judul percobaan protein dengan metode biuret

8/19/2019 Judul Percobaan Protein Dengan Metode Biuret

1/20

I. Judul Percobaan : Penentuan Kadar Protein dengan Metode Biuret

II. Tanggal Percobaan : Senin/ 16 November 2015 pukul 10.00 IB

III. Selesai Percobaan : Senin/ 16 November 2015 pukul 1!.00 IB

IV. Tujuan Percobaan :

Menentukan kadar protein "ang ada pada #ampel ke$u dengan

menggunakan %ara Biuret.

V. Dasar Teori:

Protein

Kata protein #ebenarn"a bera#al dari kata "unani "ang berarti pertama

"ang paling penting& a#al dari kata proto#. Protein terdiri dari berma%am'

ma%am golongan makromolekul (eterogen. alaupun demikian #emuan"a

merupakan turunan dari polipeptida dengan berat molekul "ang tinggi&#e%ara kimia dapat dibedakan antara protein #eder(ana "ang terdiri dari

polipeptida dengan berat molekkul "ang tinggi. Protein terdiri dari

berma%am'ma%am golongan makromolekul (eterogen. Se%ara kimia dapat

dibedakan antara protein #eder(ana "ang terdiri dari polipeptida dan protein

komplek# "ang mengandung )at')at makanan tamba(an #eperti (ern&

karbo(idrat& lipid atau a#am nukleat. *ntuk protein komplek#& bagian

polipeptida dinamakan aproprotein dan ke#eluru(ann"a dinamakan

(aloprotein. Molekul protein mengandung karbon& (idrogen& ok#igen&

nitrogen dan kadang kala #ul+ur #erta +o#+or . Struktur dan +ung#i ditentukan

ole( kombina#i& $umla( dan urutan a#am amino #edangkan #i+at +i#ik dan

kimia,i dipengaru(i ole( a#am amino pen"u#unn"a.

-mino "ang mengandung un#ur && dan N "ang tidak dimiliki ole(

lemak dan karbo(idrat. Molekul protein mengandung gula terpor belerang&

dan ada $eni# protein "ang mengandung un#ur logam #eperti be#i dan

tembaga. Si+at'#i+at protein beraneka ragam& dituangkan dalam berbagai

#i+atn"a #aat bereak#i dengan air& beberapa reagen dengan pemana#an #erta

beberapa perlakuan lainn"a.

Kun%i ribuan protein "ang berbeda #trukturn"a adala( gugu# pada

molekul unit membangunan protein "ang relati+ #eder(ana dibangun dari

rangkaian da#ar "ang #ama& dari 20 a#am amino mempun"ai rantai #amping

"ang k(u#u#& "ang berikatan kovalen dalam urutan "ang k(a#. Karena

ma#ing'ma#ing a#am amino mempun"ai rantai #amping "ang k(u#u# "ang

http://id.wikipedia.org/wiki/Karbonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Nitrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Nitrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Karbon


2/20

memberikan #i+at kimia ma#ing'ma#ing individu& kelompok 20 unit

pembangunan ini dapat dianggap #ebagai ab$ad #truktur protein.

Protein merupakan #uatu polipeptida dengan BM "ang #angat

bervaria#i dari 5000 #amapi lebi( dari #atu $uta karena molekul protein "ang

be#ar& protein #angat muda( mengalami peruba(an +i#i# dan aktivita#

biologi#n"a. Ban"ak agen#ia "ang men"ebabkan peruba(an #i+at alamia(

dari protein #eperti pana#& a#am& ba#a& #olven organik& garam& logam berat&

radia#i #inar radioakti+ Sudarmad$i& 163. Ban"ak agen#ia "ang

men"ebabkan peruba(an #i+at alamia( dari protein #eperti pana#& a#am&

ba#a& #olven organik& garam& logam berat& radia#i #inar radioakti+.

Protein merupakan #uatu polipeptida "ang #angat muda( mengalami

peruba(an +i#i# dan aktivita# biologi#n"a. idroli#i# protein meng(a#ilkan

a#am' a#am amino.

Nama a#am amino menun$ukkan ba(,a #en"a,a ini mempun"ai dua

gugu# +ung#i "aitu gugu# karbok#il "ang ber#i+at a#am dan gugu# amino

"ang ber#i+at ba#a. -#am amino ter#eder(ana adala( a#am amioa#etat

2 N223 "ang di#ebut gli#ina gl"%ine3. -#am amino lain memiliki

rantai #amping& #e(ingga karbon 4'n"a ber#i+at kiral. eak#i identi+ika#i

#uatu protein tidak $au( dari reak#i kedua gugu# +ung#i ter#ebut. Kedua

gugu# pada a#am amino dalam larutan dapat membentuk ion "ang

bermuatan po#iti+ dan $uga bermuatan negati+ atau di#ebut $uga ion am+oter

),itter ion3. Keadaan ion ini #angat tergantung pada p larutan. -pabila

a#am amino dalam air ditamba( dengan ba#a& maka kon#entra#i ion '

"ang tinggi mampu mengikat ion'ion pada gugu# 7N!. Sebalikn"a bila

ditamba(kan a#am ke dalam larutan a#am amino& maka kon#entra#i ion


3/20

"ang tinggi berikatan dengan ion 7' terbentuk gugu# 7

Poed$iadi& 183.

Struktur protein dapat dibagi men$adi empat bentuk& "aitu primer&

#ekunder& ter#ier dan kuartener. Su#unan linier a#am amino dalam protein

merupakan #truktur primer. Su#unan ter#ebut akan menentukan #i+at da#ar

protein dan bentuk #truktur #ekunder #erta ter#ier. Bila protein menandung

ban"ak a#am amino dengan gugu# (idro+obik& da"a kelarutann"a kurang

dalam air dibandingkan dengan protein "ang ban"ak mengandung a#am

amino dengan gugu# (idro+il.

9enatura#i protein dapat diartikan #uatu peruba(an atau modi+ika#i

ter(adap #truktur #ekunder& ter#ier dan kuartener molekul protein tanpa

ter$adin"a peme%a(an ikatan'ikatan kovelen. Karena itu& denatura#i dapat

diartikan #uatu pro#e# terpe%a(n"a ikatan ("drogen& interak#i (idro+obik&

ikatan garam dan aterbukan"a lipatan atau ,iru molekul protein. Protein

"ang terdenatura#i akan berkurang kelarutann"a. :api#an molekul bagian

dalam "ang er#i+at (idro+obik akan keluar #edangkan bagian (idro+ilik akan

terlipat ke dalam.Pelipatan atau pembalikkan akan ter$adi bila protein

mendekati p i#oelektri# lalu protein akan menggumpal dan mengendap.

Si+at'#i+at protein beraneka ragam& dituangkan dalam berbagai

#i+atn"a #aat bereak#i dengan air& beberapa reagen dengan pemana#an #erta

beberapa perlakuan lainn"a. Semua molekul dengan $eni# protein tertentu

mempun"ai kompo#i#i dan deret a#am amino dan pan$ang rantai polipeptida

"ang #ama. Protein memiliki +ung#i #ebagai berikut;

a.


4/20


5/20

karbon dari ikatan peptida. Makin pan$ang #uatu ikatan peptida& maka ,arna

ungu "ang terbentuk makin $ela# dan makin pekat.

eagen Biuret dibuat dari K/Na dan tembagaII3 #ul+at (idrat&

ber#ama dengan kalium natrium tartrat. Kalium natrium tartrat ditamba(kan

untuk komplek# dan men"etabilkan ion kupri. eagen beruba( dari biru ke

ungu dengan adan"a protein& biru ke mera( $ambu pink 3 ketika bergabung

dengan polipeptida rantai'pendek. eak#i antara protein dan reagen biuret;

Inten#ita# ,arna tergantung pada kon#entra#i protein "ang ditera.

Penentuan protein %ara biuret adala( dengan mengukur opti%al den#it" 93

pada pan$ang gelombang 560 7 5>0 nm. -gar dapat meng(itung ban"akn"a

protein maka perlu lebi( da(uu dibuat kurva baku/#tandar "ang meluki#kan

(ubungan antara kon#entra#i protein dengan 9 pada pan$ang gelombang

terpili(.

Metode Spektrootometri

Spektro+otometri merupakan #uatu metoda anali#a "ang dida#arkan pada pengukuran #erapan #inar monokromati# ole( #uatu la$ur larutan

ber,arna pada pan$ang gelombamg #pe#i+ik dengan menggunakan

monokromator pri#ma atau ki#i di+rak#i dengan detektor. Spektro+otometer

adala( alat untuk mengukur tran#mitan atau ab#orban #uatu #ampel #ebagai

+ung#i pan$ang gelombang. Sedangkan pengukuran menggunakan

#pektro+otometer ini& metoda "ang digunakan #ering di#ebut dengan

#pektro+otometri. Spektro+otometer dapat mengukur #erapan di daera(


6/20

tampak& *? 200'!>0 nm3 maupun I @ A50 nm3 dan menggunakan

#umber #inar "ang berbeda pada ma#ing'ma#ing daera( #inar tampak& *?&

I3. Monokromator pada #pektro+otometer menggunakan ki#i atau pri#ma

"ang da"a re#olu#in"a lebi( baik #edangkan detektorn"a menggunakan

tabung penggandaan +oton atau +ototube.Komponen utama dari

#pektro+otometer& "aitu #umber %a(a"a& pengatur Inten#ita#& monokromator&

kuvet& detektor& penguat ampli+ier3& dan indikator. Spektro+otometri dapat

dianggap #ebagai perlua#an #uatu pemerik#aan vi#ual dengan #tudi "ang

lebi( mendalam dari ab#orb#i energi. -b#orb#i radia#i ole( #uatu #ampel

diukur pada berbagai pan$ang gelombangdan dialirkan ole( #uatu perkam

untuk meng(a#ilkan #pektrum tertentu "ang k(a# untuk komponen "ang

berbeda.

Metode Spektro+otokopi dengan utraviolet "ang "ang di#erap bukan

%a(a"a tampak %a(a"a ultra ungu ultraviolet3. 9alam Spektro+otokopi ultra

ungu energi %a(a"a tampak ter#erap digunakan untuk tran#+u# elektron.

!eju

Ke$u adala( ba(an makanan "ang bia#a dikon#um#i ole( ma#"arakat

Indone#ia. Ke$u mengandung energi #ebe#ar !26 kilokalori& protein 22&>

gram& karbo(idrat 1!&1 gram& lemak 20&! gram& kal#ium AAA miligram&

+o#+or !!> miligram& dan )at be#i 2 miligram. Selain itu di dalam Ke$u $uga

terkandung vitamin - #eban"ak A50 I*& vitamin B1 0&01 miligram dan

vitamin 1 miligram. a#il ter#ebut didapat dari melakukan penelitian

ter(adap 100 gram Ke$u& dengan $umla( "ang dapat dimakan #eban"ak 100

.

I". #nalisis dan Pemba$asan


7/20

Per%obaan ini bertu$uan untuk menentukan kadar protein "ang

terdapat pada ke$u dengan metode biuret. eak#i biuret merupakan reak#i

,arna "ang umumn"a digunakan untuk gugu# peptida ''N'3 pada

protein. arna ungu "ang di(a#ilkan karena terbentukn"a #en"a,a

komplek# antara u2 dengan gugu# 7C dan N dari molekul peptida.

Semakin ban"ak a#am amino "ang terikat pada ikatan peptida maka

mempengaru(i reak#i ,arna. Sen"a,a dengan dipeptida memberi ,arna

biru& tripeptida ungu dan tripeptida #erta peptida komplek memberikan

,arna mera(. Beberapa protein "ang mempun"ai gugu# 'S'N'& 'N'

dalam molekuln"a $uga memberikan te# ,arna po#iti+ dari reak#i biuret ini

membentuk #en"a,a komplek#.

eagen biuret terdiri dariCuSO

4 dalam a=uade#t& KI dalam

a=uade#t& Na−¿ #itrat& Na2CO3 dan NaOH . CuSO4 #ebagai

pen"edia ion2+¿

Cu¿ #ebagai ion logam pu#at "ang nantin"a akan

membentuk komplek# dengan protein. KI ber+ung#i untuk men%ega(

ter$adin"a reduk#i pada2+¿

Cu¿ #e(ingga tidak mengendap. Na−¿ #itrat

dan Na

2CO

3 ber+ung#i #ebagai larutan pen"angga& kemudian NaOH

ber+ung#i #ebagai pen"edia #ua#ana ba#a. Sua#ana ba#a akan membantu

untuk terbentukn"a komplek#2+¿

Cu¿ dengan nitrogen dari karbon dari

ikatan peptida. Selan$utn"a nilai ab#orban#i larutan diukur dengan

menggunakan #pektro+otometri *?'?i#.

Persiapan Sampel

Pada per%obaan ini& #ampel "ang digunakan adala( ke$u "ang berupa

padatan ber,arna kuning. Pertama'tama ke$u ditimbang #eban"ak 0&5 gram&

ditumbuk dan dima#ukkan dalam labu ukur 25 m:. Selan$utn"a dien%erkan


8/20

dengan a=uade# (ingga tanda bata#. :arutan men$adi ber,arna puti( keru(.

Pengen%eran dilakukan dengan tu$uan untuk mengurangi be#arn"a

kon#entra#i protein pada #ampel. Kemudian larutan di#aring #e(ingga

diperole( +iltrate ber,arna puti(larutan #ampel3 dan re#idu "ang ber,arna

puti(.

Pembuatan Standar

Pada per%obaan ini& larutan #tandar "ang digunakan #eban"ak lima

larutan dengan kon#entra#i "ang berbeda'beda "aitu 1 mg/m:& 2 mg/m:& !

mg/m:& 8 mg/m: dan 5 mg/m:. Pembuatan larutan #tandard protein

bertu$uan untuk membuat kurva #tandar "ang ber+ung#i untuk penentuan

kadar #ampel. Pembuatan larutan #tandard protein digunakan prin#ip

pengen%eran bertingkat. Pertama'tama membuat larutan #tandar dengan 5

m: larutan induk "ang dien%erkan dalam labu 10 m: #e(ingga di(a#ilkan

larutan #tandar 5 mg/m:. Selan$utn"a dilakukan pengen%eran untuk

kon#entra#i 8 mg/m:& ! mg/m:& 2 mg/m:& 1 mg/m:.

*ntuk mengen%erkan digunakan rumu# umum pengen%eran "aitu ;

M1 D ?1 C M2 D ?2

?1 dan M1 adala( volume dan kon#entra#i dari larutan #tandar mula'

mula& #edangkan ?2 dan M2 adala( volume dan kon#entra#i larutan #tandar

ak(ir "ang diinginkan. Berda#arkan rumu# pengen%eran ter#ebut di dapatkan

ba(,a;

%arutan standar protein Volum &m%'

5 mg/: 5 m:8 mg/: > m:

! mg/: A.5 m:

2 mg/: 6.6 m:

1 mg/: 5 m:


9/20

Ma#ing'ma#ing kon#entra#i diambil #eban"ak 1 m: dan dima#ukkan

ke dalam tabung reak#i 1& 2& !& 8& dan 5. Kemudian kelima larutan #tandar

protein ter#ebut ma#ing'ma#ing ditamba(kan dengan 8 m: reagen biuret.

a#il "ang diperole( #etela( penamba(an reagen biuret adala( #ebagai

berikut;

• :arutan Standart 1 mg/m: ; :arutan ber,arna ungu

• :arutan Standart 2 mg/m: ; :arutan ber,arna ungu 3

• :arutan Standart ! mg/m: ; :arutan ber,arna ungu 3



Semakin be#ar kon#entra#i& ,arna ungu "ang di(a#ilkan #emakin

pekat karena #emakin ban"ak ikatan peptida untuk membentuk komplek#

u2

.

Penamba(an reagen biuret dalam larutan protein bertu$uan agar ion

2+¿Cu

¿ "ang berada dalam pereak#i biuret ter#ebut dapat berikatan dengan

ikatan peptida pada pen"u#un protein pada ke$u dan membentuk #en"a,a

komplek# "ang ber,arna ungu. eagen biuret memiliki beberapa

kandungan dengan +ung#i "ang berbeda'beda& "aitu;

1. CuSO

4 ; memberikan komplek# ber,arna

2. KOH ; memberika #ua#ana ba#a menguba(2+¿Cu

¿ men$adi

+¿

Cu¿

3

!. KnaC

4 H

4O

6 ; men#tabilkan komplek# ion2+¿Cu

¿

8. :arutan ion2+¿Cu

¿ ; membentuk komplek# dengan ikatan peptida #uatu

protein #e(ingga meng(a#ilakn ,arna ungu dengan ab#orban#i dari

pan$ang gelombang mak#imal 580 nm


10/20

Prin#ip metode biuret adala( pengukuran #erapan %a(a"a ole( ikatan

komplek# ber,arna ungu "ang ter$adi bila protein bereak#i dengan ion u2

reagen biuret dalam #ua#ana ba#a dengan ab#orban#i mak#imal pada 580 nm

karena ,arna ungu dapat didetek#i pada pana$ng gelombang ter#ebut.

eagen biuret terdiri dari uS8 dalam a=uade#t "ang ber+ung#i #ebagai

pen"edia ion u2

"ang nantin"a akan membentuk komplek# dengan protein &

KI dalam a=uade#t "ang ber+ung#i untuk men%ega( ter$adin"a reduk#i pada

u2

#e(ingga tidak mengendap& Na'#itrat dan Na2! ber+ung#i #ebagai

bu++er #erta Na ber+ung#i #ebagai pen"edia #ua#ana ba#a. Semakin pan$ang

#uatu ikatan peptida& maka ,arna ungu "ang terbentuk makin $ela# dan

makin pekat. eak#i "ang ter$adi adala(;

uS8 52a=3 2Naa=3 u32a=3 Na2S8a=3 52E3

u 32a=3 u2

a=3 2'a=3

:angka( #elan$utn"a& ma#ing'ma#ing tabung reak#i "ang teri#i larutan

#tandar protein diinkuba#i #elama 10 menit dengan #u(u !AF pada

,aterbat(. Pemana#an itu #endiri bertu$uan untuk memper%epat la$u reak#i

dari ion2+¿Cu

¿ dan #en"a,a komplek# ber,arna ungu "ang terbentuk "ang

terbentuk pada ma#ing'ma#ing larutan men$adi lebi( #tabil dan agar #eluru(

protein bereak#i #eluru(n"a dengan reagen.

Kemudian kelima larutan #tandar protein ter#ebut diukur

ab#orban#in"a pada pan$ang gelombang 520 nm& karena pada pan$ang

gelombang 520 merupakan pan$ang gelombang optimum& #e(ingga


11/20

ab#orban#i "ang di(a#ilkan adala( ab#orban#i mak#imum. 9ari pengukuran

#pektro+otometer *?'?IS& diperole( data #ebagai berikut;

Standar -b#orban#i Kon#entra#i

0&051 0&010

0&110 0&020

0&152 0&0!0

0&1>8 0&080

0&225 0&050

Berda#arkan tabel diata#& dapat diketa(ui ba(,a #emakin pekat larutan

maka kon#entra#i larutan #emakin be#ar dan ab#orban#in"a #emakin be#ar.

:arutan #tandar "ang dibuat memiliki per#amaan regre#i y = 4,22x +

0,0178 dengan koe+i#ien korela#i #ebe#ar R2=¿ 0,9878. Per#amaan

regre#i dan koe+i#ien korela#i didapatkan dari pembuatan gra+ik larutan

#tandar antara kon#entra#i mg/:3 dan ab#orban#in"a. Gra+ik antara

ab#orban#i dan kon#entra#i larutan mg/:3 adala( #ebagai berikut;

0.01 0.01 0.02 0.02 0.03 0.03 0.04 0.04 0.05 0.05 0.060

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

f(x) = 4.22x + 0.02

R² = 0.99

Kurva Larutan Standar

Konsentrasi (mg/L)

Abs

Penetapan absorbansi larutan blanko


12/20

Per%obaan ini bertu$uan untuk menentukan nilai ab#orban#i larutan

blanko. :arutan blanko "ang digunakan adala( a=uade#. :angka( per%obaan

"ang dilakukan "aitu& 1 m: a=uade# dima#ukkan ke dalam tabung reak#i&

kemudian ditamba(kan reagen biuret dan diko%ok agar ,arna "ang

terbentuk #tabil. Setela( ditamba(kan reagen biuret dan diko%ok

meng(a#ilkan peruba(an ,arna larutan dari tidak ber,arna men$adi biru.

Pada larutan blanko tidak membetuk #en"a,a komplek# "ang ber,arna

ungu karena pada larutan blanko tidak mengandung protein. Kemudian

diinkuba#i #elama 10 menit dengan #u(u !AF pada ,aterbat(. Pemana#an

itu #endiri bertu$uan untuk memper%epat la$u reak#i dari ion2+¿Cu¿ dan

agar #eluru( protein bereak#i #eluru(n"a dengan reagen. Kemudian diukur

nilai ab#orban#in"a dengan menggunakan #pektro+otometri *?'?i#. Pan$ang

gelombang "ang digunakan adala( 520 nm. :arutan blanko meng(a#ilkan

nilai ab#orban#i blanko #ebe#ar 0. al ter#ebut dikarenakan ,arna larutan

blanko "ang di(a#ilkan #etela( penamba(an pereak#i biuret "aitu biru

#e(ingga larutan ter#ebut memiliki nilai ab#orban#i mak#imum dengan

pan$ang gelombang 520 nm.

Penetapan #bsorbansi Sampel

Per%obaan ini bertu$uan untuk mengeta(ui nilai ab#orban#i larutan

#ampel ke$u. :angka( per%obaan "ang dilakukan "aitu& pada ! tabung reak#i

ditamba(kan ma#ing 7 ma#ing 1 m: larutan& kemudian ma#ing'ma#ing

ditamba(kan 8 m: reagen biuret. Hu$uan dari larutan #ampel dima#ukkan

dalam ! tabung reak#i adala( untuk pengulangan apabila (a#il "ang

diperole( men"impang. Setela( ditamba(kan reagen biuret diko%ok #ampai

(omogen agar ,arna "ang diperole( lebi( #tabil. Pada per%obaan ini #etela(

ditamba(kan reagen biuret meng(a#ilkan ,arna ungu. al ter#ebut

menu$ukkan ba(,a larutan #ampel ke$u mengandung protein. eak#i po#iti+

ditandai dengan terbentukn"a ,arna ungu "ang menun$ukkan terbentukn"a

#ebua( komplek# ketika ion tembaga dari reagen biuret bereak#i dengan


13/20

ikatan peptida pada rantai polipeptida. eak#i "ang ter$adi antara protein

dan reagen biuret adala( #ebagai berikut;

CuSO4.5 H 2O(aq)+2 NaOH (aq)⟶Cu(OH )2(aq)+ Na2SO4 (aq )+5 H 2O(l)

9alam #ua#ana ba#a

2OH (aq )−¿

Cu(aq)2+¿+¿

Cu(OH )2(aq)↔¿

Kemudian diinkuba#i #elama 10 menit dengan #u(u !AF pada

,aterbat(. Pemana#an itu #endiri bertu$uan untuk memper%epat la$u reak#i

dari ion2+¿

Cu¿ dan #en"a,a komplek# ber,arna ungu "ang terbentuk

men$adi lebi( #tabil dan agar #eluru( protein bereak#i #eluru(n"a denganreagen. Kemudian diukur nilai ab#orban#in"a dengan menggunakan

#pektro+otometri *?'?i#. Pan$ang gelombang "ang digunakan adala( 520

nm. al ter#ebut dikarenakan ,arna larutan "ang di(a#ilkan #etela(

penamba(an pereak#i biuret "aitu biru #ampai ungu #e(ingga gugu# amino

memiliki nilai ab#orban#i mak#imum dengan pan$ang gelombang 520 nm&

karena pada pan$ang gelombang 520 nm merupakan pan$ang gelombang

optimum& #e(ingga ab#orban#i "ang di(a#ilkan adala( ab#orban#i


14/20

mak#imum. Berikut adala( data (a#il pengukuran dengan menggunakan

#pektro+otometer *?'?IS ;

S-MP 0&815

2 0&0A> 0&!6A

! 0&0A> 0&!0

Nilai ab#orban#i pada #ampel dengan tiga kali pengulangan&

ketigan"a mempun"ai nilai ab#orban#i "ang tinggi& lebi( tinggi daripada

#tandar "ang tela( dibuat. al ini dikarenakan #ampel larutan ke$u ber,arna

puti( keru(& (al ini ter$adi karena kandungan ke$u lainn"a& mi#aln"a lemak dan kal#ium. at')at inila( "ang mempengaru(i nilai ab#orban#i #ampel

"ang di(a#ilkan& #e(ingga ab#orban#in"a lebi( tinggi.

9ari data ab#orban#i "ang diperole(& dibuat gra+ik antara

kon#entra#i #umbu D3 dan ab#orban#i#umbu "3. Se(ingga diperole( gra+ik

#ebagai berikut;

0.010.010.020.020.030.03 0.040.040.050.050.060

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

f(x) = 4.22x + 0.02

R² = 0.99


Konsentrasi (mg/L)

Abs

9ari gra+ik ter#ebut akan didapatkan per#amaan gari# " C mD %3

dan regre#i. Berda#arkan kurva larutan #tandar protein pada per%obaan

kedua didapatkan per#amaan y = 4,22x + 0,0178 #e(ingga dapat

digunakan untuk meng(itung kadar protein dalam #ampel dengan

mema#ukkan nilai ab#orban#i "ang diperole( pada #ampel.


15/20

Kadar protein pada #ampel ke$u adala( #ebagai berikut;

(o. Sampel !adar Protein

1. Sampel 1 0,0941

2. Sampel 2 0&0>2A!. Sampel ! 0,0690

Kadar protein rata'rata dari #ampel ke$u adala( 0,20525 . a#il

"ang diperole( $au( dari kadar protein pada ke$u #e%ara teori& "aitu 2

gram/1A gram.

Sedangkan protein "ang terkandung pada ka%ang kedelai "aitu

#ebe#ar 0&0A8. Sedangkan kadar protein #e%ara teori adala( #ebe#ar !0&2

gram tiap 100 gram ka%ang kedelai ba#a(. Protein "ang terdapat dalam

kedelai dapat larut dalam air. Kadar "ang diperole( ma#i( diba,a( kadar

#e%ara teori& (al ini di#ebabkan karena #ampel "ang digunakan "aitu ka%ang

kedelai "ang #uda( direbu#& #e(ingga kadar proteinn"a $uga berpengaru(

"akni #emakin ke%il.

". Diskusi

Pada per%obaan ini& kadar protein rata'rata dari #ampel ke$u "ang kami

perole( adala( 0,20 . a#il "ang diperole( $au( dari kadar protein pada

ke$u #e%ara teori& "aitu 2 gram/1A gram. al ini dikarenakan #ampel "ang

digunakan ber,arna puti(& dan #aat dien%erkan larutan ber,arna puti(

keru(& ,arna keru( dapat mun%ul karena kandungan ke$u "ang digunakan

bukan (an"a protein& tapi $uga mengandung lemak& dan kal#ium. al ini

membuat nilai ab#orban#i "ang di(a#ilkan pada #ampel tidak #e#uai dengan

#tandar "ang tela( dibuat. Se(ingga dalam per(itungan& kon#entra#i "ang

di(a#ilkan $uga terlalu ke%il $au( dari teori kadar protein dalam ke$u "ang

tertera pada bungku# ke$u ter#ebut.


16/20

"I. !esimpulan

Berda#arkan per%obaan "ang tela( kami lakukan& dapat di#impulkan

ba(,a rata'rata kadar protein pada #ampel ke$u adala( 0&20525. a#il "ang

diperole( ma#i( diba,a( kadar #e#unggu(n"a "ang tertera pada bungku# "aitu

#ebe#ar 2 gram/1A gram.

"II. Ja)aban Pertanyaan

*. Buatla( kurva #tandard kon#entra#i v# ab#orban#i. 9engan bantuan

kurva #tandart ter#ebut tentukan kadar protein #ampelJ

a,ab;

Per(itungan kon#entra#i #ampel dari kurva #tandar ab#orban#i v#

kon#entra#i

Standar

-b#orban#

i Kon#entra#i

0&051 0&010

0&110 0&020

0&152 0&0!0

0&1>8 0&080

0&225 0&050


17/20

0.01 0.01 0.02 0.02 0.03 0.03 0.04 0.04 0.05 0.05 0.060

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

f(x) = 4.22x + 0.02

R² = 0.99


Konsentrasi (mg/L)

Abs

S-MP 0&815

2 0&0A> 0&!6A

! 0&0A> 0&!0


18/20

1. Sampel 1 ke$u ;

y = 4,22x + 0,0178

0,415=4,22 x+0,0178

x=0,0941

2. Sampel 2 ke$u ; y=4,22 x+0,0178

0,367=4,22 x+0,0178

x=¿ 0&0>2A

!. Sampel ! ke$u ;

y=4,22 x+0,0178

0,309=4,22 x+0,0178

x=0,0690

Ma##a #ampel ke$u ; 0&8 gram C 800 mg& maka ;400mg

10ml =40

mg

ml

ata'rata kon#entra#i #ampel ke$u dalam %uplikan 10 m:

0,0941+0,0827+0,0690

3=0,0821mg /mL

Kadar protein dalam #ampel ke$u C

0,0821mg/ l

40mg/l ×100=0,20525

2. -paka( peptide akan memberikan reak#i po#iti+ ter(adap pereak#i

biuretL ika benar demikian& bagaimana menemukan kadar protein "ang

ter%ampur dengan peptida L


19/20

a,ab;

a& peptida akan memberikan reak#i po#iti+ ter(adap reak#i biuret.

eak#i biuret merupakan reak#i ,arna "ang umumn"a digunakan untuk

gugu# peptida ''N'3 dan protein. . 9alam larutan ba#a& u2

akan

membentuk komplek# dengan ikatan peptida #uatu protein& #e(ingga

meng(a#ilkan ,arna ungu "ang dapat didenti+ika#i dengan

#pektro+otometer pada pan$ang gelombang 520 nm. -b#orban#i ini

berbanding lang#ung dengan ko#entra#i protein dan tidak tergantung

$eni# protein karena #eluru( protein pada da#ar n"a mempun"ai $umla(

ikatan peptida "ang #ama per#atuan berat. arna ungu "ang di(a#ilkan

karena terbentukn"a #en"a,a komplek# antara u

2

dan N dari molekul peptida. Semakin ban"ak a#am amino "ang terikat pada ikatan peptida

maka mempengaru(i reak#i ,arna. Sen"a,a dengan dipeptida memberi

,arna biru& tripeptida ungu dan tripeptida #erta peptida komplek

memberikan ,arna mera(. Beberapa protein "ang mempun"ai gugu# 7

S'N'& 'N' dalam molekuln"a $uga memberikan te# ,arna po#iti+

dari reak#i biuret ini membentuk #en"a,a komplek#.

"III. Datar Pustaka


20/20

Ba##et& . 18. Buku -$ar ?ogel : Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik.

2. #asar $ #asar Biokimia. Suraba"a ;

judul percobaan protein dengan metode biuret

Documents