isolasi senyawa penangkap radikal bebas dari fraksi etil asetat daun mangga...

1

ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI

ETIL ASETAT DAUN MANGGA (Mangifera Indica L.) VAR.GEDONG

MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI KOLOM

SKRIPSI

NISA NURULMALA

1408010120

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2018

Isolasi Senyawa Penangkap...Nisa Nurulmala, Fakultas Farmasi Ump, 2018

2

ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI

ETIL ASETAT DAUN MANGGA (Mangifera Indica L.) VAR.GEDONG

MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI KOLOM

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi pada program studi Farmasi

NISA NURULMALA

1408010120

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2018


3


4


5


6

HALAMAN PERSEMBAHAN

Dengan menyebut nama Allah yang Maha Pengasih dan Maha Penyayang.

Saya bersyukur kepada Allah STW atas rahmat dan ridho-Nya sehingga penulis

dapat menyelesaikan skripsi ini dengan segala keterbatasan. Skripsi ini saya

persembahkan untuk :

1. Kedua orangtuaku Bapak Soleh (alm) dan Ibu Mulyati (alm) yang selalu

memberikan doa restu, kasih sayang dan semangat tiada henti sampai

akhir hayatnya.

2. Saudara tercinta Riski Amaliah, Akhmad Baidowi, Siti Rokhmania,

Fatimahtun Nada, dan Akhmad Fahmi Zidni yang senantiasa memotivasi,

memberikan dorongan serta doa.

3. Partner skripsi Dewi Astuti yang telah bersama-sama bersabar dalam

melakukan penelitian.

4. Sahabat-sahabat Nadia, Trias, Nuzulia, Amel, Cindy, Vania, Tita, Fifi,

dan Anggi yang saling bersama-sama dalam memberikan dorongan dan

semangat dalam melakukan apapun.

5. Teman-teman Fakultas Farmasi angkatan 2014.


7

MOTTO

“Dibalik suatu masalah yang ada, pasti akan ada kebahagiaan yang sedang

menantinya”


8

KATA PENGANTAR

Segala puji bagi Allah SWT, karena dengan petunjuk dan pertolonganNya

penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Isolasi Senyawa Penangkap

Radikal Bebas Dari Fraksi Etil Asetat Daun Mangga (Mangifera Indica L.)

Var.Gedong Menggunakan Metode Kromatografi Kolom. Penulisan skripsi ini

dilakukan sebagai dalam rangka memenuhi salah satu syarat gelar Sarjana

Farmasi pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto.

Penulis mengucapkan banyak terima kasih atas segala bantuan dan

bimbingan serta kerjasama dengan berbagai pihak yang terkait dalam penyusunan

skripsi ini, karena terselesaikannya skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai

pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada :

(1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H.,M.H., selaku Rektor Universitas

Muhammadiyah Purwokerto

(2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto yang telah memimpin keseluruhan proses

mengajar ditempat penulis menuntut ilmu;

(3) Wahyu Utaminingrum, M.Si., Apt., selaku Ketua Progam Studi Sarjana

Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang

tata laksana penyusunan skripsi;.

(4) Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.si dan Ika Nurjizah, M.Sc., Apt. selaku

dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan pikiran

untuk mengarahkan dalam menyelesaikan skripsi ini;

(5) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku penguji yang telah memberikan

berbagai pertanyaan untuk menguji kelayakan sebagai sarjana Farmasi dan

memberikan masukan dalam menyelesaikan skripsi ini;

(6) Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt selaku penguji yang telah

memberikan berbagai pertanyaan untuk menguji kelayakan sebagai sarjana

Farmasi dan memberikan masukan dalam menyelesaikan skripsi ini;


9

(7) Segenap staf pengajar Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Purwokerto yang memberikan ilmu dan pengarahan dari awal perkuliahan

sampai selesainya skripsi;

(8) Bapak dan ibu serta saudara tercinta yang telah memberikan berbagai

bantuan dan dukungan baik material maupun moral;

(9) Teman-teman tercinta yang telah memberikan berbagai bantuan dan

dukungan; serta

Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan atas segala kebaikan

semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa manfaat bagi

pengembang ilmu. Amin.

Purwokerto, Agustus 2018

Penulis,

Nisa Nurulmala


10

RIWAYAT HIDUP

Nama : Nisa Nurulmala

Tempat, Tanggal Lahir : Tegal, 24 Desember 1995

Nama Orang Tua : Soleh (Ayah)

Mulyati (Ibu)

Alamat : Desa Pesayangan RT.14/03 Kecamatan Talang

Kabupaten Tegal

Riwayat Pendidikan :

1. Sekolah Dasar : SD NU 01 Penawaja (2002)

2. Sekolah Menengah Pertama : SMP Negeri 1 Talang (2008)

3. Sekolah Menengah Atas : SMA Negeri 4 Tegal (2011)

4. Perguruan Tinggi : Universitas Muhammadiyah Purwokerto

(2014)


11


12

Isolasi Senyawa Penangkap Radikal Bebas Dari Fraksi Etil Asetat Daun Mangga

(Mangifera Indica L) Var.Gedong Menggunakan Metode Kromatografi Kolom

Nisa Nurulmala1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil

2, Ika Nurzijah

3

ABSTRAK

Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron atau reduktan dan

dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan molekul

yang sangat reaktif. Akibatnya kerusakan sel akan dihambat. Mangifera indica L.

dikenal sebagai tumbuhan mangga dengan sumber antioksidan alami yang kuat.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa antioksidan yang

terdapat dalam fraksi etil asetat daun mangga gedong menggunakan kromatografi

kolom dan menguji aktivitas antioksidan isolat yang didapat menggunakan

metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Fraksinansi dilakukan secara refluks

menggunakan pelarut n-heksana dilanjut dengan etil asetat. Hasil fraksinasi

dipekatkan. Fraksi kental kemudian diisolasi dengan kromatografi kolom. Sebagai

penyerap pada kolom digunakan silika gel 60 dan eluen yang digunakan adalah n-

heksana : etil asetat secara gradien. Setiap isolat yang diperoleh dari kromatografi

kolom dianalisis dengan KLT dan pereaksi semprot DPPH. Isolat yang

mengandung senyawa antioksidan kemudian dikelompokan berdasarkan nilai Rf

yang sama dan dianalisis menggunakan spektrofotometri UV-Vis untuk

mendapatkan nilai IC50. Hasil yang didapat nilai IC50 fraksi etil asetat 5,306 ppm,

sedangkan nilai IC50 isolat A, isolat B, isolat C secara berturut-turut sebesar 6,145

ppm, 8,885 ppm dan 6,952 ppm dengan kontrol positif vitamin C sebesar 8,011

ppm. Dari hasil yang didapat nilai IC50 fraksi etil asetat paling kuat di antara yang

lainnya.

Kata kunci: Fraksi Etil Asetat Daun Mangga Gedong, Antioksidan, Kromatografi

Kolom, DPPH

`


13

Isolation of Free Radical Scavenger(s) from Mango’s Leaf Ethyl Acetate Fraction

(Mangifera Indica L) var. Gedong Using Column Chromatography

Nisa Nurulmala1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil

2, Ika Nurzijah

3

ABSTRACT

Antioxidant is a reducing substance and able to inhibit oxidation

reaction by binding to a very reactive free radicals and highly reactive molecules.

Accordingly, the damage cell will be prevented. Mangifera indica L. is well

known as a source of natural antioxidant. This study aims to isolate antioxidant

component from ethyl acetate fraction of mango leaf (gedong var.) using column

chromatography and to test its antioxidant activity using DPPH (1,1-difenil-2-

pikrilhidrazil) assay. Fractionation was carried out by means of reflux using n-

hexane followed by ethyl acetate. The sample was then concentrated to yield the

final fraction . The ethyl acetate fraction was isolated by column chromatography

with silica gel 60 as stationary phase and gradient concentration of n-hexane :

ethyl acetate as mobile phase. Each isolate obtained from column

chromatography was analyzed using thin layer chromatograpy followed by DPPH

spraying. Isolat that contains antioxidant component then classified based on Rf

value and further analyzed using DPPH assay in order to get IC50 value. The

results showed that IC50 value of ethyl acetate fraction was 5.306 ppm, while IC50

of isolate A, isolate B, isolate C were 6.145 ppm, 8.885 ppm and 6.952 ppm,

respectively, in comparison to vitamin C (8.011 ppm) as a positive control. This

research showed that ethyl acetate fractions of mango leaf (Gedong var.) has the

strongest antioxidant capacity.

Keyword : Ethyl acetate fraction of mango leaf (gedong var.), Antioxidant,

column chromatography, DPPH assay


14

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL i

HALAMAN PERSETUJUAN ii

HALAMAN PENGESAHAN iii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS iv

HALAMAN PERSEMBAHAN v

MOTTO vi

KATA PENGANTAR vii

RIWAYAT HIDUP ix

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI x

ABSTRAK xi

ABTRACT xii

DAFTAR ISI xiii

DAFTAR GAMBAR xvi

DAFTAR TABEL xvii

DAFTAR LAMPIRAN xviii

BAB I. PENDAHULUAN 1

A. Latar Belakang 1

B. Perumusan Masalah 3

C. Tujuan Penelitian 3

D. Manfaat Penelitian 3

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA 4

A. Hasil Penelitian terdahulu 4

B. Landasan Teori 4

1. Deskripsi dan Klasifikasi Tanaman Mangga 4

2. Ekstraksi dan Fraksinasi 8

3. Kromatografi Kolom 10

4. Kromatografi Lapis Tipis 10

5. Uji Aktifitas Antioksidan dengan metode DPPH 11

6. Spektrofotometri UV-Vis 12


15

7. Antioksidan 14

8. Kerangka Konsep 15

9. Hipotesis 16

BAB III. METODE PENELITIAN 17

A. Jenis dan Rancangan Penlitian 17

B. Variabel dalam Penelitian 17

C. Waktu dan Tempat Penelitian 17

D. Alat dan Bahan Penelitian 18

E. Cara Penelitian 18

1. Determinasi Tumbuhan 18

2. Penyiapan Bahan 18

3. Pembuatan Fraksi Daun Mangga Gedong 18

4. Isolasi Menggunakan Kromatografi Kolom 19

5. Pembuatan Larutan Baku 19

6. Seri Konsentrasi Fraksi dan Isolat 19

7. Pembuatan Larutan DPPH 19

8. Operating Time Larutan Uji 19

9. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum 20

10. Uji Antioksdian 20

11. Analisis Data 20

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 21

A. Pengumpulan Tanaman dan Determinasi Tanaman 21

B. Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia 21

C. Pembuatan Ekstrak dan Fraksinasi 22

D. Isolasi Fraksi Etil Asetat Daun Mangga Gedong 23

E. Identifikasi Penggolongan Isolat dengan KLT 24

F. Hasil Penentuan Operating Time dan Panjang Gelombang 26

G. Aktivitas Antioksidan Fraksi dan Isolat Etil Asetat Daun

Mangga dengan Spektrofotometri 28

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN 33

A. Kesimpulan 33

B. Saran 33


16

DAFTAR PUSTAKA 34

LAMPIRAN 37


17

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Tanaman mangga ........................................................................... 5

Gambar 2.2 Struktur mangiferin ........................................................................ 8

Gambar 2.3 Mekanisme penangkapan radikal DPPH oleh antioksidan ............ 12

Gambar 2.5 Kerangka konsep ........................................................................... 15

Gambar 4.1 Hasil identifikasi setelah disemprot DPPH ..................................... 25

Gambar 4.2 Operating Time DPPH .................................................................... 26

Gambar 4.3 Hasil penentuan panjang gelombang maksimum larutan DPPH .... 27

Gambar 4.4 Struktur vitamin C .......................................................................... 29

Gambar 4.5 Grafik nilai konsentrasi versus %penghambatan fraksi etil

asetat, isolat A, isolat B, dan isolat C .............................................. 30


18

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1 Presentase randemen fraksi etil asetat daun mangga gedong ............ 23

Tabel 4.2 Nilai absorbansi dan persen penghambatan DPPH dari fraksi etil

asetat, isolat A, isolat B, isolat C ....................................................... 29


19

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat keterangan determinasi tumbuhan ................................... 39

Lampiran 2. Pembuatan fraksi etil asetat daun mangga gedong .................... 41

Lampiran 3. Perhitungan presentase bobot kering terhadap bobot basah

daun mangga gedong ............................................................... 42

Lampiran 4. Hasil isolasi dengan kromatografi kolom ................................. 43

Lampiran 5. Perhitungan Rf .......................................................................... 43

Lampiran 6. Hasil operating time DPPH ....................................................... 45

Lampiran 7. Perhitungan pembuatan larutan stok dan pembuatan seri

konsentrasi ................................................................................ 46

Lampiran 8. Perhitungan %penghambatan ................................................... 50

Lampiran 9. Analisis data ............................................................................. 55


20


isolasi senyawa penangkap radikal bebas dari fraksi etil asetat daun mangga...

Documents