek ve bulunduğu gibi bazı yiyecek ve içeceklerde de bulunabilir. (süt, içeceklerde de bulunabilir. (süt, peynir, et, sebze gibi )peynir, et, sebze gibi )

Enterococcus Enterococcus cinsi, hastane cinsi, hastane enfeksiyonlarında büyük tehlike enfeksiyonlarında büyük tehlike oluşturmaktadır. Örneğin; ürüner oluşturmaktadır. Örneğin; ürüner enfeksiyon, endokardit, kanda enfeksiyon, endokardit, kanda iltihap, yara iltihapları gibi önemli iltihap, yara iltihapları gibi önemli hastalıklara neden olmaktadır.hastalıklara neden olmaktadır.

Buna ek olarak, antibiyotik direnç Buna ek olarak, antibiyotik direnç genlerini ve virulans faktörlerini genlerini ve virulans faktörlerini kazanabilme yeteneği vardır.kazanabilme yeteneği vardır.

Jelatinaz, ekstrasellüler çinko-Jelatinaz, ekstrasellüler çinko-endopeptidazdır ve birçok çalışmada endopeptidazdır ve birçok çalışmada virulans faktörü olduğu belirlenmiştir.virulans faktörü olduğu belirlenmiştir.

Jelatinazı kodlayan gen, Jelatinazı kodlayan gen, gelEgelE’ dir. ’ dir. gelEgelE yaygın olarak yaygın olarak E.faecalisE.faecalis’ te ’ te fsrfsr geni ile birlikte bulunur. Jelatinaz; geni ile birlikte bulunur. Jelatinaz; jelatini, kazeini, hemoglobini ve diğer jelatini, kazeini, hemoglobini ve diğer biyoaktif peptidleri hidrolize eder.biyoaktif peptidleri hidrolize eder.

Hemolizin(sitolizin) birçok Gram(+) Hemolizin(sitolizin) birçok Gram(+) bakteride, bakterisidal etkiye ve bakteride, bakterisidal etkiye ve hemolitik aktivitesi vardır.hemolitik aktivitesi vardır.

Bu enzim Bu enzim cylcylA, A, cylcylB, B, cylcylM genlerinin M genlerinin etkileşimi ile aktivitesini oluşturur. etkileşimi ile aktivitesini oluşturur.

Enterococcus yüzey proteini (Enterococcus yüzey proteini (EspEsp), ), üriner enfeksiyonlar gibi birçok üriner enfeksiyonlar gibi birçok enterekok enfeksiyonlarının enterekok enfeksiyonlarının devamlılığını ve konalizasyonunu devamlılığını ve konalizasyonunu sağlarken ayrıca biofilm oluşumunu da sağlarken ayrıca biofilm oluşumunu da sağlar.sağlar.

Virulans faktörleri Virulans faktörleri E.faecalisE.faecalis’ te ’ te genellikle genellikle E.faeciumE.faecium’ a göre daha ’ a göre daha yaygındır. yaygındır. E.faecalisE.faecalis entrekok entrekok bağlantılı hastane enfeksiyonlarının bağlantılı hastane enfeksiyonlarının %80’den daha fazla bir oranda %80’den daha fazla bir oranda sorumludur. sorumludur. E.faecalisE.faecalis’ in virulans ’ in virulans faktörleri genel durumu iyi olan faktörleri genel durumu iyi olan hastalarda daha zararsız olmasına hastalarda daha zararsız olmasına rağmen hastanede yatan genel rağmen hastanede yatan genel durumu kötü hastalardan daha durumu kötü hastalardan daha etkilidir.etkilidir.

Enterokok klinik izolatları, immün Enterokok klinik izolatları, immün sistemi zayıf hastalarda potansiyel sistemi zayıf hastalarda potansiyel hastalık etmenidir.hastalık etmenidir.

E.feacalisE.feacalis virulans belirleyicileri virulans belirleyicileri hastalığın şiddetiyle yakından hastalığın şiddetiyle yakından ilişkilidir ve bu virulans faktörlerinin ilişkilidir ve bu virulans faktörlerinin etkisi hayvan modellerinde ve etkisi hayvan modellerinde ve hücrelerde gösterilmiştir. Ancak, hücrelerde gösterilmiştir. Ancak, hayvan ve gıda orijinli enterokok hayvan ve gıda orijinli enterokok virulans faktör çalışmaları azdır.virulans faktör çalışmaları azdır.

Bu nedenle, bu çalışmada Kore’de Bu nedenle, bu çalışmada Kore’de bulunan tavuklardan ve bulunan tavuklardan ve domuzlardan elde edilen domuzlardan elde edilen E.faecalisE.faecalis izolatlarının üzerinde durulmuştur.izolatlarının üzerinde durulmuştur.

Materyal - MetodMateryal - Metod

E.faecalisE.faecalis izolatları daha önceki izolatları daha önceki çalışmalarda olduğu gibi Kore’ deki çalışmalarda olduğu gibi Kore’ deki mezbahalarda izole edildi. Özellikle mezbahalarda izole edildi. Özellikle de fekal örnekler de fekal örnekler bile-esculin azide broth (BD BBL, Spark, MD, USA)’ da 24 saat 35°C’ de inokule edildi ve ’ de inokule edildi ve izolatlar Enterecoccus agara (BD BBL) ekilip, 24 24 saat boyunca saat boyunca 35°C’ de inkübe edildi. E.Faecalis’ in identifikasyonları VITEK system (bioMérieux,Hazelwood, MO, USA) kullanılarak yapıldı. E.Faecalis PCR ile teyit edildi.

22 tanesi tavuktan, 19 tanesi domuzdan 22 tanesi tavuktan, 19 tanesi domuzdan olmak üzere toplam 41 tane olmak üzere toplam 41 tane E.faecalisE.faecalis izolatı ve bu izolatlarda virulans izolatı ve bu izolatlarda virulans faktörlerinin varlığı araştırıldı.faktörlerinin varlığı araştırıldı.

Jelatinaz aktivitesi ve hemolizin aktivitesinin Jelatinaz aktivitesi ve hemolizin aktivitesinin gelE, fsr , esp, cylA, cylB, cylM genlerinin ekspresyonu ekspresyonu ile paralel olduğu anlaşılmıştır.

Jelatinaz aktivitesinin belirlenmesi için, Jelatinaz aktivitesinin belirlenmesi için, %1.5’ luk %1.5’ luk skim milk (Difco,MD,USA) içeren triptik soy agar plakalarına hazırlanıp 37°C’ de gecelik inokulasyona bırakıldı.Daha sonra soğutulup 2 saat oda sıcaklığında bekletildi ve jelatinaz aktivitesi belirlendi.

Jelatinaz aktivitesi gösteren kolonilerin etrafında şeffaf halde haleler Jelatinaz aktivitesi gösteren kolonilerin etrafında şeffaf halde haleler belirlenmiştir.belirlenmiştir.

Hemolizin aktivitesinin belirlenmesi için, Hemolizin aktivitesinin belirlenmesi için, Columbia Blood Agar (Oxoid, UK)’ a %5lik defibrine at kanı içeren plakalarda 37°C’ de 48saat inkübe edilmiştir.

Kolonilerin etrafındaki beyaz zonlar ß-hemolitik aktiviteyi göstermektedir.

Virulans genlerinin PCR ile Virulans genlerinin PCR ile belirlenmesinde jelatinaz; belirlenmesinde jelatinaz; gelgelE, E, fsrfsr, , espesp ve sitolizin ekspresyonlarıyla ilgli genler ve sitolizin ekspresyonlarıyla ilgli genler belirlenmiştir.belirlenmiştir.

Primer setleri ve PCR koşulları tabloda gösterilmiştir.Primer setleri ve PCR koşulları tabloda gösterilmiştir.

E. faecalisE. faecalis’ in ATCC 51299 nolu suşunun DNA’ sı PCR ’ in ATCC 51299 nolu suşunun DNA’ sı PCR reaksiyonlarında pozitif suş olarak belirlendi.reaksiyonlarında pozitif suş olarak belirlendi.

41 örnek arasında belirlenen virulansların 41 örnek arasında belirlenen virulansların dağılımı jelatinaz ve ß-hemolitik aktiviteleri dağılımı jelatinaz ve ß-hemolitik aktiviteleri tablo-2 de gösterilmiştir.tablo-2 de gösterilmiştir.

Toplam izolatların %85.4’ünde jelatinaz Toplam izolatların %85.4’ünde jelatinaz aktivitesi, %12.2’inde ise ß-hemolitik aktivitesi, %12.2’inde ise ß-hemolitik aktivite görülmüştür. aktivite görülmüştür.

Tavuk izolatlarının %91’inde jelatinaz Tavuk izolatlarının %91’inde jelatinaz aktivitesine rastlanmıştır. Kümes hayvan aktivitesine rastlanmıştır. Kümes hayvan orijinli izole edilen daha önceki raporlarda orijinli izole edilen daha önceki raporlarda bu oran %88di.bu oran %88di.

Domuz izolatlarında %79 oranında Domuz izolatlarında %79 oranında jelatinaz aktivitesine rastlanmıştır.Bu oran jelatinaz aktivitesine rastlanmıştır.Bu oran domuzlarda daha önce %68.4 idi.domuzlarda daha önce %68.4 idi.

Genel olarak jelatinaz aktivitesinin yaygınlığı Genel olarak jelatinaz aktivitesinin yaygınlığı bu çalışmada gıda ve klinik enterokok izolat bu çalışmada gıda ve klinik enterokok izolat raporlarınkinden daha çok bulunmuştur. raporlarınkinden daha çok bulunmuştur. (Gıda da %56, klinikte %33-55)(Gıda da %56, klinikte %33-55)

Jelatinaz ile ß-hemolitik aktiviteyi Jelatinaz ile ß-hemolitik aktiviteyi karşılaştırırsak 41 izolatın, 5’ inde ß-karşılaştırırsak 41 izolatın, 5’ inde ß-hemolitik aktivite gösterilmiştir.hemolitik aktivite gösterilmiştir.

5 örneğin 4’ü domuz orijinli olup, tavukta 5 örneğin 4’ü domuz orijinli olup, tavukta 22 izolattan yalnızca 1’inde ß-hemolitik 22 izolattan yalnızca 1’inde ß-hemolitik aktivite gözlemlenmiştir.aktivite gözlemlenmiştir.

PCR ile entrekok surface proteini (PCR ile entrekok surface proteini (espesp) ) kodlayan gen, 41 izolattan yalnızca 10 kodlayan gen, 41 izolattan yalnızca 10 tanesinde belirlenmiştir. Domuzdan izole tanesinde belirlenmiştir. Domuzdan izole edilen 19 tane izolatın, 8inde edilen 19 tane izolatın, 8inde espesp genine genine rastlanmıştır.rastlanmıştır.

İnsan izolatların da bakteremi ve endokardit İnsan izolatların da bakteremi ve endokardit hastalıklarında hastalıklarında espesp içeren içeren EnterococcusEnterococcus belirlenebilir.belirlenebilir.

Tabloda, ß-hemolitik aktiviteye sahip enterokokların Tabloda, ß-hemolitik aktiviteye sahip enterokokların hepsinin hepsinin espesp geni barındırdığını fakat jelatinaz aktiviteye geni barındırdığını fakat jelatinaz aktiviteye sahip olanlarda sahip olanlarda espesp geninin barındırmağı görülmektedir. geninin barındırmağı görülmektedir.

ß-hemolizimin prevalansı (%12.2),(5) diğer ß-hemolizimin prevalansı (%12.2),(5) diğer raporlara göre çok daha düşüktür. (Klinik ve raporlara göre çok daha düşüktür. (Klinik ve gıda izolatlarında %17-22) gıda izolatlarında %17-22)

Tüm Tüm E.faecalisE.faecalis’ler yalnızca esp geni ’ler yalnızca esp geni içermektedirler ve jelatinaz aktivitesinden içermektedirler ve jelatinaz aktivitesinden yoksundurlar.yoksundurlar.

Diğer kalan 36 izolatta tüm sitolizin genlerinin Diğer kalan 36 izolatta tüm sitolizin genlerinin hepsine rastlanmamış ve hemolitik aktivite hepsine rastlanmamış ve hemolitik aktivite gözlemlenmemiştir.gözlemlenmemiştir.

Jelatinaz aktivitesi ve Jelatinaz aktivitesi ve gelgelE ve fsr E ve fsr lokularınınlokularının(fsrA, fsrB, ve fsrC) genotipi arasındaki korelasyon tabloda gösterilmiştir.

35 pozitif jelatinaz suşlardan 31 tanesi 35 pozitif jelatinaz suşlardan 31 tanesi gelgelE ve E ve fsrfsrABC genlerini içermektedir. ABC genlerini içermektedir.

Geriye kalan 6 jelatinaz negatif suştan 2 Geriye kalan 6 jelatinaz negatif suştan 2 tanesi tanesi fsrfsrABC ve ABC ve gelgelE genlerini E genlerini içermektedir. Fakat bu durum henüz içermektedir. Fakat bu durum henüz açıklanmamıştır. Diğer yazarlarda bazı açıklanmamıştır. Diğer yazarlarda bazı enterokok türlerinin genotip ve fenotip enterokok türlerinin genotip ve fenotip tutarsızlığını rapor etmiştir.tutarsızlığını rapor etmiştir.

Bu çalışmadaki bilgiler Kore’ nin çitflik Bu çalışmadaki bilgiler Kore’ nin çitflik hayvanlarının Enterococcus virulans hayvanlarının Enterococcus virulans faktörlerinin prevalansının faktörlerinin prevalansının gözlemlenmesinde yardımcı olabilir. gözlemlenmesinde yardımcı olabilir.

Enterococcus türlerinin hayvan kaynaklı Enterococcus türlerinin hayvan kaynaklı gıda ürünlerinde rezervuar olabileceği göz gıda ürünlerinde rezervuar olabileceği göz önüne alınabilir.önüne alınabilir.

TEŞEKKÜRLER…TEŞEKKÜRLER…

Nizamettin BİNGÖLNizamettin BİNGÖL