7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

1/25

1

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

BAB 1

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Media berfungsi untuk tempat tumbuhnya mikroba,isolasi,

memperbanyak juumlah, menguji sifat-sifat fisiologi dan

perhitungan jumlah mikroba, di mana dalam proses pembuatannya

harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk

menghindari kontaminasi pada media itu sendiri. Media juga berperan sebagai wadah atau tempat zat hara yang

di gunakan oleh mikrobioorganisme untuk pertumbuhan, sintesis

sel,keperluan energi dalam metaboisme, dan pergerakan. Umumnya,

media pertumbuhan berisi air, sumber energi, zat hara sebagai

sumbe karbon,nitrogen,sulfur,fosfat,oksigen,hidrogen,serta unsur-

unsur lainnya. Variasi dalam tipe nutrisi, diimbangi oleh tersedianya

berbagai maam media yang banyak maamnya untuk kulti!asinya,

oleh sebab itu dalam laporan ini akan membahas lebih lanjut

kebutuhan dasar mikroorganisme, maam-maam media

pertumbuhan,dan prosedur umum pembuatan media pertumbuhan

guna menunjang kegiatan pembelajaran mikrobiologi. "embiakan mikroba seara buatan memerlukan media

pertumbuhanuntuk menjadi tempat tumbuh dan penyedia nutrien

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

2/25

2

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

bagi mikroba. Media pertumbuhan terdiri dari garam organik,

sumber energi #karbon$, !itamin dan zat pengatur tumbuh#%"&$.

"embuatan media ini dapat pula di tambahkan komponen lain

seperti senyawa organik dan senyawa kompleks lainnya. &eknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk

menumbuhkan mikroba di luar dari lngkungan alamianya. "emisahan

mikroorganisme dari lingungannya ini bertujuan untuk memperloeh

biakan bakteri lainnya dan di sebut biakan murni. 'egagalan dalam

pemindakan mikroba dapat menyebabkan kontaminasi pada

pertumbuhan mikroba. (iakan murni dapat diperoleh dengan beberapa teknik seperti

teknik awan gores,awan sebar,dan teknik awan tuang.prinsip

dari ketiga teknik yaitu pengeneran, maka akan diperoleh koloni

terpisah yang mengandung satu maam bakteri. (erdasarkan uraian

tersebut maka perlu di lakukan praktikum isolasi dan inokulasi

mikroorganisme.

B. "u#uan

&ujuan dilakukannya praktikum ini adalah )*. Untuk mengetahui metode-metode yang digunakan untuk

memisahkan mikroba tertentu dari populasi ampurannya untuk

mendapatkan kultur murni.

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

3/25

3

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

+. Untuk mengetahui karakteristik mikroba yang tumbuh pada

kultur murni$. Man%aat

Manfaat dari praktikum ini adalah )

*. Memahami metode-metode yang digunakan untuk memisahkan

mikroorganisme tertentu dari populasi ampurannya untuk

mendapatkan kultur murni.+. Memahami karakteristik mikroba yang tumbuh pada kultur

murni.

BAB &&

"&N'AUAN PUS"A(A

A. "e)ri U*u*

Mikrobiologi adalah telah mengenai organisme hidup yang

berukuran mikroskopis. Dalam dunia mikrobiologi kita

mempelajari banyak segi mengenai jasad-jasad renik.

Mikroorganisme sangat erat kaitannya dengan kehidupan .#pelzar dan han, +$ .

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

4/25

4

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

utrien dan !itamin dalam media pertumbuhanberfungsi

untuk membentuk susbstansi yang mengakti!asi enzim pada

media. 'ebutuhan akan nutrien dan !itamin berbeda-beda pada

masing-masing mikroorganisme. Mekroorganisme

memperlihatkan gejala yang berlainan dalam pola pengambilan

nutrisi,meskipun semua mikroorganisme membutuhkan !itamin

dalam proses metabolismenya, namun beberapa jenis

mikroorganisme mampu mensintesis kebutuhan !itaminnya

sendiri dari senyawa-senyawa lain di dalam medium

#hadioetomo, *//$

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan

yang terdiri dari ampuran zat-zat makanan #nutrisi$ yang di

perlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya.

Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekuul-

molekul keil yanng dirakit untuk menyusun komponen sel

media pertumbuhan maka dapat dilakukan isolat

mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi

komposisi media pertumbuhannya #0idayat,dkk,+1$ 2elama proses inokulasi, ruangan dan proses kerja harus

selalu dalam keadaan steril dan sirkulasi udara dalam ruang

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

5/25

5

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

berlangsung baik. Metode inokulasi yang dapat dilakukan

semprotan kedua telapak tangan dengan alkohol 34, panaskan

stik besi dan atau kawat dengan membakarnya di atas ai

spiritus lalu dianginkan. 2emprot botol dengan alohol agar

steril,buka tutup kapas baglog diatas api spiritus, untuk

mengurangi kontaminasi, kemudian masukan stik5kawat

kedalam botol bibit. 6epas penutup baglog, masukan bibit ke

dalam mulut baglog, goyangkan inin agar bibit menyebar

kepermukaan baglog, kemudian tutup kembali baglog dengan

kapas # Ipuk dan 2aparinto,+*$

Mikrobiologi termasuk salah satu bidang yang kaya akan

isu sosiosaintifik, karena sifat ilmu mikrobiologi sebagai

konsep dasar dan konsepaplikasi. "ada perkuliahan mikrobilogi,

mahasiswa akan menerima begitu saja, bahwa mikroba adalah

makhluk hidup berukuran keil dan yang termasuk di dalamnya

adalah bakteri,!irus,khamir, dan protozoa, mikroba dapat

merugikan dan menguntungkan,mikroba memainkan peranan

penting dalam bioteknologi # 0erlanti dkk,+*+$. 7rganisme yang termasuk ke dalam golongan

mikroorganisme adalah bakteri,arhea,fungi #kapang dan

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

6/25

6

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

khamir $,protozoa,alga mikroskopis, dan !irus. Virus, bakteri,

dan arhea termasuk ke dalam golongan prokariot, sedangkan

fungi,protozoa,alga mikroskopis termasuk ke dalam golongan

eikariotik #waluyo, +**$.

B. Uraian Bahan

1. Agar +Dit#en P,M Edisi &&&- 1/

ama resmi ) 898:

"emerian ) &idak berbau atau bau lemah, berasa

musilago pada lidah.

'elarutan ) &idak larut dalam air dingin, dan larut dalam

air mendidih.

'egunaan ) 2ebagai bahan pemadat medium.

"enyimpanan ) Dalam wadah tertutup baik.

. Pe2t)n +Dit#en P,M Edisi &&&- 1/

"emerian ) 2erbuk ; kuning kemerahan sampai oklat;

bau khas tidak busuk

'elarutan ) 6arut dalam air ; memberikan larutan oklat

kekuningan yang bereaksi agak asam ;

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

7/25

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

8/25

8

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

'egunaan ) 2umber protein untuk pertumbuhan

mikroorganisme.

"enyimpanan ) 2impan dalam wadah tertutup rapat, tidak

tembus ahaya.

. A3uadest +Dit#en P,M Edisi &&&- 1/

ama resmi ) 8@U8 D

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

9/25

9

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

dalam air mendidih, agak sukar larut dalam

etanol #/4$.

'egunaan ) 2ebagai sumber nutrient yang spesifik

untuk mikroba jamur.

"enyimpanan ) Dalam wadah tertutup baik.

5. Alk)h)l + %ar*ak)2e ind)nesia &6- hal7 5!

ama resmi ) 8ethanolum

ama lain )

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

10/25

10

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

rendah.

7&& ) (ahan pengoksidasi (ila diampur dengan

alkali, warna akan menjadi gelap.

'onsentrasi ) 1-/ 4.

'egunaan ) 8nti mikroba, desinfektan, pelarut,dan

penetrasi

"enyimpanan ) Fadah tertutup rapat jauh dari api.

B. Uraian Mikr)8a U#i

1. Saus t)*at

'omposisi ) air, gula, garam, pasta tomat, pati,

uka, pengawet natrium benzoat dan

natrium metabisulfit, rempah-rempah,

ekstrak ragi, pemantap nabati."roduksi ) "& 0einz 8(? Indonesia.

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

11/25

11

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

BAB &&&

ME",DE PE9$,BAAN

A. Alat dan Bahan

1. Alat

8lat yang digunakan dalam praktikum ini adalah )

*. (atang pengaduk+. (unen burnerG. ?awan "etriB.

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

12/25

12

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

roti, saus tomat, dan wortel$

A. Pr)sedur (er#a

* Isolasi mikroorganisme

Diambil sampel seukupnya, kemudian dienerkan sampel

yang akan diisolasi dari pengeneran *-*hingga *-1. 2etelah

selesai dilakukannya pengeneran, sebanyak * m6 larutan

tersebut dipipet ke dalam awan petri steril. Untuk metode

sebar, dimasukan utrient 8gar #8$ yang telah diairkan

kedalam awan petri dan tunggu hingga memadat, setelah

memadat dipipet sampel sebanyak * m6 sampel kedalam awan

petri dan dihomogenkan dengan ara memutar awan petri di

atas meja dengan gerakan seperti angka delapan untuk

menyebarkan sel-sel mikroba seara merata. 2etelah homogen,

awan tersebut diinkubasi selama * +B jam dengan posisi

terbalik. 2edangkan untuk metode tuang, dituangkan utrient

8gar #8$ke dalam awan petri lalu dipipet sampel sebanyak *

m6 ke dalam awan petri, dihomogenkan dengan ara memutar

awan petri di atas meja dengan gerakan seperti angka delapan

untuk menyebarkan sel-sel mikroba seara merata. 2ama

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

13/25

13

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

seperti metode sebar, agar yang telah memadat diinkubasi

selama * +B jam dengan posisi terbalik dan dimasukkan

kedalam inkubator. 6alu diamati koloni mikroba yang terbentuk.

+ &eknik "emindahan (iakan

Dipegang awan petri yang berisi biakan mikroorganisme

dengan tangan kiri, dan jarum inokulasi dengan tangan kanan.

Dibuka awan petri, dipijarkan mulut awan diatas nyala api.

Dipijarkan jarum ose sampai berwarna merah lalu dinginkan.

Diambil biakan, dengan ara dipindahkan sedikit dari permukaan

medium agar.. Dipijarkan kembali dan ditutup awan biakan,

dipanaskan seperti semula. Dan jarum ose dipijarkan sampai

warnanya merah dan diletakkan di tempatnya.

G "engamatan mikroorganisme dan berbagai maam media

a Medium 8gar MiringMedia 8 dituang ke dalam tabung reaksi dan

dimiringkan lalu dibiarkannya hingga memadat. Dipegang

tabung medium pembiakan dengan tangan kiri. Diambil

koloni yang ada dengan jarum ose dan digores biakan pada

permukaan medium miring, dimulai dari dasar tabung dibuat

garis zigzag sampai keatas. Diinkubasi pada suhu Go?

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

14/25

14

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

selama + +B jam. Dilakukan pengamatan koloni seara

morfologi.8 Medium 8gar &egak

Dimasukan medium kedalam tabung reaksi lalu

dibiarkannya hingga memadat. Dipegang tabung medium

pembiakan dengan tangan kiri. Diambil koloni yang ada

dengan jarum ose kemudian tusukkan kedalam permukaan

medium agar didalam tabung reaksi. Diinkubasi pada suhu

Go? selama +B jam. Dilakukan pengamatan koloni seara

morfologi.

BAB &6

HAS&L PEN:AMA"AN DAN PEMBAHASAN

A :a*8ar Penga*atan

* Isolasi Mikrobaa$ Metode &uang

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

15/25

15

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

68(7:8&7:IUMMI':7(I7679I =8:M82I

UIV

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

16/25

16

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

Inokulasi Mikroba

7. 98M(8: 28M"

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

17/25

17

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

3

A

Isolasi mikroba

7 98M(8: 28M"

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

18/25

18

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

penernaan, dan kulit. Mereka terdapat dalam jumlah yang luar

biasa besarnya. 2ebagai ontoh, sekali bersin dapat menyebarkan

beribu-ribu mikroorganisme.

8lam sekitar kita, udara, tanah, dan air juga dihuni kumpulan

mikroorganisme. "enelitian yang layak mengenai mikroorganisme

dalam berbagai habitat ini memerlukan teknik untuk memisah-

misahkan populasi ampuran yang rumit ini, atau biakan ampuran

menjadi spesies-spesies yang berbeda-beda sebagai biakan murni.

(iakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang semuanya berasal

dari satu sel induk.

"raktikum kali ini mempelajari bagaimana ara isolasi dan

inokulasi berbagai sampel pada media agar. Isolasi adalah ara

untuk memisahkan mikroorganisme tertentu dari lingkungan

sehingga diperoleh biakan yang murni, sehingga biakan tersebut

disebut kultur murni . ?ara mengisolasi tergantung pada jenis

bahannya. Untuk isolasi mikroorganisme dari udara, ukup dengan

metode terbuka. Untuk mikroorganisme dari substrat air, yaitu

dengan ara sebar #spread method$ dan ara tuang #por plate

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

19/25

19

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

method$ dengan pengeneran. Untuk substrat padat yaitu dengan

metode tabur #2pread method$ dan metode gores.

Inokulasi adalah memindahkan bakteri dari medium lama ke

medium yang baru dengan diusahakan agar semua alat harus steril,

maksudnya bebas dari mikroorganisme yang tidak diinginkan dan

pengerjaan dilakukan seara aseptis #mengusahakan agar lingkungan

tempat kita bekerja steril5aman bagi kita dan pengerjaan seara

aseptis ini dapat dilakukan dengan ara meletakkan lampu spiritus

pada meja kerja$. (ahan yang akan dinokulasikan disebut inokulum.

Isolasi mikroba perlu dilakukan untuk mempermudah dalam

mempelajari jenis, sifat, dan morfologi dari mikroorganisme

tersebut. 2edangkan inokulasi mikroba perlu dilakukan agar dapat

memelihara serta menegah penemaran dari luar. Inokulasi

dimaksudkan untuk menumbuhkan, meremajakan mikroba dan

mendapatkan populasi mikroba yang murni.

Metode isolasi yang praktikan gunakan ada dua,yakni metode

tuang #pour plate$ dan metode sebar #spread plate$. "rinsip

metode tuang, yaitu sampel yang berupa larutan atau suspensi

dimasukkan ke dalam awan "etri, lalu dimasukkan juga medium.

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

20/25

20

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

Dihomogenkan dengan ara digerakkan membentuk angka

delapan. Ditunggu hingga medium memadat lalu awan "etri

tersebut dibungkus dan diinkubasi seara terbalik. Diamati

pertumbuhan koloni mikrobanya. "rinsip metode sebar adalah

pertama-tama medium dimasukkan ke dalam awan "etri,

ditunggu hingga setengah memadat. 6alu sampel disebar dan

dihomogenkan dengan ara digerakkan membentuk angka

delapan. 2etelah itu, awan "etri tersebut dibungkus dan

diinkubasi seara terbalik. Diamati pertumbuhan koloni

mikrobanya. "erlu diperhatikan proses inkubasi berbeda pada

masing-masing mikroba. "roses inkubasi pada bakteri adalah

selama + +B jam, sedangkan proses inkubasi pada jamur adalah

selama G +B jam.

Metode inokulasi yang dilakukan pada praktikum terbagi dua

yaitu metode agar tegak dan metode agar miring. "rinsip metode

agar tegak yakni menggunakan medium yang telah dipadatkan

dengan tegak #permukaannya rata$ dalam tabung reaksi.

Inokulasi ini menggunakan ose lurus dengan ara menusukkan ose

yang telah disentuhkan dengan biakan bakteri atau jamur ke

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

21/25

21

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

dalam medium yang memadat hingga setengah dari tinggi

medium. 'emudian diinkubasikan dalam inkubator pada suhu

G3o?. "rinsip metode agar miring menggunakan medium yang

telah dipadatkan dengan dimiringkan dalam tabung reaksi. "ada

metode ini digunakan ose bulat yang telah disentuhkan dengan

biakan bakteri atau jamur dengan ara digoreskan seara zig-

zag pada permukaan medium. 'emudian diinkubasikan selama +

+B jam untuk bakteri dalam inkubator pada suhu G3?.

Isolasi dan inokulasi mikroorganisme memiliki banyak

manfaat dalam bidang farmasi. 2alah satunya adalah dalam

bidang penelitian. Metabolit-metabolit sekunder yang

terkandung dalam mikroorganisme dapat diambil digunakan

sebagai efek terapi bisa diambil dari mikroorganisme dengan

ara isolasi dan inokulasi sehingga didapat kultur murni dari

metabolit sekunder tersebut.

8gar-agar atau agarosa adalah zat yang biasanya berupa gel

yang diolah dari rumput laut atau alga. 8gar-agar adalah

karbohidrat dengan berat molekul tinggi yang mengisi dinding sel

rumput laut. 8gar-agar tergolong kelompok pektin dan

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

22/25

22

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

merupakan suatu polimer yang tersusun dari monomer galaktosa.

8gar-agar dapat dibentuk sebagai bubuk dan diperjualbelikan.

8gar-agar juga merupakan koloid padat-air bukan suatu larutan

ataupun suspensi. 8gar-agar disebut koloid karena dalam proses

pembuatannya terbentuk struktur gel yang teripta karena

ketika dipanaskan di dalam air, molekul agar-agar dan air

bergerak bebas kemudian saat didinginkan, molekul-molekul

agar-agar merapat satu sama lain, memadat, dan membentuk

kisi-kisi yang mengurung molekul-molekul air. 2ehingga

terbentuklah sistem koloid padat dan air. "ada sistem koloid

ini yang menjadi fase terdispersi adalah air dan yang menjadi

fase pendispersi adalah molekul agar-agar. 'epadatan gel agar-

agar ini lumayan kuat untuk menopang tumbuhan keil sehingga

sering kali digunakan sebagai media kultur jaringan.

BAB 6

PENU"UP

A. (esi*2ulan

2impulan yang dapat di tarik dari perobaan ini yaitu )

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

23/25

23

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

*. (eberapa metode-metode yang di gunakan untuk memisahkan

mikroba tertentu dari populasi ampurannya untuk

mendapatkan kultur murni yaitu metode awan gores,metode

sebar,dan juga metode tuang.+. 'arakteristik dari mikroba yang tumbuh pada kultur murni

dapat diketahui dengan melihat bentuk-bentuk dari

koloni,ele!asi atau permukaan koloni,tepi koloni,warna dari

koloni dan juga diameter koloni.

B. Saran

2aran yang dapat disampaikan pada praktikum ini adalah )*. 2ebaiknya pada waktu pelaksanaan praktikum praktikan

memperhatikan dengan seksama apa yang telah diarahkan

oleh asisten karena praktikum ini sangat berguna bagi

praktikan yang ingin melaksanakan penelitian tentang

mikoorganisme.+. 2ebaiknya setelah praktek selesai praktikan lebih

memperhatikan kebersihan di dalam laboratorium .

DAF"A9 PUS"A(A

0adioetomo,:.2. *// .Mikrobioogi Dasar Dalam "raktek. akarta. 9ramedia.0erlanti, dkk. +*+. 'ualitas 8rgumentasi "ada Diskusi Isu

2osiosaintifik Mikrobiologi Melalui Feblog. urnal"endidikan I"8 Indonesia.;)l +1 N) +.

0idayat, ur dkk .+1. Mikrobiologi Industri. Jogyakarta) 8ndi

7ffset.

Fadilah Ayu Lestari Syahrir Manaan S 01A1101!

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

24/25

24

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

Ipuk 2unarmi dan 2aparinto, +* . Usaha 1 jenis amur. "enerbit "enebar swadaya. akarta.

"elzar, M., j K ?han,

7/21/2019 Klmpok Saus Tomat a

25/25

25

Isolasi Dan Inokulasi Mikroorganisme

B. ()*2)sisi Media

1. Media Nutrient Agar +NA0Sintetik

8nimal tissue ,+ gram2odium ?hloride ,+ gram

(eef