katarzyna szołtysek

18
Funkcjonalne współzależności szlaków sygnałowych zależnych od czynników transkrypcyjnych TP53 i NFkB. Katarzyna Szołtysek

Upload: eara

Post on 29-Jan-2016

58 views

Category:

Documents


0 download

DESCRIPTION

Funkcjonalne współzależności szlaków sygnałowych zależnych od czynników transkrypcyjnych TP53 i NF k B. Katarzyna Szołtysek. Mechanizm regulacji NF k B, współzależności z TP53. TP53 jako czynnik transkrypcyjny. www.brc.riken.jp /.../201p53_network.html. Regulacja aktywacji TP53. - PowerPoint PPT Presentation

TRANSCRIPT

Page 1: Katarzyna  Szołtysek

Funkcjonalne współzależności szlaków sygnałowych zależnych od czynników transkrypcyjnych

TP53 i NFkB.

Katarzyna Szołtysek

Page 2: Katarzyna  Szołtysek

Mechanizm regulacji NFkB, współzależności z TP53

Page 3: Katarzyna  Szołtysek

www.brc.riken.jp/.../201p53_network.html

TP53 jako czynnik transkrypcyjny

Page 4: Katarzyna  Szołtysek

http://p53.free.fr/index.html

Regulacja aktywacji TP53

MDM2 negatywny regulator p53:• wiąże się z domeną TA p53• eksport p53 z jądra komórkowego• funkcja ligazy ubikwityny

PTEN pozytywny regulator p53:• defosforyluje PIP3 (Pi3-4-5P)• blokada aktywacji Akt/PKB

Page 5: Katarzyna  Szołtysek

Cel pracy

zidentyfikowanie i scharakteryzowanie funkcjonalnych współzależności pomiędzy szlakami sygnałowymi zależnymi od czynników transkrypcyjnych NFkB i TP53

analiza wpływu aktywacji szlaku zależnego od NFkB na przeżycie komórek nowotworowych eksponowanych na czynniki genotoksyczne (promieniowanie

UV i promieniowanie jonizujące)

analiza profilu ekspresji wybranych genów regulowanych przez czynniki transkrypcyjne NFkB i TP53, w warunkach kontrolnych i w komórkach eksponowanych na czynniki stresu komórkowego

identyfikacja genów, na których aktywność mają wpływ oba czynniki transkrypcyjne

i opracowanie modelu funkcjonalnych współzależności obu szlaków sygnałowych

Page 6: Katarzyna  Szołtysek

HCT116 (rak jelita grubego) p53+/+ (wt) p53-/- (bi-allelic knock-out)

STATUS p53:

A – RT-PCR B – Western blot

A B

HCT116

Model doświadczalny

Page 7: Katarzyna  Szołtysek

Analiza poziomu ekspresji genów oraz białek TP53 zależnych

Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-)

Analiza (WB, qRT-PCR):

regulacja p53

blokada cyklu komórkowego

indukcja apoptozy

Page 8: Katarzyna  Szołtysek

Analiza poziomu ekspresji genów oraz białek TP53 zależnych

Analiza aktywacji badanych ścieżek sygnałowych

Indukcja białka p53:

A – Western blot

Indukcja ścieżki NFkB:

B – Western blot

C – RT-PCR

A

B C

Page 9: Katarzyna  Szołtysek

Analiza poziomu ekspresji genów TP53 zależnych

Schemat ścieżki sygnałowej TP53

Page 10: Katarzyna  Szołtysek

HCT116 HCT116 p53-/-

Analiza ekspresji genów regulatorowych, zależnych od TP53 – MDM2

Page 11: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów regulatorowych, zależnych od TP53 – PTEN

HCT116 HCT116 p53-/-

Page 12: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów zależnych od TP53 – p21

HCT116 HCT116 p53-/-

Page 13: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów zależnych od TP53 – Noxa

HCT116 HCT116 p53-/-

Page 14: Katarzyna  Szołtysek

Wnioski:

stymulacja komórek TNFa wpływa na aktywację genów zależnych od p53, wywołaną promieniowaniem UV

poziom ekspresji MDM2 i PTEN ulega podwyższeniu w obu stosowanych schematach

poziom ekspresji p21/WAF1 i Noxa ulega początkowemu obniżeniu, a następnie podwyższeniu w obu stosowanych schematach aktywacji analizowanych ścieżek sygnałowych

Page 15: Katarzyna  Szołtysek

Analiza poziomu ekspresji genów NFkB zależnych

Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-)

Analiza: qRT-PCR

PCR Array (SABioscience -NFkB dependent genes)

Page 16: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB

Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-)

Analiza: cDNA 1h

Page 17: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB

Linia komórkowa: HCT116 (wt, p53-/-)

Analiza: cDNA 1h

Page 18: Katarzyna  Szołtysek

Analiza ekspresji genów zależnych od NFkB

Analiza qRT-PCR: BCL3, NFKBIA, REL,

IL1A, IL8,

TNF, TNFAIP3